RKI-1447

别名: RKI 1447;ROCK Inhibitor XIII; RKI-1447; RKI1447; 1-(3-羟基苄基)-3-[4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基]脲;RKI-1447
目录号: V1346 纯度: ≥98%
RKI-1447(ROCK Inhibitor XIII;RKI 1447;RKI1447)是一种有效的 ROCK1 和 ROCK2 小分子抑制剂,具有潜在的抗乳腺癌活性。
RKI-1447 CAS号: 1342278-01-6
产品类别: ROCK
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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  • RKI-1447 dihydrochloride
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纯度: ≥98%

产品描述
RKI-1447(ROCK Inhibitor XIII;RKI 1447;RKI1447)是一种有效的 ROCK1 和 ROCK2 小分子抑制剂,具有潜在的抗乳腺癌活性。它抑制 ROCK1 和 ROCK2,IC50 分别为 14.5 nM 和 6.2 nM。 RKI-1447 是一种 I 型激酶抑制剂,通过与铰链区和 DFG 基序的相互作用来结合 ATP 结合位点。 RKI-1447 抑制人类癌细胞中 ROCK 底物 MLC-2 和 MYPT-1 的磷酸化。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
体外活性:RKI-1447 是一种细胞渗透性吡啶噻唑基脲,可作为一种有效的 ATP 位点靶向 Rho 激酶抑制剂,对 PKA、PKN1/PRK1、p70S6K/RPS6kB1、AKT1、MRCKa/CDC42BPA 的效力大大降低( 1 µM RKI-1447)或 15 种其他激酶分别抑制 85.5%、80.5%、61.9%、56.0% 和 50.4%。 RKI-1447/ROCK1 复合物的晶体结构表明,RKI-1447 是一种 I 型激酶抑制剂,通过与铰链区和 DFG 基序的相互作用来结合 ATP 结合位点。 RKI-1447 抑制人类癌细胞中 ROCK 底物 MLC-2 和 MYPT-1 的磷酸化,但在浓度高达 10 μM 时对 AKT、MEK 和 S6 激酶的磷酸化水平没有影响。 RKI-1447 还高度选择性地抑制 LPA 刺激后 ROCK 介导的细胞骨架重组(肌动蛋白应力纤维形成),但不影响 PDGF 和缓激肽刺激后 PAK 介导的板状伪足和丝状伪足形成。 RKI-1447 抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭和不依赖锚定的肿瘤生长。激酶测定:使用 Invitrogen Z-Lyte® FRET 激酶测定法和基于肌球蛋白轻链序列 KKRPQRRYSNVF 的 Ser/Thr 13 肽底物来测量激酶抑制。化合物在不同的三天进行测试,一式两份进行 8 点稀释,以确定平均 IC50 值。测定条件优化为 15 μL 激酶反应体积,含有 5 ng 酶,溶于 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl2、1 mM EGTA 和 0.01% Brij-35。在 1.5 μM 肽底物与 12.5 μM ATP(对于 ROCK1)或 2 μM 底物与 50 μM ATP(对于 ROCK2)存在下,将反应在室温下孵育 1 小时。然后停止反应,并按照制造商的描述,通过仅选择性切割非磷酸化肽来确定磷酸化肽与非磷酸化肽的比率。随后在 400 nm 处激发香豆素,导致在 445 nm 处发射,能量转移至荧光素并最终在 520 nm 处发射。底物含有香豆素和荧光素,只有未切割的磷酸化底物才会进行 FRET。使用 Wallac EnVision 读板器(2102 型读板器)测量 445 nm 和 520 nm 处的信号比率。细胞测定:将MDA-MB-231细胞接种于96孔组织培养板(每孔1200个细胞)中并孵育24小时。孵育后,用载体或增加浓度的 RKI-1447 处理细胞 72 小时。孵育后,将新鲜制备的MTT(2mg/ml)加入到每个孔中并孵育3小时。孵育后,在 540 nm 处读取板的读数。
体内研究 (In Vivo)
RKI-1447 在转基因小鼠模型中非常有效地抑制乳腺肿瘤的生长。用 RKI-1447 治疗的小鼠的肿瘤体积增大,肿瘤体积的平均变化百分比仅为 8.8%。因此,RKI-1447 抑制乳腺肿瘤生长 87%,平均而言,与用载体对照治疗的小鼠的乳腺肿瘤相比,RKI-1447 治疗的小鼠的乳腺肿瘤小 7.7 倍。 RKI-1447 治疗不会导致小鼠体重减轻。
动物实验
Dissolved in 20%-2-hydroxypropyl-betacyclodextrin(HPCD); 200 mpk/day; i.p. injection
MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]
参考文献
Cancer Res.2012 Oct 1;72(19):5025-34;Medchemcomm.2012 Jun 1;3(6):699-709.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H14N4O2S
分子量
326.37
CAS号
1342278-01-6
SMILES
O=C(NC1=NC(C2=CC=NC=C2)=CS1)NCC3=CC=CC(O)=C3
别名
RKI 1447;ROCK Inhibitor XIII; RKI-1447; RKI1447;
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外)
DMSO: 65 mg/mL (199.16 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内)
15% Captisol:15 mg/mL
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 50% PEG300 → 5% Tween-80 → 35% ddH2O;假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄 清 DMSO 储备液加到 500 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入350 μL ddH2O定容至 1 mL);
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.0640 mL 15.3200 mL 30.6401 mL
5 mM 0.6128 mL 3.0640 mL 6.1280 mL
10 mM 0.3064 mL 1.5320 mL 3.0640 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • RKI-1447

    RKI-1447 but not RKI-1313 inhibits selectively the phosphorylation of MLC-2 and MYPT-1. Cancer Res. 2012 Oct 1;72(19):5025-34.
  • RKI-1447

    RKI-1447 suppresses LPA-induced actin stress fiber but not PDGF-induced lamellipodia or bradykinin-induced filopodia formation. Cancer Res. 2012 Oct 1;72(19):5025-34.
  • RKI-1447

    RKI-1447 but not RKI-1313 inhibits anchorage-independent growth of breast cancer cells. Cancer Res. 2012 Oct 1;72(19):5025-34.
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