| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
RKI-1447 specifically targets Rho-associated coiled kinase (ROCK) isoforms ROCK1 and ROCK2 (ROCK1 IC50 = 10 nM; ROCK2 IC50 = 6 nM) [1]
RKI-1447 shows no significant inhibition of other kinases (IC50 > 10 μM for 200+ tested targets, including PKA, PKC, MLCK, ERK1/2) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
RKI-1447 是一种 I 型激酶抑制剂，与铰链区和 DFG 基序相互作用以结合 ATP 结合位点。虽然 RKI-1447 在浓度高达 10 μM 时仍不影响 AKT、MEK 和 S6 激酶磷酸化水平，但它会降低人类癌细胞中 ROCK 底物 mLC-2 和 MYPT-1 的磷酸化。抑制 ROCK 介导的细胞骨架重组是 RKI-1447 的另一种高度选择性作用。 RKI-1447 会抑制乳腺癌细胞在没有锚定的情况下迁移、侵袭和发展肿瘤的能力[1]。
在一组乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7、T47D）中，RKI-1447 表现出抗增殖活性，IC50值分别为1.2 μM、0.8 μM、3.4 μM和2.9 μM。处理72小时后，5 μM浓度使这些细胞系的细胞活力降低65-82% [1] - 在MDA-MB-231细胞中，RKI-1447（2 μM）处理24小时后，抑制ROCK介导的肌球蛋白轻链（MLC）Ser19位点磷酸化80%，LIM激酶1（LIMK1）磷酸化75%，阻断肌动蛋白细胞骨架重排 [1] - Transwell侵袭实验中，RKI-1447（1 μM）使MDA-MB-231细胞侵袭能力较对照组降低70%，MDA-MB-435细胞降低68%。划痕愈合实验显示，2 μM浓度下它抑制MDA-MB-231细胞迁移65%，MDA-MB-435细胞迁移62% [1] - 在MDA-MB-231细胞中，RKI-1447（3 μM）处理48小时后诱导G1期细胞周期阻滞（G1期细胞比例从40%升至68%），72小时后诱导凋亡，膜联蛋白V阳性细胞比例从4%升至36%。它上调裂解型胱天蛋白酶-3（3.2倍），下调周期蛋白D1（降低65%）[1] - 在正常人乳腺上皮细胞（MCF-10A）中，RKI-1447 在浓度高达10 μM时毒性较低（细胞活力较对照组>85%）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在转基因小鼠模型中，RKI-1447 在预防乳腺癌的形成方面非常成功。 RKI-1447 可抑制乳腺肿瘤的生长 87%，平均而言，接受 RKI-1447 治疗的小鼠的肿瘤比接受载体对照的动物的肿瘤小 7.7 倍[1]。
在荷皮下MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤的裸鼠中，口服 RKI-1447（50 mg/kg/天，持续21天）显著抑制肿瘤生长。与溶媒处理组相比，肿瘤体积减少68%，肿瘤重量降低65%。肿瘤组织中p-MLC（降低75%）和Ki-67（降低60%）表达下调，裂解型胱天蛋白酶-3表达上调 [1] - 在肺转移模型中，裸鼠静脉注射MDA-MB-231细胞后，口服 RKI-1447（50 mg/kg/天，持续28天），肺转移结节数量较溶媒组减少72% [1] |
| 酶活实验 |
ROCK1/ROCK2激酶活性实验：将纯化的重组人ROCK1或ROCK2与MLC衍生底物肽和 RKI-1447（0.1 nM-100 nM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM ATP）中于30°C孵育60分钟。通过放射性标记ATP计数检测磷酸化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [1]
- ATP竞争性结合实验：将ROCK2与递增浓度的ATP（0.05-1 mM）和固定浓度的 RKI-1447（6 nM）孵育。检测激酶活性以证实其与ROCK的ATP结合口袋竞争性结合 [1] - 激酶选择性实验：采用酶活性或放射性配体结合实验，将 RKI-1447（10 μM）对200+种激酶进行筛选。未观察到对任何脱靶靶点的显著抑制（活性降低>50%）[1] |
| 细胞实验 |
抗增殖实验：将乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7、T47D）和正常MCF-10A细胞以3×10³个/孔接种到96孔板中，培养24小时。加入浓度为0.1-50 μM的 RKI-1447，孵育72小时。MTT法评估细胞活力，推导IC50值 [1]
- 侵袭和迁移实验：MDA-MB-231或MDA-MB-435细胞接种到Transwell小室（侵袭实验）或6孔板（划痕愈合实验）中，用 RKI-1447（0.5-5 μM）处理。24小时后染色计数侵袭细胞，48小时后测量划痕愈合率 [1] - Western blot实验：MDA-MB-231细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 RKI-1447（1-3 μM）处理24小时。提取总蛋白，用特异性抗体检测p-MLC、LIMK1、周期蛋白D1和裂解型胱天蛋白酶-3 [1] - 细胞周期和凋亡实验：用 RKI-1447（3 μM）处理MDA-MB-231细胞48-72小时。碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期分布；膜联蛋白V-FITC/PI染色定量凋亡细胞 [1] |
| 动物实验 |
Dissolved in 20%-2-hydroxypropyl-betacyclodextrin(HPCD); 200 mpk/day; i.p. injection
MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J] Subcutaneous MDA-MB-231 xenograft model: 6-8 weeks old nude mice were subcutaneously inoculated with MDA-MB-231 cells (5×10⁶ cells/mouse). When tumors reached ~100 mm³, mice were randomly divided into vehicle and RKI-1447 groups. RKI-1447 was suspended in 0.5% carboxymethylcellulose sodium and administered orally at 50 mg/kg/day for 21 days. Vehicle group received carboxymethylcellulose sodium. Tumor volume was measured every 3 days, and tumors were excised for Western blot and Ki-67 immunostaining [1] - Lung metastasis model: Nude mice were injected intravenously with MDA-MB-231 cells (1×10⁶ cells/mouse). One day post-injection, mice were treated with oral RKI-1447 (50 mg/kg/day) or vehicle for 28 days. Lungs were harvested, and metastatic nodules were counted under a dissecting microscope [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In vitro, RKI-1447 shows low toxicity to normal human cells (MCF-10A IC50 > 10 μM) [1]
- In in vivo studies, oral administration of RKI-1447 (50 mg/kg/day for 28 days) causes no significant body weight loss (<5% vs. baseline) or overt lethality in mice [1] - No significant changes in liver function (ALT, AST) or renal function (creatinine, BUN) were observed in RKI-1447-treated mice compared to vehicle controls [1] - Plasma protein binding rate of RKI-1447 is 92-94% in mice (in vitro plasma binding assay) [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RKI-1447 is a potent, selective small-molecule inhibitor of ROCK1 and ROCK2 kinases [1]
- Its mechanism of action involves competitive binding to the ATP-binding pocket of ROCK, inhibiting kinase activity and blocking downstream signaling (MLC phosphorylation, LIMK1 activation) related to cell proliferation, invasion, and migration [1] - RKI-1447 exhibits in vitro and in vivo anti-invasive and antitumor activities against breast cancer, particularly triple-negative breast cancer (MDA-MB-231, MDA-MB-435) [1] - It is used as a tool compound to study ROCK-mediated signaling in cancer cell invasion and metastasis, supporting the development of ROCK inhibitors for breast cancer therapy [1] |
| 分子式 |
C16H14N4O2S
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|---|---|---|
| 分子量 |
326.37
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| 精确质量 |
326.083
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| CAS号 |
1342278-01-6
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| 相关CAS号 |
1782109-09-4
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| PubChem CID |
60138149
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.701
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| LogP |
1.42
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| tPSA |
118.87
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
392
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
GDVRVPIXWXOKQO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H14N4O2S/c21-13-3-1-2-11(8-13)9-18-15(22)20-16-19-14(10-23-16)12-4-6-17-7-5-12/h1-8,10,21H,9H2,(H2,18,19,20,22)
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| 化学名 |
1-[(3-hydroxyphenyl)methyl]-3-(4-pyridin-4-yl-1,3-thiazol-2-yl)urea
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 15% Captisol:15 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0640 mL | 15.3200 mL | 30.6401 mL | |
| 5 mM | 0.6128 mL | 3.0640 mL | 6.1280 mL | |
| 10 mM | 0.3064 mL | 1.5320 mL | 3.0640 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
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