FA/fatty acid transport

单独使用 SuLfosuccinimidyl oleate（20 μM 和 50 μM，24 小时）不影响细胞活力。 100 ng/mL LPS+5 ng/mL IFNγ暴露的变化导致 BV2 细胞活力显着下降。在 LPS+IFNγ 刺激的 BV2 细胞中，与 50 μM SuLfosuccinimidyl oleate 共处理 24 小时可显着降低 NOS2 和 COX-2 的产生。根据蛋白质印迹分析，通过与 SuLfosuccinimidyl oleate（50 μM，24 小时）共同处理，可以防止由 LPS/IFNγ 引起的 p38 磷酸化形式的显着升高 [1]。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）在炎症刺激下维持BV2小胶质细胞的存活率[1]
SSO改变细胞存活率的能力首先用幼稚的BV2细胞或用100 ng/ml LPS和5 ng/ml IFNγ刺激的BV2电池进行评估。使用两种浓度的SSO（20μM和50μM）。单独使用SSO不会改变雷苏林测定法测量的细胞存活率（图1a）。暴露于100 ng/ml LPS+5 ng/ml IFNγ适度，但显著降低了BV2细胞的存活率。与SSO共同处理可防止LPS+IFNγ诱导的细胞存活率降低（图1a）。此外，LPS+IFNγ暴露诱导BV2细胞大量产生NO，这被两种浓度的SSO共同处理所阻断（图1b）。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）下调BV2细胞中LPS/IFNγ诱导的炎症介质[1]
由于50μM剂量的SSO没有产生任何毒性，我们选择使用50μM浓度的SSO进行进一步的实验。接下来的分析侧重于分析SSO在LPS+IFNγ刺激的BV2细胞中是否具有体外抗炎特性。在所分析的各种细胞因子中，LPS+IFNγ促进了IL-6和TNF-α分泌的大幅增加，而与SSO联合治疗则显著降低了这些分泌（图2a，b）。所有治疗组的IL-10水平均无变化（图2c）。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）拯救神经元免受炎症诱导的死亡[1]
接下来，我们评估了SSO是否对暴露于谷氨酸介导的兴奋毒性的培养原代神经元具有直接的神经保护作用。原代神经元用50μM SSO预处理2小时，然后暴露于400μM谷氨酸和50μM SSO24小时。单独使用SSO对神经元没有毒性，但无法防止谷氨酸诱导的神经元死亡（图5a）。由于SSO不能在纯神经元培养物中挽救神经元活力，但具有抗炎特性，我们评估了SSO是否可以使用原代神经元-BV2共培养物预防炎症诱导的神经元死亡。共培养物用两种浓度的SSO（20μM和50μM）预处理，然后暴露于100 ng/ml LPS和5 ng/ml IFNγ。使用过氧化物酶ABTS试剂盒测量神经元存活率表明，单独使用SSO不会导致MAP-2免疫反应性的任何丧失。此外，SSO剂量依赖性地阻止了LPS/IFNγ诱导的神经元死亡（图5b）。为了证实原代小胶质细胞的这些发现，我们将原代神经元-原代小神经胶质细胞共培养模型暴露于20μM SSO，同样，2小时SSO预处理显著预防了LPS+IFNγ诱导的神经元死亡（图5c）。

在具有 pMCAO 模型的 BALB/cABom 模型中，与载体处理的对照相比，SuLfosuccinimidyl oleate（50 mg/kg；通过单侧壁管导管蒸馏一次）显着减少了颈部梗塞面积。此外，50mg/kg的磺基琥珀酰亚胺油酯适合在中风后看到良好的效果[1]。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）治疗可减轻缺血后脑损伤[1]
基于我们的体外数据，我们在pMCAo小鼠模型中测试了SSO的治疗效果。我们选择了50mg/kg的SSO剂量，对小鼠没有不良影响。小鼠在受伤后3天接受了MRI成像。病变体积的量化显示，与赋形剂治疗的对照组相比，口服SSO显著减少了皮质缺血性梗死面积（图6）。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）治疗的小鼠缺血周微胶质增生显著减少，但星形胶质增生没有减少[1]
通过Iba-1免疫组织化学染色分析缺血诱导的脑微胶质瘤。正如预期的那样，与中风后3天对侧的相应区域相比，我们检测到SSO治疗组和对照组小鼠缺血周围区域的微胶质细胞增生显著上调（图7a）。然而，与赋形剂处理的小鼠相比，SSO处理的小鼠缺血周围区域的Iba-1免疫反应程度显著降低（图7a）。与对侧相比，缺血诱导缺血周围区域GFAP免疫反应性显著上调，但SSO未能减少中风诱导的GFAP免疫活性增加（图7b）。

---

磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理的小鼠显示缺血周围区域COX-2表达降低，HO-1表达增加[1]
由于SSO在体外具有降低COX-2表达的能力，我们分析了中风后3天中风动物缺血周围区域COX-2免疫反应的程度。pMCAo诱导缺血周围区域COX-2免疫反应性显著上调（图8a）。与载体处理的对照组相比，SSO处理的动物显示COX-2表达程度降低（图8a）。为了评估表达COX-2的细胞类型，我们用COX-2和小胶质细胞/巨噬细胞标记物CD45、神经元标记物NeuN和星形胶质细胞标记物GFAP进行了免疫组织学双染色。双重染色显示，COX-2免疫反应性主要位于小胶质细胞/巨噬细胞和神经元中，而不位于星形胶质细胞中（图8f）。为了评估SSO诱导抗氧化反应的影响，我们对HO-1进行了染色，并检测到与赋形剂处理的对照组相比，SSO处理的动物缺血周围区域HO-1的显著上调（图8g）。HO-1与CD45、NeuN和GFAP的双重染色显示出与COX-2相似的共定位，HO-1主要在小胶质细胞/巨噬细胞和神经元中表达，但在星形胶质细胞中不表达（图8l）。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： BV2 细胞
测试浓度： 50 μM
孵育时间： 24 hrs（小时）
实验结果：NOS2、COX-2 和 P-p38/T-p38 水平显着增加。

---

一氧化氮生成和细胞存活率测定[1]
在LPS/IFNγ刺激和磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理后24小时，通过Griess试验评估培养基中一氧化氮（NO）的产生。将50微升培养上清液与等体积的Griess试剂在室温（RT）下孵育10分钟，并使用Victor 2.0平板读数器在544nm处测量光密度。 暴露后24小时，使用刃天青测定法测量细胞存活率。简而言之，细胞与稀释在培养基中的10μM resazurin 在37°C下孵育2小时。然后使用Victor 2.0平板读数器在485nm处定量吸光度。

---

CBA测定[1]
使用小鼠抗炎细胞珠阵列（CBA）试剂盒，在磺基琥珀酰亚胺油酸钠（SSO）处理24小时后获得的培养上清液用于测定白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、TNF-α、IFN-γ和IL-12p70的水平。染色后，在FACS Calibur流式细胞仪上运行样品。使用FCAP阵列软件对结果进行分析。

Animal/Disease Models: 4-month-old male BALB/cABom mouse pMCAo model [1]
Doses: 50 mg/kg
Route of Administration: Administration once via single po (oral gavage).
Experimental Results: Reduce post-ischemic brain damage. The infarct area is diminished.

---

Ischemia surgery and treatment with sulfosuccinimidyl oleate sodium (SSO) [1]
All animals underwent distal permanent occlusion of the middle cerebral artery (MCA) (pMCAo) as described previously. Briefly, mice were anesthetized with 5% isoflurane for induction and 2% isoflurane for maintenance (70% N2O/30% O2). The temperature of the mice was maintained at 36-5 ± 0.5 °C using a thermostatically controlled heating blanket connected to a rectal probe. The temporalis muscle was retracted to expose the skull in between the ear and the eye, and a small hole of approximately 1 mm was drilled at the site of the MCA. The dura was carefully removed to expose the MCA. The artery was then gently lifted up and cauterized using a thermocoagulator. After the procedure, the muscle was lifted back and the skin wound was sutured. The animals were then placed back to their home cages. SSO was emulsified in 0.5% methyl cellulose and administered once by single oral gavage at the dose of 50 mg/kg immediately after the surgery, when the mice had retained their consciousness. The administration routes for SSO in vivo have been described previously. In addition, we performed a dose-response study and found that SSO at 50 mg/kg was suitable to see a beneficial effect after stroke. There was no mortality in this study.

[1]. Sulfosuccinimidyl oleate sodium is neuroprotective and alleviates stroke-induced neuroinflammation. J Neuroinflammation. 2017 Dec 4;14(1):237.

[2]. Succinimidyl oleate, established inhibitor of CD36/FAT translocase inhibits complex III of mitochondrial respiratory chain. Biochem Biophys Res Commun. 2010 Jan 15;391(3):1348-51.

Background: Ischemic stroke is one of the main causes of death and disability worldwide. It is caused by the cessation of cerebral blood flow resulting in the insufficient delivery of glucose and oxygen to the neural tissue. The inflammatory response initiated by ischemic stroke in order to restore tissue homeostasis in the acute phase of stroke contributes to delayed brain damage.
Methods: By using in vitro models of neuroinflammation and in vivo model of permanent middle cerebral artery occlusion, we demonstrate the neuroprotective and anti-inflammatory effects of sulfosuccinimidyl oleate sodium (SSO).
Results: SSO significantly reduced the lipopolysaccharide/interferon-γ-induced production of nitric oxide, interleukin-6 and tumor necrosis factor-α, and the protein levels of inflammatory enzymes including nitric oxide synthase 2, cyclooxygenase-2 (COX-2), and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) in microglia, without causing cell toxicity. Although SSO failed to directly alleviate glutamate-induced excitotoxicity in murine cortical neurons, it prevented inflammation-induced neuronal death in microglia-neuron co-cultures. Importantly, oral administration of SSO in Balb/c mice subjected to permanent occlusion of the middle cerebral artery reduced microglial activation in the peri-ischemic area and attenuated brain damage. This in vivo neuroprotective effect of SSO was associated with a reduction in the COX-2 and heme oxygenase-1 immunoreactivities.
Conclusions: Our results suggest that SSO is an anti-inflammatory and a possible therapeutic candidate in diseases such as stroke where inflammation is a central hallmark.[1]

---

The functional role of CD36 protein detected in mitochondrial fractions in long chain fatty acid (LCFA) oxidation is unclear due to conflicting results obtained in Cd36 knockout mice and experiments using sulfo-N-succinimidyl oleate (SSO) for inhibition of CD36 mediated LCFA transport. We investigated effect of SSO on mitochondrial respiration and found that SSO substantially inhibits not only LCFA oxidation, but also oxidation of flavoprotein- and NADH-dependent substrates and generation of mitochondrial membrane potential. Experiments in rat liver, heart and kidney mitochondria demonstrated a direct effect on mitochondrial respiratory chain with the most pronounced inhibition of the complex III (IC(50) 4microM SSO). The results presented here show that SSO is a potent and irreversible inhibitor of mitochondrial respiratory chain.[2]

C22H36NNAO7S

481.578516960144

481.211

C, 54.76; H, 7.73; N, 2.90; Na, 4.76; O, 23.21; S, 6.64

1212012-37-7

Sulfosuccinimidyl oleate;135661-44-8

90469841

White to off-white solid

129

0

7

18

32

704

0

CCCCCCCC/C=C\CCCCCCCC(=O)ON1C(=O)CC(C1=O)S(=O)(=O)[O-].[Na+]

FZVVLJSNKVOPRF-KVVVOXFISA-M

InChI=1S/C22H37NO7S.Na/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-21(25)30-23-20(24)18-19(22(23)26)31(27,28)29;/h9-10,19H,2-8,11-18H2,1H3,(H,27,28,29);/q;+1/p-1/b10-9-;

sodium;1-[(Z)-octadec-9-enoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate

Sulfosuccinimidyl Oleate sodium; 135661-44-8; SCHEMBL2129565; CHEBI:183957; 1-(Oleoyloxy)-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid; Sulfo-N-succinimidyl oleate sodium

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 47~62.5 mg/mL (97.4~129.8 mM)
Ethanol: ~3 mg/mL (~6.2 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

View More

配方 3 中的溶解度: 3.33 mg/mL (6.91 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: 3.33 mg/mL (6.91 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。