规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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5mg |
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10mg |
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25mg |
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50mg |
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100mg |
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250mg |
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500mg |
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Other Sizes |
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体外研究 (In Vitro) |
体外活性:RKI-1447 是一种细胞渗透性吡啶噻唑基脲,可作为一种有效的 ATP 位点靶向 Rho 激酶抑制剂,对 PKA、PKN1/PRK1、p70S6K/RPS6kB1、AKT1、MRCKa/CDC42BPA 的效力大大降低( 1 µM RKI-1447)或 15 种其他激酶分别抑制 85.5%、80.5%、61.9%、56.0% 和 50.4%。 RKI-1447/ROCK1 复合物的晶体结构表明,RKI-1447 是一种 I 型激酶抑制剂,通过与铰链区和 DFG 基序的相互作用来结合 ATP 结合位点。 RKI-1447 抑制人类癌细胞中 ROCK 底物 MLC-2 和 MYPT-1 的磷酸化,但在浓度高达 10 μM 时对 AKT、MEK 和 S6 激酶的磷酸化水平没有影响。 RKI-1447 还高度选择性地抑制 LPA 刺激后 ROCK 介导的细胞骨架重组(肌动蛋白应力纤维形成),但不影响 PDGF 和缓激肽刺激后 PAK 介导的板状伪足和丝状伪足形成。 RKI-1447 抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭和不依赖锚定的肿瘤生长。激酶测定:使用 Invitrogen Z-Lyte® FRET 激酶测定法和基于肌球蛋白轻链序列 KKRPQRRYSNVF 的 Ser/Thr 13 肽底物来测量激酶抑制。化合物在不同的三天进行测试,一式两份进行 8 点稀释,以确定平均 IC50 值。测定条件优化为 15 μL 激酶反应体积,含有 5 ng 酶,溶于 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl2、1 mM EGTA 和 0.01% Brij-35。在 1.5 μM 肽底物与 12.5 μM ATP(对于 ROCK1)或 2 μM 底物与 50 μM ATP(对于 ROCK2)存在下,将反应在室温下孵育 1 小时。然后停止反应,并按照制造商的描述,通过仅选择性切割非磷酸化肽来确定磷酸化肽与非磷酸化肽的比率。随后在 400 nm 处激发香豆素,导致在 445 nm 处发射,能量转移至荧光素并最终在 520 nm 处发射。底物含有香豆素和荧光素,只有未切割的磷酸化底物才会进行 FRET。使用 Wallac EnVision 读板器(2102 型读板器)测量 445 nm 和 520 nm 处的信号比率。细胞测定:将MDA-MB-231细胞接种于96孔组织培养板(每孔1200个细胞)中并孵育24小时。孵育后,用载体或增加浓度的 RKI-1447 处理细胞 72 小时。孵育后,将新鲜制备的MTT(2mg/ml)加入到每个孔中并孵育3小时。孵育后,在 540 nm 处读取板的读数。
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体内研究 (In Vivo) |
RKI-1447 在转基因小鼠模型中非常有效地抑制乳腺肿瘤的生长。用 RKI-1447 治疗的小鼠的肿瘤体积增大,肿瘤体积的平均变化百分比仅为 8.8%。因此,RKI-1447 抑制乳腺肿瘤生长 87%,平均而言,与用载体对照治疗的小鼠的乳腺肿瘤相比,RKI-1447 治疗的小鼠的乳腺肿瘤小 7.7 倍。 RKI-1447 治疗不会导致小鼠体重减轻。
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动物实验 |
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参考文献 |
Cancer Res.2012 Oct 1;72(19):5025-34;Medchemcomm.2012 Jun 1;3(6):699-709.
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分子式 |
C16H14N4O2S
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分子量 |
326.37
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CAS号 |
1342278-01-6
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SMILES |
O=C(NC1=NC(C2=CC=NC=C2)=CS1)NCC3=CC=CC(O)=C3
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别名 |
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存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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溶解度 (体外) |
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溶解度 (体内) |
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 50% PEG300 → 5% Tween-80 → 35% ddH2O;假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄 清 DMSO 储备液加到 500 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入350 μL ddH2O定容至 1 mL); 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 3.0640 mL | 15.3200 mL | 30.6401 mL | |
5 mM | 0.6128 mL | 3.0640 mL | 6.1280 mL | |
10 mM | 0.3064 mL | 1.5320 mL | 3.0640 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。