RISLENEMDAZ

N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor subunit 2B (GluN2B) [Ki = 8.1 nM; IC50 = 3.6 nM)

对于激动剂刺激的 NMDA-GluN1a/GluN2BL(tk-) 细胞，rislenemdaz (CERC-301) 可减少钙流入，IC50 为 3.6 nM。当 GluN2B 受体与所有其他靶标（包括 hERG 钾通道）进行比较时，rislenemdaz 表现出至少 1000 倍的选择性。 10 uM 的 rislenemdaz 对 sigma 型受体的作用最小[1]。

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体外药理[1]
Rislenemdaz/CERC‐301对NMDA‐GluN2B受体的亲和力 [1]
CERC‐301有效抑制放射性配体（[3H]Compound‐2）与人类NMDA‐GluN1a/GluN2B受体的结合，这些受体在所有被测试物种（大鼠、狗、恒河猴、人）的L（tk‐）细胞和脑组织浆液中表达。利用人颞叶皮层匀浆测定CERC‐301的结合亲和力，在室温和37℃下的K i值分别为3.1 nmol L−1 （0.0031 μmol L−1）和8.1 nmol L−1 （0.0081 μmol L−1）。在其他物种中的发现与人类数据一致（表1）。

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Rislenemdaz/CERC‐301对NMDA受体的功能活性和选择性 [1]
CERC‐301抑制钙流入激动剂刺激的NMDA‐GluN1a/GluN2B L（tk‐）细胞，IC50为3.6 nmol L−1，但当浓度高达30,000 nmol L−1 （30 μmol L−1）时，对钙流入激动剂刺激的GluN1a/GluN2A细胞没有影响。

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Rislenemdaz/CERC‐301对NMDA‐GluN2B受体影响的电生理学研究 [1]
CERC - 301的效价通过GluN2B拮抗剂电压箝位法测定。在10 μmol L−1谷氨酸和10 μmol L−1甘氨酸的存在下，测量了CERC‐301的开启率（图2A）和关闭率（图2B）。这些实验表明，k开和k关率分别为1.3 × 105 mol L−1 s−1和~2 × 10−5 s−1，kd约为0.15 nmol L−1。

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Rislenemdaz/CERC‐301的反筛选 [1]
当浓度等于或大于10 μmol L−1 （~3584 ng mL−1）时，CERC‐301在酶和放射性配体结合试验中没有表现出显著的活性。CERC‐301对GluN2B受体对所有测试靶标（包括hERG钾通道）表现出至少1000倍的选择性。CERC‐301在10 μmol L−1 （sigma‐1、sigma‐2和非特异性）时对sigma‐型受体也表现出最小的活性。

与赋形剂对照相比，Rislenemdaz (CERC-301)（1、3、10 和 30 mg/kg）显着改善游泳行为（10 mg/kg 时 P<0.05；1、3 和 30 mg/kg 时 P<0.01） ）并大大降低了不动的频率（P<0.001）。采样时大鼠血浆中rislenemdaz的水平约为15、120、390、1420、4700和14,110 nM (0.015、0.120、0.390、1.42、4.7和14.11 uM)。这分别相当于约 5%、29%、56%、83%、94% 和 98% RO。大约 0.3 和 0.7 mg/kg，或大约 RO 的 30% 和 50%，分别是增加游泳频率和减少不动的估计 ED50。与载体对照（1 mg/kg P < 0.01；3、10 和 30 mg/kg P < 0.001）的总行驶距离相比，rislenemdaz（1、3、10 和 30 mg/kg）显着增加了距离旅行。很少甚至没有测试[1]。

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急性抑郁模型[1]
强迫游泳试验[1]
Rislenemdaz（1,3,10和30 mg kg - 1）显著降低不动频率（P < 0.001），显著增加游泳行为（P < 0.01）；与车辆对照组相比，10 mg kg - 1的P < 0.05)（图3），但除了3 mg kg - 1的剂量外，不影响攀爬行为（P < 0.05）。与车辆对照组相比，地西帕明（20 mg kg−1）显著降低了静止不动（P < 0.001），显著提高了攀爬行为（P < 0.01），游泳行为没有变化。采样时，CERC‐301的血浆水平分别约为15、120、390、1420、4700和14110 μmol L−1(0.015、0.120、0.390、1.42、4.7和14.11 μmol L−1)，对应于大鼠的RO分别约为5、29、56、83、94和98%。游泳频率增加和不活动减少的ED50分别为~0.3和0.7 mg kg - 1，对应的RO为~ 30%和50%。

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运动试验[1]
Rislenemdaz（1,3,10和30 mg kg - 1）显著增加了旅行距离（P < 0.01）；在测试的前5分钟（时间与强迫游泳测试的时间相关），与车辆对照组相比，10和30 mg kg - 1的P < 0.001。CERC‐301（1、3、10和30 mg kg - 1）显著增加总旅行距离（P < 0.01）；3、10和30 mg kg−1)与60分钟试验期间的对照相比，P < 0.001。运动活动增加的ED50为~2 mg kg−1，转化为~75%的RO，高于游泳频率增加和不动减少的ED50。0.1和0.3 mg kg - 1剂量组未观察到运动影响（图3）。

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遥测大鼠血流动力学研究[1]
单次口服Rislenemdaz/CERC - 301 /CERC - 301，在0.3 ~ 1 mg kg - 1 （ED50≈0.7 mg kg - 1）剂量范围内，清醒大鼠动脉血压呈剂量依赖性短暂升高，且该效应在1 ~ 10 mg kg - 1剂量范围内达到稳定（图4）。在给药后1 - 2小时观察到峰值效应（图4A），与大鼠CERC‐301的PK谱一致。在0.2 mg kg - 1（例如，收缩压+36 mmHg）时，CERC‐301的血流动力学变化幅度小于MK‐801。CERC‐301给药后3.5小时内的血流动力学变化与活动水平呈线性相关（根据遥测记录估计）；特别是，活性是HR的预测因子（r2 = 0.67），因此，CERC‐301的兴奋作用可能解释了在大鼠中观察到的HR增加（特别是在高剂量水平下）。该研究还表明α1‐和/或β1‐AR阻断剂可能分别对CERC‐301介导的血压升高（图4B）和心率升高（数据未显示）提供保护。

体外药理测定 [1]
Rislenemdaz/CERC‐301对NMDA‐GluN2B受体的亲和力[1]
如前所述，在室温（或37°C）下进行放射性配体结合试验(Kiss等人，2005；Liverton et al. 2007)。类似的结合实验，如附录S1所述，克隆的人类受体在L（tk‐）细胞中表达，也使用全脑匀浆（大鼠）、额叶皮质匀浆（狗和猕猴）和颞叶皮质匀浆（人）进行。更详细的描述见附录S1。

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Rislenemdaz/CERC‐301对NMDA受体的功能活性和选择性 [1]
我们测量了表达GluN1a/GluN2B或GluN1a/GluN2A人受体的L（tk‐）细胞对钙内流的抑制，以确定CERC‐301抑制NMDA受体功能的IC50，如前所述(Kiss et al. 2005；另见附录S1)。

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Rislenemdaz/CERC‐301的电生理研究 [1]
利用克隆的人类NMDA‐GluN2B受体进行体外电生理测定，以确定CERC‐301的结合和解离动力学以及效力(Kiss et al. 2005；另见附录S1)。

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Rislenemdaz/CERC‐301的反筛谱 [1]
CERC‐301在一系列标准受体结合和酶分析中进行评估。CERC - 301在体外以10、30或100 μmol L - 1（分别为~3584、10752或35840 ng mL - 1）检测其与参考配体竞争的能力，以评估可能未检测到的药理活性（研究了bbb150受体和酶，包括sigma型阿片受体）。

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非临床药代动力学[1]
血浆蛋白结合[1]
大鼠、狗、恒河猴和人血浆样品（3 mL, N = 3）分别加入2和20 μmol L−1[14℃]CERC‐301，在37℃的摇水浴中孵育30 min。孵育后，采用标准超离心方法测定药物未结合的百分比（Pacifici和Viani 1992）。

大鼠神经毒性[1]
\n将24只Sprague-Dawley大鼠（雌雄各12只）分为四组，分别单次灌胃给予赋形剂（0.5%甲基纤维素[MC]和0.02%十二烷基硫酸钠[SLS]的去离子水）或Rislenemdaz/CERC-301，剂量分别为10、30或100 mg kg−1，灌胃体积为10 mL kg−1。另取12只雄性大鼠，单次皮下注射MK-801（NMDA受体的非竞争性拮抗剂；阳性对照），剂量为10 mg kg−1，注射体积为2 mL kg−1。每组雌雄各6只大鼠在给药后4至6小时处死并进行尸检，每组剩余大鼠在给药后3天（第4天）处死并进行尸检。活体观察和测量包括体重和临床观察。处死时，大鼠被麻醉并进行灌注固定。尸检时，收集脑组织进行组织病理学评估。\n

\nRislenemdaz/CERC-301和MK-801评估组的动物在预定的尸检时间间隔（给药后4-6小时或第4天）处死。所有动物均使用异氟烷/氧气混合物麻醉，并通过左心室灌注肝素化的0.001%亚硝酸钠生理盐水。生理盐水冲洗后，灌注10%中性缓冲福尔马林（NBF）。取出脑组织，称重后保存在10%中性缓冲福尔马林溶液（NBF）中。\n

\n将脑组织切成2毫米厚的冠状切片，每只动物取三个组织块，每个组织块包含多个切片。对以下脑区进行染色：新皮层、古皮层、基底核、边缘系统、丘脑/下丘脑、中脑、小脑、脑桥和延髓。所有在给药后4至6小时处死的动物以及所有在给药后3天处死的动物的脑组织切片均进行石蜡包埋，切片厚度为5微米，并用苏木精-伊红染色，最后进行显微镜检查。对于在第 4 天（给药后 3 天）处死的大鼠，将 1 号和 2 号块的连续切片用 Fluoro-Jade B（一种可提高评估大脑神经元变性敏感性的染色剂）和胶质纤维酸性蛋白（一种用于星形胶质细胞反应的染色剂）染色，并在显微镜下进行检查。另外三组大鼠（每组四只雄性和三只雌性）以相同方式口服CERC-301，并连续24小时采集血样，分析血浆中利塞那唑/CERC-301的浓度，并评估其全身暴露量。\n

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\n\n体内药理学[1]
\nGluN2B受体占有率与血浆药物浓度的相关性[1]
\n如附录S1和先前文献（Liverton等人，2007）所述，CERC-301/利塞那唑已分别给予大鼠、犬和恒河猴。此外，还测定了大鼠静脉注射[3H]化合物-3后的受体占有率。如附录 S1 所述，在静脉注射 (IV) 后 15 分钟和口服 (PO) 后 60 分钟评估了血浆浓度与脑组织 RO 之间的关系。\n

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\n\n急性抑郁模型 [1]
\n强迫游泳试验 [1]
\n将年轻、成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠随机分配到各治疗组，并分别给予赋形剂（0.5% MC/0.02% SLS）、溶于无菌水的参考化合物地昔帕明（20 mg kg−1；一种三环类抗抑郁药）或溶于 0.5% MC/0.02% SLS 的利昔拉明/CERC-301（0.1、0.3、1、3、10 和 30 mg kg−1），在第 1 天给药两次（适应后；试验前约 24 小时，黑暗周期前），并在第 2 天给药一次。 2（地昔帕明组进行30分钟预测试，CERC-301和溶剂对照组进行45分钟预测试）。\n

\n每个强迫游泳室均由透明亚克力制成（高40厘米，直径20.3厘米）。大鼠在装有23°C ± 1°C水的圆柱体中进行一次15分钟的给药前游泳测试，约24小时后进行5分钟的实验测试。适应性测试期间水深为16厘米，测试期间水深为30厘米。每5秒记录一次不动、攀爬和游泳行为，每只动物共记录60次。当动物无法保持鼻子露出水面的姿势时，立即将其从水中取出并排除出实验。在游泳试验结束后采集血液样本，并分析血浆中利塞那唑/CERC-301的浓度。\n

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\n\n运动活性测定[1]
\n为了确认利塞那唑/CERC-301在强迫游泳试验中的作用并非由于活动水平的普遍增加所致，在口服CERC-301后对大鼠进行了运动活性测定。将42只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配到各处理组（载体组或CERC-301组，剂量分别为0.1、0.3、1、3、10和30 mg kg−1；每组n = 6）。在光照周期内，于光电管监测笼中评估大鼠的运动活性。每个笼子由一个标准塑料鼠笼（24 × 45.5 cm）和一个不锈钢框架组成。红外光电管光束沿框架长轴方向布置，用于测量动物的活动距离。另一组光束置于地面上方，用于测量动物的站立活动。计算机系统记录光电管光束的中断情况。测试期间，在测试笼顶部放置滤光片。大鼠在第1天（测试前约24小时，黑暗周期开始前）通过灌胃法分别给予两次赋形剂或测试化合物，并在第2天（放入运动笼进行60分钟测试前45分钟）给予一次。运动活动以5分钟为单位进行记录。\n

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\n\n遥测大鼠的血流动力学效应[1]
\n为了确定全身血流动力学效应，对6只（n = 6）慢性遥测大鼠（植入时间至少在给药前7天）单次灌胃给予Rislenemdaz/CERC-301，剂量分别为0.3、0.6、1、3和10 mg kg−1，并记录全身血压和心率值。将这些血流动力学效应与静脉注射0.2 mg kg−1剂量的MK-801（溶于0.9%生理盐水）进行比较。每只动物均单次灌胃给予Rislenemdaz/CERC-301或赋形剂（0.5% MC/0.02% SLS）（体积：5 mL kg−1）。在给药前（仅给予赋形剂）和每次口服给药后进行24小时记录。在另一组研究中，将CERC-301（1 mg kg−1）与阿替洛尔（β1-肾上腺素能阻滞剂，1 mg kg−1，静脉推注）和哌唑嗪（α1-肾上腺素能受体拮抗剂，200 μg kg−1，静脉推注）联合给药，以阐明高血压的潜在机制。数据分析并与基线进行比较，并校正了给药前24小时的载体对照。\n

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\n\n首次人体药代动力学研究[1]
\n该研究方案已获得机构审查委员会的批准，所有受试者均签署了书面知情同意书。24名健康的年轻男性受试者被随机分配到3个连续治疗组（A、B和C）之一。每个治疗组包含8名受试者，其中2名受试者接受安慰剂，6名受试者接受单次递增口服剂量的Rislenemdaz/CERC-301，每次给药之间至少间隔7天的洗脱期：A组（0.1、0.2、0.5、1和2 mg）；B组（2、4、8和15 mg，以及4 mg与食物同服）；C组（15和20 mg）。分别于给药前及给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12、18、24、30、48和72小时采集血样。采用反相高效液相色谱-串联质谱法分析血浆样本中CERC-301的浓度。分析范围为0.5至500 nmol L⁻¹（0.180至180 ng mL⁻¹）。

人体药代动力学研究[1]
CERC‐301/Rislenemdaz吸收迅速（图5A），在所有空腹剂量水平下，平均达峰时间（T_max）均在给药后1小时内达到，4至20 mg剂量范围内的末端消除半衰期约为12至17小时。在所研究的剂量范围内，C_max和AUC呈剂量比例关系。餐后给药导致T_max延迟约1小时，C_max降低约56%，但总体吸收程度（AUC）不受影响（图5B，表3）。

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血浆蛋白结合[1]
CERC–301/Rislenemdaz在37°C下对大鼠（89.6%）、狗（97.2%）、猴子（96.9%）和人类（97.7%）表现出高度的浓度非依赖性血浆蛋白结合。

非临床安全性[1]
大鼠神经毒性[1]
在大鼠中，单次给予Rislenemdaz/CERC‐301（10、30 和 100 mg kg−1）和溶剂对照，均未在所有检测的脑区引起空泡化或坏死。在这些剂量下，平均 Cmax 分别约为 4、14 和 26 μmol L−1（1433、5018 和 9319 ng mL−1）。相比之下，所有给予 MK‐801（10 mg kg−1）的动物的扣带回神经元均出现空泡化和坏死，这与之前的报道一致（Fix 等，1995）。在4-6小时时间点，所有接受MK-801治疗的动物（6只雄性；第5组）的大脑皮层扣带回区域第3层和第4层均出现大量空泡化神经元。受影响的神经元的特征是胞质内充满大量紧密排列、界限分明的空泡。在第4天，所有接受MK-801治疗的动物（6只雄性；第5组）的大脑皮层扣带回区域第3层和第4层均出现坏死神经元（使用Fluoro-Jade B染色剂显色），这与之前的报道一致（Fix等，1995）。在MK-801治疗的动物中，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色显示扣带回区域的染色强度略有增加。

[1]. Preclinical pharmacology and pharmacokinetics of CERC‐301, a GluN2B‐selective N‐methyl‐D‐aspartate receptor antagonist. Pharmacol Res Perspect. 2015 Dec; 3(6): e00198.

Mk 0657 已用于研究重度抑郁症治疗的试验。

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对口服生物利用度高的选择性 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体亚基 2B (GluN2B) 拮抗剂 4-甲基苄基 (3S, 4R)-3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸酯 (CERC-301/利赛尼达) 进行了临床前药效学和药代动力学表征，旨在开发一种基于受体占有率 (RO) 的转化方法，以指导 CERC-301 在重度抑郁症临床试验中的剂量选择。CERC-301 对 GluN2B 具有高亲和力 (K_i，8.1 nmol L^-1)，IC₅₀ 为 3.6 nmol L^-1，且无脱靶活性。 CERC-301 在强迫游泳试验中显示出疗效，有效剂量 (ED50) 为 0.3-0.7 mg kg⁻¹（RO，30-50%）；在 ED50 为 2 mg kg⁻¹ 时观察到运动活性增加，对应的 RO 为 75%。预测的人体 50% RO 浓度 (Occ50) 为 400 nmol L⁻¹，与大鼠、犬和猴的预测值（分别为 300、200 和 400 nmol L⁻¹）相似。安全性药理学和神经毒性研究未发现任何特定的安全性问题。一项在健康男性中进行的首次人体研究表明，其药代动力学特征与剂量呈正比，Tmax 约为 1 小时，t1/2 为 12-17 小时。基于临床前和药效学数据，推测在人体中，≥8 mg 的剂量具有可接受的安全性，并能达到临床相关的血浆峰值暴露量。[1]

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在清醒遥测大鼠中的研究表明，口服利赛仑达兹/CERC-301 可短暂且呈剂量依赖性地升高动脉血压，剂量范围为 0.3 至 1 mg kg⁻¹，并在 1 至 10 mg kg⁻¹ 时达到平台期。有趣的是，血压效应的 ED50 与强迫游泳试验的 ED50 相似。CERC-301 引起的血流动力学变化幅度小于广谱 NMDA 受体拮抗剂 MK-801。MK-801 的研究结果与先前发表的关于 MK-801 的机制数据（Lewis 等，1989）一致。心率和血压的变化可能部分归因于药物依赖性增强大鼠的运动能力；在运动功能研究中也观察到了剂量依赖性运动分析，并在较高剂量下呈现出支持这一趋势。本研究还表明，α1-肾上腺素能阻断剂可能对CERC-301介导的血压升高具有保护作用；然而，还需要更多研究来进一步阐明其潜在机制。[1]
与一些临床使用的NMDA受体拮抗剂（例如氯胺酮或美金刚）不同，CERC-301在单次口服剂量高达100 mg kg−1的大鼠中未显示出神经毒性。这一结果与其他GluN2B特异性受体拮抗剂（例如CP-101,606和Ro 63-1908）的研究结果一致，这些拮抗剂均未表现出神经毒性。其中，CP-101,606甚至可能对发育中的大脑具有神经保护作用（Gill等人，2002；Lewis等人，2012）。GluN2B特异性拮抗剂在非临床环境中未表现出神经毒性信号，且在临床环境中未观察到类似氯胺酮的精神活性作用，因此，如果未来的临床试验数据需要，可以增加这些药物的剂量以达到更高的受体占有率（高于本文预测的水平）。 [1]
CERC-301 首次人体研究的药代动力学数据显示，在 0.1 至 20 mg 单次剂量（空腹）范围内，平均 Cmax 为 0.007 μmol L−1 (2.4 ng mL−1) 至 1.65 μmol L−1 (590.3 ng mL−1)，其半衰期使其适合每日一次给药。[1]
CERC-301 是一种强效、口服生物利用度高的选择性 NMDA-GluN2B 受体拮抗剂，具有抗抑郁作用。基于临床前药代动力学和药效学数据，推测每日 8 mg 的慢性给药方案具有可接受的安全性，可达到临床相关的血浆和脑组织浓度，并能快速发挥抗抑郁作用。[1]

C19H23FN4O2

358.409927606583

358.18

C, 63.67; H, 6.47; F, 5.30; N, 15.63; O, 8.93

808732-98-1

808733-06-4 (HCl);808732-98-1;1893392-76-1 (mesylate);

11394238

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

527.4±60.0 °C at 760 mmHg

272.7±32.9 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.584

2.73

67.4

1

6

6

26

439

2

CC1=CC=C(C=C1)COC(=O)N2CC[C@@H]([C@@H](C2)F)CNC3=NC=CC=N3

RECBFDWSXWAXHY-IAGOWNOFSA-N

InChI=1S/C19H23FN4O2/c1-14-3-5-15(6-4-14)13-26-19(25)24-10-7-16(17(20)12-24)11-23-18-21-8-2-9-22-18/h2-6,8-9,16-17H,7,10-13H2,1H3,(H,21,22,23)/t16-,17-/m1/s1

4-methylbenzyl (3S,4R)-3-fluoro-4-((pyrimidin-2-ylamino)methyl)piperidine-1-carboxylate

CERC-301; CERC301; Rislenemdaz; 808732-98-1; Rislenemdaz [USAN]; Rislenemdaz, (-)-; MK-0657, (-)-; 4-Methylbenzyl (3S,4R)-3-fluoro-4-((pyrimidin-2-ylamino)methyl)piperidine-1-carboxylate; CERC 301; MK-0657; MK 0657; MK0657;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~279.01 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。