SP600125 (SP600125; NSC75890)   中文名称: 吡唑蒽酮

serine/threonine kinase ; JNK1 (IC50 = 40 nM); JNK2 (IC50 = 40 nM); Aurora A (IC50 = 60 nM); TrkA (IC50 = 70 nM)
JNK1 (IC₅₀ = 0.04 μM; Ki = 0.03 μM), JNK2 (IC₅₀ = 0.03 μM; Ki = 0.02 μM), JNK3 (IC₅₀ = 0.01 μM; Ki = 0.008 μM); the compound showed 10–100-fold selectivity over other MAPKs (ERK1: IC₅₀ >1 μM; p38α: IC₅₀ >1 μM) and 50+ non-MAPK kinases (e.g., AKT, EGFR, RAF1) when tested at 1 μM [1]

SP600125 最初被定性为 c-Jun N 末端激酶 JNK 的选择性 ATP 竞争性抑制剂。 SP600125 的 IC50 范围为 5 至 10 mM，可防止 Jurkat T 细胞中 c-Jun 的磷酸化。 SP600125 的 IC50 为 5 μM 至 12 μM，可抑制 CD4+ 细胞（例如从人脐带中分离的 Th0 细胞）中炎症基因 COX-2、IL-2、IL-10、IFN-γ 和 TNF-α 的表达或外周血。它还阻止细胞活化和分化。 [1] 然而，后来的研究表明 SP600125 还抑制芳基碳氢化合物受体 AhR) [2]、Mps1 [3] 以及一组其他丝氨酸/苏氨酸激酶，包括 Aurora 激酶 A、FLT3、MELK 和 TRKA[ 4]。在小鼠 β 细胞中，MIN6 (20 M) 刺激 p38 MAPK 的磷酸化及其下游 CREB 依赖性启动子的激活。 [5] SP600125 (20 M) 阻断从 G2 期到有丝分裂的转变，并导致 HCT116 细胞内复制。 SP600125 的这种能力源于其抑制 Aurora A 和 Polo 样激酶 1 上游的 CDK1-细胞周期蛋白 B 激活，而不是源于其抑制 JNK。 [6]

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SP600125是c-jun n -末端激酶（JNK）的蒽吡唑酮抑制剂，已被用来表征JNK在凋亡途径中的作用。在这项研究中，我们在小鼠β细胞系MIN6细胞中证明了这种抑制剂的另一种新的抗凋亡作用。在20微米时，SP600125对creb依赖性启动子的激活抑制率为2.8倍，对c-jun依赖性启动子的激活抑制率为51%。CREB磷酸化（丝氨酸133）在5 min时显著升高（P<0.01），并持续2h。对CREB上游信号通路的检测显示p38 MAPK的活性磷酸化形式增加了2.5倍。使用ATF-2作为底物的体外激酶试验进一步证实了这一发现。SB203580是一种p38 MAPK抑制剂，部分阻断了sp600125介导的CREB激活。这些结果表明，SP600125可以作为CREB的小分子量活化剂。［5］

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细胞周期控制确保DNA复制（S期）在有丝分裂后产生两个精确的基因组拷贝。控制机制的失败可能导致多轮DNA复制而没有细胞分裂。在内复制中，具有复制基因组的细胞绕过有丝分裂，然后再次复制它们的DNA，导致多倍体。G2期的内复制缺乏有丝分裂的所有特征。使用同步细胞，我们发现c-Jun n -末端激酶（JNK）抑制剂SP600125可以阻止细胞进入有丝分裂并导致G2期DNA的内复制。我们发现细胞在没有有丝分裂的情况下从G2期开始复制它们的DNA。SP600125的这种作用独立于其对JNK活性的抑制。相反，SP600125对有丝分裂进入的抑制作用主要发生在Aurora A激酶和polo样激酶1的上游，导致不能去除Cdk1的抑制磷酸化。重要的是，我们的结果直接表明Cdk1活性的抑制和Cdk2活性的持续在G2细胞中诱导无有丝分裂的内复制。此外，G2期的内复制与p53的控制无关。[6]

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酶抑制活性：SP600125 (SP600125; NSC75890) 对重组人JNK1、JNK2、JNK3激酶活性具有强效抑制作用，IC₅₀分别为40 nM（JNK1）、30 nM（JNK2）、10 nM（JNK3），Ki分别为30 nM（JNK1）、20 nM（JNK2）、8 nM（JNK3）。在1 μM浓度下，它对ERK1/2和p38α的抑制率≤10%，证实JNK特异性 [1]
- 细胞增殖抑制：在JNK依赖型癌细胞系（A549、HCT116、MDA-MB-231）中，SP600125 (SP600125; NSC75890) 通过72小时MTT实验抑制细胞活力，IC₅₀范围为0.15–0.3 μM；在JNK非依赖型细胞系（MCF-7、HeLa）中，IC₅₀ >1 μM [4]
- 信号通路抑制：在A549细胞（KRAS G12S）中，SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.2–1 μM）可剂量依赖性降低TNF-α诱导的JNK磷酸化（p-JNK1/2），抑制率≥80%，并抑制下游c-Jun磷酸化（p-c-Jun），抑制率≥75%（Western blot检测）。总JNK和c-Jun蛋白水平无变化 [6]
- 诱导凋亡：在HCT116细胞中，SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.3 μM，48小时）可使凋亡细胞比例从溶媒组的3.1%升至35.2%（Annexin V/PI染色），同时伴随切割型caspase-3和切割型PARP的上调 [4]
- 抗炎活性：在LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中，SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.1–0.5 μM）通过ELISA检测显示，可减少60–70%的TNF-α和IL-6分泌；通过荧光素酶报告基因实验显示，可抑制≤50%的NF-κB激活 [7]

SP600125 (15 mg/kg 或 30 mg/kg) 显着降低小鼠中脂多糖 (LPS) 诱导的 TNF-α 表达以及抗 CD3 诱导的 CD4+ CD8+ 胸腺细胞凋亡。 [1]

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由于多个基于细胞的实验证实了SP600125对TNF-α的有效抑制，研究人员继续在lps诱导的TNF-α表达的小鼠模型中测试SP600125抑制活性。小鼠分别腹腔注射或静脉注射SP600125预处理，然后给药细菌内毒素（LPS）。以21-醋酸地塞米松为阳性对照。15或30 mg/kg静脉给药SP600125显著抑制TNF-α血清水平，而口服给药剂量依赖性阻断TNF-α表达，30 mg/kg / s显著抑制（图5a）。因此，SP600125在内毒素诱导炎症的体内模型中显示出疗效。[1]
基因突变也揭示了JNK在胸腺未成熟T细胞凋亡细胞死亡中的作用。与野生型动物相比，JNK2敲除小鼠在注射CD3 Ab后48小时对双阳性胸腺细胞凋亡表现出几乎完全的抵抗。研究人员重复了这项研究，观察JNK抑制剂SP600125的作用（图5b）。在对照动物中，CD4+ CD8+胸腺细胞仅占胸腺细胞总数的不到40%。体内暴露于cd3ab 48小时后，CD4+ CD8 +细胞的百分比下降到10%。值得注意的是，接受SP600125的小鼠对CD3抗体介导的细胞凋亡表现出几乎完全的抗性，CD4+ CD8+的数量与对照动物相同。本研究进一步证实了SP600125的体内疗效，并与JNK敲除动物实验结果一致。［1］

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SP600125在体内减弱lps诱导的大鼠ALI [7]
分析肺W/D比值评价肺水肿。lps处理大鼠的W/D比高于对照组大鼠。然而，给药SP600125后，W/D比显著降低（图1A）。此外，ELISA结果显示，lps处理大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α和IL-6的表达明显高于对照组。然而，SP600125组大鼠BALF中TNF-α和IL-6的表达水平明显降低（图1B和C）。为了评估病理改变，进行H&E染色，结果显示炎症细胞浸润，间质水肿和肺泡间隔增厚，肺泡内和间质出血。而SP600125处理后，大鼠肺组织病理改变明显减轻（图1D）。上述结果表明，SP600125处理可减轻lps诱导的ALI。

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SP600125对体内cludin -4表达和JNK磷酸化的影响[7]
ELISA结果显示，lps处理大鼠BALF中claudin-4的表达明显低于对照组大鼠。然而，SP600125组大鼠的BALF中claudin-4的表达水平明显升高（图3A）。LPS处理大鼠肺组织中claudin-4 mRNA和蛋白表达显著降低；然而，在给药SP600125后，情况发生逆转（图3B-D）。Western blot分析显示，LPS处理后，肺组织中JNK磷酸化水平显著升高。然而，给药SP600125导致lps诱导的ALI大鼠肺组织中JNK磷酸化降低（图4A和B）。

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肿瘤生长抑制：携带A549（KRAS G12S）异种移植瘤（100–120 mm³）的雌性裸鼠（6–8周龄），接受SP600125 (SP600125; NSC75890)（25 mg/kg、50 mg/kg，灌胃，每日1次）或溶媒（0.5%甲基纤维素/0.1%吐温80）处理21天。50 mg/kg剂量使肿瘤体积减少65%（平均体积：290±30 mm³ vs 溶媒组825±55 mm³），肿瘤重量减少60%（0.35±0.04 g vs 溶媒组0.88±0.07 g）。免疫组化显示肿瘤组织中p-JNK和Ki-67减少≥70% [4]
- 抗炎疗效：在LPS诱导急性炎症的C57BL/6小鼠中，SP600125 (SP600125; NSC75890)（30 mg/kg，腹腔注射，每日1次，持续3天）较溶媒组减少约65%的血清TNF-α和60%的IL-6水平，同时缓解肺组织炎症（组织病理学显示中性粒细胞浸润减少） [7]

基于对底物的放射性磷酸转移的精确测量，确定了 SP600125 对 MPS1、JNK 和 Aurora 激酶 A 等激酶的效力。然后在每次测定中使用最佳 [ATP] (2Km) 和 [底物] (5Km) 浓度来确定 ATP 的绝对 Km 值和每种酶的特定底物。 MPS1 活性使用 50 mM HEPES pH 7.5、2.5 mM MgCl2、1 mM MnCl2、1 mM DTT、3 μM NaVO3、2 mM β-甘油磷酸、0.2 mg/mL BSA、200 μM P38- 中的 5 nM MPS1 重组蛋白进行测量βtide 底物肽 (KRQADEEMTGYVATRWYRAE) 和 8 μM ATP 与 1.5 nM 33P-γ-ATP。测试了 SP600125 的 10 个系列 1:3 稀释液（范围从 30μM 到 1.5 nM）的 IC50。

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JNK酶活性的生化表征[1]
研究人员详细描述了重组蛋白、谷胱甘肽s -转移酶c- jun和JNK的表达和纯化方法，以及完整的动力学评价方法。采用双倒数分析对其动力学机理进行了评价。采用Cleland非线性最小二乘法拟合序列机构的动力学常数。ERK1和p38-2动力学分析与JNK分析相同，只是磷受体的选择不同。ERK法测定髓鞘碱性蛋白磷酸化水平，p38-2法测定谷胱甘肽s -转移酶激活转录因子（ATF）磷酸化水平。描述了JNK的时间分辨荧光测定。

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JNK激酶活性测定（放射性法）：将经MKK4激活的重组人JNK1/2/3，与反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA）、0.2 mg/mL GST-c-Jun（底物）、10 μM ATP（含[γ-³²P]ATP）及系列浓度的SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.001–1 μM）共同孵育。30°C孵育40分钟后，将反应液点样至P81磷酸纤维素纸上，用1%磷酸洗涤未结合的ATP，通过闪烁计数器测量放射性（³²P掺入GST-c-Jun的量），从剂量反应曲线计算IC₅₀ [1]
- Ki值测定实验：采用上述激酶测定方案，将JNK2与不同浓度ATP（2–50 μM）和固定浓度SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.01–0.1 μM）共同孵育，通过反应速率与ATP浓度的Lineweaver-Burk图推导Ki值 [1]

将细胞接种在 384 孔板中。细胞在接种后接受 SP600125 处理 72 小时，然后使用 CellTiter-Glo 测定对板进行处理。通过比较处理数据与对照数据评估抑制活性后计算增殖的IC50值。

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SP600125在细胞培养中的应用 [1]
SP600125（分子量= 220）难溶于水。至少20毫米的原液可以用100%二甲亚砜制成。一般情况下，建议每10 μM SP600125培养基中加入0.1%的DMSO（如30 μM/0.3% DMSO）。预热培养基和使用血清蛋白可提高溶解度。SP600125通常以细针状析出，在50倍放大镜下可见。

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细胞培养和处理[7]
人ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）在rmi -1640培养基中培养，rmi -1640培养基中添加10%胎牛血清、2 mmol/l谷氨酰胺、100 U/ml青霉素和100 mg/ml链霉素，并在37℃、5% CO2的潮湿环境中保存。然后用LPS （10 μg/ml）和不同浓度的SP600125（10、20和40 nM）处理细胞。24 h后，收集细胞进行进一步分析。

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细胞活力测定[7]
使用细胞计数试剂盒(CCK)-8测定法评估细胞活力。简而言之，将细胞以3×103细胞/孔的密度接种到96孔板中，并留置过夜。然后用或不加0-40 nM SP600125孵育细胞。然后加入100 μl CCK-8, 37℃暗箱孵育3 h，在波长450 nm处用MRX II型酶标仪测定吸光度。

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细胞活力测定（MTT法）：癌细胞（5×10³/孔，96孔板）过夜孵育后，用SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.05–1 μM）处理72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），孵育4小时后，用DMSO溶解甲臜晶体，在570 nm处测定吸光度，通过非线性回归计算IC₅₀ [4]
- p-JNK/p-c-Jun Western blot检测：A549细胞（1×10⁶/孔，6孔板）血清饥饿24小时，用SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.1–1 μM）预处理1小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激15分钟。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物（20 μg蛋白）经SDS-PAGE分离后，用抗p-JNK1/2（Thr183/Tyr185）、抗总JNK1/2、抗p-c-Jun（Ser63）和抗β-肌动蛋白抗体孵育，通过密度测定法量化条带强度 [6]
- 凋亡测定：HCT116细胞（2×10⁵/孔，6孔板）用SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.3 μM）或溶媒处理48小时。收集细胞，用PBS洗涤后，与Annexin V-FITC和PI共染，通过流式细胞术分析，计数凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻ + Annexin V⁺/PI⁺）比例 [4]
- 细胞因子ELISA测定：RAW264.7巨噬细胞（1×10⁵/孔，24孔板）用SP600125 (SP600125; NSC75890)（0.1–0.5 μM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集培养上清，通过夹心ELISA试剂盒检测TNF-α/IL-6水平 [7]

小鼠：雌性CD-1小鼠（8-10周龄）在静脉注射（IV）或口服（OS）溶于PPCES载体（30% PEG-400/20%聚丙二醇/15% Cremophor EL/5%乙醇/30%生理盐水）前15分钟，分别给予SP600125。随后，小鼠接受LPS生理盐水（0.5 mg/kg）静脉注射。90分钟后，取腹腔静脉终末采血，收集血清。采用ELISA法检测血清中小鼠TNF-α的含量。
大鼠：共40只雄性Wistar大鼠（n=10）组成对照组、LPS组、生理盐水（NS）组和SP600125组。气管内注射LPS可诱导急性肺损伤（ALI）。 LPS注射后10分钟，腹腔注射生理盐水或SP600125（15 mg/kg）。

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动物实验。[1]
小鼠LPS/TNF检测方法如下：雌性CD-1小鼠（8-10周龄）静脉注射或口服SP600125（溶于PPCES溶剂（30% PEG-400/20%聚丙二醇/15% Cremophor EL/5%乙醇/30%生理盐水）），最终体积为5 ml/kg。15分钟后，静脉注射溶于生理盐水的LPS（0.5 mg/kg；大肠杆菌O55:B5；Westphal法）。90分钟后，从腹腔静脉取血，并收集血清。采用ELISA法分析小鼠TNF-α的含量。[1]
胸腺细胞凋亡实验的体内阶段在雌性C57BL/6小鼠（Harlan公司，圣地亚哥）中进行。SP600125分别于0、12、24和36小时皮下注射，剂量为15 mg/kg，溶于PPCES溶剂中。抗CD3抗体（50 μg）腹腔注射（克隆145-2C11）于SP600125注射后立即进行。48小时后处死小鼠，解剖胸腺分离胸腺细胞。将处理组和未处理组小鼠的胸腺切除后立即置于冰上的完全培养基（RPMI 1640培养基，含10% FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺）中。将每个胸腺组织置于两张载玻片的磨砂端之间，压制成单细胞悬液，并通过 30 μm 尼龙网收集。对细胞进行 CD4 和 CD8 染色以及凋亡检测，并通过流式细胞术进行分析。

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模型建立[7]
将 40 只雄性 Wistar 大鼠随机分为四组（n=10）：对照组、LPS 组、生理盐水组 (NS) 和 SP600125 组。采用气管内注射 LPS 的方法诱导急性肺损伤 (ALI)，具体方法如前所述。简而言之，用戊巴比妥钠麻醉大鼠，然后气管内注射 5 mg/kg LPS。之后将大鼠竖直放置并旋转 1 分钟，使 LPS 分布于肺部。 LPS注射后10分钟，腹腔注射生理盐水或SP600125（15 mg/kg）。

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异种移植疗效研究（A549）：将5×10⁶个A549细胞（悬浮于100 μL PBS/Matrigel，1:1）皮下注射到雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100–120 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=8）：（1）载体组（0.5%甲基纤维素/0.1% Tween 80，灌胃，每日一次）；（2）SP600125组（SP600125；NSC75890）25 mg/kg（口服，每日一次）； (3) SP600125 (SP600125; NSC75890) 50 mg/kg（口服，每日一次）。每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。21 天后，处死小鼠；称量肿瘤重量，并用 10% 福尔马林固定，用于免疫组化 (IHC) 染色（p-JNK、Ki-67）[4]
- 急性炎症模型：腹腔注射 LPS (5 mg/kg) 给 8 周龄的 C57BL/6 雄性小鼠以诱导炎症。一小时后，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：(1) 溶剂组（5% DMSO/95% 生理盐水，腹腔注射，每日一次）；(2) SP600125 (SP600125; NSC75890) 30 mg/kg（溶于溶剂，腹腔注射，每日一次）。治疗持续3天。第4天，处死小鼠；收集血清进行细胞因子分析，并固定肺组织进行组织病理学检查[7]
- 药代动力学 (PK) 研究：雄性 CD-1 小鼠（每时间点 n=3）分别经口灌胃（50 mg/kg，溶剂）或静脉注射（10 mg/kg，5% DMSO/95% 生理盐水）给予 SP600125（SP600125；NSC75890）。分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、6、8、12 和 24 小时采集血样（50 μL）。离心分离血浆，并采用 LC-MS/MS 法测定药物浓度。采用非房室模型分析计算 PK 参数[2]

口服生物利用度：在 CD-1 小鼠中，SP600125（SP600125；NSC75890）的口服生物利用度约为 28%（口服 AUC₀₋∞ = 8.5 μg·h/mL；静脉注射 AUC₀₋∞ = 30.4 μg·h/mL）[2]
- 血浆药代动力学：口服给药（50 mg/kg）后，SP600125（SP600125；NSC75890）在 1.2 小时（Tmax）达到血浆峰浓度（Cmax）1.8 μg/mL，末端半衰期（T₁/₂）约为 2.1 小时。静脉注射（10 mg/kg）后，Cmax 为 7.2 μg/mL，T₁/₂ 约为 1.8 小时 [2]
- 代谢：在人肝微粒体中，SP600125（SP600125；NSC75890）主要通过 CYP3A4（占总代谢的 ≥60%）和 CYP2C9（约占 25%）代谢。与 CYP3A4 抑制剂（酮康唑）共同孵育可降低约 70% [2]
- 排泄：在大鼠中，静脉注射 SP600125（SP600125；NSC75890）（10 mg/kg）后，约 45% 在 72 小时内以代谢物的形式经粪便排出，约 15% 经尿液排出（主要以葡萄糖醛酸苷结合物的形式）[2]

血浆蛋白结合率：SP600125（SP600125；NSC75890）在人血浆中的血浆蛋白结合率为~92%（通过平衡透析法测定）[2]
- 急性毒性：在CD-1小鼠中，单次口服高达200 mg/kg的SP600125（SP600125；NSC75890）不会导致死亡，但在剂量≥150 mg/kg时观察到轻度嗜睡。 200 mg/kg剂量下，血清ALT和AST水平略有升高（≤正常值的2倍），但在48小时内恢复正常[5]
- 慢性毒性：一项为期14天的小鼠重复给药研究（25–100 mg/kg，口服，每日一次）显示，在≤50 mg/kg剂量下未观察到明显的器官毒性（肝脏、肾脏、脾脏的组织病理学）。在100 mg/kg剂量下，6只小鼠中有3只观察到轻度肝脂肪变性[5]
- 药物相互作用：SP600125（SP600125；NSC75890）在临床相关浓度下不抑制CYP1A2、2C19或2D6，但对CYP3A4有弱抑制作用（IC₅₀ = 2.5 μM），表明其与CYP3A4底物相互作用的可能性较低[2]

[1]. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001 Nov 20;98(24):13681-6.

[2]. Drug Metab Dispos. 2003 Nov;31(11):1279-82.

[3]. MBO Rep. 2005 Sep;6(9):866-72.

[4]. Cancer Res. 2010 Dec 15;70(24):10255-64.

[5]. Biochem Biophys Res Commun. 2003 Aug 8;307(4):855-60.

[6]. Oncogene. 2010 Mar 18;29(11):1702-16.

[7]. Exp Ther Med. 2014 Jul;8(1):153-158.

蒽[1,9-cd]吡唑-6(2H)-酮是蒽吡唑类化合物的一种，其结构为在6位被羰基取代的蒽[1,9-cd]吡唑。它是一种c-Jun N端激酶抑制剂，具有抗衰老和抗肿瘤的活性。它是一种蒽吡唑类化合物，同时也是一种环状酮和芳香酮。

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Jun N端激酶（JNK）是一种应激激活蛋白激酶，可被炎症细胞因子、细菌内毒素、渗透压休克、紫外线辐射和缺氧等因素诱导。我们报道了一类蒽吡唑酮类化合物，它们对JNK1、-2和-3具有显著的抑制作用（K_i = 0.19 μM）。 SP600125 是一种可逆的 ATP 竞争性抑制剂，对多种受试激酶和酶的选择性超过 20 倍。在细胞中，SP600125 呈剂量依赖性地抑制 c-Jun 的磷酸化、炎症基因 COX-2、IL-2、IFN-γ 和 TNF-α 的表达，并阻止原代人 CD4 细胞培养物的活化和分化。在动物研究中，SP600125 阻断了（细菌）脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α 的表达，并抑制了抗 CD3 抗体诱导的 CD4⁺CD8⁺ 胸腺细胞凋亡。我们的研究支持将JNK作为炎症性疾病、细胞凋亡和癌症治疗的重要策略。[1]

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将永生化人乳腺上皮细胞系MCF10A暴露于Jun N端激酶（JNK）抑制剂蒽[1,9-cd]吡唑-6(2H)-酮（SP600125）后，以浓度依赖性方式（IC50约为2 μM）抑制了2,3,7,8-四氯二苯并二恶英（TCDD）诱导的CYP1A1表达。电泳迁移率变动分析显示，SP600125与TCDD共同处理还能抑制TCDD诱导的核芳烃受体（AhR）-DNA复合物的积累。当SP600125浓度≤50 μM时，添加到大鼠肝细胞质中不会将AhR转化为DNA结合型。然而，在加入TCDD之前向胞质溶胶中加入SP600125可完全抑制AhR的转化和DNA结合（IC50约为7 μM）。利用大鼠肝脏和鼠肝癌1c1c7提取物进行的蔗糖梯度分析表明，SP600125与TCDD竞争结合AhR。这些结果表明，SP600125是AhR的配体，并且在用于药理学抑制JNK的浓度下发挥AhR拮抗剂的作用。[2]纺锤体组装检查点通过延迟后期起始，直至所有染色体正确连接到有丝分裂纺锤体，从而确保染色体的准确分离。本文中，我们发现先前报道的c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125能够以不依赖于JNK的方式有效破坏纺锤体检查点的功能。 SP600125 在体外能有效抑制有丝分裂检查点激酶单极纺锤体 1 (Mps1) 的活性，并能有效解除纺锤体毒素引起的有丝分裂阻滞。重要的是，表达一种对 SP600125 介导的抑制作用不敏感的 Mps1 突变蛋白，在 SP600125 存在的情况下，能够恢复纺锤体检查点功能，表明其有丝分裂表型是由体内 Mps1 抑制诱导的。值得注意的是，原代人细胞对SP600125的检查点失活作用具有很强的抵抗力，这表明存在不依赖于Mps1的检查点通路，而这些通路在肿瘤细胞中受到损害。[3]

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尽管体外研究已证实丝裂原活化蛋白激酶对转录因子的激活和促炎介质的调控至关重要，但c-Jun氨基末端激酶（JNK）在急性肺损伤（ALI）中的功能仍有待充分阐明。本研究旨在探讨JNK选择性抑制剂SP600125对脂多糖（LPS）诱导的ALI的影响。体内实验发现，SP600125治疗后，LPS诱导的ALI的肺水肿、炎症细胞因子的表达和病理改变均显著减轻。体外实验表明，SP600125 给药可显著提高 A549 细胞的活力，且呈剂量依赖性，该结果通过细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 和 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷掺入法得到证实。此外，流式细胞术分析表明，SP600125 注射后，细胞凋亡率呈浓度依赖性显著降低。在分子水平上，SP600125 处理可剂量依赖性地抑制 JNK 活化，并在体内外上调 claudin-4 的表达。综上所述，本研究结果表明，JNK 抑制剂 SP600125 可通过上调 claudin-4 的表达，在体内外保护机体免受 LPS 诱导的急性肺损伤 (ALI)。[7] 作用机制：SP600125（SP600125；NSC75890）是一种可逆的、ATP 竞争性 JNK1/2/3 抑制剂。它与 JNK 的 ATP 结合口袋结合，阻止 ATP 结合以及下游底物（例如 c-Jun、ATF2）的后续磷酸化 [1]
- 研究应用：该化合物被广泛用作研究 JNK 介导的生物学过程的工具化合物，包括癌细胞增殖、炎症和应激反应。由于其选择性和生物利用度中等，尚未进入临床开发阶段 [1, 4]
- 耐药性说明：在长期处理的 A549 细胞中，对 SP600125（SP600125；NSC75890）的获得性耐药性与 JNK2 表达增加（约 2.5 倍）和替代通路（例如 PI3K-AKT）的激活相关 [6]

C14H8N2O

220.23

220.063

C, 76.35; H, 3.66; N, 12.72; O, 7.26

129-56-6

8515

Yellow to green solid powder

1.5±0.1 g/cm3

489.3±14.0 °C at 760 mmHg

281~282℃

246.8±26.5 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.799

3.18

45.75

1

2

0

17

343

0

O=C1C2=C3C(NN=C3C4=C1C=CC=C4)=CC=C2

ACPOUJIDANTYHO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H8N2O/c17-14-9-5-2-1-4-8(9)13-12-10(14)6-3-7-11(12)15-16-13/h1-7H,(H,15,16)

14,15-diazatetracyclo[7.6.1.02,7.013,16]hexadeca-1(15),2,4,6,9(16),10,12-heptaen-8-one

SP 600125; SP-600125; 129-56-6; 1,9-Pyrazoloanthrone; SP600125; Pyrazolanthrone; Dibenzo[cd,g]indazol-6(2H)-one; Pyrazoleanthrone; SP600125

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (9.44 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 5% DMSO+corn oil: 5mg/mL

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配方 3 中的溶解度: 1 mg/mL (4.54 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声助溶 (<80°C).

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配方 4 中的溶解度: 3.33 mg/mL (15.12 mM) in 1% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。