Saikosaponin B2

别名: 柴胡皂苷B2;柴胡皂甙B2;Saikosaponin B2 柴胡皂苷B2 标准品; 柴胡皂甙b2标准品;柴胡皂甙 B2 柴胡皂苷B2;柴胡皂甙 B2 Saikosaponin B2;柴胡皂苷B;柴胡皂苷B2 对照品标准品;柴胡皂苷B2(标准品);柴胡皂苷B2(柴胡皂甙 B2);柴胡皂苷B2对照品;柴胡皂甙 B2;柴胡皂苷 B2
目录号: V30048 纯度: ≥98%
柴胡皂苷B2是从柴胡根中提取的活性成分,是HCV(丙型肝炎病毒)病毒感染的侵袭抑制剂。
Saikosaponin B2 CAS号: 58316-41-9
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
柴胡皂苷B2是从柴胡根中提取的活性成分,是HCV(丙型肝炎病毒)病毒感染的侵袭抑制剂。抗癌作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
The target of Saikosaponin B2 involves hepatitis C virus (HCV) entry-related molecules, including HCV E1/E2 glycoproteins and host cell surface receptors (CD81, SR-BI); the EC50 for inhibiting HCV (genotype 2a JFH-1) entry is 0.8 μM [1]
体外研究 (In Vitro)
1. 抑制HCV进入:柴胡皂苷B2(0.1-10 μM)作用于感染HCV(基因型2a JFH-1)的Huh7.5.1细胞,可选择性抑制HCV进入,不影响病毒复制或装配。降低HCV RNA水平的EC50为0.8 μM,5 μM时HCV进入抑制率>90%(qPCR检测)。对其他HCV基因型(1b、3a)也有抑制作用,EC50分别为1.2 μM和1.5 μM。免疫荧光显示,5 μM时可减少HCV E2糖蛋白与Huh7.5.1细胞的结合(减少65%)[1]
2. 抑制乳腺癌细胞增殖:柴胡皂苷B2(5-40 μM)抑制MCF-7(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(三阴性)乳腺癌细胞增殖。48小时后IC50分别为15 μM(MCF-7)和12 μM(MDA-MB-231)(CCK-8法)。BrdU掺入实验显示,20 μM时可减少MCF-7细胞DNA合成58%、MDA-MB-231细胞62%[2]
3. 抑制乳腺癌细胞迁移与侵袭:划痕愈合实验显示,20 μM 柴胡皂苷B2使MCF-7细胞24小时迁移率降低45%、MDA-MB-231细胞降低52%。Transwell侵袭实验显示,20 μM时MCF-7侵袭细胞数减少60%、MDA-MB-231减少65%。Western blot显示,20 μM时MMP-9蛋白表达在MCF-7中降低55%、MDA-MB-231中降低60%[2]
4. 诱导乳腺癌细胞凋亡:流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)显示,20 μM 柴胡皂苷B2处理24小时后,MCF-7细胞凋亡率从3.1%升至28.5%,MDA-MB-231从2.8%升至32.1%。Western blot显示,两种细胞中促凋亡蛋白Bax上调2.3倍,抗凋亡蛋白Bcl-2下调50%[2]
5. 调控信号通路:Western blot显示,柴胡皂苷B2(10、20 μM)剂量依赖性降低MCF-7和MDA-MB-231细胞中AKT(p-AKT)和ERK(p-ERK)的磷酸化水平。20 μM时,MCF-7中p-AKT降低65%、p-ERK降低60%;MDA-MB-231中p-AKT降低70%、p-ERK降低63%[2]
体内研究 (In Vivo)
1. 抑制人源化肝脏小鼠HCV复制:移植人肝细胞的FRG小鼠感染HCV JFH-1(1×10⁶ FFU/只),分为两组(n=6):对照组(溶剂)和柴胡皂苷B2组(10 mg/kg,腹腔注射,每日1次,连续14天)。柴胡皂苷B2使血清HCV RNA水平降低3.2 log₁₀ IU/mL(从6.5 log₁₀ IU/mL降至3.3 log₁₀ IU/mL),肝脏HCV RNA降低2.8 log₁₀ IU/g。免疫组化显示肝脏组织中HCV Core蛋白表达减少70%[1]
2. 抑制乳腺癌异种移植生长:4-6周龄雌性BALB/c裸鼠皮下注射5×10⁶个MDA-MB-231细胞建立模型。肿瘤达~100 mm³时分为三组(n=6):对照组(溶剂)、柴胡皂苷B25 mg/kg组、柴胡皂苷B210 mg/kg组(腹腔注射,每周2次,连续3周)。10 mg/kg组表现为:(1)肿瘤体积减少55%(从920±85 mm³降至410±52 mm³);(2)肿瘤重量减少58%(从0.85±0.09 g降至0.36±0.04 g);(3)免疫组化显示增殖标志物Ki-67表达减少62%、MMP-9减少65%[2]
酶活实验
1. MMP-9活性检测:MDA-MB-231细胞经柴胡皂苷B2(10、20 μM)处理24小时后,收集培养上清,与MMP-9荧光底物在反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,pH 7.5,10 mM CaCl₂)中混合,37°C孵育1小时。检测荧光强度(激发光320 nm,发射光405 nm)计算MMP-9活性。柴胡皂苷B210 μM时使MMP-9活性降低40%,20 μM时降低65%[2]
细胞实验
1. HCV进入实验:Huh7.5.1细胞以5×10⁴个/孔接种于24孔板,柴胡皂苷B2(0.1-10 μM)在HCV JFH-1感染(MOI=0.1)前1小时加入。4小时后洗去未结合病毒和药物,继续培养72小时。提取总RNA,qPCR(针对HCV 5' UTR引物)定量HCV RNA。E2结合实验中,细胞与HCV E2-Fc融合蛋白+柴胡皂苷B2(5 μM)孵育1小时,洗涤后用Alexa Fluor 488标记二抗染色,流式细胞术检测荧光强度[1]
2. 乳腺癌细胞增殖实验:MCF-7和MDA-MB-231细胞以3×10³个/孔接种于96孔板,加入柴胡皂苷B2(5-40 μM),培养24、48、72小时。加入CCK-8试剂,检测450 nm吸光度计算细胞活力及IC50。BrdU实验中,药物处理后细胞与BrdU孵育2小时,固定后用抗BrdU抗体染色,显微镜计数阳性细胞[2]
3. 乳腺癌细胞迁移与侵袭实验:划痕实验中,融合细胞用移液管尖划痕,洗涤后加入柴胡皂苷B2(20 μM),0和24小时成像并测量划痕宽度。Transwell实验中,细胞接种于上室(侵袭实验加Matrigel)并加入柴胡皂苷B2(20 μM),下室加含10% FBS的培养基。24小时后固定下室膜上的侵袭细胞,结晶紫染色并计数[2]
4. 凋亡与Western blot实验:细胞经柴胡皂苷B2(20 μM)处理24小时后,Annexin V-FITC/PI染色并流式分析凋亡。Western blot实验中,提取总蛋白并BCA定量,每泳道30 μg蛋白经SDS-PAGE分离,膜用抗Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK、MMP-9及β-肌动蛋白(内参)抗体孵育,ECL显影条带[2]
动物实验
1. HCV感染人源化肝脏小鼠模型(参考文献[1]):将6-8周龄的FRG小鼠经脾内注射移植人肝细胞(1×10⁶个细胞/只)。8周后(肝细胞移植率>70%),经尾静脉注射HCV JFH-1(1×10⁶ FFU/只)感染小鼠。7天后(病毒载量>6 log₁₀ IU/mL),将小鼠分组。柴胡皂苷B2溶于10% DMSO + 90%生理盐水中,配制成1 mg/mL的溶液,以10 mg/kg的剂量腹腔注射,每日一次,连续14天。对照组小鼠注射DMSO-生理盐水。每隔3天采集血清检测HCV RNA,处死小鼠后取出肝组织进行RNA和免疫组织化学分析[1]
2. 乳腺癌异种移植模型(参考文献[2]):雌性BALB/c裸鼠(4-6周龄)饲养于SPF级条件下。将5×10⁶个MDA-MB-231细胞(重悬于100 μL PBS + Matrigel 1:1混合液中)皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时,将小鼠分组。将柴胡皂苷B2溶解于5% DMSO + 95%玉米油中,配制成0.5 mg/mL和1 mg/mL的溶液。小鼠腹腔注射5 mg/kg或10 mg/kg的柴胡皂苷B2,每周两次,持续3周。每3天测量一次肿瘤体积(体积 = 长×宽²/2),每周记录一次体重。治疗后,切除肿瘤,称重,并用4%多聚甲醛固定,用于免疫组织化学染色[2]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. 在人源化肝小鼠中的安全性(参考文献[1]):柴胡皂苷B2(10 mg/kg,腹腔注射)14 天不会引起小鼠体重减轻(对照组:22.5 ± 1.2 g;治疗组:21.8 ± 0.9 g)或血清 ALT/AST 水平异常(ALT:对照组 35 ± 5 U/L,治疗组 38 ± 6 U/L;AST:对照组 85 ± 8 U/L,治疗组 82 ± 7 U/L)。肝脏组织学检查未见明显炎症或坏死[1]
2.裸鼠安全性(参考文献[2]):柴胡皂苷B2(5、10 mg/kg,腹腔注射)连续3周未影响小鼠体重(对照组:18.2 ± 0.8 g;10 mg/kg组:17.5 ± 0.7 g),也未对肝脏、肾脏、心脏或肺脏造成病理损伤(HE染色)。未观察到死亡[2]
参考文献

[1]. Saikosaponin b2 is a naturally occurring terpenoid that efficiently inhibits hepatitis C virus entry. J Hepatol. 2015 Mar;62(3):541-8.

[2]. Antitumor effects of saikosaponin b2 on breast cancer cell proliferation and migration. Mol Med Rep. 2019 Aug;20(2):1943-1951.

其他信息
柴胡皂苷 B2 是一种柴胡皂苷。
据报道,柴胡皂苷 B2 存在于柴胡(Bupleurum falcatum)中,并有相关数据。
1. 来源和基本性质(参考文献 [1][2]):柴胡皂苷 B2 是从柴胡(Bupleurum chinense DC.)的根中分离得到的三萜皂苷。柴胡(Bupleurum scorzonerifolium Willd.)是一种用于抗炎和保肝的传统中药[1][2]
2. 抗HCV机制(参考文献[1]):柴胡皂苷B2通过阻断HCV E2糖蛋白与宿主细胞受体(CD81、SR-BI)的相互作用来抑制HCV的进入,而不影响进入后的步骤(病毒RNA复制、蛋白质翻译或病毒颗粒组装/释放)[1]
3. 抗乳腺癌机制(参考文献[2]):柴胡皂苷B2通过以下三种途径发挥抗乳腺癌作用:(1)抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路以抑制细胞增殖;(2)下调MMP-9以减少细胞迁移/侵袭; (3)上调Bax/Bcl-2比值诱导细胞凋亡[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C42H68O13
分子量
780.9815
精确质量
780.466
CAS号
58316-41-9
PubChem CID
21637642
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
909.9±65.0 °C at 760 mmHg
熔点
231-238ºC
闪点
504.1±34.3 °C
蒸汽压
0.0±0.6 mmHg at 25°C
折射率
1.619
LogP
3.59
tPSA
218.99
氢键供体(HBD)数目
9
氢键受体(HBA)数目
13
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
55
分子复杂度/Complexity
1500
定义原子立体中心数目
19
SMILES
C[C@@H]1[C@@H]([C@@H]([C@H]([C@@H](O1)O[C@H]2CC[C@]3([C@H]([C@]2(C)CO)CC[C@@]4([C@@H]3C=CC5=C6CC(CC[C@@]6([C@@H](C[C@]54C)O)CO)(C)C)C)C)O)O[C@H]7[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O7)CO)O)O)O)O
InChi Key
WRYJYFCCMSVEPQ-ORAXXRKOSA-N
InChi Code
InChI=1S/C42H68O13/c1-21-29(47)34(55-35-32(50)31(49)30(48)24(18-43)53-35)33(51)36(52-21)54-28-11-12-38(4)25(39(28,5)19-44)10-13-40(6)26(38)9-8-22-23-16-37(2,3)14-15-42(23,20-45)27(46)17-41(22,40)7/h8-9,21,24-36,43-51H,10-20H2,1-7H3/t21-,24-,25-,26-,27-,28+,29+,30-,31+,32-,33-,34+,35+,36+,38+,39+,40-,41-,42-/m1/s1
化学名
(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[[(3S,4R,4aR,6aR,6bS,8R,8aS,14aR,14bS)-8-hydroxy-4,8a-bis(hydroxymethyl)-4,6a,6b,11,11,14b-hexamethyl-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,14a-dodecahydropicen-3-yl]oxy]-3,5-dihydroxy-6-methyloxan-4-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~128.04 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.2804 mL 6.4022 mL 12.8044 mL
5 mM 0.2561 mL 1.2804 mL 2.5609 mL
10 mM 0.1280 mL 0.6402 mL 1.2804 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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