MEK1 (IC50 = 14 nM); MEK1 (Kd = 99 nM); MEK2 (Kd = 530 nM)
MEK1/2 (IC50 = 14 nmol/L against purified MEK1 [3])
MEK2 (similar inhibition as MEK1, data not shown [3])

NVP-BHG712 呈剂量依赖性地抑制了转染不同 EphR 的 Hek293 细胞中 EphR 的自磷酸化。与 EphB2、EphA2、EphB3 和 NVP-BHG712 相比，EphB4 表现出更强的抑制作用。AZD6244 在 IC50 浓度低于 40 nM 时抑制 ERK1/2 的磷酸化，且不与 ATP 竞争。抑制 ERK1/2 和 p90RSK 的磷酸化，以及提高 caspase-3 和 caspase-7 的裂解和裂解的聚（ADP）核糖聚合酶的水平，均有助于 AZD6244 抑制原代肝癌细胞的生长。磷脂酰肌醇 3-激酶、MEK5/ERK5 和 p38 通路不受 AZD6244 的显著影响。 Ras突变和Raf突变分别影响AZD6244对乳腺癌细胞系和非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系的敏感性。在原发性肝细胞癌（HCC）细胞（2-1318、4-1318、26-1004）中，硫酸塞鲁米替尼（AZD6244硫酸盐）可导致DNA合成（BrdU掺入）和细胞活力（MTT法）呈时间和剂量依赖性降低，48小时后浓度低于0.5 μmol/L时细胞活力降低50%。它呈剂量依赖性地升高磷酸化MEK1/2（Ser217/221和Ser218/222）和B-Raf的水平，同时降低ERK1/2和p90RSK（Ser359/363）的磷酸化水平。从 0.5 μmol/L 浓度开始即可检测到裂解的 PARP (89 kDa)、裂解的 caspase-3 和裂解的 caspase-7。细胞凋亡（TUNEL 染色）呈剂量依赖性增加 (P<0.01)。在 1 μmol/L 浓度下，磷酸化 ERK1/2 在 3 小时后下降，并在 6 小时后几乎检测不到；p90RSK 磷酸化在 6 小时后受到抑制；裂解的 caspase 和 PARP 在 6 小时后可检测到，并在 12 小时后达到峰值。Z-VAD-FMK 可阻断 AZD6244 诱导的细胞凋亡和 ERK1/2 激活 [1]。
在 31 株乳腺癌细胞系中，5 株的 IC50 <1 μM（敏感）；敏感性与 BRAF 突变 (p=0.022) 和非管腔亚型相关。在 43 株非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系中，15 株的 IC50 <1 μM；敏感性与 KRAS/NRAS 突变相关 (p=0.045)。对 27 株非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系进行蛋白质印迹分析显示，1 μM 硫酸塞鲁米替尼 (AZD6244 硫酸盐) 几乎完全消除了所有细胞系中的 pERK，且与敏感性无关，而 pAKT 没有变化。在敏感细胞系中观察到 G0/G1 期阻滞，但在耐药细胞系中未观察到。基线基因表达分析发现，PIK3R3 在耐药乳腺癌细胞系中表达较高 (p<0.05)，而 FAM77C、THC1981357 和 MSRA 在两种组织学类型中均存在差异表达 [2]。在 Malme-3M、A431 和其他细胞系中，硫酸塞鲁米替尼 (AZD6244 硫酸盐) 抑制了基础和 EGF 诱导的 ERK1/2 磷酸化，IC50 <40 nmol/L；在 Malme-3M 细胞中，pERK 的 IC50 为 10.3 nmol/L。该化合物能抑制 B-Raf 突变细胞（HT-29、Malme-3M、SK-MEL-28）和 Ras 突变细胞（MIA PaCa-2、SK-MEL-2）的生长，IC50 为 59-473 nmol/L，但对正常成纤维细胞 Malme-3 或野生型乳腺癌细胞的影响甚微（IC50 > 50 μmol/L）。浓度高达 10 μmol/L 时，该化合物均未抑制 ERK5 的磷酸化。在 HT-29 和 Malme-3M 细胞中，24 小时处理可诱导 G1/S 期细胞周期阻滞；在 Malme-3M 和 SK-MEL-2（N-Ras 突变体）细胞中，该化合物可激活 caspase-3/7，但在 HT-29 或 SK-MEL-28 细胞中则无此作用 [3]。

AZD6244 可显著抑制 2-1318、5-1318、26-1004 和 4-1318 异种移植瘤中 ERK1/2 的磷酸化，并通过激活 caspase 通路诱导原代 2-1318 细胞凋亡。在 100 mg/kg 的剂量下，AZD6244 可减缓 HT-29 异种移植瘤（一种携带 B-Raf 突变的结直肠肿瘤模型）的生长；其肿瘤生长抑制效果优于吉西他滨。细胞凋亡以及细胞周期调节因子（如细胞周期蛋白D1、Cdc-2、CDK2和4、细胞周期蛋白B1和c-Myc）的下调与细胞凋亡增加有关，这就是为什么AZD6244可以在缺乏这些因素的情况下抑制HCC异种移植瘤的生长。

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在7个HCC异种移植瘤（2-1318、4-1318、5-1318、26-1004、30-1004、29-1104、2006）中，生长速率与磷酸化MEK1（Ser218/222和Thr286）水平呈正相关。口服硫酸塞鲁米替尼（AZD6244）50 mg/kg（每日两次）或100 mg/kg，连续21天，可剂量依赖性地抑制4-1318细胞的肿瘤生长（治疗组/对照组比值分别为0.41和0.18）。在50 mg/kg剂量下，2-1318（0.50）、26-1004（0.31）、5-1318（0.64）和29-1104（0.70）细胞的生长抑制也显著，且在高pMEK表达细胞系中更为敏感（P<0.05）。 AZD6244 抑制 pERK1/2 和 MEK 激酶活性，提高 B-Raf 和 pMEK (Ser218/222) 的水平，降低 p90RSK (Ser380 和 Thr359/363) 的水平，并增加肿瘤中裂解的 PARP、caspase-3 和 caspase-7 的水平。 Ki-67 标记指数从 14.4% 降至 4.3%，裂解型 caspase-3 阳性细胞从 0.1% 升至 4.5% [1]。
在 HT-29（B-Raf 突变型）异种移植瘤中，口服硫酸塞鲁米替尼（AZD6244 硫酸盐）10、25、50 和 100 mg/kg，每日两次，持续 21 天，可剂量依赖性地抑制肿瘤生长（10 mg/kg 组抑制 55%，100 mg/kg 组在第 11 天抑制 70%）。停药后肿瘤恢复生长；高剂量组达到 1000 mm³ 的时间为 36 天，而对照组为 18 天（P<0.01）。治疗组肿瘤中 pERK1/2 表达受到抑制。在BxPC3（胰腺）异种移植瘤模型中，每日两次（BID）分别给予10、25和50 mg/kg的药物，持续18天，可诱导肿瘤消退（50 mg/kg组10个肿瘤中有6个消退），生长抑制率达94%，优于吉西他滨。pERK受到抑制。在另一项BxPC3研究中，连续21天（每日两次，每次25或50 mg/kg）治疗，随后停药7天，再进行一个21天的治疗周期，结果显示肿瘤对再次治疗仍然敏感，两个周期均观察到肿瘤消退[3]。

MEK1。[3]
氨基末端带有六组氨酸标签的组成型活性MEK1（S218D、S222D ΔR4F；参考文献18）在杆状病毒感染的Hi5昆虫细胞中表达，并通过固定化金属亲和层析、离子交换和凝胶过滤进行纯化。MEK1的活性通过测量[γ-33P]ATP中的[γ-33P]磷酸盐掺入ERK2来评估。该检测在96孔聚丙烯板中进行，孵育混合物（100 μL）由以下成分组成：25 mmol/L HEPES（pH 7.4）、10 mmol/L MgCl₂、5 mmol/L β-甘油磷酸钠、100 μmol/L 原钒酸钠、5 mmol/L DTT、5 nmol/L MEK1、1 μmol/L ERK2 和 0 至 80 nmol/L 的化合物（DMSO 终浓度为 1%）。加入 10 μmol/L ATP（每孔含 0.5 μC k[γ-³³P]ATP）启动反应，并在室温下孵育 45 分钟。加入等体积的 25% 三氯乙酸终止反应并沉淀蛋白质。沉淀的蛋白质被截留在玻璃纤维B滤板上，过量的标记ATP用0.5%磷酸洗去，放射性在液体闪烁计数器中计数。通过改变反应混合物中ATP的量来确定ATP依赖性。使用SigmaPlot对数据进行全局拟合。非竞争性抑制的计算公式如下：v = [Vmax × S / (1 + I / Ki)] / (Km + S)。[3]

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ERK2。[3]
为了测定ERK2的抑制作用，首先用MEK1激活ERK2的激酶活性。在大肠杆菌中过表达带有N端六组氨酸标签的野生型(WT) ERK2，并通过固定化金属亲和层析、离子交换和凝胶过滤进行纯化。为激活野生型 ERK2，将 2 mg 野生型 ERK2 与 17 μg 组成型活性 MEK1 混合于 4 mL 含有 1 mmol/L ATP 的 25 mmol/L HEPES 缓冲液（pH 7.5）中。反应混合物在室温下孵育 40 分钟，并通过质谱分析确认两个磷酸基团的生成。激活的野生型 ERK2 经离子交换进一步纯化。ERK2 活性测定方法与组成型活性 MEK 的测定方法相同，使用 10 nmol/L 的激活型 ERK2。底物为浓度为 1 μmol/L 的髓鞘碱性蛋白 (MBP)。[3]

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使用抗 MEK1 抗体对 MEK1 分子进行免疫沉淀。在以 MBP 为终点的偶联测定中，当重组 ERK1 被免疫分离的 MEK1 激活时，即可计算 MEK 激酶活性。在暴露于 X 光胶片之前，将磷酸化的 MBP 在 14% SDS-PAGE 凝胶上分离，并真空干燥。

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MEK1 酶活性测定：将组成型活性 MEK1 (S218D, S222D) 与 硫酸塞鲁米替尼 (AZD6244 硫酸盐) (0-80 nmol/L)、ERK2 和 [γ-33P]ATP 在缓冲液 (25 mmol/L HEPES pH 7.4, 10 mmol/L MgCl2, 5 mmol/L β-甘油磷酸钠, 100 μmol/L 原钒酸钠, 5 mmol/L DTT) 中孵育。反应由 10 μmol/L ATP (0.5 μCi/孔) 引发，室温孵育 45 分钟，用 25% 三氯乙酸终止反应，沉淀吸附在玻璃纤维 B 滤膜上的蛋白质，用 0.5% 磷酸洗涤，并计数。IC50 = 14.1 ± 0.79 nmol/L。ATP 依赖性：不同 ATP 浓度均表现出非竞争性抑制（Km ATP = 14.9 μmol/L，Ki = 22.6 nmol/L）[3]。
MEK 激酶活性测定（来自 HCC 异种移植瘤）：抗 MEK1 抗体免疫沉淀 MEK1；通过激活重组 ERK1 的能力来测定激酶活性，以髓鞘碱性蛋白 (MBP) 为终点。磷酸化 MBP 在 14% SDS-PAGE 上分离，并通过放射自显影法显色 [1]。
其他激酶检测：使用标准方案（放射性、TR-FRET 或 ELISA）测试了 p38α、MKK6、EGFR、ErbB2、B-Raf (V600E) 和 40 多种其他激酶。在 10 μmol/L 硫酸塞鲁米替尼（AZD6244 硫酸盐） 浓度下，未观察到对任何这些激酶的抑制作用，包括 p38α（88% 对照）、MKK6（100%）、EGFR（90%）、ErbB2（100%）、ERK2（100%）、B-Raf（100%）、CDK2/cyclinA（93%）、c-Raf（98%）、c-Src（95%）、胰岛素受体激酶（103%）、JNK2α2（100%）、MAPKAP-K2（101%）、PDGFRα（99%）、PKBα（97%）、PKCα（93%）[3]。

细胞活力和细胞增殖[1]
将原代肝癌细胞以每孔 2.0 × 10⁴ 个细胞的密度接种于生长培养基中。在生长培养基中培养 48 小时后，用 MEM 培养基洗涤细胞单层两次。用不同浓度的 AZD6244（0、0.5、1.0、2.0、3.0 和 4.0 μmol/L）处理细胞 24 或 48 小时。采用 MTT 法 (32) 检测细胞活力。使用溴脱氧尿苷试剂盒（Roche）按照制造商说明检测细胞增殖。实验至少重复三次，数据以平均值±标准误（SE）表示。[1]

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细胞凋亡检测[1]
将原代肝癌细胞培养于八孔玻片上，并在SRF培养基中用0、0.5、1.0、2.0、3.0和4.0 μmol/L的AZD6244处理24小时。用含4%甲醛溶液的PBS在室温下固定细胞1小时，并用PBS洗涤。使用原位细胞死亡检测试剂盒（Roche），按照制造商的说明，通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。然后在配备FITC滤光片的荧光显微镜下观察凋亡细胞。通过计数每个区域500个细胞中的阳性细胞数获得标记指数。结果以百分比表示。[1]

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细胞以 2.0 × 10⁴ 的密度接种。培养 48 小时后，用培养基冲洗细胞两次。使用不同浓度的 AZD6244 处理细胞 24 或 48 小时。MTT 法使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物 (MTT) 检测细胞活力。使用溴脱氧尿苷 (BrdU) 试剂盒检测细胞增殖。

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原代肝细胞癌 (HCC) 细胞的分离：将肿瘤组织切碎，用 MEM 洗涤，在含有 5% FBS 和 5 mg/mL 胶原酶的 MEM 中于 37°C 孵育 12 小时，离心（800×g，10 分钟），洗涤，并在含 10% FBS 的 MEM 中培养。细胞活力：MTT 法；将细胞以 2×10⁴/孔的密度接种，用 硫酸塞鲁米替尼（AZD6244 硫酸盐）（0-4 μmol/L）处理 24 或 48 小时。细胞增殖：BrdU ELISA 法。细胞凋亡：使用原位细胞死亡检测试剂盒进行 TUNEL 检测；将细胞培养于腔室载玻片上，用化合物处理 24 小时，用 4% 甲醛固定，染色，并在荧光显微镜下观察。 Western blot：裂解细胞/组织，用针对裂解型 caspase-3/7、pMEK、pERK、p90RSK、裂解型 PARP 等的抗体进行免疫印迹分析[1]。
乳腺癌和非小细胞肺癌细胞系增殖实验：将细胞以每孔 5×10⁴ 至 1×10⁵ 个的密度接种于 24 孔板中，用 硫酸塞鲁米替尼（AZD6244 硫酸盐）（10 μmol/L 至 1 nmol/L）处理 6 天，用胰蛋白酶消化收集细胞，并使用库尔特计数器进行计数。抑制率 = 1 - (处理组/对照组)。IC50 通过线性回归计算。细胞周期分析：用 1 μmol/L 塞鲁米替尼处理细胞 48 小时，用 Nim-Dapi 染色，并通过流式细胞仪（UV）进行分析。 Western blot：将细胞培养至对数生长期，用 1 μmol/L 化合物处理 30 分钟，裂解细胞，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转移至硝酸纤维素膜，用针对总 ERK、pERK (Thr202/Tyr204)、总 AKT、pAKT (Ser308 和 Ser473) 以及微管蛋白的抗体进行检测 [2]。
细胞 ERK1/2 磷酸化测定：将细胞培养于 24 孔板中，用 硫酸塞鲁米替尼 (AZD6244 硫酸盐) 处理 1 小时，在指定情况下用 100 ng/mL EGF 刺激 5 分钟，用 RIPA 缓冲液裂解细胞，用抗 pERK 抗体进行 Western blot 检测，剥离后用抗 ERK1/2 抗体重新检测。 96孔板实验：Malme-3M细胞经处理后，用3.7%甲醛固定，甲醇透化，用抗pERK和抗总ERK抗体染色，随后用荧光二抗染色，用LI-COR成像仪定量（IC50 = 10.3 nmol/L）。全血实验：人全血经化合物在37°C处理1小时，然后用400 nmol/L TPA处理10分钟，用2%甲醛固定，Ficoll分离PBMC，用抗pERK和FITC标记的二抗染色，流式细胞术分析。在100 nmol/L化合物浓度下，pERK阳性细胞百分比从74%降至34%；在1 μmol/L化合物浓度下几乎完全阻断[3]。

在携带SCID（严重联合免疫缺陷）纯合突变的小鼠中建立HCC异种移植模型
50或100mg/kg
口服给药

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为了研究AZD6244对HCC异种移植模型的影响，将AZD6244配制成适当浓度的水溶液。携带HCC异种移植模型的小鼠，从肿瘤植入后第7天开始，每天两次口服给予AZD6244，剂量分别为100 μL水（n = 12）、50 mg/kg体重（n = 12）或100 mg/kg体重（n = 12），持续21天。每周至少两次使用游标卡尺测量肿瘤的长度（a）和宽度（b）来监测已建立的肿瘤异种移植模型的生长情况。肿瘤体积计算公式为(a × b²)/2。动物在最后一次注射ADZ6244后3小时处死，记录体重和肿瘤重量，并取出肿瘤进行分析。[1]

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为了研究AZD6244对caspase-3活化和MEK1/2磷酸化的影响，将携带HCC肿瘤（约800 mm3）的小鼠按上述方法分别用载体（n = 4）或50 mg/kg体重的AZD6244（n = 4）治疗3天。动物在最后一次给药后3小时处死，取出肿瘤并液氮速冻以备后续分析。部分肿瘤组织用含10%甲醛的中性缓冲液固定，用于免疫组织化学染色。[1]

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将HT-29人结肠癌或BxPC3人胰腺癌组织块皮下植入裸鼠侧腹，使其生长至100至150 mg。小鼠（每组 n = 10）随机分为治疗组，分别接受赋形剂（10 mL/kg 和 10% 乙醇/10% Cremophor EL/80% D5W）或 AZD6244/ARRY-142886（10、25、50 或 100 mg/kg，口服，每日两次）治疗，治疗时间为第 1 至 21 天。每周测量两次肿瘤大小 [(W2 × L) / L]。[3]

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HCC 异种移植模型：雄性 SCID 小鼠（SCID 突变纯合子）皮下植入切碎的肿瘤碎片（通过 18 号针头）与 RPMI 1640 培养基混合的肿瘤组织。治疗于植入后第 7 天开始。硫酸塞鲁米替尼（硫酸 AZD6244） 悬浮于水中；小鼠每日两次口服（BID）给予水（赋形剂）、50 mg/kg 或 100 mg/kg 的药物，持续 21 天。每周两次用游标卡尺测量肿瘤体积（长 a，宽 b；体积 = a×b²/2）。末次给药后 3 小时处死动物；收集肿瘤进行分析 [1]。
HT-29 和 BxPC3 异种移植模型：将肿瘤碎片（约 100-150 mg）皮下植入裸鼠体内。随机分组（n=10）。赋形剂：10% 乙醇 / 10% 聚氧乙烯蓖麻油 / 80% 5% 葡萄糖溶液，10 mL/kg。硫酸塞鲁米替尼（AZD6244 硫酸盐） 每日两次口服，剂量分别为 10、25、50 或 100 mg/kg，持续 21 天（BxPC3 组由于需要控制肿瘤生长，因此仅持续 18 天）。每周测量两次肿瘤体积。对于 HT-29 细胞，监测肿瘤再生情况直至达到 1000 mm³。对于 BxPC3 细胞，吉西他滨作为对照组：每 3 天腹腔注射 160 mg/kg，共 4 次。在另一项 BxPC3 研究中，小鼠接受 21 天的治疗，然后停药 7 天，再进行另一个 21 天的治疗周期。末次给药 4 小时后，切除肿瘤进行 pERK 分析 [3]。

在携带肝细胞癌异种移植瘤的小鼠中，给予100 mg/kg剂量的硫酸塞鲁米替尼（AZD6244硫酸盐）后，观察到体重下降约10%，提示存在显著毒性。而给予50 mg/kg剂量时，未观察到明显的毒性（以体重减轻或发病率衡量），表明其安全性良好[1]。在HT-29和BxPC3异种移植瘤研究中，未报告显著毒性；该化合物在高达100 mg/kg每日两次的剂量下均耐受良好[3]。

[1]. Targeted inhibition of the extracellular signal-regulated kinase kinase pathway with AZD6244 (ARRY-142886) in the treatment of hepatocellular carcinoma. Mol Cancer Therapy, 2007, 6 (1), 138-146 .

[2]. Identification of common predictive markers of in vitro response to the Mek inhibitor selumetinib (AZD6244; ARRY-142886) in human breast cancer and non-small cell lung cancer cell lines. Mol Cancer Thera, 2010, 9 (7), 1985-1994.

[3]. Biological characterization of ARRY-142886 (AZD6244), a potent, highly selective mitogen-activated protein kinase kinase 1/2 inhibitor. Clin Cancer Res, 2007, 13 (5), 1576-1583.

硫酸塞鲁米替尼是塞鲁米替尼的硫酸盐，塞鲁米替尼是一种口服有效的具有潜在抗肿瘤活性的小分子药物。塞鲁米替尼是一种不依赖ATP的丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK或MAPK/ERK激酶）1和2抑制剂。MEK1和MEK2是双特异性激酶，也是RAS/RAF/MEK/ERK通路激活的关键介质，通常在多种癌细胞中高表达，并驱动多种细胞反应，包括增殖。塞鲁米替尼通过抑制MEK1和MEK2，阻止MEK1/2依赖性效应蛋白和转录因子的激活，从而抑制多种癌细胞的增殖。
另见：塞鲁米替尼（含活性成分）。
药物适应症
Koselugo单药疗法适用于治疗3岁及以上患有1型神经纤维瘤病（NF1）的儿童的症状性、不可切除的丛状神经纤维瘤（PN）。

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Ras-Raf-MEK-ERK通路在多种人类癌症中持续激活，包括肝细胞癌（HCC）、结直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌和黑色素瘤。硫酸塞鲁米替尼（AZD6244）靶向MEK1/2，阻断ERK1/2磷酸化及其下游信号传导，从而导致细胞生长停滞和凋亡。在HCC中，MEK1/2过表达和磷酸化很常见；AZD6244诱导的生长抑制与ERK和p90RSK的抑制以及caspase的激活相关。在乳腺癌和非小细胞肺癌中，药物敏感性与BRAF突变（乳腺癌）和KRAS/NRAS突变（非小细胞肺癌）相关。AZD6244在临床前模型中显示出比第一代MEK抑制剂CI-1040更好的疗效，目前正在进行针对多种实体瘤的I/II期临床试验[1][2][3]。

C₁₇H₁₇BRCLFN₄O₇S

555.76

553.967

943332-08-9

Selumetinib;606143-52-6

16214875

Light yellow to yellow solid

4.601

174.88

5

10

6

32

604

0

O=C(C1C(NC2C(Cl)=CC(Br)=CC=2)=C(F)C2N=CN(C=2C=1)C)NOCCO.O=S(O)(O)=O

GRKFGZYYYYISDX-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H15BrClFN4O3.H2O4S/c1-24-8-21-16-13(24)7-10(17(26)23-27-5-4-25)15(14(16)20)22-12-3-2-9(18)6-11(12)19;1-5(2,3)4/h2-3,6-8,22,25H,4-5H2,1H3,(H,23,26);(H2,1,2,3,4)

6-(4-bromo-2-chloroanilino)-7-fluoro-N-(2-hydroxyethoxy)-3-methylbenzimidazole-5-carboxamide;sulfuric acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。