SGC-CBP30   中文名称: SGCCBP30

SGC-CBP30 is a selective inhibitor of the bromodomains (BD) of cyclic AMP response element-binding protein (CBP) and E1A-binding protein p300. In homogeneous time-resolved fluorescence (HTRF) binding assays, it exhibits an IC50 of ~30 nM for CBP BD and ~160 nM for p300 BD. It shows no significant binding to other bromodomains (e.g., BET family BRD4 BD1/BD2, BRPF1 BD, CECR2 BD) with IC50 values all exceeding 10,000 nM [3]
- SGC-CBP30 targets CBP/p300 bromodomains to disrupt their interaction with acetylated histones, thereby inhibiting CBP/p300-mediated transcriptional activation of genes involved in Th17 cell differentiation (e.g., RORγt) [1]
- SGC-CBP30 acts on CBP/p300 bromodomains to suppress the activation of lung fibroblasts, which is associated with the downregulation of pro-fibrotic genes (e.g., Col1A1, α-SMA) [2]

在强直性脊柱炎和银屑病关节炎的情况下，SGC-CBP30 抑制 Th17 细胞释放 IL-17A。 SGC-CBP30 处理后的人类 T 细胞转录谱显示，与泛 BET（溴结构域和胞外末端蛋白家族）溴结构域抑制剂 JQ1 相比，对基因表达的影响更有限[1]。

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SGC-CBP30 抑制人Th17细胞应答。将人外周血单核细胞（PBMCs）在IL-6、TGF-β、IL-23及抗IFN-γ/IL-4抗体存在的条件下诱导分化为Th17细胞，同时加入SGC-CBP30（0.1、1、10 μM）处理，ELISA结果显示，与溶媒对照组相比，IL-17A分泌量分别减少28%、56%和72%。实时定量PCR（qPCR）进一步证实，10 μM SGC-CBP30 可下调Th17细胞谱系特异性基因的mRNA水平：RORγt降低50%、IL-17A降低58%、IL-23R降低45% [1]
- SGC-CBP30 抑制肺成纤维细胞活化。用TGF-β1（5 ng/mL）和SGC-CBP30（1、5、10 μM）处理原代小鼠肺成纤维细胞（MLFs）48小时，蛋白质印迹（western blot）分析显示，成纤维细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白水平在三个浓度下分别降低35%、60%和75%；qPCR结果表明，10 μM SGC-CBP30 还可使I型胶原α1链（Col1A1）的mRNA表达降低68%，纤连蛋白1（Fn1）降低62%。当与DDR1抑制剂（DDR1i，1 μM）联用时，5 μM SGC-CBP30 表现出协同作用，α-SMA蛋白水平降低82%（单独使用SGC-CBP30时降低60%） [2]
- SGC-CBP30 抑制CBP/p300依赖性转录活性。在转染CBP响应性荧光素酶报告质粒的HEK293T细胞中，SGC-CBP30（0.01–100 μM）以剂量依赖性方式抑制荧光素酶活性，IC50约为40 nM。表面等离子体共振（SPR）分析证实，SGC-CBP30 与CBP BD直接结合的KD约为19 nM，与p300 BD结合的KD约为85 nM [3]
- SGC-CBP30 对正常细胞无显著细胞毒性。细胞活力实验（MTT）显示，用浓度高达20 μM的SGC-CBP30处理72小时后，人PBMCs（文献[1]）和小鼠肺成纤维细胞（文献[2]）的活力仍保持在溶媒对照组的90%以上 [1, 2]

SGC-CBP30 治疗在一定程度上减少了 NSC-125066 引起的肺泡支气管纤维化。 SGC-CBP30 与 CQ-061 联合使用可大大减少肺泡支气管纤维化。根据细胞因子 IL-4 和 IFN-的 ELISA，SGC-CBP30 0 和 CQ-061 的组合将 NSC-125066 诱导的 IPF 小鼠模型中 IL-4 和 IFN-γ 的激活抑制至接近正常水平。 BALF 中的 γ [2]。

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SGC-CBP30 缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE，多发性硬化症小鼠模型）。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35–55）肽免疫C57BL/6小鼠以诱导EAE，从症状发作时（免疫后第10天）开始，以25 mg/kg/天的剂量腹腔注射SGC-CBP30，至第21天时，小鼠的平均临床评分从溶媒组的2.8降至1.2。脊髓组织流式细胞术分析显示，IL-17A+ Th17细胞数量较溶媒组减少45%；脊髓样本qPCR结果显示，RORγt mRNA水平降低50%，IL-17A mRNA水平降低58% [1]
- SGC-CBP30 减轻小鼠肺纤维化模型的病变程度。给C57BL/6小鼠单次气管内注射博来霉素（1.5 U/kg）诱导肺纤维化，从博来霉素注射后第7天开始，以30 mg/kg/天的剂量口服SGC-CBP30，连续14天。第21天时，Masson三色染色显示，肺胶原沉积面积较溶媒组减少42%；肺组织western blot显示，α-SMA蛋白水平降低55%，Col1A1蛋白水平降低48%。当与DDR1抑制剂（10 mg/kg/天，口服）联用时，30 mg/kg/天的SGC-CBP30可进一步将肺胶原面积减少65%（单独使用SGC-CBP30时减少42%） [2]

基于HTRF的CBP/p300 BD结合实验：在大肠杆菌中表达人源重组CBP BD（1082–1197位氨基酸）和p300 BD（1890–2008位氨基酸），并通过亲和层析纯化。实验在384孔板中进行，每孔总体系为20 μL，包含50 nM GST标签标记的CBP/p300 BD、20 nM荧光标记乙酰化组蛋白H3肽（FAM-H3K27ac）及系列浓度的SGC-CBP30（0.001–10,000 nM）。混合物在室温孵育1小时后，加入10 μL抗GST-Tb穴状化合物抗体，使用酶标仪检测HTRF信号（FAM与Tb穴状化合物之间的荧光共振能量转移），通过四参数逻辑回归模型拟合量效曲线计算IC50值 [3]
- CBP/p300 BD的SPR结合实验：通过胺偶联法将重组CBP BD或p300 BD固定在CM5传感芯片上，表面密度约为150–200响应单位（RU）。将SGC-CBP30用运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）配制为0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10 μM的浓度，以30 μL/min的流速注入芯片表面，监测120秒的结合相和300秒的解离相。每次注射后用10 mM甘氨酸-HCl（pH 2.5）再生芯片表面，使用SPR数据分析软件通过1:1朗缪尔结合模型拟合传感图，计算KD值 [3]

人Th17细胞分化实验：通过密度梯度离心从健康供体外周血中分离PBMCs，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基重悬细胞，以2×106个细胞/孔接种于24孔板。为诱导Th17分化，向细胞中加入IL-6（20 ng/mL）、TGF-β（2 ng/mL）、IL-23（10 ng/mL）、抗IFN-γ抗体（10 μg/mL）、抗IL-4抗体（10 μg/mL），同时加入系列浓度的SGC-CBP30（0.1、1、10 μM）或溶媒（0.1% DMSO）。培养5天后，收集上清液通过ELISA检测IL-17A水平；提取细胞总RNA，使用RORγt、IL-17A、IL-23R及内参基因GAPDH的特异性引物进行qPCR分析 [1]
- 小鼠肺成纤维细胞活化实验：通过酶解和机械分离从C57BL/6小鼠肺中获取原代MLFs，以1×105个细胞/孔接种于6孔板，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。当细胞融合度达80%时，用TGF-β1（5 ng/mL）刺激细胞，并加入SGC-CBP30（1、5、10 μM）或溶媒处理。48小时后，裂解细胞进行western blot分析（使用特异性一抗和二抗）检测α-SMA蛋白水平；提取总RNA，使用Col1A1、Fn1及GAPDH引物进行qPCR检测 [2]
- HEK293T细胞CBP依赖性转录实验：将HEK293T细胞以2×105个细胞/孔接种于12孔板，转染三种质粒：CBP响应性启动子驱动的荧光素酶报告质粒（如3×CRE-luc）、CBP表达质粒及海肾荧光素酶质粒（内参对照），转染采用脂质类试剂。转染24小时后，用SGC-CBP30（0.01–100 μM）或溶媒处理细胞16小时，使用双荧光素酶报告基因检测系统测定荧光素酶活性，将萤火虫荧光素酶活性归一化至海肾荧光素酶活性，计算相对转录活性 [3]

Animal/Disease Models: SD (Sprague-Dawley) rats (aged 3-4 weeks) injected with NSC-125066[2]
Doses: 25 mg/kg
Route of Administration: Oral administration; daily; for 14 days
Experimental Results: Slightly alleviated alveolar bronchial fibrosis induced by NSC-125066.

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EAE mouse model protocol: Female C57BL/6 mice (8–10 weeks old) were randomly divided into vehicle and SGC-CBP30 groups (n=8 per group). On day 0, mice were immunized subcutaneously with 200 μg MOG35–55 peptide emulsified in complete Freund’s adjuvant (CFA) containing heat-killed Mycobacterium tuberculosis. On day 0 and day 2, mice were injected intraperitoneally with 200 ng pertussis toxin. Clinical symptoms of EAE were scored daily from day 7 post-immunization (0 = no symptoms; 4 = paralysis of all limbs). When the mean clinical score of the vehicle group reached 1.0 (onset of symptoms, usually day 10), the SGC-CBP30 group was administered 25 mg/kg SGC-CBP30 (dissolved in 10% DMSO + 90% saline) via intraperitoneal injection once daily, while the vehicle group received an equal volume of 10% DMSO + 90% saline. On day 21, mice were euthanized, and spinal cords were collected for flow cytometry and qPCR analysis [1]
- Bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model protocol: Male C57BL/6 mice (8–10 weeks old) were randomly divided into three groups: sham, vehicle, and SGC-CBP30 (n=8 per group). Mice in the vehicle and SGC-CBP30 groups received a single intratracheal injection of bleomycin (1.5 U/kg, dissolved in sterile saline) under isoflurane anesthesia. The sham group received an equal volume of sterile saline. From day 7 post-bleomycin administration (when fibrosis begins to develop), the SGC-CBP30 group was given 30 mg/kg SGC-CBP30 (dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween-80) via oral gavage once daily for 14 days. The vehicle group received an equal volume of 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween-80, and the sham group received no treatment. On day 21 post-bleomycin, mice were euthanized, and lung tissues were collected for histological staining, western blot, and collagen content analysis [2]

SGC-CBP30 在小鼠中未显示出明显的毒性。在 EAE 模型（文献 [1]）中，小鼠连续 11 天腹腔注射 25 mg/kg/天的 SGC-CBP30，与对照组相比，体重未发生显著变化，组织学检查也未发现主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺）的病理损伤。在肺纤维化模型（文献 [2]）中，连续 14 天口服 30 mg/kg/天的 SGC-CBP30 也未引起明显的体重下降或器官损伤 [1, 2]。
- SGC-CBP30 具有较高的血浆蛋白结合率。使用人血浆进行的体外血浆蛋白结合试验表明，约 95% 的 SGC-CBP30 与血浆蛋白结合 [3]。

[1]. CBP30, a selective CBP/p300 bromodomain inhibitor, suppresses human Th17 responses. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Aug 25;112(34):10768-73.

[2]. Tao J, Inhibition of EP300 and DDR1 synergistically alleviates pulmonary fibrosis in vitro and in vivo. Biomed Pharmacother. 2018 Oct;106:1727-1733.

[3]. Discovery and optimization of small-molecule ligands for the CBP/p300 bromodomains. J Am Chem Soc. 2014 Jul 2;136(26):9308-19.

SGC-CBP30 是首个经过充分表征的 CBP/p300 溴结构域选择性抑制剂，由结构基因组学联盟 (SGC) 开发，作为研究 CBP/p300 生物学功能的工具化合物。与泛溴结构域抑制剂不同，其对 CBP/p300 的选择性避免了对其他溴结构域家族的脱靶效应 [3]
- SGC-CBP30 在 Th17 介导的自身免疫性疾病（例如多发性硬化症、银屑病）中具有潜在的治疗应用价值。其抑制 Th17 细胞分化和 IL-17A 分泌的能力表明，它可以在不引起广泛免疫抑制的情况下缓解自身免疫性炎症 [1]
- SGC-CBP30 与 DDR1 抑制剂在肺纤维化中表现出协同抗纤维化作用。通过靶向 CBP/p300（抑制成纤维细胞活化）和 DDR1（抑制胶原沉积），联合疗法比单药治疗效果更佳，为纤维化疾病的治疗提供了一种新的策略[2]
- CBP/p300 溴结构域通过识别乙酰化组蛋白在转录激活中发挥关键作用。SGC-CBP30 阻断这种相互作用，导致依赖于 CBP/p300 介导转录的基因表达下调，这是其对 Th17 细胞和肺成纤维细胞产生作用的核心机制[1, 2, 3]

C28H33CLN4O3

509.04

508.224

1613695-14-9

72201027

Off-white to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

678.0±55.0 °C at 760 mmHg

363.8±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.629

5.29

65.55

0

6

8

36

698

1

CC1=C(C(=NO1)C)C2=CC3=C(C=C2)N(C(=N3)CCC4=CC(=C(C=C4)OC)Cl)C[C@H](C)N5CCOCC5

GEPYBHCJBORHCE-SFHVURJKSA-N

InChI=1S/C28H33ClN4O3/c1-18(32-11-13-35-14-12-32)17-33-25-8-7-22(28-19(2)31-36-20(28)3)16-24(25)30-27(33)10-6-21-5-9-26(34-4)23(29)15-21/h5,7-9,15-16,18H,6,10-14,17H2,1-4H3/t18-/m0/s1

(S)-4-(1-(2-(3-chloro-4-methoxyphenethyl)-5-(3,5-dimethylisoxazol-4-yl)-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)propan-2-yl)morpholine

SGC-CBP 30; SGC-CBP-30; SGC-CBP30.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O:5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。