| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Retinoic acid receptor-related orphan receptor γ (RORγ) [1, 2].
Ki: 105 nM (for RORγ) [1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
SR2211 处理 EL4 后 IL-17 基因表达降低。同样，SR2211 显着降低了 IL-23 受体 (Il23r) 的表达。当用 SR2211 处理 EL-4 细胞时，与用媒介物处理的细胞相比，IL-17 细胞内染色显着减少 [1]。
在放射性配体结合实验中，SR2211 可以置换与 GST-RORγ-LBD 结合的 [³H]-T0901317，计算得到的 Kᵢ 值为 105 nM [1]。 在基于细胞的 Gal4 共转染实验中，SR2211 抑制 Gal4-RORγ LBD 的转录活性，IC₅₀ 约为 320 nM。在 10 μM 浓度下，对 Gal4-RORα、Gal4-LXRα、Gal4-FXR 或 Gal4-VP16 对照的转录活性无显著影响 [1]。 在使用 5X-RORE 荧光素酶报告基因的全长 RORγ 报告实验中，SR2211 以 RORγ 依赖性方式显著抑制荧光素酶活性 [1]。 在使用 IL-17 荧光素酶报告基因的天然启动子实验中，SR2211 以 RORγ 依赖性方式抑制了由 IL-17 启动子驱动的转录活性，抑制率超过 50% [1]。 在 EL-4 小鼠 T 淋巴细胞中，用 5 μM SR2211 预处理后，再使用 PMA/离子霉素刺激，通过定量实时 PCR 检测发现，内源性 IL-17A 和 IL-23R 的 mRNA 表达显著降低。SR2211 对 IL-17A 基因表达的抑制作用强于地高辛 [1]。 在 EL-4 细胞中，通过流式细胞术进行细胞内细胞因子染色，结果显示，在 PMA/离子霉素刺激后，用 5 μM SR2211 处理可显著抑制 IL-17 蛋白的产生 [1]。 在荧光素酶报告基因实验（使用转染了 RORγ 的 HEK293 细胞）中，SR2211 显示出抑制活性，IC₅₀ 为 0.11 ± 0.03 μM [2]。 在热位移实验中，SR2211 稳定了 RORγ-LBD 蛋白，导致 ΔTm 为 6.50 °C [2]。 在测量 RORγ-LBD 与 SRC1 共激活因子肽相互作用的 AlphaScreen 实验中，SR2211 的 IC₅₀ 为 0.91 ± 0.07 μM [2]。 |
| 酶活实验 |
放射性配体结合实验 (SPA)：该实验以闪烁亲近分析技术形式进行。反应混合物包含 0.25 mg 谷胱甘肽 YSI 微珠、1 μg GST-RORγ-LBD、5 nM [³H]-T0901317 作为放射性配体，以及不同浓度的 SR2211，反应缓冲液为 (50 mM HEPES, pH 7.4, 0.01% 牛血清白蛋白, 150 mM NaCl, 5 mM MgCl₂, 10% 甘油, 1 mM DTT 和蛋白酶抑制剂混合物)。所有成分轻柔混合后孵育 20 小时，然后在 TopCount 仪器上读取信号。通过分析结合数据计算 Kᵢ 值 [1]。
氢/氘交换质谱分析：使用自动化系统进行溶液相酰胺氢/氘交换实验。将 4 μL 10 μM 的 RORγ-LBD 蛋白溶液用含 D₂O 的 HDX 缓冲液稀释，并在 25°C 下孵育不同时间点（10秒、30秒、60秒、900秒、3600秒）。氘交换后，用 0.1% TFA（含 3 M 尿素，1°C）稀释使蛋白变性。样品流经固定的胃蛋白酶柱，产生的肽段被 C8 捕集柱捕获。肽段随后通过 C18 HPLC 柱梯度洗脱，并直接电喷雾进入 Orbitrap 质谱仪。使用内部软件处理数据，计算未结合和结合（SR2211）的 RORγ-LBD 之间氘摄取量的差异 [1]。 热位移实验：热位移实验用于检测配体结合。所有反应在含有 10 mM HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl 和 5% (v/v) 甘油的缓冲液中进行，最终蛋白浓度为 10 μM RORγ-LBD，化合物浓度为 200 μM。将 10 μL 反应混合物加入 96 孔 PCR 板中。加入荧光探针（稀释度为 1:1000），混合物在冰上与化合物孵育 30 分钟。使用实时 PCR 系统将温度以每分钟 0.5°C 的速率从 30°C 升至 80°C，并以 0.5°C 的间隔记录荧光读数 [2]。 AlphaScreen 实验：该实验用于评估化合物破坏 RORγ-LBD 与 SRC1 共激活因子肽之间相互作用的能力。所有反应在存在不同浓度待测化合物的情况下，包含结合在镍受体微珠上的 200 nM RORγ-LBD (5 μg/mL) 和结合在链霉亲和素供体微珠上的 50 nM 生物素化 SRC1-4 肽 (5 μg/mL)。化合物浓度范围从 150 nM 到 200 μM。AlphaScreen 实验缓冲液含有 50 mM MOPS、50 mM NaF、0.05 mM CHAPS 和 0.1 mg/mL 牛血清白蛋白，pH 7.4。N 端生物素化的 SRC1-4 肽序列为 QKPTSPGQTPQAQQKSLIQQLLTE [2]。 |
| 细胞实验 |
Gal4 共转染实验：HEK293 细胞在含有 10% 胎牛血清的 DMEM 中培养。使用 1 × 10⁶ 个细胞在 6 厘米培养皿中进行批量反向转染，总 DNA 量为 3 μg（受体与报告基因比例为 1:1），转染试剂与 DNA 的比例为 3:1。次日，将细胞以 10,000 个/孔的密度重新铺板于 384 孔板中。4 小时后，用 SR2211 或 DMSO 处理细胞。孵育 20 小时后，通过一步加入检测试剂测定荧光素酶水平，并使用读板仪读取。数据以相对于 DMSO 处理细胞的倍数变化进行标准化 [1]。
全长 RORγ 报告基因实验 (5X-RORE)：使用由五个 ROR 响应元件重复序列驱动的荧光素酶报告基因，以及空载体或全长 RORγ 进行类似的共转染实验 [1]。 天然启动子实验 (IL-17-Luc)：使用 IL-17 荧光素酶报告基因以及全长 RORα 或 RORγ 进行共转染实验，以评估 SR2211 对天然 ROR 靶标启动子的影响 [1]。 EL-4 细胞中的实时 PCR 分析：将一百万 EL-4 细胞接种于 6 孔板中，与 5 μM SR2211、地高辛或 DMSO 孵育 20 小时。然后用 PMA (50 ng/mL) 和离子霉素 (1 μg/mL) 刺激细胞 5 小时。提取 RNA 并合成 cDNA。通过实时 PCR 定量 IL-17A 和 IL-23R 的基因表达，并以 GAPDH 的表达进行标准化 [1]。 流式细胞术细胞内细胞因子染色：用 PMA (50 ng/mL) 和离子霉素 (1 μg/mL) 刺激 EL-4 细胞 5 小时。刺激 3 小时后，加入蛋白转运抑制剂再孵育 2 小时。随后固定、透化细胞，并用 IL-17A 抗体进行染色。使用流式细胞仪进行细胞分选和分析 [1]。 荧光素酶报告基因实验（用于 RORγ 抑制）：该实验用于测试化合物对 RORγ 转录活性的影响。HEK293T 细胞与 RORγ 和荧光素酶报告基因共转染。然后用待测化合物处理细胞 20 小时，并测定荧光素酶活性。据报道，SR2211 的 IC₅₀ 为 0.11 ± 0.03 μM [2]。 |
| 参考文献 |
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| 分子式 |
C26H24F7N3O
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|---|---|
| 分子量 |
527.49
|
| 精确质量 |
527.18
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| 元素分析 |
C, 59.20; H, 4.59; F, 25.21; N, 7.97; O, 3.03
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| CAS号 |
1359164-11-6
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| PubChem CID |
51035449
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| 外观&性状 |
Off-white to light brown solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
552.4±50.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
287.9±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.545
|
| LogP |
4.79
|
| tPSA |
39.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
698
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC1=C(C2=CC=C(CN3CCN(CC4=CC=NC=C4)CC3)C=C2)C=CC(C(C(F)(F)F)(O)C(F)(F)F)=C1
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| InChi Key |
KVHKWAZUPPBMLL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H24F7N3O/c27-23-15-21(24(37,25(28,29)30)26(31,32)33)5-6-22(23)20-3-1-18(2-4-20)16-35-11-13-36(14-12-35)17-19-7-9-34-10-8-19/h1-10,15,37H,11-14,16-17H2
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| 化学名 |
1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-[3-fluoro-4-[4-[[4-(pyridin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl]methyl]phenyl]phenyl]propan-2-ol
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| 别名 |
SR2211; SR 2211; SR2211; 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-[3-fluoro-4-[4-[[4-(pyridin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl]methyl]phenyl]phenyl]propan-2-ol; 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-(3-fluoro-4-(4-((4-(pyridin-4-ylmethyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)phenyl)propan-2-ol; RefChem:185198; 1359164-11-6; SR-2211
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~189.58 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8958 mL | 9.4789 mL | 18.9577 mL | |
| 5 mM | 0.3792 mL | 1.8958 mL | 3.7915 mL | |
| 10 mM | 0.1896 mL | 0.9479 mL | 1.8958 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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