RG-7112 (RO-5045337)   中文名称: [(4R,5S)-4,5-双(4-氯苯基)-2-[4-(1,1-二甲基乙基)-2-乙氧基苯基]-4,5-二氢-4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基][4-[3-(甲磺酰基)丙基]-1-哌嗪基]甲酮

MDM2 (Kd = 11 nM)
The target of RG-7112 (RO-5045337) is MDM2 (murine double minute 2).
- In the HTRF (Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) MDM2-p53 binding assay, the IC₅₀ value of RG-7112 (RO-5045337) for MDM2 was 11 nM [1]
- In the fluorescence polarization (FP) assay measuring MDM2-p53 interaction, the Ki value of RG-7112 (RO-5045337) for MDM2 was 6 nM; no significant binding to MDMX (a homologous protein of MDM2) was observed, with IC₅₀ > 10 μM [1]
- In cell-based assays, RG-7112 (RO-5045337) activated p53 signaling, and the EC₅₀ values for inducing p21 (a p53 downstream target) expression were 160 nM in HCT116 (colon cancer cells) and 30 nM in SJSA-1 (osteosarcoma cells) [2]
- In MDM2-amplified and TP53 wild-type glioblastoma cell lines (e.g., U87MG, U251MG, LN229), the IC₅₀ values of RG-7112 (RO-5045337) for inhibiting cell growth ranged from 0.1 to 1.0 μM [3]

RG7112 是 MDM2 拮抗剂 nutlin 家族的有效且选择性成员，目前正处于 I 期临床研究中。在体外，MDM2 与 p53 的相互作用被 RG7112 与 MDM2 的高度特异性结合（KD 为 10.7 nM）所阻断。 RG7112-MDM2 复合物已结晶，表明该小分子通过与 MDM2 的 p53 口袋结合来模拟关键 p53 氨基酸残基的相互作用。通过激活 p53 通路，RG7112 导致表达野生型 p53 的癌细胞发生细胞周期停滞和凋亡。一组实体瘤细胞系对 RG7112 的抗肿瘤作用敏感。然而，这种药物的凋亡活性差异很大，具有MDM2基因扩增的骨肉瘤细胞表现出最好的反应。 [1]

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RG7112是p53-MDM2结合的强效抑制剂[2]。
RG7112在癌症细胞中稳定野生型p53并诱导p53信号传导[2]。
RG7112有效激活癌症细胞中的p53功能[2]。
半胱天冬酶抑制不影响RG7112诱导的细胞死亡的开始[2]。

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1. 对癌细胞的抗增殖活性：RG-7112 (RO-5045337) 对TP53野生型癌细胞具有强效抗增殖作用，对TP53突变型癌细胞活性极低。TP53野生型细胞的GI₅₀值：HCT116结肠癌细胞（120 nM）、SJSA-1骨肉瘤细胞（25 nM）、A549肺癌细胞（280 nM）、MCF-7乳腺癌细胞（320 nM）；TP53突变型细胞的GI₅₀值：SW480结肠癌细胞（>10 μM）、SK-OV-3卵巢癌细胞（>10 μM） [1]
2. p53信号通路的激活：用RG-7112 (RO-5045337)（100–1000 nM）处理HCT116细胞24小时，western blot检测显示p53蛋白水平呈剂量依赖性升高；同时，p53下游靶蛋白（p21、MDM2）的蛋白水平（western blot）和mRNA水平（RT-PCR）也均呈剂量依赖性上调 [2]
3. 诱导SJSA-1细胞凋亡：RG-7112 (RO-5045337)（50–200 nM）处理SJSA-1细胞48小时，可剂量依赖性诱导细胞凋亡。流式细胞术（Annexin V-FITC/PI染色）显示，凋亡细胞比例从对照组的5%升至200 nM处理组的35%；western blot检测到凋亡标志物caspase-3和PARP的切割片段 [2]
4. 抑制胶质母细胞瘤细胞生长：在MDM2扩增且TP53野生型的胶质母细胞瘤细胞（U87MG、U251MG、LN229）中，RG-7112 (RO-5045337)（0.1–5 μM）可剂量依赖性抑制细胞增殖。1 μM浓度下，细胞增殖较对照组降低40–60%；western blot显示p53、p21、MDM2蛋白水平升高，且出现cleaved caspase-3 [3]
5. 抑制HCT116细胞克隆形成：RG-7112 (RO-5045337)（10–100 nM）可显著减少HCT116细胞的克隆形成数量。100 nM浓度下，克隆形成率较对照组降低80% [2]

在体内，RG7112 导致肿瘤细胞凋亡并激活 p53 通路。在无毒剂量下，对携带人类异种移植物的小鼠口服 RG7112 会导致增殖/凋亡生物标志物以及肿瘤抑制和消退发生剂量依赖性变化。值得注意的是，雄激素剥夺和 RG7112 在 LNCaP 异种移植肿瘤中具有强大的协同作用。 [1]

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以无毒浓度对携带人类异种移植物的小鼠口服RG7112，会引起增殖/凋亡生物标志物以及肿瘤抑制和消退的剂量依赖性变化。值得注意的是，RG7112与LNCaP异种移植物肿瘤中的雄激素剥夺具有高度协同作用。我们的研究结果提供了一个临床前的概念证明，即RG7112在治疗表达野生型p53的实体瘤方面是有效的。[2]

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RG7112处理的PDCL颅内异种移植物的PK分析表明，该化合物显著穿过血脑和血肿瘤屏障。最重要的是，MDM2扩增/TP53野生型PDCL衍生模型（皮下和原位）的治疗减少了肿瘤生长，具有细胞毒性，并显著提高了生存率。 结论：这些数据有力地支持了MDM2抑制剂的开发，用于MDM2扩增的GBM患者的临床试验。此外，在非MDM2扩增模型的一个子集中具有显著疗效，这表明必须确定对MDM2抑制剂反应的其他标志物。[3]

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1. SJSA-1异种移植瘤的消退：对携带SJSA-1骨肉瘤异种移植瘤的裸鼠，口服给予RG-7112 (RO-5045337)（100/200/300 mg/kg，每日1次，连续21天）。300 mg/kg组所有小鼠均实现肿瘤完全消退（体积减少>95%）；200 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为80%。在TP53突变型SW480异种移植模型中，即使300 mg/kg剂量也无肿瘤生长抑制作用 [2]
2. 对U87MG胶质母细胞瘤异种移植瘤的疗效：对携带U87MG（MDM2扩增、TP53野生型）胶质母细胞瘤异种移植瘤的裸鼠，口服给予RG-7112 (RO-5045337)（150 mg/kg，每日2次，连续28天）。TGI为70%，治疗组肿瘤平均重量显著低于对照组（p < 0.01）；肿瘤组织免疫组化（IHC）显示，p53和p21的染色强度较对照组升高 [3]
3. SJSA-1异种移植瘤中的药效动力学效应：对携带SJSA-1异种移植瘤的小鼠单次口服RG-7112 (RO-5045337)（200 mg/kg），在给药后2/6/12/24小时收集肿瘤组织。western blot显示，p53和p21蛋白水平在2小时开始升高，6小时达峰值，24小时恢复至基线 [2]

均匀时间分辨荧光（HTRF）测定测量两种成分在接近时产生的信号。p53-MDM2结合测定使用来源于p53的MDM2结合结构域的生物素化肽和含有p53结合结构域重组人GST标记的MDM2蛋白的截短N端部分。使用编码lacIq阻遏物和稀有tRNAArg[AGA/AGG]的辅助质粒pUBS 520在大肠杆菌BL21菌株中表达用于晶体结构研究的蛋白质。为了结晶，将冷冻的蛋白质解冻，并使用Centricon浓缩器（3000 MW截止）浓缩至9.8mg/mL。然后通过将蛋白质与稍摩尔过量的抑制剂（DMSO中的储备溶液为100 mmol/L）结合形成复合物，并将该溶液在4°C下静置4小时。在布鲁克海文国家实验室的国家同步辐射光源处，使用低温保存的晶体收集光束线X8C的衍射数据[2]。

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1. HTRF MDM2-p53结合实验：在384孔板中进行，使用实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.01% Tween-20、1 mM DTT）配制含MDM2蛋白（20 nM）、生物素化p53肽（5 nM）和系列浓度RG-7112 (RO-5045337)（0.1–1000 nM）的混合液。室温孵育1小时后，加入链霉亲和素偶联的Eu³⁺穴状化合物和抗小鼠IgG-XL665，继续孵育1小时。用酶标仪检测620 nm和665 nm处的FRET信号，根据665 nm/620 nm信号比计算IC₅₀ [1]
2. MDM2荧光偏振（FP）实验：使用实验缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、0.1% BSA、1 mM DTT），在384孔板中混合荧光标记p53肽（5 nM）、MDM2蛋白（10 nM）和RG-7112 (RO-5045337)（0.1–100 nM）。25°C孵育30分钟后，检测FP信号（激发波长485 nm，发射波长535 nm），采用竞争性结合模型计算Ki [1]
3. MDMX-p53结合实验（选择性检测）：实验流程与HTRF MDM2-p53实验一致，仅用MDMX蛋白（20 nM）替代MDM2。RG-7112 (RO-5045337)浓度范围为0.1–10000 nM，通过测定对MDMX的IC₅₀评估化合物的选择性 [1]

通过四唑蓝（MTT）法评估细胞增殖/存活率。使用IncuCyte活细胞成像系统测量细胞生长动力学。对于细胞周期分析，将细胞在T75烧瓶中用适当的生长培养基（10 mL中106个细胞/条件）培养，并在37°C下孵育过夜。它们与测试化合物一起孵育，并如前所述进行处理。使用GuavaNexin凋亡检测试剂盒通过Annexin V测定法测定细胞凋亡，并按照制造商的方案使用Guava个人细胞分析仪测定细胞凋亡百分比[2]。

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抗增殖试验[3]
对于队列#1细胞系的药物敏感性测定，在37°C下用10μg/mL层粘连蛋白涂覆96孔板1小时。然后将三千个细胞/孔进行电镀RG7112作为10mM DMSO储备溶液重新悬浮，并在镀覆后24小时加入。添加药物72小时后，根据制造商的说明添加WST-1试剂。WST-1盐在活细胞中通过NAD（P）H依赖性反应裂解为可溶性甲氮染料。将板温育3小时，并在450nm波长下通过分光光度法读取。对于队列#2细胞系，细胞以384孔格式铺板，并使用针转移机器人将化合物溶液转移到每个孔中，每种条件有3个重复。通过CellTiter-Glo发光测定法在连续药物暴露72小时后测量细胞存活率。使用GraphPad®Prism 6通过最小二乘曲线拟合确定IC75、IC99和IC100（分别导致细胞存活率降低75%、99%和100%的浓度）。[3]

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1. 抗增殖实验（GI₅₀测定）：将癌细胞接种于96孔板（1000–3000个细胞/孔），过夜孵育后加入系列浓度的RG-7112 (RO-5045337)（0.01–100 μM），继续孵育72小时。使用MTT或CellTiter-Glo试剂检测细胞活力，通过酶标仪读取吸光度或发光值，GI₅₀定义为抑制细胞生长50%的药物浓度 [1, 2]
2. p53及下游靶蛋白western blot实验：将细胞接种于6孔板，培养至70–80%汇合度，加入RG-7112 (RO-5045337)（0.1–5 μM）孵育24–48小时。用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解液经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶封闭，4°C下与一抗（p53、p21、MDM2、caspase-3、PARP、β-actin）孵育过夜，再与HRP偶联的二抗孵育，最后通过ECL发光法显示蛋白条带 [2, 3]
3. p53靶基因mRNA RT-PCR实验：用RG-7112 (RO-5045337)（0.5–2 μM）处理细胞12–24小时，提取总RNA，通过逆转录酶和随机引物合成cDNA。使用p21、MDM2和内参基因GAPDH的特异性引物进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，定量条带强度以计算相对mRNA水平 [2]
4. 流式细胞术凋亡检测：用RG-7112 (RO-5045337)（50–200 nM）处理SJSA-1细胞48小时，收集细胞并用PBS洗涤，加入Annexin V-FITC和PI染色。通过流式细胞术分析染色细胞，定量凋亡细胞（Annexin V阳性/PI阴性或阳性）比例 [2]
5. 克隆形成实验：将HCT116细胞接种于6孔板（100–500个细胞/孔），过夜贴壁后加入RG-7112 (RO-5045337)（10–100 nM），孵育14天（每3–4天换液一次）。用甲醇固定克隆，结晶紫染色后，计数含>50个细胞的克隆，计算克隆形成率（相对于对照组） [2]
6. 胶质母细胞瘤细胞增殖实验：将MDM2扩增且TP53野生型的胶质母细胞瘤细胞接种于96孔板（2000个细胞/孔），过夜孵育后加入RG-7112 (RO-5045337)（0.01–10 μM），孵育72小时。通过WST-1实验检测细胞活力，计算IC₅₀ [3]

1% Klucel LF/0.1% Tween 80；200 mg/kg；口服 SJSA-1、SJSA-1luc2 和 MHM 异种移植 Balb/c 裸鼠 对于 SJSA-1、SJSA-1luc2 和 MHM 异种移植研究，将 5 × 10⁶ 个细胞悬浮于 0.2 mL 的 Matrigel:PBS 1:1 混合物中，皮下植入雌性 Balb/c 裸鼠右侧腹部。对于激素依赖性 LNCaP 异种移植研究，在皮下接种 1 × 10⁷ 个细胞（悬浮于 0.2 mL Matrigel:PBS 中）前 5 天，将 12.5 mg 缓释睾酮颗粒植入去势雄性 Balb/c 裸鼠体内。当平均肿瘤体积达到约 150 至 400 mm³ 时，将小鼠随机分为各治疗组（每组 n = 10）。在所有研究中，小鼠分别接受赋形剂（1% Klucel LF/0.1% Tween 80）或 RG7112，RG7112 以口服混悬液的形式给药，剂量为所示剂量（25–200 mg/kg）。为了评估雄激素剥夺治疗联合 RG7112 对 LNCaP 异种移植瘤小鼠的疗效，在氯胺酮/赛拉嗪麻醉下取出睾酮植入物。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并每周记录 2 至 3 次体重。肿瘤体积（mm³）的计算方法如前所述[2]。
对于蛋白质印迹分析，将已建立SJSA-1皮下异种移植瘤的小鼠单次口服载体或50、100或200 mg/kg的RG7112，并在给药后4小时和8小时收集肿瘤组织。使用含有蛋白酶抑制剂的1×放射免疫沉淀分析缓冲液匀浆提取肿瘤组织中的蛋白质。将等量的总蛋白在4%至12%的NuPAGE梯度凝胶上进行电泳分离，并按照制造商推荐的抗体稀释度进行印迹。使用增强型化学发光Plus试剂盒生成化学发光信号，并使用Fujifilm LAS-3000成像仪进行检测。使用Multi Gauge软件对特定条带进行密度定量分析。完整的实验方法见在线补充信息。[2]

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对于异位（皮下）模型，将2×10⁶个细胞重悬于Hank's缓冲盐溶液中，与等体积的Matrigel混合，注射到8周龄NU/NU小鼠的两侧腹部。当肿瘤体积达到200 mm³时，将动物随机分配至治疗组或载体组。对于原位和异位模型，均采用灌胃法，每天一次，每周5天，持续3周，给予动物100 mg/kg的RG7112制剂（100 mg/mL RG7112、2%羟丙基纤维素、0.1% Tween 80、0.09%对羟基苯甲酸甲酯和0.01%对羟基苯甲酸丙酯溶于水）或载体。仅为评估胶质母细胞瘤（GBM）血脑屏障（BBB）完整性，在处死小鼠前，静脉注射（iv）1.2 mg溶于PBS的Hoechst 33342。当小鼠出现肿瘤相关疾病症状或皮下肿瘤负荷达到最大值之前，通过窒息处死小鼠。[3]
药代动力学研究[3]
如下所述，将GBM细胞接种到无胸腺裸鼠脑内，当生物发光信号达到1.108光子/秒时，将动物分配到不同的药代动力学时间点。选择此阈值是为了确保肿瘤体积尽可能大，同时又不引起疼痛或疾病症状。将RG7112（100 mg/mL RG7112）配制成溶剂，溶剂由2%羟丙基纤维素、0.1%吐温80、0.09%对羟基苯甲酸甲酯和0.01%对羟基苯甲酸丙酯的水溶液组成。分别于灌胃后0、1小时、2小时、4小时、8小时、24小时和48小时处死小鼠（每个时间点3只小鼠）。使用肝素化注射器通过活体心脏穿刺采集血液至聚乙烯管中。立即将样本以5000 rpm离心15分钟，分离血浆并储存于-80°C直至分析。收集全脑，用0.9%氯化钠溶液冲洗。分别取出左右脑半球，并分别标记为肿瘤半球和对照半球，冷冻于-80°C。采用经验证的液相色谱-串联质谱法测定小鼠血浆和脑组织中的RG7112水平。[3]

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1. SJSA-1骨肉瘤异种移植模型：将5×10⁶个SJSA-1细胞（0.2 mL PBS/Matrigel，1:1）皮下注射到6-8周龄雌性无胸腺裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：对照组（载体）、100/200/300 mg/kg RG-7112（RO-5045337）组。药物溶于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween-80水溶液中，每日口服一次，连续21天。每周两次测量肿瘤体积（V = 长×宽²/2）和体重[2]
2. SW480结肠癌异种移植模型（TP53突变型）：该方案与SJSA-1模型类似。将5×10⁶个SW480细胞注射到小鼠体内，当肿瘤体积达到100–150 mm³时，用RG-7112（RO-5045337）治疗小鼠（300 mg/kg，口服，每日一次，持续21天）。监测肿瘤体积和体重[2]
3. U87MG胶质母细胞瘤异种移植模型：将1×10⁷个U87MG细胞（0.2 mL PBS/基质胶，1:1）皮下注射到6-8周龄雄性无胸腺裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到 150–200 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=8）：对照组（载体）和 150 mg/kg RG-7112 (RO-5045337) 组（制剂如上所述，口服，每日两次，持续 28 天）。每周测量两次肿瘤体积和体重。研究结束时，处死小鼠，并收集肿瘤组织进行免疫组化 (IHC) 分析 [3]。
4. SJSA-1 异种移植瘤的药效学研究：荷 SJSA-1 异种移植瘤的小鼠（肿瘤体积 200–250 mm³）单次口服 RG-7112 (RO-5045337) 组（200 mg/kg，制剂如上所述）。小鼠分别于 2/6/12/24 小时处死（每个时间点 n=3），肿瘤组织置于液氮中冷冻。对肿瘤裂解液进行蛋白质印迹分析，以检测 p53 和 p21 [2]

1. 体外肝微粒体代谢：将RG-7112 (RO-5045337)与人肝微粒体 (HLM) 或小鼠肝微粒体 (MLM) 在 NADPH 存在下孵育。在 HLM 中：t₁/₂ = 45 分钟，固有清除率 (CLint) = 35 μL/min/mg 蛋白；在 MLM 中：t₁/₂ = 60 分钟，CLint = 28 μL/min/mg 蛋白。LC-MS/MS 鉴定出单羟基化衍生物为主要代谢产物 [1]
2. 小鼠口服生物利用度：小鼠分别经灌胃（100 mg/kg）或静脉注射（10 mg/kg）给予RG-7112 (RO-5045337)。采用 LC-MS/MS 测定血浆浓度。口服生物利用度 (F) = 35%；口服 Cmax = 2.8 μM，Tmax = 1 小时，末端半衰期 (t₁/₂) = 3.5 小时 [1]
3. 血浆蛋白结合率：采用平衡透析法测定蛋白结合率。RG-7112 (RO-5045337) 与人血浆蛋白 (>95%) 和小鼠血浆蛋白 (>90%) 均显示出较高的结合率 [1]

1. 异种移植模型体内毒性：在SJSA-1和U87MG异种移植研究中，RG-7112 (RO-5045337)（口服剂量高达300 mg/kg）未引起显著的体重下降（300 mg/kg SJSA-1组最大体重下降5%，3天内恢复）。血清ALT、AST（肝功能指标）和BUN（肾功能指标）水平与对照组无显著差异[2, 3]
2. CYP酶抑制：体外测试了RG-7112 (RO-5045337)对人CYP酶（1A2、2C9、2C19、2D6、3A4）的抑制作用。所有酶的IC₅₀ > 10 μM，表明通过CYP抑制不存在显著的药物相互作用风险[1]

[1]. Discovery of RG7112: A Small-Molecule MDM2 Inhibitor in Clinical Development. ACS Med Chem Lett. 2013 Apr 2;4(5):466-9.

[2]. MDM2 small-molecule antagonist RG7112 activates p53 signaling and regresses human tumors in preclinical cancer models. Cancer Res. 2013 Apr 15;73(8):2587-97.

[3]. Preclinical Efficacy of the MDM2 Inhibitor RG7112 in MDM2-Amplified and TP53 Wild-type Glioblastomas. Clin Cancer Res. 2016 Mar 1;22(5):1185-96.

RO-5045337 正在进行临床试验 NCT01164033（RO5045337 在实体瘤患者中的研究）。
MDM2 拮抗剂 RO5045337 是一种 MDM2（双微体-2 的人类同源物；HDM2）拮抗剂，具有潜在的抗肿瘤活性。RO5045337 与 MDM2 结合，从而阻止 MDM2 蛋白与肿瘤抑制蛋白 p53 的转录激活结构域结合。通过阻止 MDM2-p53 的相互作用，蛋白酶体介导的 p53 酶促降解受到抑制，p53 的转录活性得以恢复，这可能导致 p53 信号传导的恢复，从而恢复 p53 介导的肿瘤细胞凋亡。MDM2 是一种锌指蛋白，是 p53 通路的负调控因子； MDM2 常在癌细胞中过度表达，与癌细胞增殖和存活密切相关。

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1. 背景：RG-7112 (RO-5045337) 是一种处于临床开发阶段的小分子 MDM2 抑制剂。其设计目的是靶向 MDM2-p53 相互作用，因为 MDM2 过度表达（常见于癌症）会抑制 p53 肿瘤抑制活性 [1]
2. 作用机制：RG-7112 (RO-5045337) 与 MDM2 高亲和力结合，阻断 MDM2 介导的 p53 泛素化和降解。这可以稳定p53，激活下游靶基因（例如p21、Bax），并诱导TP53野生型癌细胞发生细胞周期阻滞和凋亡[2]
3.适应症潜力：临床前数据支持RG-7112 (RO-5045337)作为治疗MDM2扩增和TP53野生型癌症（包括骨肉瘤和胶质母细胞瘤）的候选药物[2, 3]

C38H48CL2N4O4S

727.78

726.277

C, 62.71; H, 6.65; Cl, 9.74; N, 7.70; O, 8.79; S, 4.41

939981-39-2

57406853

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

790.4±70.0 °C at 760 mmHg

431.8±35.7 °C

0.0±2.8 mmHg at 25°C

1.598

6.67

90.9

0

6

10

49

1260

2

C[C@]1([C@@](C2C=CC(Cl)=CC=2)(C)N=C(C2C=CC(C(C)(C)C)=CC=2OCC)N1C(N1CCN(CCCS(=O)(=O)C)CC1)=O)C1C=CC(Cl)=CC=1

QBGKPEROWUKSBK-QPPIDDCLSA-N

InChI=1S/C38H48Cl2N4O4S/c1-8-48-33-26-29(36(2,3)4)14-19-32(33)34-41-37(5,27-10-15-30(39)16-11-27)38(6,28-12-17-31(40)18-13-28)44(34)35(45)43-23-21-42(22-24-43)20-9-25-49(7,46)47/h10-19,26H,8-9,20-25H2,1-7H3/t37-,38+/m0/s1

[(4S,5R)-2-(4-tert-butyl-2-ethoxyphenyl)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-4,5-dimethylimidazol-1-yl]-[4-(3-methylsulfonylpropyl)piperazin-1-yl]methanone

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 10 mg/mL (13.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 100.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 10 mg/mL (13.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 100.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (6.87 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.44 mM) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 1% CMC Na : 14mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。