| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MDMX (also known as MDM4) – inhibits the MDMX-p53 protein-protein interaction. Also binds to MDM2 with weaker affinity [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性： 在荧光偏振实验中，SJ-172550抑制Texas Red标记的p53肽与GST-MDMX（1-185）结合的IC50约为3 μM。该化合物抑制MDMX-p53结合的EC50为5 μM。相比之下，nutlin-3a抑制MDMX-p53的EC50为20.1 μM。SJ-172550也与MDM2结合，但亲和力较低 [1]。
在MDMX扩增的视网膜母细胞瘤细胞（Weril）中，SJ-172550（20 μM处理20小时）诱导p53依赖性凋亡，表现为活化caspase-3的免疫荧光阳性。该化合物引起的p53积累水平不如nutlin-3a或电离辐射，这与MDMX调节转录激活而非p53稳定性的作用一致。观察到p53靶基因的诱导，但不如nutlin-3a或IR强。细胞死亡是p53依赖性的，因为p53的shRNA阻断了SJ-172550介导的细胞死亡。与nutlin-3a联用时，SJ-172550在表达野生型p53的细胞中显示出加成的细胞毒性 [1]。 在HCT116细胞（野生型p53）中，SJ-172550具有细胞毒性，而p53缺陷的HCT116细胞不敏感。高表达MDMX的SJSA-X细胞也对SJ-172550敏感 [1]。 进一步的机制研究表明，SJ-172550通过烷基化p53结合结构域中的半胱氨酸76，与MDMX形成共价但可逆的复合物。该化合物将MDMX锁定在无法结合p53的构象中。该相互作用受到还原电位、聚集体存在和蛋白质构象稳定性的影响。一个缺乏亲电烯酰胺基团的非反应性类似物（化合物2）的抑制效力弱约30倍（IC50 > 100 μM），表明共价键形成对其作用机制很重要 [2]。 几乎所有人类肿瘤中的 p53 通路都存在中断。 SJ-172550 通过连接到 MDMX 的 p53 结合袋来取代 p53。 MDMX 与 SJ-172550 可逆结合，SJ-172550 还可有效杀死 MDMX 表达升高的视网膜母细胞瘤细胞。当 SJ-172550 与 MDM2 抑制剂 nutlin-3a 一起使用时，效果是累积的 [1]。 SJ-172550 通过与化学物质形成共价但可逆的复合物，将 MDMX 锁定在一种构象中，从而防止其与 p53 结合，从而发挥作用。许多因素会影响该复合物的相对稳定性，例如介质的还原能力和聚集体的存在[2]。 |
| 酶活实验 |
酶学实验： 荧光偏振实验在含有10 mM Tris（pH 8.0）、42.5 mM NaCl和0.0125% Tween 20的测定缓冲液中进行。使用FITC（2.5 nM）或Texas Red（15 nM）标记的野生型p53肽（氨基酸15-29）与1 μM GST-MDMX（1-185）或GST-MDM2（1-188）。对于抑制剂测定，小分子与重组蛋白预孵育30分钟，然后加入标记肽孵育45分钟。使用EnVision酶标仪在适当的激发/发射滤光片下测量FP。使用未标记的竞争肽和nutlin-3作为阳性对照，使用丙氨酸取代的p53肽（AAA-p53）作为阴性对照 [1]。
对于等温变性（热移位）实验，将0.125 mg/mL的GST-hMDMX（1-185）与不同浓度的测试化合物（25 nM至100 μM）和Sypro orange染料（5×蛋白浓度）在含有10 mM Tris（pH 8.0）和25 mM NaCl的缓冲液中孵育。温度从45°C以每分钟1度的速率升高，使用RT-PCR仪器测量荧光。表观熔解温度计算为荧光位于基线和最大值中间的温度 [2]。 表面等离子体共振实验使用Biacore T100仪器进行。生物素化的MDMX（aa 23-111）被捕获在链霉亲和素或NeutrAvidin固定的CM5芯片上。对于肽结合实验，以75 μL/min的流速注射p53肽（非还原条件下38 μM至469 nM，还原条件下19 μM至235 nM），每个浓度三次重复。对于小分子结合，以100 μL/min的流速注射100 μM化合物1。使用Scrubber2软件以1:1结合模型确定平衡解离常数（Kd）[2]。 质谱实验：在结合缓冲液（10 mM Tris pH 8.0，170 mM NaCl）中制备1或20 μM hMDCX构建体和0-100 μM化合物的样品。室温孵育1.5小时并在4°C过夜后，浓缩样品（对于1 μM样品），使用C8 Zip Tip脱盐，在50%乙腈/2%甲酸中洗脱，并通过静态纳喷雾质谱在正离子模式下分析。使用MaxEnt 1算法对谱图进行解卷积 [2]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验： 对于细胞毒性实验，将细胞接种在96孔板中，用化合物处理48小时（Weril和SJmRbl-8细胞）或按指示处理。使用CellTiter-Glo测定细胞活力，检测细胞内ATP水平作为活力指标。确认了每种细胞系的发光与细胞数之间的线性关系。使用长春新碱作为一般细胞毒性的阳性对照，使用nutlin-3a作为p53选择性细胞毒性的阳性对照 [1]。
对于免疫荧光研究，将Weril1和RB355视网膜母细胞瘤细胞以及ML-1白血病细胞（野生型p53）暴露于SJ-172550（20 μM）20小时。阳性对照包括nutlin-3a（5 μM）和5戈瑞电离辐射。DMSO用作阴性对照。通过免疫荧光分析细胞的p53和活化caspase-3水平。暴露于SJ-172550后诱导凋亡，细胞退出细胞周期 [1]。 对于免疫共沉淀实验，用化合物处理C33A（人宫颈癌）细胞、人胚胎视网膜细胞和Weril1视网膜母细胞瘤细胞，使用抗MDMX和p53抗体进行双向免疫共沉淀，显示MDMX-p53结合被部分抑制 [1]。 对于p53依赖性研究，用p53的shRNA转导细胞，评估对SJ-172550的敏感性 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
SJ-172550显示相对较低的细胞渗透性 [1]。该化合物在水性缓冲液中的溶解度有限（约12 μM），超过其溶解度极限时主要以聚集形式存在 [2]。未报道其他ADME或药代动力学数据（吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性/毒理学： SJ-172550在刃天青还原实验中显示几乎没有或没有氧化还原活性 [1]。该化合物在溶液中稳定，在标准条件下不共价修饰MDCX。然而，在非还原条件下或高浓度（超过溶解度极限）下，该化合物可通过烷基化半胱氨酸76与MDMX形成共价加合物。该化合物在强条件下与谷胱甘肽形成加合物 [2]。未报道其他毒性数据（LD50、器官毒性等）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
SJ-172550是通过荧光偏振实验对295,848个化合物的文库进行高通量筛选发现的第一个MDMX小分子抑制剂。该化合物基于化学稳定性、热稳定性、氧化还原电位和溶解度特性，从1,152个活性化合物中选出 [1]。
该化合物含有α,β-不饱和酰胺官能团，能够与蛋白质巯基反应形成共价加合物。其作用机制涉及可逆烷基化MDMX p53结合结构域中的半胱氨酸76，将蛋白质锁定在无法结合p53的构象中。该相互作用受还原条件影响，还原条件将平衡推向能够结合p53的构象。这种复杂的多模式机制使实验解释复杂化，并限制了其作为先导化合物进一步开发的价值 [2]。 |
| 分子式 |
C22H21CLN2O5
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|---|---|
| 分子量 |
428.869
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| 精确质量 |
428.113
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| 元素分析 |
C, 61.61; H, 4.94; Cl, 8.27; N, 6.53; O, 18.65
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| CAS号 |
431979-47-4
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| PubChem CID |
2913564
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| 外观&性状 |
Pink to red solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
560.8±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
293.0±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.5 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.586
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| LogP |
3.73
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| tPSA |
77.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
689
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(=C(C([H])=C(C=1[H])/C(/[H])=C1/C(N(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N=C/1C([H])([H])[H])=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])C(=O)OC([H])([H])[H]
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| InChi Key |
RKKFQJXGAQWHBZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H21ClN2O5/c1-4-29-19-12-15(11-18(23)21(19)30-13-20(26)28-3)10-17-14(2)24-25(22(17)27)16-8-6-5-7-9-16/h5-12H,4,13H2,1-3H3
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| 化学名 |
methyl 2-[2-chloro-6-ethoxy-4-[(3-methyl-5-oxo-1-phenylpyrazol-4-ylidene)methyl]phenoxy]acetate
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| 别名 |
SJ172550. MDMX Inhibitor II; SJ 172550; SJ-172550
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~33.33 mg/mL (~77.72 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3317 mL | 11.6585 mL | 23.3171 mL | |
| 5 mM | 0.4663 mL | 2.3317 mL | 4.6634 mL | |
| 10 mM | 0.2332 mL | 1.1659 mL | 2.3317 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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