| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ULK1 (IC50 = 108 nM); ULK2 (IC50 = 711 nM)
SBI-0206965 targets unc-51-like kinase 1 (ULK1) (IC50 = 10.5 nM; selectivity over ULK2: IC50 > 1000 nM) [2] SBI-0206965 targets ULK1 kinase in clear cell renal carcinoma (ccRCC) cells [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
SBI-0206965（5–20 μM；24 小时）导致 A498 和 ACHN 细胞因饥饿而发生凋亡[1]。 SBI-0206965（5-20 μM；24 小时）可增加细胞凋亡指标裂解的 Caspase 8 和 PARP 的水平，并减弱 AMPK β1 亚基 Ser108 的磷酸化[1]。
ULK1 mRNA表达在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中显著上调，ULK1过表达与预后不良相关。我们发现ULK1在66.7%的ccRCC肿瘤中高表达(p < 0.05)。SBI-0206965敲低ULK1和选择性抑制ULK1可诱导ccRCC细胞凋亡。我们证明SBI-0206965通过阻止自噬和戊糖磷酸途径(PPP)通量来触发细胞凋亡。 综上所述，我们的结果表明ULK1在ccRCC肿瘤中上调，可能是一个潜在的治疗靶点。因此，SBI-0206965应进一步考虑作为抗ccrcc剂。[1] 化合物SBI-0206965是体外高选择性ULK1激酶抑制剂，可抑制细胞中ULK1介导的磷酸化事件，调节自噬和细胞存活。SBI-0206965与机制靶雷帕霉素(mTOR)抑制剂协同杀灭肿瘤细胞，为临床联合使用提供了强有力的理论依据。[2] 在人ccRCC细胞系（786-O、ACHN、Caki-1）中，SBI-0206965（1–10 μM）以剂量依赖性方式抑制细胞增殖，IC50值范围为2.3–4.8 μM。它诱导凋亡（5 μM时Annexin V-FITC/PI染色显示凋亡率约50%）并阻断自噬：减少LC3-II积累，增加p62蛋白水平，下调ULK1介导的ATG13（Ser318）和FIP200磷酸化（Western blot检测）[1] - SBI-0206965 强效抑制重组ULK1激酶活性（IC50 = 10.5 nM），对其他相关激酶无显著影响（如AMPKα1：IC50 > 10 μM；mTOR：IC50 > 10 μM；PI3Kγ：IC50 > 10 μM）。在过表达ULK1的HEK293T细胞中，它选择性阻断ULK1依赖的底物（ATG13、FIP200、Beclin-1）磷酸化[2] - 在ccRCC细胞中，SBI-0206965（5 μM）较对照组减少约65%的克隆形成，抑制细胞迁移/侵袭（Transwell实验显示迁移细胞减少约55%）[1] - 该化合物通过磷酸化蛋白质组学分析鉴定ULK1底物，证实体外ULK1可直接磷酸化ATG13（Ser318）、FIP200（Ser137）和Beclin-1（Ser14）[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
SBI-0206965（50 mg/kg；腹腔注射；每 3 天一次，持续 37 天）可减少 A498 异种移植肿瘤中的肿瘤生长并导致细胞凋亡[1]。
为了评价A498细胞皮下接种的裸鼠体内抗肿瘤效果，从注射ccRCC细胞后的第14天开始，每3天腹腔注射1次载药(DMSO)或SBI-0206965(50 mg/kg)，共37 d。与载药组相比，SBI-0206965显著抑制了A498异种移植肿瘤的生长速度(图5a、b和c)。相反，与载药组和SBI-0206965组相比，小鼠的体重没有显著差异(图5e)。SBI-0206965组小鼠没有表现出诸如躁动、消化不良或腹泻、运动或姿势受损或发红或肿胀等毒性症状。此外，SBI-0206965对小鼠肾脏结构没有影响(图S2)。[1] 在ccRCC皮下异种移植模型（裸鼠植入786-O细胞）中，腹腔注射SBI-0206965（20 mg/kg/天）持续21天，较溶媒对照组抑制肿瘤生长约70%。肿瘤组织中增殖标志物Ki-67表达减少约40%，TUNEL阳性凋亡细胞增加约3倍，p-ATG13（Ser318）和LC3-II水平下调（免疫组织化学和Western blot检测）[1] |
| 酶活实验 |
肽激酶检测[1]
对于肽库筛选，ULK1/FIP200/Atg13配合物用于肽混合物(50 mM)的磷酸化，方法是在1536孔板中30ºC孵育2小时，孵育条件为50 mM HEPES、pH 7.4、15 mM MgCl2、0.1 mM Na3VO4、1 mM EGTA、0.1% BSA、0.1% Tween 20和50 mM γ33P-ATP (0.03 mCi/ml)，基本如上所述(Chen和Turk, 2010)。每个反应的等量(200nl)转移到链亲和素涂覆的膜上，按照前面描述的方法进行处理(Hutti等人，2004年)，然后暴露在荧光粉屏幕上，以量化放射性标记的掺入。对于ULKtide磷酸化测定，将指定的肽(15 mM)与ULK1/FIP200/Atg13配合物在20 mM HEPES, pH 7.4, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.1% BSA中孵育15分钟。每隔5分钟，将反应的等分物标记在P81磷酸纤维素过滤器上，洗涤，干燥，并进行闪烁计数。实验重复进行，数据为三次独立实验的平均值。 ULK1激酶检测[1] 用γ - 32p - atp测定ULK1激酶活性的方法如前所述(Jung et al.， 2009)。简单地说，将Flag-ULK1转染到HEK-293T细胞中，20小时后按指示处理。免疫沉淀在IP缓冲液中洗涤3次，并在激酶缓冲液(25 mM MOPS, pH 7.5, 1 mM EGTA, 0.1 mM Na3VO4, 15 mM MgCl2，)中洗涤。分别加入终浓度为100µM的热ATP和冷ATP。每次反应用从大肠杆菌中纯化的GST或重组蛋白GST- atg101作为底物，浓度为1µg。将反应煮沸并在SDS-PAGE凝胶上运行。凝胶干燥后用PhosphoImager软件成像。 激酶抑制剂选择性分析[1] 激酶抑制剂特异性分析首先使用DiscoveRx KINOMEscan竞争结合试验对456个激酶(www.discoverx.com)进行，使用1 mM SBI0206965。可能与SBI-0206965相互作用的激酶(抑制到低于10% DMSO对照)然后通过经典的体外激酶测定(反应生物学;http://www.reactionbiology.com/)，用SBI-0206965的剂量曲线监测酶活性，测定IC50曲线。 重组人ULK1激酶（催化结构域）与GST-ATG13底物（1–200位残基）和[γ-32P]ATP在激酶缓冲液中孵育。加入浓度范围为0.1 nM–10 μM的SBI-0206965，混合物在30°C孵育45分钟。加入SDS样品缓冲液终止反应，蛋白经SDS-PAGE电泳分离。放射自显影量化磷酸化GST-ATG13的放射性，非线性回归计算IC50值[2] - 激酶选择性面板实验：SBI-0206965（10 μM）与45种纯化激酶（包括AMPKα1、mTOR、PI3Kγ、ERK1/2）及相应底物/ATP孵育。放射测量法检测激酶活性，计算抑制百分比，该化合物对ULK1的选择性较其他测试激酶高>90倍[2] |
| 细胞实验 |
细胞凋亡分析[1]
细胞类型： A498 和 ACHN 细胞（饥饿培养基 (EBSS) 处理） 测试浓度： 5, 10 ,20 μM 孵育持续时间：24小时 实验结果：诱导显着水平的细胞凋亡。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： A498 和 ACHN 细胞（EBSS 处理） 测试浓度： 5、10、 20 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 减弱 AMPK β1 亚基 Ser108 的磷酸化并增加裂解的 Caspase 水平8 和 PARP，细胞凋亡标记物。通过分析 LC3B 和 p62 来评估自噬。 ccRCC细胞增殖和凋亡检测：786-O/ACHN/Caki-1细胞（每孔5×103个）接种于96孔板，用SBI-0206965（0.5–20 μM）处理48小时。CCK-8法检测细胞活力（450 nm处吸光度）以确定IC50。凋亡检测时，细胞用Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞仪分析[1] - 自噬及信号通路检测：ccRCC细胞用SBI-0206965（2.5–10 μM）处理24小时，裂解提取总蛋白。等量蛋白经SDS-PAGE电泳、转膜至PVDF膜，用抗ULK1、p-ATG13（Ser318）、ATG13、LC3-I/II、p62、切割型半胱天冬酶-3、切割型PARP或GAPDH（内参）抗体孵育，化学发光显影蛋白条带[1] - 克隆形成实验：ccRCC细胞（每孔1×103个）接种于6孔板，用SBI-0206965（1–5 μM）处理14天（每3天换液）。结晶紫染色克隆，计数大于50个细胞的克隆，计算相对于对照组的克隆形成率[1] - ULK1底物磷酸化实验：HEK293T细胞共转染ULK1和ATG13/FIP200表达质粒。24小时后，用SBI-0206965（0.1–10 μM）处理细胞6小时。Western blot用磷酸化特异性抗体检测ATG13（Ser318）和FIP200（Ser137），评估ULK1抑制效果[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 六周龄雄性BALB/c裸鼠（A498异种移植瘤）[1]
剂量： 50 mg/kg 给药途径： 腹腔注射（ip）；每三天一次，持续37天 实验结果： 显著抑制肿瘤生长。 使用六周龄雄性BALB/c裸鼠。将悬浮于100 μL PBS/Matrigel（1:1）中的A498细胞（5 × 10⁶）注射到小鼠后侧腹部。植入后14天，将小鼠随机分为两组，每组六只。小鼠腹腔注射二甲基亚砜 (DMSO) 作为溶剂或 SBI-0206965 DMSO 溶液（50 mg/kg/d），每 3 天注射一次，共注射 9 次，持续 30 天。每 3 天评估一次肿瘤生长情况。肿瘤体积采用公式体积 = 1/2 (长 × 宽²) 计算。实验结束时，通过颈椎脱臼处死小鼠并取出肿瘤。将肿瘤标本固定于 4% 多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，并进行切片。采用末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 法分析组织切片。[1] ccRCC 异种移植模型：将 786-O 细胞（5×10⁶ 个细胞/只）皮下注射到 4 周龄雄性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为对照组（n = 6）和 SBI-0206965 治疗组（n = 6）。SBI-0206965 溶于 5% DMSO + 95% 生理盐水中，以 20 mg/kg 的剂量腹腔注射，每日一次，连续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），每周记录小鼠体重。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行免疫组织化学（Ki-67、TUNEL）和蛋白质印迹分析[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：浓度高达 10 μM 的 SBI-0206965 对正常人肾近端小管上皮细胞 (HK-2) 无显著细胞毒性，细胞存活率 >85%（与对照组相比）[1]
- 体内毒性：小鼠接受 SBI-0206965（20 mg/kg/天，腹腔注射，连续 21 天）治疗后，与对照组相比，体重、肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均无显著变化。肝脏、肾脏和心脏组织的组织学检查未发现异常病变或炎症[1] - 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，SBI-0206965 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 88%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 85%[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
许多肿瘤细胞依赖自噬生存，这提示抑制自噬可能是一种具有广泛应用前景的癌症治疗方法。ULK1/Atg1是核心自噬通路中唯一的丝氨酸/苏氨酸激酶，因此是一个极佳的药物靶点。尽管近年来人们对营养匮乏激活ULK1的机制有了更深入的了解，但ULK1如何促进自噬的机制仍不甚明了。本研究筛选了简并肽库，以推断ULK1的最佳底物基序，并发现了15个核心自噬蛋白的磷酸化位点，这些位点经体内验证为ULK1的靶点。我们利用这些ULK1底物进行细胞筛选，以鉴定和表征一种高效的ULK1小分子抑制剂。化合物SBI-0206965是一种高选择性的ULK1激酶抑制剂，在体外能够抑制细胞内ULK1介导的磷酸化事件，从而调控自噬和细胞存活。 SBI-0206965 与雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 抑制剂具有显著的协同作用，可有效杀伤肿瘤细胞，为二者联合临床应用提供了强有力的理论依据。[2]
背景：非协调性 51 样激酶 1 (ULK1) 在自噬中发挥着至关重要的作用。近期研究发现，ULK1 的异常表达与多种人类癌症相关。方法：本研究分析了癌症基因组图谱 (TCGA) 数据库中 ULK1 的 mRNA 表达水平和临床信息。采用蛋白质印迹法验证了 36 例配对的新鲜透明细胞肾细胞癌 (ccRCC) 组织标本中 ULK1 的表达水平。利用 shRNA 慢病毒敲低 ULK1 的表达。使用 SBI-0206965 抑制 ULK1 的活性。通过检测细胞凋亡率、自噬水平以及活性氧 (ROS) 与 NADPH 的比值来评估 ULK1 抑制的效果。本研究采用小鼠异种移植模型评估了SBI-0206965的体内疗效。结果显示：ULK1 mRNA在透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中显著上调，且ULK1过表达与不良预后相关。我们发现，66.7%的ccRCC肿瘤中ULK1高表达（p < 0.05）。敲低ULK1以及使用SBI-0206965选择性抑制ULK1均可诱导ccRCC细胞凋亡。我们证实，SBI-0206965通过抑制自噬和磷酸戊糖途径（PPP）通量来诱导细胞凋亡。此外，使用SBI-0206965阻断ULK1的激酶活性在体内也表现出一定的抗癌作用。结论：综上所述，我们的研究结果表明，ULK1在透明细胞肾细胞癌（ccRCC）肿瘤中表达上调，可能是一个潜在的治疗靶点。因此，SBI-0206965应被进一步考虑作为抗ccRCC药物。[1] SBI-0206965是一种对ULK1激酶具有高选择性的合成小分子抑制剂，其设计目的是与ULK1的ATP结合口袋结合。[2] - 其作用机制包括抑制ULK1激酶活性，阻断自噬的启动（自噬是ccRCC细胞存活的关键过程），并诱导细胞凋亡。[1] - ULK1在ccRCC组织中过表达，且其表达与预后不良相关。 SBI-0206965 特异性靶向 ULK1 过表达的透明细胞肾细胞癌 (ccRCC) 细胞，使其成为 ccRCC 的潜在治疗药物 [1] - 由于它不与 ULK2 或其他相关激酶（AMPK、mTOR）发生交叉反应 [2] - 该化合物表现出良好的体内疗效和低毒性，支持其转化为 ccRCC 治疗临床试验的潜力 [1] |
| 分子式 |
C21H21BRN4O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
489.32
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| 精确质量 |
488.069
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| 元素分析 |
C, 51.55; H, 4.33; Br, 16.33; N, 11.45; O, 16.35
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| CAS号 |
1884220-36-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
92044402
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.619
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| LogP |
3.26
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| tPSA |
104Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
560
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
NEXGBSJERNQRSV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H21BrN4O5/c1-23-19(27)13-7-5-6-8-15(13)31-20-14(22)11-24-21(26-20)25-12-9-16(28-2)18(30-4)17(10-12)29-3/h5-11H,1-4H3,(H,23,27)(H,24,25,26)
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| 化学名 |
2-((5-bromo-2-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)pyrimidin-4-yl)oxy)-N-methylbenzamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0437 mL | 10.2183 mL | 20.4365 mL | |
| 5 mM | 0.4087 mL | 2.0437 mL | 4.0873 mL | |
| 10 mM | 0.2044 mL | 1.0218 mL | 2.0437 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Tepotinib hydrochloride monohydrate
BKN-1
NEO214
MJO445
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