| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Through a mechanism like that of the endogenous activator FBP, TEPP-46 and DASA-58 activate PKM2. Pre-treating cells with DASA-58 or TEPP-46 inhibits the suppression of PKM2 activity caused by pervanadate. Moreover, acetyl-coA, lactate, ribose phosphate, and serine intracellular levels are decreased by TEPP-46[1]. TEPP-46 suppresses the expression of several other Hif-1α-dependent genes as well as IL-1β and Hif-1α that are stimulated by LPS. Treatment with TEPP-46 dramatically reduces the expression of Cxcl-10 and Il12p40, two M1 indicators. PKM2 activation with TEPP-46 dramatically reduces the expression of Il1b mRNA produced by CpG and FSL-1. TEPP-46 has no effect on Tnf levels but increases Mtb-induced levels of Il10 mRNA and suppresses Mtb-induced levels of Il1b mRNA[2].
PKM2 (pyruvate kinase M2) – promotes tetramer formation and activates pyruvate kinase enzymatic activity [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过内源性激活剂 FBP 等机制，TEPP-46 和 DASA-58 激活 PKM2。用 DASA-58 或 TEPP-46 预处理细胞可抑制过钒酸盐引起的 PKM2 活性抑制。此外，TEPP-46 还可降低细胞内乙酰辅酶 A、乳酸、磷酸核糖和丝氨酸的水平[1]。 TEPP-46 抑制其他几个 Hif-1α 依赖性基因以及 LPS 刺激的 IL-1β 和 Hif-1α 的表达。 TEPP-46 处理显着降低了两个 M1 指标 Cxcl-10 和 Il12p40 的表达。用 TEPP-46 激活 PKM2 会显着降低 CpG 和 FSL-1 产生的 Il1b mRNA 的表达。 TEPP-46 对 Tnf 水平没有影响，但会增加 Mtb 诱导的 Il10 mRNA 水平并抑制 Mtb 诱导的 Il1b mRNA 水平[2]。
TEPP-46 是重组PKM2的强效选择性激活剂，其AC90为470 nM，AC50为92 nM，且在体外不激活重组PKM1[1] TEPP-46 促进PKM2亚基组装成稳定的四聚体，这通过蔗糖梯度超速离心和尺寸排阻色谱证实[1] TEPP-46 (1 µM) 可防止过钒酸盐诱导的A549细胞中PKM2活性抑制[1] TEPP-46 (25 µM，处理36小时) 降低H1299细胞内的乳酸、核糖磷酸和丝氨酸浓度[1] TEPP-46 (30 µM) 在常氧 (21% O2) 条件下对细胞增殖无显著影响，但在低氧 (1% O2) 条件下降低H1299细胞的增殖速率[1] TEPP-46 处理（上下文中浓度未具体说明）能恢复PKM2突变体 (K305Q) 与内源性PKM2共沉淀的能力，表明其在A-A'界面稳定四聚体[1] TEPP-46（50-100 μM）在BMDM和RAW巨噬细胞中促进PKM2四聚化，DSS交联实验显示出现约250 kDa的高分子量PKM2复合物，FPLC体积排阻色谱显示向更高分子量迁移（洗脱体积10-11 ml）。[2] TEPP-46（50-100 μM）抑制LPS诱导的BMDM中PKM2的核转位。[2] TEPP-46（50 μM，预孵育30分钟）抑制LPS诱导的BMDM和腹腔细胞中pro-IL-1β蛋白表达。[2] TEPP-46（100 μM，预孵育1小时）通过寡核苷酸pull-down和连续ChIP实验证明，抑制LPS诱导的PKM2和Hif-1α与IL-1β启动子的结合。[2] TEPP-46（50 μM）抑制LPS诱导的BMDM和腹腔细胞中Hif-1α蛋白表达。[2] TEPP-46（50 μM）抑制LPS诱导的BMDM中糖酵解（ECAR）。[2] TEPP-46（50 μM，预孵育30分钟）抑制FSL-1（TLR2/6配体）和CpG（TLR9配体）诱导的BMDM中Il1b mRNA表达。[2] TEPP-46（25-50 μM，预孵育30分钟）抑制热灭活结核分枝杆菌（Mtb）诱导的BMDM中pro-IL-1β和Hif-1α蛋白以及TNFα和IL-6蛋白，同时增强Mtb诱导的IL-10产生。[2] TEPP-46（25 μM，预孵育30分钟）抑制活Mtb（H37Ra）感染的BMDM中Il1b mRNA，对Tnf mRNA无影响，增强Il10 mRNA，抑制IL-1β和TNFα蛋白，增加IL-10蛋白。[2] TEPP-46（25 μM，预孵育30分钟）在Mtb感染BMDM后72小时增加胞内细菌载量。[2] TEPP-46（25 μM，预孵育30分钟）在S. typhimurium感染（MOI 10，4小时）前处理BMDM，增加胞内细菌载量。[2] 在PKM2条件性敲除BMDM（PKM2-/-）中，TEPP-46（50 μM）对LPS诱导的Il1b表达无进一步抑制作用，证实了其靶向活性。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
TEPP-46 具有长半衰期、低清除率和良好的分布体积，具有很强的口服生物利用度，并具有表明肿瘤组织中药物暴露的指标。在 A549 异种移植肿瘤中，150 mg/kg 的 TEPP-46 很容易达到最大 PKM2 激活[1]。
TEPP-46 (50 mg/kg，口服，每日两次) 可抑制免疫功能低下 (nu/nu) 小鼠中H1299人非小细胞肺癌异种移植瘤的生长，延缓肿瘤出现并减少最终肿瘤重量[1] TEPP-46 处理 (50 mg/kg，处死前16小时和4小时给药) 可促进H1299异种移植瘤中PKM2四聚体的形成，并降低乳酸、核糖磷酸和丝氨酸的浓度[1] 小鼠腹腔注射TEPP-46（50 mg/kg）或溶媒（20%羟丙基-β-环糊精）1小时，随后腹腔注射LPS（15 mg/kg）2小时。与单独LPS相比，TEPP-46显著降低腹腔细胞中pro-IL-1β水平和血清IL-1β水平，血清IL-6水平不变，血清IL-10水平大幅升高。[2] 小鼠在感染S. typhimurium（1×10⁶ CFU，腹腔注射）前1小时腹腔注射TEPP-46（50 mg/kg），感染后2小时检测。与单独感染相比，TEPP-46显著降低腹腔细胞中pro-IL-1β，对血清IL-6和IL-18水平无影响，大幅增强血清IL-10水平。[2] 感染S. typhimurium（1×10⁶ CFU，腹腔注射）24小时后处死小鼠，TEPP-46预处理组（感染前1小时腹腔注射50 mg/kg）的脾脏和肝脏中细菌载量（log CFU）均显著增加。[2] |
| 酶活实验 |
通过监测磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP) 向丙酮酸的转化，并与乳酸脱氢酶偶联反应将活性与NADH氧化关联，来测量细胞或组织裂解液中的丙酮酸激酶活性[1]
对于抑制剂研究，在裂解前用100 µM过钒酸盐处理细胞10分钟，以急性增加酪氨酸磷酸化蛋白水平[1] 对于磷酸酪氨酸肽实验，使用了对应于PKM2最佳相互作用基序的肽段 (例如，M2tide和P-M2tide)[1] 交联实验：BMDM或RAW 264.7巨噬细胞用50 μM TEPP-46或DMSO处理，然后用500 μM disuccinimidyl suberate交联30分钟。裂解液通过Western blot分析检测高分子量PKM2复合物（约250 kDa）。[2] 体积排阻色谱：RAW 264.7细胞用±10 μM TEPP-46或DMSO处理1小时，随后LPS（100 ng/ml）刺激24小时，取2-3 mg蛋白上样至Superdex 200柱，用缓冲液洗脱。收集250 μL馏分，通过SDS-PAGE和Western blot分析PKM2。TEPP-46导致PKM2向更高分子量迁移（洗脱体积10-11 ml），对应四聚体PKM2。[2] 寡核苷酸pull-down实验：BMDM用± TEPP-46（50 μM，60分钟）处理，随后LPS刺激24小时。将IL-1β启动子上Hif-1α结合位点特异性的寡核苷酸与细胞裂解液孵育。样品通过Western blot检测Hif-1α和PKM2。[2] 连续染色质免疫沉淀（ChIP）：BMDM用± TEPP-46（50 μM，30分钟）预处理，随后LPS（100 ng/ml）刺激24小时。裂解液先用抗HIF-1α抗体免疫沉淀，然后将沉淀样品重新用PKM2抗体检测。使用IL-1β启动子共有HIF1α结合位点（-408）的特异性引物进行qRT-PCR。数据以输入百分比计算。[2] |
| 细胞实验 |
为了评估细胞内丙酮酸激酶复合物的形成，表达Flag标记的PKM1或PKM2，用Flag抗体进行免疫沉淀，并通过Western blot检测共沉淀的内源性PKM2[1]
通过使用结晶紫染色定期测量六天内的细胞质量积累，或使用商业细胞活力检测试剂盒 (如MTS法) 来评估细胞增殖[1] 对于代谢测量，使用生化分析仪测定细胞孵育培养基中的乳酸产量[1] 通过将细胞与[6-14C]-葡萄糖共孵育，提取细胞脂质，并通过闪烁计数定量掺入的14C，来测量葡萄糖掺入脂质的情况[1] 使用靶向液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定细胞内代谢物浓度 (如乳酸、核糖磷酸、丝氨酸)[1] 为了评估细胞内PKM2的多聚体状态，将裂解液进行尺寸排阻色谱分离，并对洗脱组分进行PKM2的Western blot分析[1] 对于蔗糖梯度超速离心，将重组PKM2与化合物孵育，铺在梯度液上，离心，然后通过SDS-PAGE和染色分析各组分[1] 从C57BL/6小鼠分离的BMDM（1×10⁶细胞/ml）用± TEPP-46（50-100 μM，预孵育30-60分钟）处理，随后LPS（100 ng/ml）刺激不同时间（6-48小时）。通过Western blot分析pro-IL-1β、Hif-1α、PKM2和β-actin蛋白表达。[2] BMDM用± TEPP-46（100 μM，1小时）处理，随后LPS刺激24小时。提取RNA，通过qRT-PCR检测Il1b、Il6、Ldha、Il12p40、Cxcl-10、Arg-1、Mrc-1和Pkm2 mRNA表达。[2] BMDM用± TEPP-46（50 μM，30分钟）处理，随后LPS刺激24小时。通过ELISA检测上清中IL-6、TNFα和IL-10蛋白。[2] BMDM用± TEPP-46（50 μM，30分钟）处理，随后FSL-1（100 ng/ml）或CpG（1 μg/ml）刺激24小时。通过qRT-PCR分析Il1b mRNA。[2] BMDM用± TEPP-46（25-50 μM，30分钟）处理，随后热灭活或活Mtb（H37Ra，MOI 5）感染3-24小时。通过Western blot分析PKM2、IL-1β、Hif-1α和β-actin蛋白；通过qRT-PCR检测Pkm2、Il1b、Tnf、Il10 mRNA；通过ELISA检测IL-10、TNFα、IL-6蛋白。[2] 从PKM2fl/fl小鼠分离的BMDM用± 600 nM他莫昔芬处理72小时以敲除PKM2，然后用± TEPP-46（50 μM）预处理，随后LPS（100 ng/ml）刺激24小时。通过qRT-PCR检测Il1b mRNA。在PKM2-/-细胞中未观察到进一步抑制。[2] 糖酵解测量：BMDM以200,000细胞/孔铺板，用± 50 μM TEPP-46处理1小时，随后LPS刺激24小时，使用通量分析仪测量细胞外酸化率（ECAR）。结果以细胞数归一化。[2] |
| 动物实验 |
150 mg/kg 小鼠 在异种移植疗效研究中，将H1299细胞（5×10^6）皮下注射到免疫缺陷（nu/nu）小鼠体内[1] 小鼠被随机分为若干组，分别接受载体或TEPP-46（50 mg/kg）治疗，TEPP-46每日两次口服给药，持续7周以上[1] 在急性药效学研究中，携带H1299异种移植瘤的小鼠在处死前特定时间接受TEPP-46的单次口服剂量（例如，150 mg/kg或50 mg/kg）[1] 监测肿瘤生长情况，并在指定时间处死小鼠以收集和分析肿瘤[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
基于体外ADME分析，预测TEPP-46与其他类似物相比具有更优的体内药物暴露量[1]。TEPP-46在小鼠体内表现出良好的口服生物利用度、相对较低的清除率、较长的半衰期和良好的分布容积[1]。150 mg/kg的TEPP-46急性口服剂量可使A549异种移植瘤中的PKM2达到最大激活[1]。单次静脉注射、腹腔注射或口服给药后，测量了血浆药物浓度随时间的变化，并使用非房室模型计算了药代动力学参数（Cmax、Tmax、T1/2、AUC）[1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
一项为期5天的小鼠重复给药耐受性研究表明，每日两次口服50 mg/kg的TEPP-46耐受性良好，未出现体重减轻的迹象[1]。根据血细胞计数、血清化学和主要器官的组织学检查，在小鼠连续口服给药（50 mg/kg，每日两次）超过7周后，未观察到明显的毒性[1]。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
6-[(3-氨基苯基)甲基]-4-甲基-2-甲基亚磺酰基-5-噻吩并[3,4]吡咯并[1,3-d]哒嗪酮是一种有机硫杂环化合物、有机氮杂环化合物和有机杂双环化合物。
TEPP-46（也称为ML-265）是噻吩并[3,2-b]吡咯并[3,2-d]哒嗪酮类PKM2激活剂的代表性化合物[1]。 TEPP-46结合于PKM2四聚体AA'界面上的一个口袋，该口袋不同于内源性激活剂果糖-1,6-二磷酸（FBP）的结合位点，并能稳定四聚体构象[1]。 TEPP-46对PKM2四聚体的稳定作用使该酶对酪氨酸磷酸化蛋白抑制具有抵抗性[1] TEPP-46通过减少糖酵解中间体和生物合成前体来改变癌细胞代谢，从而干扰肿瘤生长所需的合成代谢[1] TEPP-46是一种高度特异性的PKM2小分子激动剂，可促进四聚体形成并增强PKM2酶活性，从而在体内抑制肿瘤生长（如先前报道）。在本研究中，TEPP-46作为工具化合物用于探索LPS激活的巨噬细胞中PKM2的功能。它抑制LPS诱导的pro-IL-1β和Hif-1α，减弱M1巨噬细胞极化，抑制糖酵解和琥珀酸积累，并促进IL-10产生。在体内，TEPP-46在脓毒症和S. typhimurium感染模型中降低IL-1β并增加IL-10，导致细菌播散增加。该化合物根据已发表的方法合成（Boxer et al., 2010；Jiang et al., 2010）。[2] |
| 分子式 |
C17H16N4O2S2
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|---|---|---|
| 分子量 |
372.464540481567
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| 精确质量 |
372.071
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| 元素分析 |
C, 54.82; H, 4.33; N, 15.04; O, 8.59; S, 17.22
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| CAS号 |
1221186-53-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
44246499
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
711.6±70.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
384.2±35.7 °C
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|
| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.805
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| LogP |
0.61
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| tPSA |
130.36
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
601
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S1C(=CC2=C1C1C=NN(CC3C=CC=C(C=3)N)C(C=1N2C)=O)S(C)=O
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| InChi Key |
ZWKJWVSEDISQIS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H16N4O2S2/c1-20-13-7-14(25(2)23)24-16(13)12-8-19-21(17(22)15(12)20)9-10-4-3-5-11(18)6-10/h3-8H,9,18H2,1-2H3
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.87 mg/mL (7.71 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.71 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，您可以将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 配方 5 中的溶解度: 10 mg/mL (26.85 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 6 中的溶解度: 5 mg/mL (13.42 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6849 mL | 13.4243 mL | 26.8485 mL | |
| 5 mM | 0.5370 mL | 2.6849 mL | 5.3697 mL | |
| 10 mM | 0.2685 mL | 1.3424 mL | 2.6849 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Activation of PKM2 using TEPP-46 attenuates the M1 attributes of LPS-activated BMDMs.Cell Metab.2015 Jan 6;21(1):65-80. |
Activation of PKM2 counteracts LPS induced excessive rate of glycolysis and restores cellular levels of succinate.Cell Metab.2015 Jan 6;21(1):65-80. |
Activation of PKM2in vivodiminishes the host immune response in LPS-induced sepsis and in anS. typhimuriummodel of infection.Cell Metab.2015 Jan 6;21(1):65-80. |
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