RO-5963

别名: RO-5963; RO5963; RO 5963

目录号: V6157

COA 产品数据产品说明书 SDS

RO-5963 是 p53-MDM2 和 p53-MDMX 相互作用的双重（双功能）抑制剂，IC50 分别约为 17 nM 和 24 nM。

RO-5963 CAS号: 1416663-77-8
产品类别: New1

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
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产品描述

RO-5963 是 p53-MDM2 和 p53-MDMX 相互作用的双重（双功能）抑制剂，IC50 分别约为 17 nM 和 24 nM。RO-5963是一种同时靶向p53与MDM2和MDMX相互作用的小分子双重抑制剂。它是作为高效但溶解度差的母体化合物RO-2443的后续化合物开发的，通过化学修饰显著改善了溶解度和细胞活性。RO-5963的分子量为518.9 g/mol，CAS号为1416663-77-8，是首个能够通过结合MDM2和MDMX的N端p53结合结构域诱导其二聚化的化合物，在p53通路激活剂中具有独特的作用机制。

生物活性&实验参考方法

靶点	MDM2 and MDMX (dual inhibitor). IC50 values: p53-MDM2 binding inhibition ~17 nM (comparable to nutlin-3a at ~19 nM); p53-MDMX binding inhibition ~24 nM (approximately 400-fold more potent than nutlin-3a, which has IC50 ~9 μM) [1].
体外研究 (In Vitro)	体外活性： RO-5963（10或20 μM）可穿透MDMX过表达的MCF7乳腺癌细胞，稳定p53，并以剂量依赖性方式升高p53转录靶点p21和MDM2的蛋白水平。p21和MDM2蛋白水平的增加归因于其转录的诱导，这通过它们的mRNA以及另外两个p53转录靶点MIC-1和BAX的剂量依赖性增加所揭示，但MDMX（不受p53控制）无此变化 [1]。 MCF7细胞中的免疫共沉淀实验显示，RO-5963（10或20 μM处理4小时）可同时破坏p53-MDM2和p53-MDMX相互作用。在20 μM浓度下，RO-5963在抑制p53-MDM2结合方面与10 μM nutlin-3a相当，并在10和20 μM浓度下有效阻断p53-MDMX结合。Nutlin-3a对p53-MDMX相互作用无影响。免疫沉淀的MDMX中拉下的MDMX和MDM2蛋白显著增加，这与RO-5963诱导的MDMX/MDMX和MDMX/MDM2二聚体形成一致 [1]。在三种野生型p53癌细胞系（MCF7、HCT116、RKO）的细胞活力测定中，RO-5963的EC50值比突变型p53细胞系（SW480、MDA-MB-435）低约10倍。RO-5963不增加p53 Ser15磷酸化，表明p53激活不是由基因毒性应激引起的 [1]。在G401和H460细胞中，RO-5963以剂量依赖性方式增加p53、MDM2和p21水平，同时仅轻微降低MDMX。重要的是，RO-5963可保护MDMX免受nutlin诱导的MDM2介导的降解。在11种野生型p53实体瘤细胞系（乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌、骨肉瘤、黑色素瘤）中，RO-5963有效激活p53并升高p21和MDM2水平 [1]。在细胞周期分析中，RO-5963强效地将指数生长的癌细胞阻滞在G1和G2期，有效耗尽S期细胞。在使用SJSA-V（亲本）和SJSA-X（MDMX过表达）细胞的凋亡实验中，RO-5963在两种细胞系中均显示出强烈的Annexin V信号，而nutlin-3a在SJSA-X中几乎无活性。RO-5963的凋亡活性呈剂量依赖性，且与nutlin-3a联用时增强。SJSA-X裂解物的Western blot分析显示，20 μM RO-5963诱导的p53积累与10 μM nutlin-3a相当，但p21和MDM2水平在RO-5963处理下更高，表明由于双重抑制而增强了转录活性 [1]。在具有不同MDMX/MDM2比率的乳腺癌细胞系（MCF7高MDMX、ZR75-30中等MDMX、ZR75-1低MDMX）中，RO-5963（20 μM）在MCF7和ZR75-30细胞中显示出比nutlin-3a高得多的凋亡活性。在9种野生型p53癌细胞系中，RO-5963在4/9的细胞系（H460、RKO、LS174T、AGS）中显示出比nutlin-3a更好的凋亡活性，这与相对较高的MDMX水平相关 [1]。在 MCF7 和 ZR75-30 细胞系中，RO-5963（10–20 μM；48 小时）比 Nutlin 表现出更强的凋亡活性 [1]。 RO-5963（10 μM，24 小时）有效激活 p53 并提高 p21 和 MDM2 水平 [1]。
酶活实验	酶学实验： MDM2-p53和MDMX-p53结合通过时间分辨荧光共振能量转移结合实验和荧光淬灭实验进行评估。对于RO-2443（RO-5963的母体化合物），进行了等温滴定量热法测定，显示结合常数（Kd = 78 nM）由熵组分主导，与主要疏水结合相互作用一致。使用¹⁵N标记的人源化斑马鱼MDMX进行的核磁共振波谱显示，RO-2443结合于p53口袋，Y63出现显著的高场位移，与芳香基团的屏蔽作用一致。静态光散射尺寸排阻色谱显示，RO-2443诱导MDMX二聚体形成，复合物质量计算为24.1 kDa（理论单体12.3 kDa）[1]。 MDMX与RO-2443结合的晶体结构（1.8 Å分辨率）揭示了一个二聚体排列，两个抑制剂分子位于核心，每个分子与两个蛋白单体相互作用。吲哚基-乙内酰脲部分占据一个单体的Phe口袋，而二氟苯基伸入另一个单体的Trp口袋，两个吲哚基-乙内酰脲基团之间存在广泛的芳香堆积相互作用（3.3-3.7 Å）[1]。
细胞实验	细胞实验：细胞增殖/活力通过甲基噻唑基四氮唑和CellTiter-Glo实验评估。对于剂量反应曲线，将细胞与系列稀释的RO-5963孵育5天，活力表示为对照的百分比±SD [1]。对于Western blot分析，将对数期细胞与RO-5963孵育24小时（或按指示），制备细胞裂解物，使用特异性抗体测定p53、p21、MDM2、MDMX和磷酸化p53（Ser15）的蛋白水平。对于联合研究，将细胞与RO-5963在有或没有10 μM nutlin-3a的情况下孵育 [1]。对于免疫共沉淀，将MCF7细胞与10 μM nutlin-3a或10/20 μM RO-5963孵育4小时。用抗MDMX或抗p53抗体免疫沉淀蛋白复合物，通过Western blotting测定p53、MDM2和MDMX的水平 [1]。对于凋亡实验，将细胞与化合物孵育48小时，通过Annexin V实验确定凋亡细胞百分比。对于细胞周期分析，用化合物处理指数生长的细胞，通过流式细胞术分析细胞周期分布 [1]。对于基因表达分析，将MCF7细胞用RO-5963处理24小时，提取RNA，通过实时PCR定量p53靶基因和MDMX的mRNA水平 [1]。细胞凋亡分析 [1] 细胞类型： ZR75-30、MCF7 细胞测试浓度： 10、20 μM 孵育时间： 48小时实验结果：强烈显示细胞凋亡活性。蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： LNCap、U2OS、RKO、A489、22Rv1、HCT116、H460、LOX、MCF7、A549、G401 细胞测试浓度： 10 μM 孵育时间： 24 小时实验结果：有效激活 p53 和增加 p21 和 MDM2 水平。
药代性质 (ADME/PK)	RO-5963是RO-2443的类似物，具有略高的效力和显著改善的溶解度。RO-2443在体外显示出强效的MDM2/MDMX抑制活性，但水溶性差，无法对其细胞活性进行有意义的评估。未报道RO-5963的特异性药代动力学数据（吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度）[1]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	该化合物不增加p53 Ser15磷酸化，表明p53激活不是由基因毒性应激引起的，提示其具有非基因毒性作用机制 [1]。
参考文献	[1]. Activation of the p53 pathway by small-molecule-induced MDM2 and MDMX dimerization. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 17;109(29):11788-93.
其他信息	RO-5963是一种双重MDM2/MDMX抑制剂，源自通过高通量筛选鉴定的吲哚基-乙内酰脲类化合物。与母体化合物RO-2443（溶解度差）不同，RO-5963具有显著改善的溶解度，能够评估细胞活性。该化合物通过与MDM2和MDMX的N端p53结合结构域结合来诱导其二聚化，这是小分子抑制剂此前未观察到的机制。MDMX与母体化合物RO-2443结合的晶体结构显示，两个抑制剂分子介导二聚体形成，每个抑制剂以"握手"构型与两个蛋白单体结合。RO-5963克服了MDMX过表达癌细胞对选择性MDM2拮抗剂（如nutlin-3a）的耐药性，使其成为MDMX扩增癌症（约占乳腺癌、结肠癌和肺癌的19%）的有前途的先导化合物。该双重抑制剂可恢复p53转录活性，并在nutlin-3a无效的MDMX过表达细胞系中诱导凋亡 [1]。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C24H21CLF2N4O5
分子量	518.897151708603
精确质量	518.116
元素分析	C, 55.55; H, 4.08; Cl, 6.83; F, 7.32; N, 10.80; O, 15.42
CAS号	1416663-77-8
PubChem CID	136209736
外观&性状	Light yellow to yellow solid powder
LogP	1.4
tPSA	135
氢键供体(HBD)数目	5
氢键受体(HBA)数目	8
可旋转键数目(RBC)	7
重原子数目	36
分子复杂度/Complexity	959
定义原子立体中心数目	0
SMILES	CC1=C(C=CC\2=C1N=C/C2=C\C3=C(N(C(=O)N3)C(C4=CC(=C(C=C4)F)F)C(=O)NC(CO)CO)O)Cl
InChi Key	IFYMUYSGUSHEPI-NTUHNPAUSA-N
InChi Code	InChI=1S/C24H21ClF2N4O5/c1-11-16(25)4-3-15-13(8-28-20(11)15)7-19-23(35)31(24(36)30-19)21(22(34)29-14(9-32)10-33)12-2-5-17(26)18(27)6-12/h2-8,14,21,32-33,35H,9-10H2,1H3,(H,29,34)(H,30,36)/b13-7+
化学名	2-[5-[(Z)-(6-chloro-7-methylindol-3-ylidene)methyl]-4-hydroxy-2-oxo-1H-imidazol-3-yl]-2-(3,4-difluorophenyl)-N-(1,3-dihydroxypropan-2-yl)acetamide
别名	RO-5963; RO5963; RO 5963
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~150 mg/mL (~289.07 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (7.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 3.75 mg/mL (7.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~150 mg/mL (~289.07 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (7.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (7.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.9272 mL	9.6358 mL	19.2715 mL
	5 mM	0.3854 mL	1.9272 mL	3.8543 mL
	10 mM	0.1927 mL	0.9636 mL	1.9272 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

RO-5963 stabilizes p53 and activates the p53 pathway in cancer cells. (A) Chemical structure and in vitro inhibitory activity of RO-5963 and the MDM2 antagonist, nutlin-3a. (B) RO-5963 stabilizes p53 and elevates protein levels of p53 targets, p21 and MDM2. Log-phase MCF7 cells were incubated with RO-5953 for 24 h, and cell lysates were analyzed by Western blotting. (C) Dose-dependent induction of p53 target genes in MCF7 cells 24 h post RO-5963 addition. (D) RO-5963 inhibits p53-MDM2 and p53-MDMX binding in cancer cells. MCF7 cells were incubated with 10 μM nutlin-3a and 10 or 20 μM RO-5963 for 4 h, and the levels of p53, MDM2, and MDMX were determined in protein complexes immunoprecipitated with anti-MDMX or anti-p53 antibodies by Western blotting.[1].Graves B, et al. Activation of the p53 pathway by small-molecule-induced MDM2 and MDMX dimerization. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 17;109(29):11788-93.

RO-5963 activates p53 signaling in diverse cellular context by a nongenotoxic mechanism. (A) Antitumor activity of RO-5963 depends on the p53 status. Viability of three wild-type p53 (MCF7, HCT116, RKO) and two mutant p53 (SW480, MDA-MB-435) cancer cell lines was determined by the CellTiter-Glo assay after 5 d of incubation with RO-5963 and expressed as percentage of controls ± SD. (B) RO-5963 does not induce genotoxic response in cancer cells. Cells were incubated with 10 μM RO-5963 or 1 μM doxorubicin for 24 h, and the levels of total and Ser15-phosphorylated p53 were determined by Western blotting. (C) Binding of RO-5963 prevents MDM2-mediated degradation of MDMX. G401 and H460 cells were incubated with the indicated concentrations of RO-5963 with or without 10 μM nutlin-3a, and relative levels of p53, p21, MDM2, and MDMX were determined by Western blotting. Blots representative of three independent experiments are shown.[1].Graves B, et al. Activation of the p53 pathway by small-molecule-induced MDM2 and MDMX dimerization. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 17;109(29):11788-93.

Apoptotic activity of RO-5963 and MDMX status. (A) Breast cancer cells respond to RO-5963 depending on the levels of MDM2 and MDMX. Three cell lines with variable ratios of MDMX/MDM2 proteins were exposed to nutlin-3a (10 μM) and RO-5963 (10 or 20 μM) for 48 h, and the percentage of apoptotic cells (± SD) was determined by the Annexin V assay. (B) Cytotoxicity of RO-5963 on MCF7 cells. Phase-contrast images were taken 48 h after addition of 20 μM RO5963. (C) Relative protein levels of MDM2 and MDMX in a panel of solid tumor cell lines. Cells lines at subconfluent stage of growth were analyzed for protein levels by Western blotting. (D) Apoptotic response to RO-5963 and nutlin in a panel of cancer cell lines with wild-type and mutant p53. Log-phase cells were incubated with nutlin-3a and RO-5963 for 48 h and analyzed for apoptosis as in A. Two mutant p53 cell lines, MDA-MB-435 and SW480, were included as controls.[1].Graves B, et al. Activation of the p53 pathway by small-molecule-induced MDM2 and MDMX dimerization. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 17;109(29):11788-93.