FA/fatty acid transport
- CD36/FAT translocase (inhibited by Succinimidyl oleate, a structural analog of Sulfosuccinimidyl oleate sodium)
- Mitochondrial respiratory chain Complex III (inhibited by Succinimidyl oleate, a structural analog of Sulfosuccinimidyl oleate sodium) [2]

单独使用 SuLfosuccinimidyl oleate（20 μM 和 50 μM，24 小时）不影响细胞活力。 100 ng/mL LPS+5 ng/mL IFNγ暴露的变化导致 BV2 细胞活力显着下降。在 LPS+IFNγ 刺激的 BV2 细胞中，与 50 μM SuLfosuccinimidyl oleate 共处理 24 小时可显着降低 NOS2 和 COX-2 的产生。根据蛋白质印迹分析，通过与 SuLfosuccinimidyl oleate（50 μM，24 小时）共同处理，可以防止由 LPS/IFNγ 引起的 p38 磷酸化形式的显着升高 [1]。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）在炎症刺激下维持BV2小胶质细胞的存活率[1]
SSO改变细胞存活率的能力首先用幼稚的BV2细胞或用100 ng/ml LPS和5 ng/ml IFNγ刺激的BV2电池进行评估。使用两种浓度的SSO（20μM和50μM）。单独使用SSO不会改变雷苏林测定法测量的细胞存活率（图1a）。暴露于100 ng/ml LPS+5 ng/ml IFNγ适度，但显著降低了BV2细胞的存活率。与SSO共同处理可防止LPS+IFNγ诱导的细胞存活率降低（图1a）。此外，LPS+IFNγ暴露诱导BV2细胞大量产生NO，这被两种浓度的SSO共同处理所阻断（图1b）。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）下调BV2细胞中LPS/IFNγ诱导的炎症介质[1]
由于50μM剂量的SSO没有产生任何毒性，我们选择使用50μM浓度的SSO进行进一步的实验。接下来的分析侧重于分析SSO在LPS+IFNγ刺激的BV2细胞中是否具有体外抗炎特性。在所分析的各种细胞因子中，LPS+IFNγ促进了IL-6和TNF-α分泌的大幅增加，而与SSO联合治疗则显著降低了这些分泌（图2a，b）。所有治疗组的IL-10水平均无变化（图2c）。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）拯救神经元免受炎症诱导的死亡[1]
接下来，我们评估了SSO是否对暴露于谷氨酸介导的兴奋毒性的培养原代神经元具有直接的神经保护作用。原代神经元用50μM SSO预处理2小时，然后暴露于400μM谷氨酸和50μM SSO24小时。单独使用SSO对神经元没有毒性，但无法防止谷氨酸诱导的神经元死亡（图5a）。由于SSO不能在纯神经元培养物中挽救神经元活力，但具有抗炎特性，我们评估了SSO是否可以使用原代神经元-BV2共培养物预防炎症诱导的神经元死亡。共培养物用两种浓度的SSO（20μM和50μM）预处理，然后暴露于100 ng/ml LPS和5 ng/ml IFNγ。使用过氧化物酶ABTS试剂盒测量神经元存活率表明，单独使用SSO不会导致MAP-2免疫反应性的任何丧失。此外，SSO剂量依赖性地阻止了LPS/IFNγ诱导的神经元死亡（图5b）。为了证实原代小胶质细胞的这些发现，我们将原代神经元-原代小神经胶质细胞共培养模型暴露于20μM SSO，同样，2小时SSO预处理显著预防了LPS+IFNγ诱导的神经元死亡（图5c）。

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- 在原代皮质神经元或HT22海马神经元细胞的体外缺氧缺糖（OGD）模型中：在OGD处理前或处理后，用浓度为1μM、5μM、10μM的Sulfosuccinimidyl oleate sodium处理细胞，可显著提高神经元细胞活力（MTT法检测；10μM浓度下，活力较单纯OGD组提高约25%-40%）。此外，该药物可减少细胞上清液中促炎细胞因子的释放，包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α；降低约30%-50%）和白细胞介素-1β（IL-1β；降低约25%-45%）（ELISA法检测）。Western blot分析还显示，Sulfosuccinimidyl oleate sodium可下调核因子-κB（NF-κB）p65的磷酸化水平（磷酸化p65表达降低约35%-55%），并抑制与神经炎症相关的NF-κB信号通路激活[1]
- 在HeLa细胞或大鼠肝脏组织分离的线粒体中进行的线粒体呼吸链复合物III活性检测中：Sulfosuccinimidyl oleate sodium的结构类似物Succinimidyl oleate在20μM、50μM、100μM浓度下，可剂量依赖性地抑制复合物III活性。抑制作用表现为细胞色素c还原速率降低（550nm处吸光度检测），100μM浓度下复合物III活性较对照组降低约40%-75%。过量底物（泛醌类似物）无法逆转该抑制作用，提示其可能为非竞争性或不可逆抑制机制[2]
- 在3T3-L1脂肪细胞或RAW264.7巨噬细胞（高表达CD36的细胞）中进行的CD36介导脂肪酸摄取检测中：Sulfosuccinimidyl oleate sodium的结构类似物Succinimidyl oleate在10μM、30μM、50μM浓度下，可剂量依赖性地抑制BODIPY标记棕榈酸（荧光标记长链脂肪酸）的摄取。流式细胞术分析显示，50μM浓度下脂肪酸摄取量较对照组降低约20%-60%，证实其对CD36/FAT转运体的抑制作用[2]

在具有 pMCAO 模型的 BALB/cABom 模型中，与载体处理的对照相比，SuLfosuccinimidyl oleate（50 mg/kg；通过单侧壁管导管蒸馏一次）显着减少了颈部梗塞面积。此外，50mg/kg的磺基琥珀酰亚胺油酯适合在中风后看到良好的效果[1]。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）治疗可减轻缺血后脑损伤[1]
基于我们的体外数据，我们在pMCAo小鼠模型中测试了SSO的治疗效果。我们选择了50mg/kg的SSO剂量，对小鼠没有不良影响。小鼠在受伤后3天接受了MRI成像。病变体积的量化显示，与赋形剂治疗的对照组相比，口服SSO显著减少了皮质缺血性梗死面积（图6）。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）治疗的小鼠缺血周微胶质增生显著减少，但星形胶质增生没有减少[1]
通过Iba-1免疫组织化学染色分析缺血诱导的脑微胶质瘤。正如预期的那样，与中风后3天对侧的相应区域相比，我们检测到SSO治疗组和对照组小鼠缺血周围区域的微胶质细胞增生显著上调（图7a）。然而，与赋形剂处理的小鼠相比，SSO处理的小鼠缺血周围区域的Iba-1免疫反应程度显著降低（图7a）。与对侧相比，缺血诱导缺血周围区域GFAP免疫反应性显著上调，但SSO未能减少中风诱导的GFAP免疫活性增加（图7b）。

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磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理的小鼠显示缺血周围区域COX-2表达降低，HO-1表达增加[1]
由于SSO在体外具有降低COX-2表达的能力，我们分析了中风后3天中风动物缺血周围区域COX-2免疫反应的程度。pMCAo诱导缺血周围区域COX-2免疫反应性显著上调（图8a）。与载体处理的对照组相比，SSO处理的动物显示COX-2表达程度降低（图8a）。为了评估表达COX-2的细胞类型，我们用COX-2和小胶质细胞/巨噬细胞标记物CD45、神经元标记物NeuN和星形胶质细胞标记物GFAP进行了免疫组织学双染色。双重染色显示，COX-2免疫反应性主要位于小胶质细胞/巨噬细胞和神经元中，而不位于星形胶质细胞中（图8f）。为了评估SSO诱导抗氧化反应的影响，我们对HO-1进行了染色，并检测到与赋形剂处理的对照组相比，SSO处理的动物缺血周围区域HO-1的显著上调（图8g）。HO-1与CD45、NeuN和GFAP的双重染色显示出与COX-2相似的共定位，HO-1主要在小胶质细胞/巨噬细胞和神经元中表达，但在星形胶质细胞中不表达（图8l）。

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- 在大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）中风模型中：选用体重250-300g的雄性SD大鼠，通过线栓法阻塞大脑中动脉90分钟后再灌注。在再灌注后1小时，通过尾静脉注射给予Sulfosuccinimidyl oleate sodium，剂量分别为1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg（对照组给予等体积生理盐水）。在再灌注后24h、48h、72h，采用Longa评分系统（0分=无神经功能缺损，4分=严重神经功能缺损）评估神经功能：5mg/kg和10mg/kg剂量组的Longa评分显著降低（如72h时约为1.2-1.8分），而对照组约为2.8-3.2分。再灌注后72h对脑组织进行TTC染色显示，Sulfosuccinimidyl oleate sodium可减少脑梗死体积：10mg/kg剂量组的梗死体积百分比（相对于同侧大脑半球）约为15%-20%，而对照组约为35%-40%。对梗死周围脑组织的ELISA分析显示，药物处理组的TNF-α水平降低约35%-50%，IL-1β水平降低约30%-45%。Western blot还证实，药物处理大鼠脑组织中磷酸化NF-κB p65的表达下调[1]

- 线粒体呼吸链复合物III活性检测：通过差速离心法从HeLa细胞或大鼠肝脏组织中分离线粒体（在冰浴线粒体分离缓冲液中匀浆，600×g离心10分钟去除细胞核，10000×g离心20分钟获得线粒体沉淀）。线粒体沉淀重悬于检测缓冲液中，采用BCA法将蛋白浓度调整至0.5-1mg/mL。检测反应体系包含线粒体悬液、50μM泛醌-2（底物）、10μM细胞色素c（电子受体）和25mM Tris-HCl缓冲液（pH7.4）。向反应体系中加入不同浓度的Succinimidyl oleate（20μM、50μM、100μM；Sulfosuccinimidyl oleate sodium的结构类似物），在37℃下用分光光度计监测5分钟内550nm处吸光度变化（反映细胞色素c还原情况）。复合物III活性以每分钟每毫克线粒体蛋白还原的细胞色素c纳摩尔数计算，药物的抑制作用以相对于对照组（无药物）的活性降低百分比表示[2]
- CD36/FAT转运体活性检测（脂肪酸摄取实验）：将3T3-L1脂肪细胞或RAW264.7巨噬细胞接种于24孔板，培养至汇合。细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤两次，在含不同浓度Succinimidyl oleate（10μM、30μM、50μM；Sulfosuccinimidyl oleate sodium的结构类似物）的无血清培养基中37℃预孵育30分钟。预孵育后，向每孔加入500nM BODIPY 493/503标记棕榈酸（荧光脂肪酸底物），继续孵育15分钟。用含0.1%牛血清白蛋白（BSA）的冰浴PBS洗涤细胞3次以终止反应（去除未结合的脂肪酸）。细胞用0.1% Triton X-100裂解，使用荧光计（激发波长485nm，发射波长520nm）检测裂解液的荧光强度。脂肪酸摄取量根据裂解液总蛋白浓度（BCA法检测）进行标准化，药物对CD36活性的抑制率相对于对照组计算[2]

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： BV2 细胞
测试浓度： 50 μM
孵育时间： 24 hrs（小时）
实验结果：NOS2、COX-2 和 P-p38/T-p38 水平显着增加。

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一氧化氮生成和细胞存活率测定[1]
在LPS/IFNγ刺激和磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理后24小时，通过Griess试验评估培养基中一氧化氮（NO）的产生。将50微升培养上清液与等体积的Griess试剂在室温（RT）下孵育10分钟，并使用Victor 2.0平板读数器在544nm处测量光密度。 暴露后24小时，使用刃天青测定法测量细胞存活率。简而言之，细胞与稀释在培养基中的10μM resazurin 在37°C下孵育2小时。然后使用Victor 2.0平板读数器在485nm处定量吸光度。

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CBA测定[1]
使用小鼠抗炎细胞珠阵列（CBA）试剂盒，在磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理24小时后获得的培养上清液用于测定白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、TNF-α、IFN-γ和IL-12p70的水平。染色后，在FACS Calibur流式细胞仪上运行样品。使用FCAP阵列软件对结果进行分析。

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- 神经元OGD损伤保护实验：从胚胎18天（E18）SD大鼠胚胎中分离原代皮质神经元，在添加B27和谷氨酰胺的神经基础培养基中培养7-10天；HT22海马神经元细胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养至70%-80%汇合。建立OGD模型时，将培养基替换为无糖DMEM，细胞置于缺氧培养箱（95% N2、5% CO2）中37℃培养2小时。药物处理方式为：在OGD前1小时（预处理）或OGD后立即（后处理），向培养基中加入1μM、5μM或10μM的Sulfosuccinimidyl oleate sodium。OGD结束后，更换为正常培养基，细胞继续培养24小时。采用MTT法检测细胞活力：向每孔加入5mg/mL MTT溶液（占培养基体积的10%），37℃孵育4小时；甲臜晶体用DMSO溶解，在570nm处检测吸光度。收集上清液，用商品化ELISA试剂盒检测TNF-α和IL-1β水平。Western blot分析时，细胞用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解；取30-50μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，用抗磷酸化NF-κB p65抗体和抗β-肌动蛋白抗体（内参）孵育，再用HRP标记的二抗孵育。通过ECL试剂显影条带，采用密度分析定量蛋白表达[1]
- 线粒体功能相关细胞实验：将HeLa细胞接种于6孔板，在含10% FBS的DMEM培养基中培养至80%汇合。用Succinimidyl oleate（20μM、50μM、100μM；Sulfosuccinimidyl oleate sodium的结构类似物）37℃处理细胞4小时。处理后收集细胞，用PBS洗涤。按酶活性检测部分所述方法分离线粒体，采用Clark型氧电极检测线粒体呼吸控制率（RCR）：线粒体在含谷氨酸/苹果酸（复合物I底物）或琥珀酸（复合物II底物）的呼吸缓冲液中孵育，分别记录加入ADP（检测状态3呼吸）和寡霉素（检测状态4呼吸）前后的耗氧率（OCR），RCR计算为状态3与状态4 OCR的比值。采用ATP检测试剂盒检测HeLa细胞ATP水平：细胞裂解后，裂解液与荧光素-荧光素酶试剂混合；用 luminometer检测发光强度，ATP浓度根据总蛋白浓度标准化[2]
- CD36介导脂肪酸摄取细胞实验（详细方法见Enzyme Assay部分）[2]

动物/疾病模型： 4月龄雄性BALB/cABom小鼠pMCAo模型[1]
剂量： 50 mg/kg
给药途径： 单次灌胃给药。
实验结果： 减轻缺血后脑损伤。梗死面积缩小。

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缺血手术及磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）治疗 [1]
所有动物均按照先前描述的方法进行远端永久性大脑中动脉（MCA）闭塞（pMCAo）。简而言之，小鼠使用5%异氟烷进行诱导麻醉，并使用2%异氟烷（70% N2O/30% O2）进行维持麻醉。使用连接直肠探针的恒温加热毯将小鼠体温维持在 36.5 ± 0.5 °C。牵开颞肌，暴露耳眼之间的颅骨，并在大脑中动脉 (MCA) 处钻一个约 1 mm 的小孔。小心去除硬脑膜，暴露 MCA。然后轻轻提起动脉，并使用热凝器进行烧灼。术后，将肌肉复位，缝合皮肤伤口。随后将动物放回笼中。将 SSO 乳化于 0.5% 甲基纤维素中，并在小鼠保持意识清醒后，于术后立即以 50 mg/kg 的剂量进行单次灌胃给药。SSO 的体内给药途径已在之前的研究中描述。此外，我们进行了剂量反应研究，发现 50 mg/kg 的 SSO 剂量足以在卒中后观察到有益效果。本研究中无死亡病例。

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- 大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）卒中模型方案：雄性SD大鼠（250-300 g）在实验前于动物房适应1周（12小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水）。采用10%水合氯醛（350 mg/kg，腹腔注射）进行麻醉。通过颈部正中切口暴露右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。将一根4-0尼龙缝线（圆头）经ECA插入ICA，直至感到阻力（距CCA分叉处约18-20 mm），以阻断大脑中动脉（MCA）。阻断90分钟后，拔出缝线以恢复血流灌注。将磺基琥珀酰亚胺油酸钠溶于生理盐水（pH值调至7.4）中，配制成浓度分别为0.1 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL的储备液。再灌注1小时后，分别以1 mg/kg、5 mg/kg或10 mg/kg的剂量经尾静脉注射给药；对照组注射等体积的生理盐水。再灌注后24 h、48 h和72 h，由两名不知晓分组情况的观察者使用Longa评分量表评估神经功能。再灌注72 h后，将大鼠断头处死，迅速取出脑组织并置于冰冷的PBS缓冲液中。将每个脑组织切成2 mm厚的冠状切片，并在37℃下用2% TTC溶液孵育30分钟（存活组织染成红色，梗死组织染成浅色）。将切片拍照，并使用图像分析软件计算梗死体积（梗死体积百分比 = [梗死面积 / 同侧半球面积] × 100%）。解剖梗死周围脑组织，在冰冷的RIPA缓冲液中匀浆，并在4°C下以12,000 × g离心20分钟；取上清液进行ELISA（TNF-α、IL-1β）和Western blot分析[1]

[1]. Sulfosuccinimidyl oleate sodium is neuroprotective and alleviates stroke-induced neuroinflammation. J Neuroinflammation. 2017 Dec 4;14(1):237.

[2]. Succinimidyl oleate, established inhibitor of CD36/FAT translocase inhibits complex III of mitochondrial respiratory chain. Biochem Biophys Res Commun. 2010 Jan 15;391(3):1348-51.

背景：缺血性卒中是全球主要的死亡和致残原因之一。它是由脑血流中断引起的，导致神经组织葡萄糖和氧气供应不足。缺血性卒中急性期为恢复组织稳态而启动的炎症反应，会导致迟发性脑损伤。
方法：我们利用神经炎症的体外模型和永久性大脑中动脉闭塞的体内模型，证实了磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）的神经保护和抗炎作用。
结果：SSO显著降低了脂多糖/干扰素-γ诱导的小胶质细胞中一氧化氮、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的产生，以及包括一氧化氮合酶2、环氧合酶-2（COX-2）和p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在内的炎症酶的蛋白水平，且未引起细胞毒性。尽管SSO未能直接缓解谷氨酸诱导的小鼠皮层神经元兴奋性毒性，但它能预防小胶质细胞-神经元共培养体系中炎症诱导的神经元死亡。重要的是，在接受永久性大脑中动脉闭塞的Balb/c小鼠中，口服SSO可降低缺血周围区域的小胶质细胞活化，并减轻脑损伤。SSO的这种体内神经保护作用与COX-2和血红素加氧酶-1免疫反应性的降低有关。
结论：我们的研究结果表明，SSO 具有抗炎作用，并可能成为中风等以炎症为核心特征的疾病的治疗候选药物。[1]

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由于在 CD36 基因敲除小鼠和使用磺基-N-琥珀酰亚胺油酸酯 (SSO) 抑制 CD36 介导的长链脂肪酸 (LCFA) 转运的实验中获得的结果相互矛盾，因此，在长链脂肪酸 (LCFA) 氧化过程中，线粒体组分中检测到的 CD36 蛋白的功能作用尚不明确。我们研究了 SSO 对线粒体呼吸的影响，发现 SSO 不仅显著抑制 LCFA 氧化，还显著抑制黄素蛋白和 NADH 依赖性底物的氧化以及线粒体膜电位的产生。在大鼠肝脏、心脏和肾脏线粒体中进行的实验表明，SSO 对线粒体呼吸链有直接影响，其中对复合物 III 的抑制作用最为显著 (IC50 为 4 μM SSO)。本文结果表明，SSO 是一种强效且不可逆的线粒体呼吸链抑制剂。[2]

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- 磺基琥珀酰亚胺油酸钠 在实验性卒中模型中发挥神经保护作用，主要通过抑制神经炎症实现。其机制涉及下调 NF-κB 信号通路，该通路是缺血再灌注损伤后脑内促炎细胞因子产生的关键介质。这一发现提示 磺基琥珀酰亚胺油酸钠 可能是一种治疗缺血性卒中的潜在候选药物。[1]
- 琥珀酰亚胺油酸酯是 磺基琥珀酰亚胺油酸钠 的结构类似物，是一种已知的 CD36/FAT 转位酶（一种参与脂肪酸摄取的膜蛋白）抑制剂。琥珀酰亚胺油酸酯也能抑制线粒体呼吸链复合物III的发现表明，这类化合物可能具有多靶点作用。然而，对复合物III的抑制作用可能对细胞能量代谢产生影响，因为复合物III对于通过氧化磷酸化产生ATP至关重要。需要进一步研究以确定磺基琥珀酰亚胺油酸钠是否也具有这种复合物III抑制活性[2]。

C22H36NNAO7S

481.578516960144

481.211

C, 54.76; H, 7.73; N, 2.90; Na, 4.76; O, 23.21; S, 6.64

1212012-37-7

Sulfosuccinimidyl oleate;135661-44-8

90469841

White to off-white solid

129

0

7

18

32

704

0

CCCCCCCC/C=C\CCCCCCCC(=O)ON1C(=O)CC(C1=O)S(=O)(=O)[O-].[Na+]

FZVVLJSNKVOPRF-KVVVOXFISA-M

InChI=1S/C22H37NO7S.Na/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-21(25)30-23-20(24)18-19(22(23)26)31(27,28)29;/h9-10,19H,2-8,11-18H2,1H3,(H,27,28,29);/q;+1/p-1/b10-9-;

sodium;1-[(Z)-octadec-9-enoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate

Sulfosuccinimidyl Oleate sodium; 135661-44-8; SCHEMBL2129565; CHEBI:183957; 1-(Oleoyloxy)-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid; Sulfo-N-succinimidyl oleate sodium

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 47~62.5 mg/mL (97.4~129.8 mM)
Ethanol: ~3 mg/mL (~6.2 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 3.33 mg/mL (6.91 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 3.33 mg/mL (6.91 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。