| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Btk (IC50 < 0.5 nM)
Spebrutinib besylate targets Bruton's tyrosine kinase (BTK), a non-receptor tyrosine kinase that plays a critical role in B-cell receptor (BCR) signaling, B-cell development, and survival. It is a covalent/irreversible inhibitor with an IC₅₀ of 0.5 nM and a Kinact/Ki of 7.69×10⁴ M⁻¹s⁻¹. The compound exhibits >1400-fold selectivity over other kinases assayed. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Spebrutinib (CC-292) 是一种共价结合、高选择性、口服有效的 Btk 抑制剂，IC50 值为 0.5 nM。Spebrutinib 对 Yes、c-Src、Brk、Lyn 和 Fyn 的 IC50 值分别为 723 nM、1.729 μM、2.43 μM、4.4 μM 和 7.15 μM，表明其对这些基因的抑制作用较弱。经过深入研究发现，Spebrutinib 对 Btk 激酶的细胞 EC50 值 (EC50=8 nM) 与 Ramos 细胞中 Spebrutinib 剂量反应曲线所测得的 Btk 占有率 EC50 值 (EC50=6 nM) 呈正相关。此外，研究发现，Spebrutinib 达到 90% Btk 占有率所需的浓度为 39 nM，而其在 Ramos 细胞中抑制 90% Btk 活性的浓度为 35 nM[1]。
Spebrutinib (CC-292) 是一种口服 Btk 抑制剂，具有共价结合、高选择性，IC50 为 0.5 nM。此外，Spebrutinib 对 Yes、c-Src、Brk、Lyn 和 Fyn 也表现出轻微的抑制作用，相应的 IC50 分别为 723 nM、1.729 μM、2.43 μM、4.4 μM 和 7.15 μM。进一步研究发现，Spebrutinib抑制Btk激酶的细胞EC50值（EC50=8 nM）与Ramos细胞中Btk受体占有率随药物剂量变化的EC50值（EC50=6 nM）密切相关。此外，35 nM的Spebrutinib浓度可抑制Ramos细胞中90%的Btk活性，而39 nM的浓度则可使Btk受体占有率达到90% [1]。 在本研究中，研究人员首先在72小时的治疗后，研究了CC-292对五种MCL细胞系（REC-1、MINO、UPN-1、MAVER-1和Z138）的抗肿瘤作用。 CC-292 (10–1000 nM) 对部分细胞系具有细胞抑制作用，其中 REC-1、MINO 和 UPN-1 细胞系最为敏感，而 MAVER-1 和 Z138 细胞系对 CC-292 的耐药性最强，其耐药趋势与伊布替尼相似（图 1A、B）。CC-292 在最敏感的细胞系（UPN-1 和 REC-1）中诱导了少量细胞凋亡（10–15%）（在线补充图 S1）。Tyr223 pBTK 的鉴定被认为是激酶活性的替代标志物6。用 CC-292 预孵育的 MCL 细胞系经 IgM 刺激以模拟 BCR 激活。如图 1C 所示，CC-292 显著降低了 MCL 细胞系和原代细胞中 Y223 位点的组成型和 IgM 诱导的 BTK 磷酸化水平，且与这些细胞对抑制剂的敏感性无关。[2] 体外实验表明，Spebrutinib besylate 对 BTK 激酶活性具有强效且选择性的抑制作用，IC₅₀ 为 0.5 nM。BTK 激酶抑制的细胞 EC₅₀ 为 8 nM，Ramos 细胞中 BTK 占有率的 EC₅₀ 为 6 nM。达到 90% BTK 占有率所需的浓度为 39 nM，而抑制 90% BTK 活性所需的浓度为 35 nM。 Spebrutinib 还显示出对 Yes (IC₅₀=723 nM)、c-Src (1.729 µM)、Brk (2.43 µM)、Lyn (4.4 µM) 和 Fyn (7.15 µM) 的抑制活性，表明对这些激酶的抑制作用较弱。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在胶原诱导性关节炎小鼠模型中，AVL-292（3-30 mg/kg，口服）呈剂量依赖性地抑制炎症性疾病的临床症状，包括减轻关节和爪肿胀以及受累爪的可见发红。在采用过继转移TCL1小鼠慢性淋巴细胞白血病（CLL）模型进行的体内研究中，CC-292降低了肿瘤负荷，并使肿瘤相关的T细胞和单核细胞扩增恢复正常，同时不影响T细胞功能。重要的是，CC-292与苯达莫司汀联合用药可抑制体内CLL细胞增殖，并增强对CLL进展的控制。我们的结果表明，CC-292是一种特异性BTK抑制剂，与苯达莫司汀联合用药在CLL治疗中具有良好的疗效。需要进一步的临床试验来研究该联合方案的治疗效果。[3]CC-292/苯达莫司汀治疗可有效控制体内CLL的进展。为了评估 CC-292 的体内活性并验证其与苯达莫司汀联合用药的体外结果，我们使用了 TCL1 AT 慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 小鼠模型。将白血病 TCL1 AT 脾细胞移植到同基因免疫功能正常的 C57BL/6N 小鼠体内。14 天后，小鼠的平均淋巴细胞总数 (TL) 达到 50%（见补充信息图 S5a）。随后，将小鼠随机分为四组（见补充信息图 S5b），并进行为期 11 天的治疗（图 4a）。治疗期间，每周监测血液中的绝对淋巴细胞计数 (ALC)。在所有治疗条件下，ALC 均有所下降，联合治疗组的下降更为显著（见补充信息图 S6a）。此外，未经治疗的小鼠表现出较低的红细胞和血小板计数，而 CC-292、苯达莫司汀或联合治疗后，这些指标均有所改善（见补充信息图 S6b 和 S6c）。未经治疗的小鼠表现出严重的脾肿大和肝肿大（图 4b），而 CC-292 和苯达莫司汀治疗的动物的脾肿大和肝肿大程度明显减轻（CC-292 组的脾脏重量降低了 2.2 倍（p < 0.0001），苯达莫司汀组的脾脏重量降低了 2.5 倍（p < 0.0001），CC-292 组（p < 0.0001）和苯达莫司汀组（p = 0.0002）的肝脏重量均降低了 1.6 倍）。与未治疗组相比，接受联合治疗的小鼠脾脏重量显著降低，最多可降低5倍（p < 0.0001），肝脏重量降低1.7倍（p < 0.0001）。[3]
在体内，Spebrutinib besylate 已在B细胞恶性肿瘤的临床前模型中显示出抗肿瘤活性。作为一种口服生物利用度高的BTK抑制剂，它能抑制B细胞受体信号传导，并减少B细胞淋巴瘤和白血病细胞的增殖。该化合物与BTK的不可逆结合可提供持续的靶点抑制作用。 |
| 酶活实验 |
靶向抑制B细胞受体（BCR）信号传导的疗法已成为自身免疫性疾病和B细胞恶性肿瘤治疗中极具前景的药物。布鲁顿酪氨酸激酶（Btk）通过BCR信号通路在B细胞发育和活化中发挥关键作用，是治疗以B细胞活性异常为特征的疾病的新靶点。N-(3-(5-氟-2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（CC-292）是一种高选择性共价Btk抑制剂，目前已开发出一种灵敏且定量的CC-292-Btk结合检测方法。该转化药效学检测方法已伴随CC-292经历了药物发现和开发的各个阶段。这些研究表明，CC-292 结合的 Btk 量与 CC-292 的体外疗效相关。[1]
ELISA 细胞因子定量 [2] 使用 ELISA 试剂盒对预先用 1µM CC-292 在 37ºC 下处理 1 小时，随后用 10µg/ml 抗 IgM 刺激 24 小时的细胞上清液进行重复测定，检测 CCL3 和 CCL4 水平。 体外 BTK 抑制酶活性测定包括将重组 BTK 激酶与肽底物和 ATP 在不同浓度的 Spebrutinib 苯磺酸盐存在下孵育。使用放射性、荧光或发光测定法测量激酶活性。根据剂量反应曲线计算 IC₅₀ 值和 Kinact/Ki 比值，以确定化合物的效力和共价结合动力学。 |
| 细胞实验 |
在不含血清的RPMI培养基中，细胞培养1至1.5小时。将分离的人B细胞与终浓度为0.001、0.01、0.1和1 μM的spebrutinib共同培养。向Ramos细胞中加入0.1 nM至3 μM的spebrutinib溶液。随后，将细胞与化合物在37°C下孵育1小时。孵育结束后，离心细胞并重悬于100 μL不含血清的RPMI培养基中。接下来，加入5 μg/mL的α-人IgM以刺激BCR。将样本进行离心，然后用PBS洗涤，并在100 μL细胞提取缓冲液中裂解，该缓冲液补充有1:10 (v/v) PhosSTOP磷酸酶抑制剂和1:10 (v/v) Complete蛋白酶抑制剂。免疫印迹分析中使用的抗体包括：Btk、P-Btk、Tubulin、Syk (2712; CST)、P-PLCγ2、PLCγ2 (3871; CST)和Syk (2712; CST)。使用 Li-Cor Odyssey 扫描仪进行红外荧光检测以扫描膜[1]。
细胞增殖测定和凋亡定量[2] 将 MCL 细胞 (5×10⁴) 用 Spebrutinib (CC-292)、来那度胺或 NIK 抑制剂处理指定时间，并在分光光度法测定前加入 0.5 mg/mL MTT (3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四唑溴化物) 试剂，孵育 2-6 小时。每个测定重复三次。以未处理的对照细胞作为参考值。采用流式细胞术，在Attune声聚焦流式细胞仪上评估MCL细胞凋亡的诱导情况。MCL细胞用Annexin V-FIT染色，原代细胞则用CD19-PE进行共染色。 流式细胞术[2] 细胞在37℃下用1µM Spebrutinib (CC-292)预处理1小时，随后用10µg/ml抗IgM刺激24小时。MCL细胞用CD69-PC7/CD86-FITC共染色，原代细胞则用CD19-PE和Annexin V-Pacific Blue染色，随后在Attune流式细胞仪上进行流式细胞术评估，以评估细胞活化情况。 迁移实验[2] 使用含有5 µm孔径插入片的24孔趋化小室评估SDF-1α/CXCL12诱导的细胞迁移，小室表面包被1 µg/ml VCAM-1。下室含有200 ng/ml CXCL12。细胞在37℃下用1 µM Spebrutinib (CC-292)预处理1小时，然后置于上室，在37℃下迁移3小时，最后通过流式细胞术计数。 细胞实验使用B细胞淋巴瘤细胞系，例如Ramos、REC-1、MINO等。细胞用不同浓度的Spebrutinib苯磺酸盐处理1-72小时。使用荧光探针或Western blot检测BTK在Tyr223位点的自磷酸化来测定BTK的占位情况。通过测量下游靶点（如PLCγ2）的磷酸化水平来评估BCR信号抑制情况。细胞增殖和凋亡通过MTT、CellTiter-Glo和Annexin V/PI染色进行评估。 |
| 动物实验 |
3-30 mg/kg；口服
胶原诱导性关节炎 (CIA) 小鼠模型 TCL1 过继转移 (AT) 小鼠模型[3] 本研究使用 C57BL/6 背景的 Eμ-TCL1 (TCL1) 小鼠。在该模型中，VH 启动子-IgH-Eμ 增强子调控下 B 细胞中 TCL1 的过表达驱动 CD5+ B 细胞的克隆扩增，代表一种侵袭性慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 形式。24 治疗研究中，按照先前描述的方法25，将 TCL1 肿瘤过继转移至 C57BL/6 野生型小鼠体内。简而言之，将 106 个来自白血病 TCL1 小鼠的脾细胞（其中 CD19+CD5+ 细胞存活率超过 95%）通过尾静脉注射移植到 3 月龄雌性 C57BL/6N 野生型小鼠体内。小鼠饲养于无特定病原体 (SPF) 条件下，并密切监测疾病症状。所有实验均按照巴塞罗那大学动物实验伦理委员会的指导原则进行。当外周血肿瘤负荷（TL）达到CD19+CD5+细胞（占总CD45+细胞）平均值的50%时，将动物随机分为4组（载体组、CC-292组、苯达莫司汀组和联合治疗组），各组的TL百分比均值和标准差均相等。CC-292以15 mg/kg的剂量每日两次经口灌胃给药，而苯达莫司汀以25 mg/kg的剂量每周一次经静脉注射给药。小鼠在治疗11天后处死，并从骨髓、腹股沟淋巴结和脾脏中获取单细胞悬液。[3] 体内研究在B细胞恶性肿瘤（例如套细胞淋巴瘤）的异种移植小鼠模型中进行。Spebrutinib besylate以不同剂量口服给药。定期测量肿瘤体积，并采集肿瘤进行生物标志物分析，包括通过免疫组织化学评估 BTK 占有率、磷酸化 BTK 和 Ki-67。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
斯普布替尼苯磺酸盐（分子量 581.62，分子式 C₂₈H₂₈FN₅O₆S）是一种小分子化合物。它具有良好的口服生物利用度，并可溶于二甲基亚砜 (DMSO)。该化合物通常储存于 -20°C。其理化性质使其适用于口服给药，并具有良好的类药特性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
临床前毒性研究已在动物模型中评估了贝西酸斯普布替尼。作为一种BTK抑制剂，其毒性特征与B细胞功能抑制和对免疫反应的潜在影响有关。该化合物在临床前研究中显示出良好的安全性。
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| 参考文献 |
[2]. The Bruton tyrosine kinase inhibitor CC-292 shows activity in mantle cell lymphoma and synergizes with lenalidomide and NIK inhibitors depending on nuclear factor-κB mutational status. Haematologica . 2017 Nov;102(11):e447-e451.
[3]. Selective BTK inhibition improves bendamustine therapy response and normalizes immune effector functions in chronic lymphocytic leukemia. Int J Cancer . 2019 Jun 1;144(11):2762-2773. |
| 其他信息 |
斯普布替尼贝西酸盐是斯普布替尼的贝西酸盐形式，斯普布替尼是一种高生物利用度、高选择性的布鲁顿氏无丙种球蛋白血症酪氨酸激酶 (BTK) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，斯普布替尼靶向并共价结合 BTK，从而抑制其活性。通过不可逆地抑制 BTK，该药物的给药可能导致 B 细胞受体 (BCR) 信号传导的抑制，并可能抑制 B 细胞恶性肿瘤的增殖。BTK 是一种胞质酪氨酸激酶，属于 Tec 激酶家族，在 B 淋巴细胞的发育、激活、信号传导、增殖和存活中起着至关重要的作用。斯普布替尼贝西酸盐（AVL-292；CC-292）是一种共价结合、高选择性、口服有效的 BTK 抑制剂，用于治疗 B 细胞恶性肿瘤。其作用机制涉及与BTK发生不可逆共价结合，从而抑制BCR信号传导和B细胞增殖。该化合物已在慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤和其他B细胞恶性肿瘤的临床试验中进行评估。Spebrutinib besylate尚未获得临床应用监管部门的批准。
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| 分子式 |
C28H28FN5O6S
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|---|---|
| 分子量 |
581.615228652954
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| 精确质量 |
581.174
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| 元素分析 |
C, 57.82; H, 4.85; F, 3.27; N, 12.04; O, 16.50; S, 5.51
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| CAS号 |
1360053-81-1
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| 相关CAS号 |
Spebrutinib;1202757-89-8
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| PubChem CID |
74892828
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| 外观&性状 |
Solid
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| LogP |
6.485
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| tPSA |
160.15
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
11
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| 重原子数目 |
41
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| 分子复杂度/Complexity |
745
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
COCCOC1=CC=C(NC2=NC=C(F)C(NC3=CC=CC(NC(C=C)=O)=C3)=N2)C=C1.O=S(C4=CC=CC=C4)(O)=O
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| InChi Key |
ABSXPNGWJFAPRT-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H22FN5O3.C6H6O3S/c1-3-20(29)25-16-5-4-6-17(13-16)26-21-19(23)14-24-22(28-21)27-15-7-9-18(10-8-15)31-12-11-30-2;7-10(8,9)6-4-2-1-3-5-6/h3-10,13-14H,1,11-12H2,2H3,(H,25,29)(H2,24,26,27,28);1-5H,(H,7,8,9)
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| 化学名 |
benzenesulfonic acid;N-[3-[[5-fluoro-2-[4-(2-methoxyethoxy)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]prop-2-enamide
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| 别名 |
AVL292; AVL-292; AVL 292; CC292; AVL-292 benzenesulfonate; Spebrutinib besylate; AVL-292 (benzenesulfonate); AVL 292 benzenesulfonate; AVL-292 BESYLATE; Spebrutinib besilate; Spebrutinib besylate [USAN]; CC-292; CC 292
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥ 45 mg/mL (~106.3 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7193 mL | 8.5967 mL | 17.1934 mL | |
| 5 mM | 0.3439 mL | 1.7193 mL | 3.4387 mL | |
| 10 mM | 0.1719 mL | 0.8597 mL | 1.7193 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01975610 | Completed | Drug: CC-292 Drug: CC-292 |
Rheumatoid Arthritis | Celgene | October 2013 | Phase 2 |
| NCT02031419 | Terminated | Drug: CC-122 Drug: CC-223 |
Lymphoma, Large B-Cell, Diffuse |
Celgene | December 18, 2013 | Phase 1 |
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