Syrosingopine (Su 3118)   中文名称: 昔洛舍平

MCT1/MCT4 (lactate transporters)

在 HeLa 细胞中，西洛平（10 μM；1、3、4 小时）在 1 小时后开始积累细胞内酸度，并在 4 小时达到峰值 [1]。 Silosepine (10 μM; 1, 2) 分别抑制 MCT1-KO 和 MCT4-KO HAP1 细胞中的 MCT4 和 MCT1，以防止振荡破坏 [1]。在 MCT1-KO 细胞中，二甲氧嘧啶 (10-100 μM) 和昔洛舍平 (10-100 μM) 的组合会抑制 HAP1 中继错误合成，使其致命 [1]。

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Syrosingopine导致细胞内乳酸积累和酸化。 Syrosingopine和F3 syro抑制乳酸转运蛋白MCT1和MCT4。 Syrosingopine和F3 syro抑制MCT1和MCT4的乳酸流出。 Syrosingopine和F3糖浆对乳酸进出口的影响不同。 Syrosingopine和F3糖浆在体外结合MCT1和MCT4。 抑制乳酸转运是Syrosingopine和二甲双胍合成致死性的必要条件。[1]

西洛丝平（5 mg/kg；皮下注射；一次）的抗高血压作用相当于通过休眠外周去甲肾上腺素储备阻断神经节神经时观察到的效果[2]。

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在2、3、6、9、12和16个月大的有意识自发性高血压大鼠（SHR）中，与阻断α2-肾上腺素能受体（用育亨宾、rauwolscine）相比，阻断自主神经节（用氯索达明）或连接后α1-肾上腺素能受体。在3至9个月大的SHR中，哌唑嗪预处理后的血压下降幅度明显小于氯硝胺或丁香花碱预处理后。在神经节阻断的SHR中，只有当动脉内注射肾上腺素或去甲肾上腺素使血压参数升高时，哌唑嗪才能降低血压。相比之下，在相同的实验条件下，育亨宾或罗卧叶皂苷给药未能改变苯肾上腺素或肾上腺素的升压作用，但部分降低了去甲肾上腺素的升压效果，与哌唑嗪不同，它强烈拮抗了B-HT 920的升压效果。在完整或神经节阻断的SHR中，以100.0（而非25.0）微克/千克/分钟的速度动脉内输注地尔硫卓30分钟，显著降低了基线平均尾动脉血压。在神经节阻断的SHR中，较小剂量的地尔硫卓分别拮抗了去甲肾上腺素和B-HT 920的40%和80%的升压作用，但未能改变苯肾上腺素、肾上腺素或加压素的血管收缩反应，然而，较高剂量的地尔硫卓会降低这些反应。这些结果表明，在清醒的成年SHR中，外周交感神经末梢释放的去甲肾上腺素和体液携带的肾上腺素几乎只刺激连接后的α1肾上腺素能受体。后一项发现可能解释了所研究的钙拮抗剂在有效拮抗清醒SHR中α2-肾上腺素能受体介导的血管收缩的剂量下缺乏降压作用[2]。

细胞活力测定 [1]
细胞类型： HeLa、MCT1-KO、MCT4-KO HAP1、HAP1 MCT1-KO
测试浓度： 10 µM
孵育持续时间：1、2、3、4小时
实验结果：导致细胞内乳酸积累和酸化1]。 。通过抑制 MCT4 和 MCT1 减缓乳酸流出。与二甲双胍联合使用时，通过抑制乳酸转运来诱导合成致死。

动物/疾病模型：自发性高血压大鼠 (SHR)（2 至 17 月龄）[2]。
剂量：5 mg/kg
给药途径：皮下注射；单次（血压测定前 16 小时）。
实验结果：通过耗竭外周去甲肾上腺素储备发挥降压作用。

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小鼠实验[1]
小鼠在处死前 16 小时和 1 小时腹腔注射syrosingopine（7.5 mg/kg 体重）。用二氧化碳处死小鼠，并从体腔取血进行乳酸测定。使用 Arkray Lactate Pro 2 乳酸检测仪和相应的试纸测定血清乳酸水平。在肝脏肿瘤结节中测定了细胞内乳酸水平。切除结节（每只小鼠3个），并在液氮中研磨成细粉。将粉碎的肿瘤组织重悬于20 μL水中，并进行3次冻融循环（干冰/37°C水浴）以释放细胞内容物。使用乳酸检测仪测定乳酸水平。采用BCA法测定蛋白质浓度，以校正不同结节间乳酸水平的差异。

大鼠口服 LD50 >2 gm/kg Iyakuhin Kenkyu。医疗用品研究。，6(386)，1975
大鼠腹膜内 LD50 286 mg/kg 日本药物，6(365)，1982
大鼠皮下 LD50 >2 gm/kg Iyakuhin Kenkyu。医疗用品研究。, 6(386), 1975
大鼠 LD50 静脉注射 50 mg/kg Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie., 119(245), 1959 [PMID:13628284]
小鼠 LD50 口服 1293 mg/kg 日本药物, 6(365), 1982

[1]. Dual Inhibition of the Lactate Transporters MCT1 and MCT4 Is Synthetic Lethal with Metformin due to NAD+ Depletion in Cancer Cells. Cell Rep. 2018 Dec 11;25(11):3047-3058.e4.

[2]. Role of the sympathetic nervous system in blood pressure maintenance and in the antihypertensive effects of calcium antagonists in spontaneously hypertensive rats. Hypertension. 1988 Apr;11(4):360-70.

西罗辛戈平是一种育亨宾生物碱。

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我们提供了直接证据，证明西罗辛戈平是乳酸转运蛋白MCT1和MCT4的双重抑制剂。此外，我们还证明，MCT1和MCT4的双重抑制作用是西罗辛戈平与二甲双胍联合用药在人癌细胞中产生合成致死效应的原因。MCT对癌细胞的生长和存活至关重要（Doherty和Cleveland，2013），因此，人们投入了大量精力来开发乳酸转运蛋白抑制剂作为潜在的抗癌药物。目前已开发出几种MCT1特异性抑制剂（Guile等，2006），其中一种（AZD3965）正在进行晚期癌症的I期临床试验。MCT1特异性抑制的缺点是，当MCT4表达时，其作用无效。这是一个特别严重的局限性，因为在大多数肿瘤中，MCT4的表达是由缺氧诱导的。目前尚无关于有效MCT4小分子抑制剂的报道。Pouysségur及其同事曾提及一种MCT4特异性抑制剂AZ93（Marchiq和Pouysségur，2016）。然而，与MCT1特异性抑制剂类似，由于MCT1和MCT4转运蛋白的功能冗余，该化合物对同时表达MCT1和MCT4的细胞无效。最近有报道称，吖啶黄素可破坏MCT4-CD147的相互作用（但不能破坏MCT1-CD147的相互作用），但对乳酸分泌没有影响（Voss等，2017）。我们没有发现任何证据表明syrosingopine会破坏MCT1或MCT4与CD147之间的相互作用；相反，syrosingopine似乎直接与这些转运蛋白相互作用（图4）。在非洲爪蟾卵母细胞乳酸转运实验中，双氯芬酸被证实能够抑制MCT4对乳酸的摄取（Sasaki等，2016）；然而，由于MCT亚型表达尚未得到表征，其对人Caco-2细胞乳酸摄取的抑制作用尚不明确。我们提供了直接的生化证据，表明赛罗辛戈平能够抑制MCT1和MCT4对乳酸的转运。此外，在包含MCT1-4亚型表达不同组合的细胞系中，赛罗辛戈平与二甲双胍的合成致死性表明，赛罗辛戈平也能抑制MCT2，但对MCT3无活性。赛罗辛戈平与二甲双胍联用如何产生合成致死性？在生理条件下，LDH将丙酮酸还原为乳酸的反应受到促进，从而再生糖酵解途径上游ATP生成步骤中消耗的NAD+（图6A）。 MCT抑制导致乳酸积累，进而造成细胞内乳酸浓度升高，最终抑制LDH的活性，导致NAD+再生能力丧失。二甲双胍同时抑制线粒体复合物I（NAD+再生的另一主要来源），导致NAD+/NADH比值下降、糖酵解ATP生成减少，最终导致细胞死亡。外源性NAD+或NAD前体NMN可部分恢复ATP水平，提示合成致死的原因是NAD+耗竭。这种恢复需要超生理浓度的NAD+和NMN，这可能是由于这些化合物在HL60细胞中的渗透性较差（Billington等，2008）。值得注意的是，在接受syrosingopine-二甲双胍联合治疗48小时后，NAD+和NMN均无法阻止细胞死亡（数据未显示）。缺乏足够的NAD+来驱动糖酵解可能是syrosingopine-二甲双胍合成致死的一个合理原因。这与DNA损伤细胞中的情况类似，在DNA损伤细胞中，活化的PARP1会消耗过量的NAD+（Ying等人，2005），最终导致细胞死亡。维生素K2可以部分挽救syrosingopine-二甲双胍处理细胞中的ATP生成。外源性维生素K2可以暂时提高NAD+水平，从而在syrosingopine-二甲双胍处理的情况下短暂地支持糖酵解。然而，由于外源性维生素K2的消耗以及NAD+/NADH再生机制的缺失，这种挽救作用是短暂的，因此无法研究其对细胞增殖的影响。尽管如此，它仍然为所提出的合成致死机制提供了支持性证据。syrosingopine作为一种MCT1和MCT4双重抑制剂，可能在体内具有额外的抗肿瘤作用。癌细胞分泌的大部分乳酸积聚在细胞外间隙，形成促进细胞侵袭和转移的肿瘤微环境（Kato et al., 2013）。乳酸引起的细胞外酸化还对肿瘤浸润免疫细胞具有免疫抑制作用（Brand et al., 2016; Fischer et al., 2007）。某些肿瘤的功能分化为高糖酵解的低氧核心，周围环绕着血管丰富的外周区域，从而形成代谢共生：低氧核心产生的代谢废物乳酸被肿瘤外周的正常氧合癌细胞用作燃料。肿瘤细胞还可以利用来自周围基质细胞的乳酸（逆瓦博格效应），或直接从血液循环中吸收乳酸（Faubert et al., 2017; Pavlides et al., 2009）。因此，在所有这些情况下，syrosingopine介导的乳酸在肿瘤细胞中的滞留，除了药物组合对糖酵解的影响外，还能提供额外的益处。人们对将二甲双胍重新定位为抗癌药物表现出浓厚的兴趣，并已启动多项临床试验来评估其抗癌活性。已完成的试验报告了不同的结果，显示其临床疗效不佳或无效（Kordes等人，2015；Tsilidis等人，2014）。关于二甲双胍发挥抗肿瘤活性所需的有效浓度，目前仍存在相当大的争议（Chandel等人，2016；Dowling等人，2016）。在临床前模型中证实具有抗癌活性的二甲双胍浓度（mM级）比常规抗糖尿病剂量下可达到的血清二甲双胍浓度（μM级）高一个数量级，这表明这可能是导致临床试验结果不一的部分原因。鉴于此，syrosingopine 能够与二甲双胍在癌细胞中产生合成致死效应，并显著降低细胞模型中所需的二甲双胍有效浓度（图 S5F），这可能具有潜在的临床应用价值。由于单独抑制乳酸转运充其量只能起到细胞抑制作用，这表明将 MCT1 和 MCT4 抑制剂与二甲双胍合理联合使用，可能成为对这两类药物都有效的抗癌策略。[1]

C35H42N2O11

666.71478

666.279

C, 63.05; H, 6.35; N, 4.20; O, 26.40

84-36-6

6769

White to yellow solid powder

1.35g/cm3

795ºC at 760 mmHg

175ºC

434.6ºC

1.615

4.635

144.08

1

12

13

48

1130

6

CCOC(=O)OC1=C(C=C(C=C1OC)C(=O)O[C@@H]2C[C@@H]3CN4CCC5=C([C@H]4C[C@@H]3[C@@H]([C@H]2OC)C(=O)OC)NC6=C5C=CC(=C6)OC)OC

ZCDNRPPFBQDQHR-SSYATKPKSA-N

InChI=1S/C35H42N2O11/c1-7-46-35(40)48-31-26(42-3)12-18(13-27(31)43-4)33(38)47-28-14-19-17-37-11-10-22-21-9-8-20(41-2)15-24(21)36-30(22)25(37)16-23(19)29(32(28)44-5)34(39)45-6/h8-9,12-13,15,19,23,25,28-29,32,36H,7,10-11,14,16-17H2,1-6H3/t19-,23+,25-,28-,29+,32+/m1/s1

3beta,20alpha-Yohimban-16beta-carboxylic acid, 18beta-hydroxy-11,17alpha-dimethoxy-, methyl ester, 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoate (ester) ethyl carbonate (ester) (8CI)

HF41T; SU3118; HF 41T; syrosingopine; 84-36-6; Syringopine; Isotense; Londomin; Neoreserpan; Siringina; Menatensina; SU 3118; Syrosingopine; HF-41T; SU-3118

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~62.5 mg/mL (~93.74 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。