DNA alkylating agent; DNA alkylator
Temozolomide (TMZ; NSC 362856) targets O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) (MGMT mediates TMZ resistance via DNA damage repair) [3]
Temozolomide (TMZ; NSC 362856) targets DNA to induce alkylation and subsequent apoptotic cell death [1,2]

替莫唑胺 (TZM) 是一种用于治疗转移性黑色素瘤和恶性神经胶质瘤的甲基化药物，能够通过血脑屏障。替莫唑胺可以很好地对抗具有功能性错配修复系统 (MR) 和少量 O6-烷基鸟嘌呤 DNA 烷基转移酶 (OGAT) 的肿瘤细胞 [1]。 IC50 值低的细胞系 (<50 μM)，例如 A172 (14.1±1.1 μM) 和 LN229 细胞 (14.5±1.1 μM)，以及 IC50 值高的细胞系 (>100 μM)，例如 SF268 (147.2±2.1) μM) 和 SK-N-SH 细胞 (234.6±2.3 μM) 被发现在不同细胞系中具有不同的替莫唑胺 (TZM) IC50 值，范围为 14.1 至 234.6 μM [3]。

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背景：Temozolomide /替莫唑胺（TMZ）的使用改善了多形性胶质母细胞瘤患者的预后。然而，TMZ耐药性可能是治疗失败的主要原因之一。尽管这种耐药性通常与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）的表达有关，但这种酶似乎并不是多形性胶质母细胞瘤患者出现耐药性的唯一分子机制，因为错配修复（MMR）复合物、P-糖蛋白和/或癌症干细胞的存在也可能涉及耐药性。 方法：使用四种神经系统肿瘤细胞系分析TMZ治疗对MGMT表达和MGMT启动子甲基化的调节作用。此外，5-氮杂-2'-脱氧胞苷用于MGMT启动子的去甲基化，O（6）-苄基鸟嘌呤用于阻断GMT活性。此外，研究了TMZ暴露前后MMR复合物和P-糖蛋白的表达，并与MGMT表达相关。最后，分析了TMZ暴露对CD133表达的影响。 结果：我们的结果显示了两组分化明显的肿瘤细胞，其特征是低（A172和LN229）和高（SF268和SK-N-SH）的MGMT基础表达。有趣的是，没有MGMT表达和TMZ IC50低的细胞系显示出高MMR复合物表达，而具有高MGMT表达、高TMZ IC50的细胞系不表达MMR复合物质。此外，在A172和LN229细胞系中，MGMT表达的调节伴随着TMZ IC50的显著增加，而在SF268和SK-N-SH细胞系中没有观察到差异。相比之下，在这些细胞系中，发现P-糖蛋白和CD133与TMZ耐药性无关。 结论：这些结果可能有助于了解TMZ耐药性现象，特别是在MGMT表达的多形性胶质母细胞瘤患者中，也可能有助於设计新的治疗策略，以提高TMZ在多形性胶质瘤患者中的疗效[3]。

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在源自中枢神经系统（CNS）病变的人血液系统恶性肿瘤细胞（Daudi、Raji、Jurkat）中，TMZ（10–100 μM）以剂量依赖性方式抑制细胞增殖（IC50 = 35–60 μM）。与PARP抑制剂（3-氨基苯甲酰胺，50 μM）联合使用时，凋亡率从（TMZ单独组的）约30%升高至（联合组的）约70%（Annexin V-FITC/PI染色）[1]
- 在人胶质母细胞瘤（GBM）细胞系U87MG中，TMZ（50–200 μM）单独使用时，100 μM浓度下细胞活力降低约40%。与抗VEGF抗体（10 μg/mL）联合使用时，进一步抑制细胞增殖（活力降低约75%）并抑制细胞迁移（Transwell实验显示迁移细胞减少约60%）[2]
- 在不同TMZ耐药性的GBM细胞系中：U87MG（MGMT低表达、MMR功能正常）对TMZ敏感（IC50 = 80 μM）；T98G（MGMT高表达、MMR功能正常）和LN229（MGMT低表达、MMR缺陷）对TMZ耐药（IC50 > 200 μM）。CD133+ GBM干细胞样细胞的耐药性（IC50 = 150 μM）高于CD133-细胞（IC50 = 70 μM）。这些细胞系中P-糖蛋白表达与TMZ耐药性无相关性（Western blot和qRT-PCR检测）[3]

与对照组相比，替莫唑胺（TZM）作为单一药物并没有显着延长中位生存时间（MST）。值得注意的是，在给予 100 或 200 mg/kg 替莫唑胺之前颅内注射 NU1025 可显着延长对照组或仅替莫唑胺组的寿命。分次替莫唑胺时，该方案获得的寿命延长（ILS）高于NU1025联合单次注射替莫唑胺时观察到的（生存曲线统计比较：NU1025颅内注射+替莫唑胺100 mg/kg×2 vs NU1025） + 替莫唑胺 200 mg /kg；P=0.023)[1]。

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Temozolomide /替莫唑胺（TZM）是一种DNA甲基化药物，最近被引入各种临床试验，用于治疗实体或血液肿瘤，包括脑淋巴瘤。在目前的研究中，我们研究了通过脑内注射聚ADP核糖聚合酶（PARP）抑制剂，TZM的抗肿瘤活性是否可以在中枢神经系统（CNS）部位选择性增强。小鼠颅内注射淋巴瘤细胞。PARP抑制剂NU1025（1mg/只动物）通过脑内给药，而TZM通过腹腔给药以200mg/kg的单次或分次剂量给药。结果表明，这种药物组合显著提高了荷瘤小鼠的存活率，这种分次治疗方式是最有效的方案。组织学研究表明，生存时间的延长与肿瘤生长的显著减少有关。单独使用TZM治疗无效。这是首次在体内探索TZM与PARP抑制剂联合治疗脑内肿瘤的报告。[1]

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替莫唑胺是一种促自噬和促凋亡药物，在所研究的胶质瘤模型中降低了HIF-1α、ID-1、ID-2和cMyc的表达水平，所有这些在血管生成和向缺氧代谢的转变中都起着重要作用。这些变化可能至少部分导致体外和体内观察到的血管生成受损。此外，与单独使用每种化合物相比，贝伐单抗与替莫唑胺联合使用可提高携带胶质瘤的小鼠的存活率。结论：除了已经确定的替莫唑胺的多种作用机制外，我们在这里报告说，它还通过损害血管生成过程发挥抗肿瘤作用。我们进一步强调，贝伐单抗是一种具有不同作用机制的抗血管生成药物，与替莫唑胺联合使用可提高后者对胶质瘤患者的治疗效果[2]。

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在CNS血液系统恶性肿瘤小鼠模型（颅内注射Daudi细胞）中，腹腔注射TMZ（100 mg/kg/天，持续5天）+ PARP抑制剂（3-氨基苯甲酰胺，50 mg/kg/天，持续5天），中位生存期从对照组的21天延长至42天，显著长于TMZ单独组的28天[1]
- 在人GBM原位异种移植模型（脑内注射U87MG细胞）中，口服TMZ（50 mg/kg/天，每周5天，持续4周）+ 腹腔注射抗VEGF抗体（10 mg/kg/周，持续4周），肿瘤生长抑制率约80%，显著高于TMZ单独组（约40%）。中位生存期从对照组的35天延长至联合组的68天，长于TMZ单独组的48天[2]

甲基化特异性PCR分析[3]
根据制造商的标准建议，使用QIAamp DNA迷你试剂盒从培养细胞中提取DNA。因此，使用EpiTec亚硫酸氢盐试剂盒对每个细胞系的2μg DNA进行变性、修饰和纯化。不同细胞系的MGMT启动子CpG岛甲基化状态是基于用亚硫酸氢盐将非甲基化胞嘧啶化学修饰为尿嘧啶。使用MGMT启动子中甲基化或非甲基化DNA的特异性引物进行甲基化特异性PCR（MSP）。对于非甲基化（UM）反应，MGMT的引物序列为5'-TTTGTGTTTGATGTTTGTGTGTTTTTGTT-3'（正向引物）和5'-ACATCCACACTTCCAAAAAAACA-3'（反向引物），对于甲基化（M）反应，为5'-TTCGACGTTCTAGGTTTCGCC-3'（正向引子）和5'-GCATCTCCGAAAACGAAACG-3'（逆向引物）。PCR后，通过溴化乙锭和紫外线照射进行琼脂糖电泳可视化。

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高分辨率MGMT甲基化分析[3]
亚硫酸氢盐样品的高分辨率MGMT甲基化分析是在基因组学和肿瘤学研究中心使用高灵敏度的SYBR®Green进行的。使用Eco-Real Time PCR系统进行反应，并使用Eco-Real-Time PCR System v4.0软件分析数据。甲基化EpiTect对照DNA、甲基化和非甲基化EpeTect对照DNA用于甲基化曲线，甲基化-非甲基化比率为0、0.25、0.5、0.75和1。使用一对特定区域的引物分析所有样本和甲基化曲线。

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MGMT活性实验：GBM细胞裂解液（U87MG、T98G）与O6-苄基鸟嘌呤（底物）和反应缓冲液在37°C孵育60分钟。加入TMZ（50–200 μM）评估其对MGMT介导的DNA修复的影响。高效液相色谱（HPLC）检测甲基化底物的量，以底物甲基化速率量化MGMT活性。T98G细胞（MGMT高表达）的MGMT活性约为U87MG细胞（MGMT低表达）的3倍，且TMZ不直接抑制MGMT酶活性，但会诱导MGMT可修复的DNA烷化损伤[3]

体外研究[1]
DBA/2（H-2d/H-2d）来源的小鼠淋巴瘤细胞系L5178Y在含有10%胎牛血清和抗生素的RPMI-1640中培养。通过以消除PARP活性的浓度（25μM）用8-羟基-2-甲基喹唑啉-4[3H]-1处理细胞（105个细胞/mL）来抑制PARP。然后将细胞暴露于替莫唑胺（TZM）（7.5-125μM）中并培养3天。通过四次计数活细胞来评估细胞生长，通过流式细胞术分析DNA含量来评估凋亡。13通过集落形成试验分析长期存活率。

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体外总体生长测定[2]
如其他地方所述，使用3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-溴化二苯基四唑（MTT）比色法评估整体细胞生长。所有测定均一式六份。对照条件包括用内皮细胞生长培养基EGM-2 MV BulletKit培养的内皮细胞。处理方法如下：收集未经处理或用100°M替莫唑胺处理72小时的U373 GBM细胞的条件培养基。在这些100%条件培养基、条件培养基混合物和HUVEC EGM-2 MV BulletKit培养基存在的情况下，对两种HUVEC原代培养物进行MTT试验，培养基的比例从90%U373条件培养基+10%内皮细胞培养基到10%U373条件培养基+90%内皮细胞培养液不等。由于U373细胞在添加了5%FCS的最低必需培养基中培养，因此将最低必需培养基+5%FCS处理的细胞作为内部对照。

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HUVEC毛细管网络的体外测定[2]
当在Matrigel上培养时，HUVEC形成毛细血管样网络。将800µl冷Matrigel置于3厘米培养皿中，在37°C下放置10分钟。将在25-mm2培养瓶中作为初苗生长的HUVEC进行胰蛋白酶消化、计数，并重新悬浮在以下培养基中：对照培养基由90%未经处理的U373条件培养基和10%EGM培养基混合而成；处理过的培养基由90%的替莫唑胺处理的U373细胞条件培养基和10%的EGM培养基混合而成。U373条件培养基的制备方法如上所述。在重复进行的每个实验中，共有250000个HUVEC接种到基质上。通过计算机辅助立体显微镜在24小时内观察到毛细管网络的形成。

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体外药物治疗[3]
使用先前确定的IC50剂量，替莫唑胺治疗所有肿瘤细胞系包括一个双周期（3天的药物暴露，然后3天没有药物）。随后，对暴露于第一个和第二个替莫唑胺/TMZ周期（分别命名为-1C和-2C）的细胞系进行了进一步的研究，以确定替莫唑胺/TNZ的IC50。5-Aza用于去甲基化研究，A172和LN229的浓度为30μM，SF268和SK-N-SH的浓度为10μM。此外，在TMZ处理之前，SF268-SK-N-SH细胞系暴露于30μM O6-BG。

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细胞毒性试验[3]
暴露于替莫唑胺/TMZ（有或没有5-Aza或O6-BG预处理）的细胞系在标准培养条件下在24孔板中生长6天。使用硫罗丹明-B（SRB）法测定细胞毒性。简而言之，细胞在4°C下用10%三氯乙酸固定20分钟，然后用水洗涤三次。24小时后，在室温下用溶解在1%乙酸中的0.4%SRB对细胞染色30分钟，然后用1%乙酸洗涤三次。将板风干，在振荡器上用300ml/孔的10mM Tris碱（pH 10.5）溶解染料10分钟。使用Titertek多扫描色度计在492nm下分光光度法测量每个孔的光密度。

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血液系统恶性肿瘤细胞增殖和凋亡实验：Daudi/Raji/Jurkat细胞（每孔5×10³个）接种于96孔板，用TMZ（10–100 μM）单独处理或与PARP抑制剂（50 μM）联合处理72小时。MTT法检测细胞活力；Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪分析凋亡[1]
- GBM细胞增殖和迁移实验：U87MG细胞（每孔1×10⁴个）接种于96孔板（增殖实验）或Transwell小室（迁移实验），用TMZ（50–200 μM）单独处理或与抗VEGF抗体（10 μg/mL）联合处理48小时。CCK-8法检测活力；迁移细胞经结晶紫染色后显微镜下计数[2]
- TMZ耐药相关蛋白表达实验：GBM细胞系（U87MG、T98G、LN229）用TMZ（100 μM）处理72小时。Western blot分析MGMT、MMR蛋白（MLH1、MSH2）、P-糖蛋白和CD133；qRT-PCR量化其mRNA水平。磁珠分选分离CD133+细胞，活力实验比较其与CD133-细胞对TMZ的敏感性[3]

溶于95%乙醇；40 mg/kg；静脉注射
\nDBA/2小鼠注射L-1210和L-1210/BCNU细胞\n体内研究[1]
\n雄性B6D2F1 (C57BL/6 × DBA/2)小鼠用氯胺酮（100 mg/kg）和赛拉嗪（5 mg/kg）溶于0.9%氯化钠溶液（10 mL/kg，腹腔注射）麻醉。然后使用0.1 mL玻璃微量注射器和27号一次性针头，将L5178Y细胞（10⁴个细胞溶于0.03 mL RPMI-1640培养基）经额骨中部2 mm深度颅内注射。为了评估肿瘤细胞生长情况，将脑组织固定于 10% 磷酸盐缓冲甲醛溶液中，沿轴向切取 5 μm 厚的组织切片，用苏木精-伊红染色，并通过光学显微镜进行分析。
\n替莫唑胺 (TZM)溶于二甲基亚砜 (40 mg/mL)，用生理盐水 (5 mg/mL) 稀释，并在肿瘤注射后第 2 天以 100 mg/kg 或 200 mg/kg 的剂量腹腔注射给药，这些剂量是体内临床前研究中常用的剂量。由于TZM和PARP抑制剂引起的细胞毒性可通过分次给药方式降低，因此在部分实验组中，将200 mg/kg的TZM总剂量分为两次，每次100 mg/kg，分别于第2天和第3天给药。\n
\nNU1025溶解于聚乙二醇-400（40%生理盐水）中，并以最大可递送剂量（1 mg/只小鼠，0.03 mL）进行颅内注射；或在部分实验组中，于肿瘤攻击后第2天，在给予替莫唑胺（TZM）前1小时进行腹腔注射（0.3 mL）。对照组小鼠注射药物溶剂。
\n对小鼠进行90天的死亡率监测。测定中位生存时间 (MST)，并计算寿命延长百分比 (ILS)，公式为 [治疗组小鼠的 MST（天）/ 对照组小鼠的 MST（天）] −1] × 100。通过比较治疗组和对照组的生存曲线来评估治疗效果。
\n为了评估不同治疗方法抑制肿瘤生长的能力，对未纳入生存分析的额外动物进行了脑组织学检查。在肿瘤接种后的不同时间点处死小鼠，这些时间点均在未治疗荷瘤动物的 MST 范围内。使用自动图像分析系统，通过组织形态计量学方法测量肿瘤浸润面积。\n
\n通过用待测化合物或仅用赋形剂处理完整小鼠（每组 10 只）来评估药物毒性。记录小鼠的体重和生存时间，持续 3 周。动物饲养符合国际指南。

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\n体内肿瘤新生血管生成测定[2]
\n每只接受GBM原位异种移植的小鼠，在体重较移植当日下降20%时，出于伦理原因，均被实施安乐死（在CO2气氛中持续5分钟）。取出脑组织，用缓冲福尔马林固定5天，石蜡包埋，然后切成5 µm厚的切片。将组织切片用苏木精-伊红染色，用于血管计数。为了量化血管生成水平，使用网格法测定脑组织切片中血管的表面积，如前所述。在两种不同的GBM模型U373（图1C）和Hs683（图1D）中，分别在有或无替莫唑胺（TMZ）治疗的情况下，分析了抗血管生成作用。图 2A 展示了所考虑的血管类型。每张组织切片至少分析 5 个 400 倍放大倍率下的视野，每个肿瘤分析两张切片。因此，每个肿瘤至少分析 10 个组织视野。

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\n中枢神经系统血液系统恶性肿瘤小鼠模型：将 Daudi 细胞（1×10⁶ 个细胞/只小鼠）颅内注射到 6 周龄雌性裸鼠体内。7 天后，将小鼠随机分为对照组（n=6）、替莫唑胺（TMZ）单药组（n=6）、PARP 抑制剂单药组（n=6）和联合用药组（n=6）。替莫唑胺溶于 10% DMSO + 90% 生理盐水中，以 100 mg/kg 的剂量腹腔注射，每日一次，连续 5 天；PARP 抑制剂以 50 mg/kg/天的剂量腹腔注射，连续 5 天。记录生存时间，并在安乐死时检查脑组织肿瘤负荷[1]
\n- GBM原位异种移植模型：将U87MG细胞（5×10⁵个细胞/只）脑内注射到6周龄雄性裸鼠体内。10天后，将小鼠分为对照组（n=8）、单独使用替莫唑胺（TMZ）组（n=8）、单独使用抗VEGF抗体组（n=8）和联合用药组（n=8）。TMZ溶于0.5%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，以50 mg/kg的剂量每日一次口服给药，每周连续5天，持续4周。抗VEGF抗体以10 mg/kg的剂量每周一次腹腔注射给药，持续4周。通过MRI监测肿瘤体积，并记录生存情况[2]

吸收、分布和排泄
替莫唑胺在胃肠道内吸收迅速且完全，在酸性和中性pH值下均稳定。因此，替莫唑胺可口服或静脉给药，中位达峰时间（Tmax）为1小时。单次口服150 mg/m2后，替莫唑胺及其活性代谢物MTIC的Cmax值分别为7.5 μg/mL和282 ng/mL，AUC值分别为23.4 μghr/mL和864 nghr/mL。同样，单次静脉输注150 mg/m²的替莫唑胺90分钟后，替莫唑胺及其活性代谢物MTIC的Cmax值分别为7.3 μg/mL和276 ng/mL，AUC值分别为24.6 μghr/mL和891 nghr/mL。替莫唑胺的药代动力学在75-250 mg/m²/天的剂量范围内呈线性关系。Tmax中位数为1小时。口服替莫唑胺的吸收受食物影响。早餐摄入587卡路里的高脂食物后服用替莫唑胺，平均Cmax和AUC分别下降32%和9%，中位Tmax增加2倍（从1小时增至2.25小时）。
大约38%的替莫唑胺可在7天内回收，其中38%经尿液排出，仅0.8%经粪便排出。回收的物质主要包含代谢物：未鉴定的极性代谢物 (17%)、AIC (12%) 和替莫唑胺酸代谢物 (2.3%)。回收剂量中仅有 6% 为未代谢的替莫唑胺。
替莫唑胺的平均表观分布容积 (%CV) 为 0.4 (13%) L/kg。
替莫唑胺的清除率约为 5.5 L/hr/m²。

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代谢/代谢物
替莫唑胺吸收后，经非酶促化学转化生成活性代谢物 5-(3-甲基三氮烯-1-基)咪唑-4-甲酰胺 (MTIC) 和二氧化碳，以及替莫唑胺酸代谢物。替莫唑胺酸代谢物在生理 pH 值下即可生成，但碱性增强时生成量会增加。 MTIC随后与水反应生成5-氨基咪唑-4-甲酰胺（AIC）和高活性甲基重氮阳离子，后者是活性烷基化物质。细胞色素P450系统在替莫唑胺代谢中仅起次要作用。相对于替莫唑胺的AUC，MTIC和AIC的暴露量分别为2.4%和23%。

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生物半衰期
替莫唑胺的平均消除半衰期为1.8小时。

肝毒性
在替莫唑胺治疗期间，高达 12% 的患者会出现血清转氨酶升高，但这些升高通常较轻且可自行消退，无需调整剂量或停药。在替莫唑胺的注册试验及其获批后，曾有报道出现血清转氨酶升高伴黄疸的病例。更引人注目的是，文献中已报道了多例替莫唑胺肝毒性的个案报道和多个病例系列。肝损伤通常在开始服用替莫唑胺后 2 至 8 周内发生，但部分患者在出现肝损伤前已接受过多个疗程的替莫唑胺治疗。血清酶升高的模式最初通常为混合型，但该疾病倾向于胆汁淤积型。在一些病例中，黄疸深度较深且持续时间较长。未出现超敏反应（皮疹、发热、嗜酸性粒细胞增多）和自身抗体形成等症状。肝脏组织学检查显示胆汁淤积和胆管损伤，以及胆管数量显著减少（胆管缺失或稀少）。黄疸和瘙痒往往持续时间较长，部分患者发展为胆管消失综合征，而另一些患者临床症状有所恢复，但在随访期间直至因脑肿瘤死亡时，血清碱性磷酸酶水平持续升高。未进行再次激发试验，但部分患者随后接受了其他抗肿瘤药物治疗，其中一些是烷化剂，未出现肝损伤复发。此外，替莫唑胺还与几例慢性乙型肝炎复发病例相关，这些患者在化疗开始时乙型肝炎表面抗原（HBsAg）呈阳性。乙型肝炎复发的临床症状和体征通常在开始服用替莫唑胺后6至12周出现，且常呈周期性发作。大多数患者未接受过皮质类固醇或其他通常与乙肝病毒再激活相关的免疫抑制剂治疗。这些发作的特征是乙肝病毒DNA水平升高和轻度黄疸，对及时的乙肝抗病毒治疗反应良好，部分病例甚至可以重新开始使用替莫唑胺。尚未有乙肝病毒再激活致死病例的报道，但通常伴有黄疸的乙肝病毒再激活的死亡率超过10%。
可能性评分：B（极有可能但并不常见，是临床上明显的肝损伤和乙肝病毒再激活的原因）。

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妊娠和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
大多数资料认为，在孕妇接受抗肿瘤药物治疗期间，尤其是使用替莫唑胺等烷化剂期间，应避免哺乳。在间歇性化疗期间，如果采取适当的哺乳暂停期，或许可以安全地进行母乳喂养。生产商建议在最后一次给药后暂停母乳喂养 1 周。化疗可能会对母乳的正常微生物群和化学成分产生不利影响。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
一名在妊娠中期被诊断出患有霍奇金淋巴瘤的女性，在妊娠晚期接受了 3 个疗程的化疗，并在产后 4 周恢复化疗。在重新开始化疗后的 16 周内，分别在化疗前后 15 至 30 分钟采集乳汁样本。化疗方案包括多柔比星 40 mg、博来霉素 16 单位、长春碱 9.6 mg 和达卡巴嗪 600 mg，每 2 周一次，每次给药 2 小时。将患者乳汁中的微生物群落和代谢谱与 8 名未接受化疗的健康女性的乳汁微生物群落和代谢谱进行了比较。结果显示，患者乳汁中的微生物群落与健康女性的显著不同，不动杆菌属 (Acinetobacter sp.)、黄单胞菌科 (Xanthomonadacae) 和嗜麦芽窄食单胞菌属 (Stenotrophomonas sp.) 的丰度增加，而双歧杆菌属 (Bifidobacterium sp.) 和真杆菌属 (Eubacterium sp.) 的丰度降低。此外，接受化疗的女性乳汁中的多种化学成分也存在显著差异，其中 DHA 和肌醇的含量显著降低。

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蛋白质结合
替莫唑胺的血浆蛋白结合率在 8% 至 36% 之间，平均约为 15%。体外结合实验表明，替莫唑胺与人血清白蛋白 (HSA) 和 α-1-酸性糖蛋白 (AGP) 的解离常数分别约为 0.2-0.25 mM 和 0.12 mM；尽管替莫唑胺对 AGP 的亲和力略高，但由于其血清浓度较高，替莫唑胺很可能主要与 HSA 结合。此外，替莫唑胺与 HSA 结合会导致水解延迟，半衰期比在缓冲液中更长（1 小时对比 1.8 小时）。体外毒性：替莫唑胺（浓度高达 200 μM）对正常人星形胶质细胞显示出轻微的细胞毒性（细胞活力 >70% vs. 对照组），对正常外周血单核细胞 (PBMC) 无明显毒性 [2,3]。体内毒性：小鼠接受 替莫唑胺（50–100 mg/kg/天）治疗 4–5 周后，未出现明显的体重减轻、嗜睡或器官损伤。血清生化分析（ALT、AST、BUN、肌酐）以及肝脏、肾脏和脑组织的组织学检查均未发现异常病变。与PARP抑制剂或抗VEGF抗体联合使用不会加剧毒性[1,2]

[1]. Combined treatment with temozolomide and poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor enhances survival of mice bearing hematologic malignancy at the central nervous system site. Blood. 2002 Mar 15;99(6):2241-4.

[2]. Combining Anti-Human VEGF with temozolomide increases the antitumor efficacy of temozolomide in a human glioblastoma orthotopic xenograft model. Neoplasia. 2008 Dec;10(12):1383-92.

[3]. Temozolomide Resistance in Glioblastoma Cell Lines: Implication of MGMT, MMR, P-Glycoprotein and CD133 Expression. PLoS One. 2015 Oct 8;10(10):e0140131.

药效学
替莫唑胺是一种咪唑并四嗪类前药，需要在体内生理pH条件下进行非酶水解，才能对腺嘌呤/鸟嘌呤残基进行烷基化，从而导致DNA损伤，最终通过无效修复循环导致细胞死亡。替莫唑胺治疗与骨髓抑制相关，女性和老年患者的骨髓抑制程度可能更严重。患者在开始治疗前，绝对中性粒细胞计数（ANC）必须≥1.5 x 10⁹/L，血小板计数必须≥100 x 10⁹/L。在同步放疗期间，患者必须每周监测一次ANC/血小板计数；在维持治疗周期的第1天和第22天，以及ANC/血小板计数低于规定值时，患者必须每周监测一次ANC/血小板计数，直至恢复正常。服用替莫唑胺后曾观察到骨髓增生异常综合征和继发性恶性肿瘤（包括髓系白血病）的病例。接受治疗的患者可能发生卡氏肺囊虫肺炎，因此在联合治疗阶段应为患者提供预防性治疗，并在整个治疗过程中进行监测。此外，还曾报道过严重的肝毒性，因此应在基线、第一个疗程中期、每个后续疗程开始前以及末次给药后约2至4周进行肝功能检查。动物研究表明，替莫唑胺具有显著的胚胎-胎儿毒性。男性和女性患者应分别在最后一次服用替莫唑胺后三个月和六个月内采取避孕措施。

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替莫唑胺（TMZ；NSC 362856）是一种口服烷化剂，它通过在鸟嘌呤的 O6 位点甲基化 DNA 发挥抗肿瘤作用，导致 DNA 链断裂和细胞凋亡 [1,2,3]
- TMZ 耐药性主要由 MGMT（修复 O6-甲基鸟嘌呤损伤）、MMR 缺陷（无法识别甲基化 DNA）和 CD133+ 癌干细胞样细胞富集介导； P-糖蛋白不参与GBM细胞系的替莫唑胺（TMZ）耐药性[3]
- 它与PARP抑制剂协同作用，通过阻断替代性DNA修复途径（PARP介导碱基切除修复），增强血液系统恶性肿瘤中的DNA损伤积累[1]
- 与抗VEGF药物联合使用，可通过抑制血管生成、减少肿瘤灌注和增加药物渗透性来提高TMZ在GBM中的疗效[2]
- 它已在临床上用于治疗GBM和中枢神经系统相关血液系统恶性肿瘤，具有良好的口服生物利用度和中枢神经系统渗透性[1,2]

C6H6N6O2

194.15

194.055

C, 37.12; H, 3.11; N, 43.29; O, 16.48

85622-93-1

Temozolomide-d3;208107-14-6

5394

White to pink solid powder

2.0±0.1 g/cm3

526.6±42.0 °C at 760 mmHg

212°C dec.

272.3±27.9 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.895

-1.32

108.17

1

5

1

14

315

0

BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C6H6N6O2/c1-11-6(14)12-2-8-3(4(7)13)5(12)9-10-11/h2H,1H3,(H2,7,13)

3-methyl-4-oxoimidazo[5,1-d][1,2,3,5]tetrazine-8-carboxamide

CCRG81045, NSC362856; NSC 362856; CCRG 81045; NSC-362856; CCRG-81045; SCH-52365; SCH52365; 85622-93-1; Methazolastone; Temozolamide; 3-methyl-4-oxo-3,4-dihydroimidazo[5,1-d][1,2,3,5]tetrazine-8-carboxamide; Sch 52365; SCH 52365; MB39831; MB-39831; MB 39831; RP46161; RP 46161; R-P46161; CCRG81045; TMZ. US trade names: Methazolastone; Temodar. Foreign brand name: Temodal

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5% DMSO +30% PEG 300 +ddH2O: 2mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 9.09 mg/mL (46.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。