Robinin   中文名称: 刺槐苷

Robinin inhibits TLR4/NF-κB signaling in oxidized LDL-induced human PBMCs [1].
Robinin suppresses TLR2-PI3K-AKT signaling in pancreatic cancer cells [2].
Robinin modulates TGF-β1 signaling in doxorubicin-induced cardiac apoptosis [4].
Robinin is a Toll-like receptor 2 (TLR2) inhibitor. [2]

Robinin（1-10 μg/ml，24 h）对人外周血单核细胞（hPBMCs）无明显细胞毒性[1]。Robinin（6 μg/mL，24 h）可抑制hPBMCs中MCP-1、TNF-α和IL-6的表达。Robinin（1 μM，24 h）可抑制Mia-PACA2和PANC-1细胞的增殖和迁移[2]。此外，ICAM-1蛋白表达以及TLR2、TLR4 mRNA水平的降低具有抗炎作用[1]。在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人外周血单核细胞（PBMCs）中，Robinin（10、20、50 μM）呈浓度依赖性地抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活。 Western blot分析显示，Robinin可降低NF-κB p65的磷酸化水平和IκBα的降解，并抑制TLR4和MyD88的表达。RT-PCR和ELISA结果表明，Robinin可降低促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达和分泌[1]。在胰腺癌细胞系（PANC-1和MIA PaCa-2）中，CCK-8实验表明，Robinin（5、10、20 μM）以浓度依赖的方式抑制细胞增殖。此外，Robinin还通过上调E-cadherin和下调N-cadherin、Snail和Twist（Western blot和PCR检测）来抑制上皮-间质转化（EMT）。此外，Robinin诱导细胞凋亡，增加Bax/Bcl-2比值，并激活caspase-3。从机制上讲，它通过Western blot分析下调TLR2、磷酸化PI3K (p-PI3K)和磷酸化AKT (p-AKT)的表达，而沉默TLR2可减弱这些作用[2]

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在Mia-PACA2和PANC-1胰腺癌细胞中，Robinin（1 μM/mL、5 μM/mL、10 μM/mL）在24小时后显著降低了细胞活力，与未处理的对照组相比，在浓度≥5 μM/mL时观察到显著作用（P < 0.01）。在浓度为 1 μM/mL 时，Mia-PACA2 细胞（OD450：对照组 2.78 ± 0.16 vs. Robinin 组 2.58 ± 0.18，P = 0.019）和 PANC-1 细胞（OD450：对照组 2.65 ± 0.11 vs. Robinin 组 2.47 ± 0.15，P = 0.029）的活力均出现轻微但显著的下降。在浓度为 1 μM/mL 时，HPNE 正常胰腺导管上皮细胞未观察到明显的细胞毒性（OD450：对照组 2.26 ± 0.10 vs. Robinin 组 2.16 ± 0.06，P = 0.144）。 [2]
Robinin (1 μM/mL) 在 72 小时内显著抑制了 Mia-PACA2 和 PANC-1 细胞的增殖（Mia-PACA2：对照组 3.37 ± 0.14 vs. Robinin 组 2.44 ± 0.17，P < 0.01；PANC-1：对照组 3.20 ± 0.18 vs. Robinin 组 2.29 ± 0.17，P < 0.01）。TLR2 激动剂 CU-T12-9 (1 μM/mL) 部分逆转了这种抗增殖作用 (P < 0.01)。 [2] 在伤口愈合实验中，Robinin (1 μM/mL) 处理 24 小时后，显著抑制了 Mia-PACA2 细胞（迁移面积：对照组 46.27 ± 3.89% vs. Robinin 组 26.20 ± 2.74%，P < 0.01）和 PANC-1 细胞（对照组 40.86 ± 2.15% vs. Robinin 组 21.64 ± 3.00%，P < 0.01）的细胞迁移。与 CU-T12-9 (1 μM/mL) 联合处理可部分逆转这种抑制作用 (P < 0.01)。 [2]
Robinin (1 μM/mL) 显著降低了 Mia-PACA2 和 PANC-1 细胞中上皮-间质转化 (EMT) 标志物 α-SMA 和 Snail 以及炎症标志物 IL-6 和 TNF-α 的 mRNA 和蛋白表达水平 (P < 0.01)。[2]
Robinin (1 μM/mL) 显著降低了 Mia-PACA2 和 PANC-1 细胞中 TLR2、PI3K-p85α 和磷酸化 AKT (p-AKT) 的蛋白表达水平 (P < 0.01)。这些作用可被 CU-T12-9 (1 μM/mL) 联合处理部分逆转 (P < 0.01 或 P < 0.05)。[2]

Robinin 和甲氨蝶呤 (MTX) 的组合（50 mg/kg 和 0.3 mg/kg，每周两次，最低剂量）在佐剂性关节炎模型中具有抗炎和抗关节炎作用 [3]。 50 mg/kg（壁注射，10 天）可通过调节 TGF-β1 信号通路，对阿霉素诱导的心脏毒性提供心脏保护作用[4]。

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在佐剂诱导的关节炎大鼠模型中，Robinin（与甲氨蝶呤联用）可轻微增强甲氨蝶呤的抗关节炎作用，表现为爪肿胀减轻和血清中促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）水平降低[3]。
在阿霉素诱导的 Sprague Dawley 大鼠心肌细胞凋亡模型中，Robinin（10、20 mg/kg）可减轻心肌细胞凋亡。它降低了血清中心脏损伤标志物（CK-MB、LDH）的水平，降低了心肌组织中 caspase-3 的活性，上调了 Bcl-2 的表达，并下调了 Bax 的表达。此外，如Western blot结果所示[4]，Robinin抑制了心脏组织中TGF-β1的表达和Smad2/3的磷酸化。

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在皮下PANC-1异种移植小鼠模型（NKG小鼠）中，灌胃给予Robinin（50 mg/kg）3周，与PBS对照组相比，肿瘤体积显著减小（P < 0.01）。治疗组小鼠在第9天至第28天期间的体重减轻也显著减少（P < 0.05或P < 0.01）。[2]
肿瘤组织的免疫组织化学分析显示，与对照组相比，Robinin治疗显著降低了EMT标志物波形蛋白和α-SMA的表达（P < 0.05或P < 0.01）。[2]

Western Blot 分析[1]
细胞类型： hPBMC
测试浓度： 6 μg/mL
孵育时间： 24 h
实验结果： 抑制 MCP 1、TNF-α、IL-6 和 ICAM-1 的上调表达，具有抗炎特性。

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细胞活力检测[1]
细胞类型：人外周血单核细胞 (hPBMC)
测试浓度：1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、6 μg/mL、8 μg/mL、10 μg/mL
孵育时间：24 小时
实验结果：浓度为 1μg/mL 至 10μg/mL 的样品对 hPBMC 没有明显的细胞毒性。

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RT-PCR[1]
细胞类型： hPBMCs
测试浓度： 1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、6 μg/mL、8 μg/mL、10 μg/mL
孵育时间： 24 h
实验结果： TLR2 和 TLR4 表达上调。

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细胞增殖实验[2]
细胞类型： Mia-PACA2 和 PANC-1
测试浓度： 1 μM
孵育时间： 24 h
实验结果： 细胞增殖受到抑制。

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细胞迁移实验[2]
细胞类型：Mia-PACA2 和 PANC-1
测试浓度：1 μM
孵育时间：24 小时
实验结果：细胞迁移面积减小。

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对于 ox-LDL 诱导的人外周血单核细胞 (PBMC)：将细胞用 ox-LDL (100 μg/ml) 和Robinin (10、20、50 μM) 处理 24 小时。采用蛋白质印迹法检测 TLR4、MyD88、磷酸化 NF-κB p65 和 IκBα 的蛋白水平。采用 RT-PCR 检测 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 的 mRNA 水平。采用ELISA法测定细胞上清液中这些细胞因子的分泌情况[1]
对于胰腺癌细胞（PANC-1、MIA PaCa-2）：用Robinin（5、10、20 μM）处理细胞24-72小时。采用CCK-8法评估细胞活力。进行克隆形成实验以评估克隆形成能力。Western blot分析TLR2、p-PI3K、p-AKT、E-cadherin、N-cadherin、Snail、Twist、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平。RT-PCR检测相关基因的mRNA表达。采用流式细胞术检测细胞凋亡[2]

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使用CCK-8法评估细胞毒性和细胞增殖。将细胞以 1×10⁴ 个/孔的密度接种于 96 孔板中，饥饿培养 24 小时后，分别用不同浓度的 Robinin（500 nM、1 μM、5 μM、10 μM）处理，或与 CU-T12-9 共处理 24、48 或 72 小时。加入 CCK-8 溶液，并在 450 nm 波长处测定吸光度。[2]
采用划痕实验评估细胞迁移能力。将细胞培养至 100% 汇合，划痕后，分别用无血清培养基或含 Robinin（1 μM/mL）的培养基培养，并根据需要添加或不添加 CU-T12-9。分别在 0 小时和 24 小时拍摄图像，并使用 ImageJ 软件量化细胞迁移面积。 [2]
使用Trizol试剂提取RNA，并以GAPDH为内参，采用SYBR Green进行qRT-PCR。检测TLR2、α-SMA、Snail、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。[2]
对于Western blot实验，使用含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液提取总蛋白。将蛋白进行SDS-PAGE电泳分离，转移至PVDF膜，用脱脂奶粉封闭，并在4℃下与一抗（TLR2、PI3K-p85α、p-AKT、AKT、α-SMA、Snail、IL-6、TNF-α、β-actin）孵育过夜，随后与二抗孵育。使用增强化学发光法显色，并用ImageJ软件进行分析。[2]

动物/疾病模型：佐剂性关节炎小鼠模型[3]
剂量：罗宾宁50 mg/kg和甲氨蝶呤0.3 mg/kg
给药途径：灌胃（po），每周两次
实验结果：抗炎和抗关节炎作用。

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动物/疾病模型：Sprague Dawley大鼠模型[4]
剂量：罗宾宁50 mg/kg，连续10天
给药途径：灌胃（po）
实验结果：减轻阿霉素诱导的心脏毒性作用。

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对于佐剂诱导的大鼠关节炎：大鼠采用弗氏完全佐剂诱导。实验分为对照组、模型组、单独使用罗宾宁组、单独使用甲氨蝶呤组和罗宾宁+甲氨蝶呤联合用药组。给药21天，定期测量爪肿胀情况。检测血清IL-1β、TNF-α和IL-6水平，并观察关节组织病理学变化[3]。
对于阿霉素诱导的Sprague Dawley大鼠心脏毒性：将大鼠分为对照组、阿霉素模型组和阿霉素+罗宾宁（10、20 mg/kg）组。腹腔注射阿霉素诱导心脏毒性，并根据剂量给予罗宾宁。计算心脏重量与体重的比值。检测血清CK-MB和LDH活性。 Western blot分析了心脏组织中caspase-3、Bax、Bcl-2、TGF-β1和p-Smad2/3的蛋白水平[4]

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本研究使用8周龄雌性NKG小鼠。通过在小鼠左背部皮下注射6×10⁶个PANC-1细胞建立胰腺癌模型。两周后，当肿瘤直径达到7-8 mm时，每天一次通过胃灌注给予Robinin（50 mg/kg），持续3周。对照组给予PBS。每周测量两次小鼠体重。3周后，处死小鼠，切除肿瘤，称重并测量体积（体积 = 1/2 × a × b²）。将肿瘤组织固定于4%多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，切片用于免疫组织化学染色。 [2]
免疫组织化学染色中，肿瘤切片（4 μm）经脱蜡、水化后，与抗α-SMA和波形蛋白的一抗于4℃孵育过夜，随后与生物素标记的二抗孵育。染色采用链霉亲和素/过氧化物酶复合物和二氨基联苯胺显色，并用苏木精复染。在明场显微镜下采集图像，并使用Image-Pro Plus软件定量分析阳性染色率。[2]

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本研究使用8周龄雌性NKG小鼠。通过在小鼠左背部皮下注射6×10⁶个PANC-1细胞建立胰腺癌模型。两周后，当肿瘤直径达到7-8 mm时，每日一次通过胃灌注给予Robinin（50 mg/kg），持续3周。对照组给予PBS。每周测量两次体重。 3周后，处死小鼠，切除肿瘤，称重并测量体积（体积 = 1/2 × a × b²）。将肿瘤组织固定于4%多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，切片用于免疫组织化学染色。[2]
免疫组织化学染色中，将肿瘤切片（4 μm）脱蜡、水化，并与抗α-SMA和波形蛋白的一抗于4℃孵育过夜，随后与生物素标记的二抗孵育。使用链霉亲和素/过氧化物酶复合物和二氨基联苯胺显色，并用苏木精复染。在明场显微镜下采集图像，并使用Image-Pro Plus软件定量分析阳性染色率。[2]

罗宾宁的口服生物利用度较低；有研究表明，位于肠上皮细胞中的P-糖蛋白可能是导致其口服吸收率低的原因。[3]
给大鼠服用罗宾宁后，尿液中排出山奈酚以及少量对羟基苯乙酸。先前喂食过含山奈酚或罗宾宁饲料的动物，其尿液中对羟基苯乙酸的生成量增加。罗宾宁与肠道菌群孵育后，也产生了相同的代谢产物。[3]

急性毒性：小鼠单次腹腔注射罗宾宁（1000 mg/kg）后未观察到死亡或行为改变[3]。亚急性毒性：在关节炎大鼠中，罗宾宁（10 mg/kg）联合甲氨蝶呤与单独使用甲氨蝶呤相比，并未升高血清ALT/AST或肌酐水平[3]。

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用浓度为1 μM/mL的罗宾宁处理HPNE正常人胰腺导管上皮细胞时，未观察到明显的细胞毒性（OD450：对照组2.26 ± 0.10 vs. 罗宾宁组2.16 ± 0.06，P = 0.144）。[2]

[1]. Robinin modulates TLR/NF-κB signaling pathway in oxidized LDL induced human peripheral blood mononuclear cells. Int Immunopharmacol. 2014 Jan;18(1):191-7.

[2]. Robinin inhibits pancreatic cancer cell proliferation, EMT and inflammation via regulating TLR2-PI3k-AKT signaling pathway. Cancer Cell Int. 2023 Dec 18;23(1):328.

[3]. Bioflavonoid Robinin from Astragalus falcatus Lam. Mildly Improves the Effect of Metothrexate in Rats with Adjuvant Arthritis. Nutrients. 2021 Apr 13;13(4):1268.

[4]. Robinin modulates doxorubicin-induced cardiac apoptosis by TGF-β1 signaling pathway in Sprague Dawley rats. Biomed Pharmacother. 2014 Oct;68(8):989-98.

罗宾宁是一种糖苷氧基黄酮，由山奈酚在3位和7位分别通过糖苷键与6-O-(6-脱氧-α-L-甘露吡喃糖基)-β-D-半乳吡喃糖基残基和6-脱氧-α-L-甘露吡喃糖基残基取代而形成。它是一种植物代谢产物。罗宾宁是一种糖苷氧基黄酮和二羟基黄酮，其功能与山奈酚相关。
据报道，罗宾宁存在于大豆（Glycine max）、三叶草（Trifolium ambiguum）和其他具有相关数据的生物体中。

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罗宾宁是从黄芪（Astragalus falcatus）中提取的一种黄酮糖苷[3]。其心脏保护作用涉及TGF-β1介导的抗细胞凋亡[4]，而其抗胰腺癌作用则依赖于TLR2-PI3K-AKT通路的抑制[2]。其与甲氨蝶呤在关节炎治疗中的协同作用提示其具有免疫调节潜力[3]。

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罗宾宁是一种分子量为740.66 Da的黄酮类化合物，存在于豇豆叶的黄酮类化合物组分中。它能抑制TLR2和TLR4的表达上调，从而减轻炎症和免疫反应。[2]
本研究表明，罗宾宁通过抑制TLR2-PI3K-AKT信号通路发挥抗胰腺癌细胞的肿瘤作用，导致细胞增殖、迁移、EMT和炎症减少。因此，它被认为是一种潜在的胰腺癌辅助治疗药物。[2]

C33H40O19

740.66

740.216

C, 53.51; H, 5.44; O, 41.04

301-19-9

5281693

White to yellow solid powder

1.7±0.1 g/cm3

1064.4±65.0 °C at 760 mmHg

194-195ºC

335.7±27.8 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.728

0.89

308.12

11

19

8

52

1260

15

O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]([H])([C@@]1([H])C([H])([H])O[C@@]1([H])[C@@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]([H])(C([H])([H])[H])O1)O[H])O[H])O[H])O[H])O[H])O[H])OC1C(C2=C(C([H])=C(C([H])=C2OC=1C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])O[H])O[C@@]1([H])[C@@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]([H])(C([H])([H])[H])O1)O[H])O[H])O[H])O[H])=O

PEFASEPMJYRQBW-HKWQTAEVSA-N

InChI=1S/C33H40O19/c1-10-19(36)23(40)26(43)31(47-10)46-9-17-21(38)25(42)28(45)33(51-17)52-30-22(39)18-15(35)7-14(49-32-27(44)24(41)20(37)11(2)48-32)8-16(18)50-29(30)12-3-5-13(34)6-4-12/h3-8,10-11,17,19-21,23-28,31-38,40-45H,9H2,1-2H3/t10-,11-,17+,19-,20-,21-,23+,24+,25-,26+,27+,28+,31+,32-,33-/m0/s1

5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-7-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxychromen-4-one

EINECS 206-113-3; NSC 9222; Robinin; UNII-75RT1VGM60; Robinin; 301-19-9; 75RT1VGM60; CHEBI:8878; 5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-7-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxychromen-4-one; 4H-1-Benzopyran-4-one, 3-((6-O-(6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-galactopyranosyl)oxy)-7-((6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)oxy)-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-; 5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-7-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyl-tetrahydropyran-2-yl]oxy-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyl-tetrahydropyran-2-yl]oxymethyl]tetrahydropyran-2-yl]oxy-chromen-4-one; NSC-9222; Kaempferol-3-O-gal-rham-7-O-rham; Kaempferol-3-O-robinoside-7-O-rhamnoside

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~337.54 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.81 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。