| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MDMX (also known as MDM4) – inhibits the MDMX-p53 protein-protein interaction. Also binds to MDM2 with weaker affinity [1].
SJ-172550 targets MDMX, a negative regulator of the tumor suppressor p53. Similarly to MDM2, MDMX regulates p53; however, in contrast to MDM2, MDMX appears to directly regulate p53 transcription. The compound binds to the p53-binding pocket of MDMX. It forms a reversible covalent complex with MDMX, locking it in a conformation that cannot bind to p53. By disrupting the MDMX-p53 interaction, the compound frees p53 to exert its tumor-suppressive functions, leading to cell cycle arrest and apoptosis. It is the first small-molecule inhibitor of MDMX with a low micromolar binding constant. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验：在荧光偏振 (FP) 检测中，SJ-172550 抑制了德克萨斯红标记的 p53 肽与 GST-MDMX (1-185) 的结合，IC50 值约为 3 μM。该化合物对 MDMX-p53 结合的抑制 EC50 值为 5 μM。作为比较，nutlin-3a 对 MDMX-p53 的抑制 EC50 值为 20.1 μM。SJ-172550 也与 MDM2 结合，但亲和力较低 [1]。
在 MDMX 扩增的视网膜母细胞瘤细胞 (Weril) 中，SJ-172550（20 μM，处理 20 小时）诱导了 p53 依赖性细胞凋亡，如活化 caspase-3 免疫荧光所示。该化合物并未引起与nutlin-3a或电离辐射相同水平的p53积累，这与MDMX调节转录激活而非p53稳定性相符。观察到p53靶基因的诱导，但强度低于nutlin-3a或电离辐射。细胞死亡依赖于p53，因为针对p53的shRNA可阻止SJ-172550介导的细胞死亡。与nutlin-3a联用时，SJ-172550在表达野生型p53的细胞中表现出叠加的细胞毒性[1]。在HCT116细胞（野生型p53）中，SJ-172550具有细胞毒性，而p53缺陷型HCT116细胞则不敏感。表达高水平MDMX的SJSA-X细胞也对SJ-172550敏感[1]。进一步的机制研究表明，SJ-172550通过烷基化p53结合域中的半胱氨酸76，与MDMX形成共价但可逆的复合物。该化合物将MDMX锁定在一种无法与p53结合的构象中。这种相互作用受还原电位、聚集体的存在以及蛋白质构象稳定性的影响。一种非反应性类似物（化合物2，缺少亲电烯酰胺基团）的抑制效力大约弱30倍（IC50 > 100 μM），表明共价键的形成对于其作用机制至关重要[2]。几乎所有人类肿瘤中都存在p53通路紊乱。SJ-172550通过与MDMX的p53结合口袋结合来取代p53。 MDMX 可逆地与 SJ-172550 结合，SJ-172550 还能有效杀死 MDMX 表达升高的视网膜母细胞瘤细胞。当 SJ-172550 与 MDM2 抑制剂 nutlin-3a 联用时，其作用具有累积效应 [1]。SJ-172550 的作用机制是通过与 MDMX 形成共价但可逆的复合物，将 MDMX 锁定在一种构象中，从而阻止其与 p53 结合。多种因素会影响该复合物的相对稳定性，例如培养基的还原能力和聚集体的存在 [2]。体外实验表明，SJ-172550 能以 5 µM 的 EC50 值竞争性地抑制野生型 p53 肽与 MDMX 的结合，有效破坏 MDMX 与 p53 肽的相互作用。该化合物可逆地与 MDMX 结合，并能有效杀死 MDMX 表达扩增的视网膜母细胞瘤细胞。 SJ-172550 与 MDM2 抑制剂 nutlin-3a 联用时，其作用具有叠加效应。该复合物的相对稳定性受多种因素影响，包括介质的还原性以及聚集体的存在。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，SJ-172550 用于研究动物癌症模型中的 p53 通路。它通过抑制 MDMX 来激活 p53 并诱导肿瘤消退。目前正在临床前研究中评估其疗效和药代动力学。SJ-172550 是验证 MDMX 抑制剂治疗潜力的有效工具。它能够杀伤 MDMX 扩增的视网膜母细胞瘤细胞，使其与该疾病的治疗尤为相关。需要进一步研究以全面表征其体内疗效和安全性。
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| 酶活实验 |
酶活性测定：荧光偏振 (FP) 测定在含有 10 mM Tris (pH 8.0)、42.5 mM NaCl 和 0.0125% Tween 20 的测定缓冲液中进行。使用与 FITC (2.5 nM) 或 Texas Red (15 nM) 偶联的野生型 p53 肽段（氨基酸 15-29），以及 1 μM GST-MDMX (1-185) 或 GST-MDM2 (1-188)。对于抑制剂测定，将小分子与重组蛋白预孵育 30 分钟，然后加入标记肽段并孵育 45 分钟。使用配备相应激发/发射滤光片的 EnVision 多功能酶标仪测量 FP 值。未标记的竞争肽和nutlin-3用作阳性对照，丙氨酸取代的p53肽（AAA-p53）用作阴性对照[1]。
对于等温变性（热位移）测定，将0.125 mg/mL的GST-hMDMX (1-185)与不同浓度的测试化合物（25 nM至100 μM）和Sypro Orange染料（5倍蛋白浓度）在含有10 mM Tris（pH 8.0）和25 mM NaCl的缓冲液中孵育。温度从45°C以每分钟1°C的速率升高，并使用RT-PCR仪测量荧光。表观熔解温度计算为荧光强度处于基线和最大值中间值时的温度[2]。 表面等离子共振（SPR）测定使用Biacore T100仪器进行。生物素标记的MDMX（氨基酸23-111）被捕获在链霉亲和素或NeutrAvidin固定的CM5芯片上。在肽结合实验中，p53肽以75 μL/min的流速注入，浓度范围为38 μM至469 nM（非还原条件）或19 μM至235 nM（还原条件），每个浓度重复三次。在小分子结合实验中，化合物1（100 μM）以100 μL/min的流速注入。使用Scrubber2软件，采用1:1结合模型[2]测定平衡解离常数（Kd）。 质谱实验：样品在结合缓冲液（10 mM Tris pH 8.0，170 mM NaCl）中制备，其中包含1或20 μM的hMDMX构建体和0-100 μM的化合物。样品在室温下孵育 1.5 小时，然后在 4°C 下过夜孵育后，浓缩（对于 1 μM 的样品），使用 C8 Zip Tips 脱盐，用 50% 乙腈/2% 甲酸洗脱，并在正离子模式下通过静态纳米喷雾质谱进行分析。使用 MaxEnt 1 算法 [2] 对光谱进行解卷积。 SJ-172550 的体外结合实验包括使用荧光偏振或表面等离子共振 (SPR) 测量其与 MDMX 的亲和力。将重组 MDMX 与不同浓度的 SJ-172550 (0.1-100 µM) 和荧光标记的 p53 肽段孵育。测量肽段的置换情况，并根据剂量反应曲线计算 EC50 值。通过竞争实验验证化合物与 MDMX 的 p53 结合口袋的结合。通过对 MDM2 和其他相关蛋白进行测试，证实了其选择性。 |
| 细胞实验 |
细胞实验：在细胞毒性实验中，将细胞接种于96孔板中，并用化合物处理48小时（Weril和SJmRbl-8细胞）或按指定方法处理。使用CellTiter-Glo（Promega）检测细胞内ATP水平，以此作为细胞活力的指标。每种细胞系的发光强度与细胞数量之间均呈线性关系。长春新碱用作一般细胞毒性的阳性对照，nutlin-3a用作p53选择性细胞毒性的阳性对照[1]。
在免疫荧光研究中，将Weril1和RB355视网膜母细胞瘤细胞以及ML-1白血病细胞（野生型p53）暴露于SJ-172550（20 μM）20小时。阳性对照包括nutlin-3a（5 μM）和5戈瑞电离辐射。DMSO用作阴性对照。通过免疫荧光分析细胞中 p53 和活化 caspase-3 的水平。SJ-172550 处理后诱导细胞凋亡，细胞退出细胞周期 [1]。 在共免疫沉淀实验中，用该化合物处理 C33A（人宫颈癌）细胞、人胚胎视网膜细胞和 Weril1 视网膜母细胞瘤细胞，并用抗 MDMX 和 p53 抗体进行反向共免疫沉淀实验，结果表明 MDMX-p53 结合受到部分抑制 [1]。 在 p53 依赖性研究中，用 p53 shRNA 转导细胞，并评估其对 SJ-172550 的敏感性 [1]。 SJ-172550 的体外细胞实验使用视网膜母细胞瘤细胞或其他 MDMX 表达扩增的癌细胞系。将细胞培养于适宜的培养基中，并用浓度为 0.1-100 µM 的化合物处理 24-72 小时。采用 MTT 或 CCK-8 法评估细胞活力。采用 caspase-3/7 活性检测和 Annexin V 染色评估细胞凋亡。通过 qPCR 或 Western blot 检测 p53 靶基因（例如 p21、PUMA）的表达来确认 p53 的激活。将该化合物的作用与 MDM2 抑制剂（例如 nutlin-3a）进行比较。 |
| 动物实验 |
SJ-172550 的体内动物研究采用视网膜母细胞瘤或其他 MDMX 扩增的癌细胞系的异种移植小鼠模型。荷瘤小鼠通过腹腔或静脉注射接受该化合物治疗，剂量为 1-50 mg/kg。定期测量肿瘤体积。评估该化合物对肿瘤生长的影响。通过 TUNEL 染色和 caspase-3 免疫组化评估肿瘤组织中的细胞凋亡。通过 qPCR 分析肿瘤组织中 p53 靶基因的表达。药效学研究测量 MDMX 抑制和 p53 激活情况。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
ADME/药代动力学：SJ-172550的细胞渗透性相对较低[1]。该化合物溶解度有限（在水性缓冲液中约为12 μM），且在超过其溶解度极限时主要以聚集体形式存在[2]。未报道其他ADME或药代动力学数据（吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度）。
SJ-172550的药代动力学性质表明，它是一种小分子，在DMSO中具有良好的溶解度（≥30 mg/mL）。其分子量为428.87，分子式为C22H21ClN2O5。该化合物为橙色粉末。短期储存应在2-8°C下进行，长期储存（最长3年）应在-20°C下进行。在溶剂中，它可以在-80°C下保存长达1年。对于体内研究，它可以配制成10% DMSO + 90%玉米油的溶液。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒代动力学：SJ-172550经刃天青还原试验测定，几乎没有或完全没有氧化还原活性[1]。该化合物在溶液中稳定，在标准条件下不会在FP测定缓冲液中与MDMX发生共价修饰。然而，在非还原条件下或高浓度（高于溶解度极限）下，该化合物可通过半胱氨酸76的烷基化与MDMX形成共价加合物。在强制条件下，该化合物可与谷胱甘肽形成加合物[2]。未报道其他毒性数据（LD50、器官毒性等）。
作为一种p53激活剂，该化合物可能对正常细胞产生影响，但其对MDMX扩增细胞的选择性可能降低毒性。该化合物仅供研究使用，不得用于人类治疗。操作时应遵循标准安全预防措施。如需详细的毒性信息，需要在合适的动物模型中进行专门的毒理学研究。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
SJ-172550是首个通过荧光偏振法对包含295,848个化合物的化合物库进行高通量筛选而发现的小分子MDMX抑制剂。该化合物是从1,152个活性化合物中筛选出来的，筛选依据包括化学稳定性、热稳定性、氧化还原电位和溶解度[1]。
该化合物含有一个α,β-不饱和酰胺官能团，能够与蛋白质的巯基反应形成共价加合物。其作用机制涉及MDMX p53结合域中半胱氨酸76的可逆烷基化，从而使蛋白质锁定在无法与p53结合的构象中。还原条件会影响该相互作用，使平衡向能够与p53结合的构象移动。这种复杂的多模式机制使得实验结果的解读变得复杂，并限制了其作为先导化合物进行进一步开发的价值[2]。 SJ-172550 是一种首创的小分子 MDMX 抑制剂，CAS 编号为 431979-47-4。其分子式为 C22H21ClN2O5，分子量为 428.87。它能破坏 MDMX-p53 的相互作用，EC50 值为 5 µM。它能可逆地与 MDMX 结合，并有效杀死 MDMX 扩增的视网膜母细胞瘤细胞。该化合物是用于研究 p53 通路的科研工具，不适用于人类治疗。 |
| 分子式 |
C22H21CLN2O5
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|---|---|
| 分子量 |
428.869
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| 精确质量 |
428.113
|
| 元素分析 |
C, 61.61; H, 4.94; Cl, 8.27; N, 6.53; O, 18.65
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| CAS号 |
431979-47-4
|
| PubChem CID |
2913564
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| 外观&性状 |
Pink to red solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
560.8±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
293.0±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.5 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.586
|
| LogP |
3.73
|
| tPSA |
77.4
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
689
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C(=C(C([H])=C(C=1[H])/C(/[H])=C1/C(N(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N=C/1C([H])([H])[H])=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])C(=O)OC([H])([H])[H]
|
| InChi Key |
RKKFQJXGAQWHBZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H21ClN2O5/c1-4-29-19-12-15(11-18(23)21(19)30-13-20(26)28-3)10-17-14(2)24-25(22(17)27)16-8-6-5-7-9-16/h5-12H,4,13H2,1-3H3
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| 化学名 |
methyl 2-[2-chloro-6-ethoxy-4-[(3-methyl-5-oxo-1-phenylpyrazol-4-ylidene)methyl]phenoxy]acetate
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| 别名 |
SJ172550. MDMX Inhibitor II; SJ 172550; SJ-172550
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~33.33 mg/mL (~77.72 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3317 mL | 11.6585 mL | 23.3171 mL | |
| 5 mM | 0.4663 mL | 2.3317 mL | 4.6634 mL | |
| 10 mM | 0.2332 mL | 1.1659 mL | 2.3317 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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