| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Btk （IC50 < 0.5 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
Spebrutinib (CC-292) 是一种口服 Btk 抑制剂，具有共价、高选择性，IC50 为 0.5 nM。此外，spebrutinib 对 Yes、c-Src、Brk、Lyn 和 Fyn 表现出轻度抑制作用，相应的 IC50 为 723 nM、1.729 μM、2.43 μM、4.4 μM 和 7.15 μM。进一步的研究表明，Spebrutinib 抑制 Btk 激酶的细胞 EC50（EC50=8 nM）与 Ramos 细胞中响应药物剂量反应的 Btk 占据 EC50（EC50=6 nM）之间存在密切相关性。此外，35 nM spebrutinib 是抑制 Ramos 细胞中 90% Btk 活性的浓度，而 39 nM 是 90% Btk 占用所需的浓度 [1]。
在本研究中，研究人员首先研究了CC-292在5种MCL细胞系(REC-1、MINO、UPN-1、maver1和Z138)治疗72 h后的抗肿瘤作用。CC-292 (10-1000 nM)在一部分细胞系中具有细胞抑制作用，其中REC-1、MINO和UPN-1似乎对CC-292最敏感，而maver1和Z138对CC-292最耐药，其趋势与伊鲁替尼相似(图1A,B)。CC-292在最敏感的细胞系(UPN-1和REC-1)中诱导边缘凋亡(10-15%)(在线补充图S1)。Tyr223 pBTK的鉴定被认为是激酶活性的替代标记物用CC-292预孵育MCL细胞系，igm刺激模拟BCR激活。如图1C所示，CC-292显著降低了MCL细胞系和原代细胞中组成型和igm诱导的BTK Y223残基磷酸化，与它们对抑制剂的敏感性无关。[2] |
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| 体内研究 (In Vivo) |
在胶原诱导的关节炎小鼠模型中，AVL-292（3-30 mg/kg，口服）剂量依赖性地抑制炎症性疾病的临床症状，包括减少关节和爪子肿胀以及受影响爪子的明显发红。[1]
在使用过继转移TCL1小鼠CLL模型的体内研究中，CC-292降低了肿瘤负荷并使肿瘤相关的T细胞和单核细胞扩增正常化，同时不影响T细胞功能。重要的是，CC-292和苯达莫司汀联合使用可在体内损害CLL细胞增殖，增强对CLL进展的控制。我们的研究结果表明，CC-292是一种特异性的BTK抑制剂，与苯达莫司汀联合治疗CLL有很好的效果。需要进一步的临床试验来研究该联合方案的治疗效果。[3] CC-292/苯达莫司汀治疗可有效控制体内CLL的发展。为了评估CC-292的体内活性，并验证其与苯达莫司汀联用的体外结果，我们采用了cl1 AT小鼠CLL模型。将白血病TCL1 AT脾细胞移植到同源免疫活性C57BL/ 6n小鼠体内。14天后，小鼠的平均TL为50%(支持信息图S5a)。然后将他们随机分为四组(支持信息图S5b)，治疗11天(图4a)。治疗期间，每周监测血液中绝对淋巴细胞计数(ALC)。在所有处理条件下，都检测到下降，在联合处理中更为显著(支持信息图S6a)。此外，未经治疗的小鼠表现出较低的红细胞和血小板计数，在CC-292、苯达莫司汀或两者联合治疗后，红细胞和血小板计数得到改善(支持信息图S6b和S6c)。未治疗的小鼠表现出严重的脾和肝肿大(图4b)， CC-292和苯达莫司汀治疗的小鼠的严重程度明显较轻(CC-292组脾脏重量降低2.2倍(p < 0.0001)，苯达莫司汀组降低2.5倍(p < 0.0001)， CC-292组肝脏重量降低1.6倍(p < 0.0001)和苯达莫司汀组(p = 0.0002))。与未治疗的小鼠相比，经联合治疗的小鼠脾脏重量明显降低了5倍(p < 0.0001)，肝脏重量降低了1.7倍(p < 0.0001)。[3] |
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| 酶活实验 |
抑制B细胞受体(BCR)信号的靶向治疗已成为自身免疫性疾病和B细胞恶性肿瘤的有希望的药物。布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase, Btk)通过BCR信号通路在B细胞的发育和激活中起着至关重要的作用，是B细胞活性异常疾病的新靶点。N-(3-(5-氟-2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺)嘧啶-4-苯胺)苯基)丙烯酰胺(CC-292)是一种高选择性共价Btk抑制剂，已经开发出一种灵敏的定量测定CC-292-Btk参与的方法。这种翻译药效学分析伴随着CC-292在药物发现和开发的每一步。这些研究表明CC-292结合Btk的数量与CC-292的体外疗效相关[1]。
ELISA细胞因子定量分析[2] 用1µM CC-292在37ºC下预处理1h，然后用10µg/ml抗igm刺激24h的细胞收集上清，使用ELISA试剂盒对CCL3和CCL4水平进行重复评估。 |
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| 细胞实验 |
细胞增殖与凋亡定量分析[2]
MCL细胞(5x104)经Spebrutinib (CC-292)、来那度胺或NIK抑制剂处理指定时间，并在分光光度测定前加入0.5 mg/mL MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基溴化四唑)试剂2-6小时。每次测量一式三份。数值以未经处理的对照细胞作为参考。用Annexin V-FIT染色MCL细胞，原代细胞用CD19-PE共染色，通过流式细胞术在tunune声学聚焦细胞仪上评估细胞凋亡诱导情况。 流式细胞术[2] 细胞用1µM Spebrutinib (CC-292)在37℃下预处理1h，然后用10µg/ml anti-IgM刺激24h。通过CD69-PC7/CD86-FITC共染色MCL细胞(原代细胞包括CD19-PE和Annexin V-Pacific Blue)来评估细胞活化，然后在tunune细胞仪上进行细胞荧光评估。 迁移试验[2] 采用24孔的趋化室，对SDF-1α/ cxcl12诱导的迁移进行评估，该趋化室含有5µm孔径的插入物，并涂有1µg/ml的VCAM-1。下腔含200ng/ml CXCL12。细胞用1µM Spebrutinib (CC-292)在37ºC下预处理1h，沉积于上室，使其在37ºC下迁移3h，并通过流式细胞术计数。 |
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| 动物实验 |
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| 参考文献 | |||
| 其他信息 |
Spebrutinib has been used in trials studying the treatment of Rheumatoid Arthritis, Lymphoma, Large B-Cell, Diffuse, and Leukemia Lymphocytic Chronic B-Cell.
Spebrutinib is an orally bioavailable, selective inhibitor of Bruton's agammaglobulinemia tyrosine kinase (BTK), with potential antineoplastic activity. Upon administration, spebrutinib targets and covalently binds to BTK, thereby preventing its activity. By irreversibly inhibiting BTK, administration of this agent may lead to an inhibition of B cell receptor (BCR) signaling and may inhibit cell proliferation of B-cell malignancies. BTK, a cytoplasmic tyrosine kinase and member of the Tec family of kinases, plays an important role in B lymphocyte development, activation, signaling, proliferation and survival. |
| 分子式 |
C22H22FN5O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
423.44
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| 精确质量 |
423.17
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| 元素分析 |
C, 62.40; H, 5.24; F, 4.49; N, 16.54; O, 11.34
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| CAS号 |
1202757-89-8
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| 相关CAS号 |
Spebrutinib besylate;1360053-81-1
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| PubChem CID |
59174488
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| 外观&性状 |
White to khaki solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.655
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| LogP |
2.95
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| tPSA |
104.12
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
561
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
KXBDTLQSDKGAEB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H22FN5O3/c1-3-20(29)25-16-5-4-6-17(13-16)26-21-19(23)14-24-22(28-21)27-15-7-9-18(10-8-15)31-12-11-30-2/h3-10,13-14H,1,11-12H2,2H3,(H,25,29)(H2,24,26,27,28)
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| 化学名 |
N-[3-[[5-fluoro-2-[4-(2-methoxyethoxy)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3616 mL | 11.8080 mL | 23.6161 mL | |
| 5 mM | 0.4723 mL | 2.3616 mL | 4.7232 mL | |
| 10 mM | 0.2362 mL | 1.1808 mL | 2.3616 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01975610 | Completed | Drug: CC-292 Drug: CC-292 |
Rheumatoid Arthritis | Celgene | October 2013 | Phase 2 |
| NCT02031419 | Terminated | Drug: CC-122 Drug: CC-223 |
Lymphoma, Large B-Cell, Diffuse |
Celgene | December 18, 2013 | Phase 1 |
Btk occupancy and Btk protein resynthesis can be detected in mice in vivo. Mice were treated orally once with 50 mg/kg CC-292 to inhibit all Btk protein.J Pharmacol Exp Ther.2013 Aug;346(2):219-28. |
CC-292 is efficacious in an established collagen-induced arthritis model.J Pharmacol Exp Ther.2013 Aug;346(2):219-28. |
BTK-IN-40
Btk substrate peptide
WS-11
BTK-IN-38
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