| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Autophagy
SPAUTIN-1 targets ubiquitin-specific proteases 10 (USP10) and 13 (USP13) [1] SPAUTIN-1 targets USP10 and USP13 to inhibit autophagy [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Spautin-1 降低抗凋亡蛋白 Mcl-1 和 Bcl-2 的表达，从而增加甲磺酸伊马替尼 (IM) 在 CmL 细胞中诱导的细胞凋亡。 Spautin-1 的促凋亡作用与 GSK3β 激活相关，GSK3β 是一种重要的 PI3K/AKT 下游效应子。在 CmL 细胞系 K562 中，spautin-1 通过将 IC50 从 1 μM 降低至 0.5 μM 来增加 IM 诱导的细胞毒性 [1]。自噬抑制的减少与 spautin-1 治疗急性胰腺炎的机制有关 [2]。
在人慢性髓系白血病（CML）细胞系（K562、KU812）中，SPAUTIN-1（5–20 μM）单独使用时抗增殖活性较弱（20 μM时细胞活力仅降低≤20%）。与伊马替尼（1 μM）联合使用时，显著增强伊马替尼诱导的凋亡：Annexin V-FITC/PI染色显示，K562细胞的凋亡率从（伊马替尼单独组的）约25%升高至（10 μM SPAUTIN-1 + 伊马替尼组的）约65%。它通过减少LC3-II积累和增加p62蛋白水平抑制自噬（Western blot检测），并下调USP10/USP13表达，促进Beclin-1泛素化降解[1] - 在雨蛙素（100 nM）诱导的模拟急性胰腺炎的大鼠胰腺腺泡细胞（AR42J）中，SPAUTIN-1（1–10 μM）以剂量依赖性方式改善细胞活力（10 μM时从约50%升高至约85%），抑制受损自噬：降低LC3-II/LC3-I比值和Beclin-1表达（Western blot检测），减轻细胞内钙超载（Fura-2 AM染色显示，5 μM时胞质Ca²⁺浓度降低约40%）。它还在mRNA和蛋白水平降低炎症细胞因子（TNF-α、IL-6）的产生（qRT-PCR和ELISA检测）[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Spautin-1 可改善由雨蛙蛋白或 L-精氨酸引起的急性胰腺炎的病理生理学。 Spautin-1预处理显着降低了血清淀粉酶和脂肪酶水平的增加，表明胰蛋白酶活性。当 spautin-1 存在时，由雨蛙素产生的血清 TNFα 水平的增加会减少。 Spautin-1药物可减轻雨蛙素产生的水肿、变性、凝固性坏死和炎性细胞浸润等炎症损伤[2]。
在雨蛙素诱导的急性胰腺炎小鼠模型中，腹腔注射SPAUTIN-1（5 mg/kg/天）持续3天改善胰腺损伤：减少胰腺水肿（湿/干重比降低约30%），降低血清淀粉酶和脂肪酶水平（分别降低约45%和50%），减轻组织学损伤（腺泡细胞坏死和炎症细胞浸润减少约60%）。胰腺组织中自噬受到抑制（LC3-II和Beclin-1下调），炎症细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）表达降低（免疫组织化学和Western blot检测）[2] |
| 酶活实验 |
USP10/USP13蛋白酶活性实验：重组人USP10或USP13（1 μM）与泛素-AMC底物（5 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM DTT、0.01% BSA）中37°C孵育60分钟。加入浓度范围为1–50 μM的SPAUTIN-1，荧光光谱法（激发光360 nm，发射光460 nm）检测AMC的释放量，相对于溶媒对照组计算蛋白酶活性抑制率，证实SPAUTIN-1以剂量依赖性方式抑制USP10和USP13活性[1,2]
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| 细胞实验 |
细胞计数试剂盒-8 （CCK-8）测定细胞增殖[1]
CCK-8检测细胞增殖情况。细胞（1×10~5/ml）接种于96孔板中，一式三次，分别用125 ~ 4000 nM IM单独或联合spautin-1 （10 μM）处理。孵育48 h后，每孔加CCK-8试剂10 μl。4小时后，使用酶标仪在450 nm处读取吸光度。在只含染料溶液和培养基的孔中测量本底吸光度。呈现的数据是从总吸光度值中减去背景吸光度值的值。计算三次重复的平均值。 荧光显微法[1] 采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态。将细胞（1×105/ml）接种于指示浓度为IM （500 nM）的12孔板中12 h，然后在K562培养基中加入spauatin -1 （10 μM）或DMSO再孵育36 h，孵育后用20 mg/ml的Hoechst 33258染色10 min，在荧光显微镜下观察。 CML细胞增殖和凋亡实验：K562/KU812细胞（每孔5×10³个）接种于96孔板，用SPAUTIN-1（5–20 μM）单独处理或与伊马替尼（1 μM）联合处理48小时。CCK-8法检测细胞活力；Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪分析凋亡。自噬检测时，细胞转染GFP-LC3质粒，药物处理后荧光显微镜观察LC3斑点[1] - 胰腺腺泡细胞实验：AR42J细胞接种于6孔板（蛋白/mRNA分析）或96孔板（活力检测），用SPAUTIN-1（1–10 μM）预处理1小时后，雨蛙素（100 nM）刺激24小时。MTT法检测细胞活力；Fura-2 AM染色结合荧光计检测细胞内Ca²⁺浓度。Western blot分析LC3-I/II、Beclin-1、USP10、USP13和GAPDH；qRT-PCR量化TNF-α和IL-6的mRNA水平[2] - 泛素化实验：K562细胞用SPAUTIN-1（10 μM）处理24小时后，用含泛素酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。细胞裂解液经抗Beclin-1抗体免疫沉淀后，通过SDS-PAGE和抗泛素抗体的Western blot分析免疫沉淀物，检测Beclin-1的泛素化水平[1] |
| 动物实验 |
每隔一小时，连续四次腹腔注射西鲁林（50 μg/kg 体重）；L-精氨酸诱导模型每隔一小时腹腔注射一次 L-精氨酸（1.4 g/kg，本研究的最佳剂量），共注射三次。
急性胰腺炎小鼠模型，包括西鲁林和 L-精氨酸诱导模型 本研究构建了急性胰腺炎小鼠模型，包括西鲁林和 L-精氨酸诱导模型，具体方法如前所述。对于西鲁林诱导模型，每隔一小时，连续四次腹腔注射西鲁林（50 μg/kg 体重）。对于 L-精氨酸诱导模型，每隔一小时腹腔注射一次 L-精氨酸（1.4 g/kg，本研究的最佳剂量），共注射三次。 将大鼠随机分为六组（每组 n = 12）。前三组用于胰泌素诱导模型分析：第1组（对照组）；第2组（胰泌素组），胰泌素诱导的胰腺炎，未接受spautin-1治疗；第3组（胰泌素+spautin-1组），胰泌素诱导的胰腺炎，并接受spautin-1治疗（2 mg/kg，在首次注射胰泌素前30分钟腹腔注射）。接下来的三组用于L-精氨酸诱导模型分析：第4组（对照组）；第5组（L-精氨酸组），L-精氨酸诱导的胰腺炎，未接受spautin-1治疗；第6组（L-精氨酸+spautin-1组），L-精氨酸诱导的胰腺炎，并接受spautin-1治疗（2 mg/kg，在首次注射L-精氨酸前30分钟腹腔注射）。为了观察炎症过程的变化，随机选取部分小鼠，在最后一次注射西鲁林或L-精氨酸后3、6和9小时处死，进行血清淀粉酶分析。在最后一次注射西鲁林或L-精氨酸后9小时处死小鼠，进行血清淀粉酶、脂肪酶和TNFα的分析、Western blotting以及组织病理学检查。[2] 西鲁林诱导的急性胰腺炎小鼠模型：将成年雄性C57BL/6小鼠（20-25 g）随机分为对照组、模型组和SPAUTIN-1治疗组（每组n=8）。通过腹腔注射西鲁林（50 μg/kg），每小时一次，持续7小时，诱导急性胰腺炎。将SPAUTIN-1溶解于5% DMSO + 95%生理盐水中，于首次注射胰泌素前1小时以5 mg/kg的剂量腹腔注射，之后每日一次，连续3天。对照组小鼠注射等体积的溶剂。第3天，处死小鼠；收集血清以测定淀粉酶和脂肪酶水平；切取胰腺组织进行组织学检查、Western blot和免疫组织化学分析[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：浓度高达 20 μM 的 SPAUTIN-1 对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 或大鼠胰腺腺泡细胞（细胞活力 >85% vs. 对照组）未显示出明显的细胞毒性 [1,2]
- 体内毒性：用 SPAUTIN-1（5 mg/kg/天，腹腔注射，连续 3 天）处理的小鼠与对照组相比，体重、肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未出现显著变化。肝脏、肾脏和心脏组织的组织学检查未发现异常病变 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
甲磺酸伊马替尼（IM）是一种靶向BCR-ABL酪氨酸激酶的竞争性抑制剂，彻底改变了慢性粒细胞白血病（CML）的临床治疗。然而，耐药性和不耐受性仍然是CML治疗面临的挑战。自噬被认为在IM耐药中发挥作用。为了研究特异性强效自噬抑制剂-1（spautin-1）在CML中的抗白血病活性，我们检测了其与IM在K562和CML细胞中的协同作用。结果表明，spautin-1通过下调Beclin-1显著抑制IM诱导的CML细胞自噬。Spautin-1通过降低抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达增强IM诱导的CML细胞凋亡。我们进一步证实，spautin-1的促凋亡活性与PI3K/AKT通路的重要下游效应分子GSK3β的激活有关。研究结果表明，自噬抑制剂spautin-1通过抑制PI3K/AKT通路并激活下游GSK3β，增强伊马替尼（IM）诱导的细胞凋亡，进而导致Mcl-1和Bcl-2表达下调，这为提高IM治疗慢性粒细胞白血病（CML）患者的疗效提供了一种有前景的策略。[1]
急性胰腺炎的特征是胰酶原预激活。胰酶原激活引起的严重炎症最终可导致多器官功能障碍，这也是重症急性胰腺炎高死亡率的原因之一。然而，目前尚无针对急性胰腺炎的特效疗法。本文研究表明，spautin-1能够有效抑制自噬通量，从而改善由胰泌素或L-精氨酸诱导的急性胰腺炎的发病机制。此外，本文还揭示了胞质钙过载引起的CaMKII磷酸化。研究还表明，自噬蛋白聚集体降解受阻伴随的自噬功能障碍与胰腺腺泡细胞内消化酶激活呈正相关，而消化酶激活是由胰泌素或L-精氨酸刺激引起的。本研究还表明，spautin-1在缓解急性胰腺炎中的作用与自噬抑制受损和Ca2+超载缓解有关。我们在此提供了一种有前景的急性胰腺炎治疗方法，该方法通过靶向受损的自噬和胞质钙离子升高来实现。[2] SPAUTIN-1 是一种新型小分子自噬抑制剂，其作用机制是通过特异性抑制 USP10 和 USP13 [1,2] - 其核心机制是抑制 USP10/USP13 介导的 Beclin-1 去泛素化，促进 Beclin-1 泛素化和降解，从而阻断自噬的启动 [1] - 在慢性粒细胞白血病 (CML) 中，它通过抑制 CML 细胞中的保护性自噬来增强伊马替尼的疗效，克服伊马替尼耐药的可能性 [1] - 在急性胰腺炎中，它通过抑制受损的自噬、减少细胞内钙超载和炎症反应来减轻胰腺损伤 [2] - 它在自噬相关疾病（包括某些癌症和炎症性疾病[1,2] |
| 分子式 |
C15H11F2N3
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|---|---|---|
| 分子量 |
271.26
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| 精确质量 |
271.092
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| 元素分析 |
C, 66.42; H, 4.09; F, 14.01; N, 15.49
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| CAS号 |
1262888-28-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
51037431
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
419.6±40.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
207.6±27.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.672
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| LogP |
3.4
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| tPSA |
37.81
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
308
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
AWIVHRPYFSSVOG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H11F2N3/c16-11-3-1-10(2-4-11)8-18-15-13-7-12(17)5-6-14(13)19-9-20-15/h1-7,9H,8H2,(H,18,19,20)
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| 化学名 |
6-fluoro-N-[(4-fluorophenyl)methyl]quinazolin-4-amine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6865 mL | 18.4325 mL | 36.8650 mL | |
| 5 mM | 0.7373 mL | 3.6865 mL | 7.3730 mL | |
| 10 mM | 0.3687 mL | 1.8433 mL | 3.6865 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Spautin-1 inhibits IM-induced autophagy in K562 cells.Int J Oncol.2014 May;44(5):1661-8.
Spautin-1 promotes IM-induced apoptosis in K562 cells.Int J Oncol.2014 May;44(5):1661-8. |
Tepotinib hydrochloride monohydrate
BKN-1
NEO214
MJO445
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