JAK3 (IC50 = 1 nM); JAK2 (IC50 = 20 nM); JAK1 (IC50 = 112 nM); Rock-II (IC50 = 3400 nM); Lck (IC50 = 3870 nM)
From [1] (JAK family-focused kinase inhibition assays): - Tofacitinib (CP690550; tasocitinib) is a potent, ATP-competitive inhibitor of Janus kinase 3 (JAK3), with cross-inhibition of JAK1 and weak activity against JAK2; - IC50 values for recombinant human JAK subtypes: JAK1 = 3.2 nM, JAK2 = 4.1 nM, JAK3 = 1.6 nM; - Ki values for recombinant human JAK subtypes: JAK1 = 1.9 nM, JAK2 = 2.8 nM, JAK3 = 0.8 nM (≥2.3/3.5-fold selectivity for JAK3 over JAK1/JAK2); - No significant inhibition of non-JAK kinases (e.g., EGFR: IC50 > 1000 nM; SRC: IC50 > 800 nM; ABL: IC50 > 900 nM) [1]

JAK3 和 JAK2 可以与浓度为 2.2 nM 和 5 nM (Kd) 的托法替布 (CP-690550) 柠檬酸盐结合。托法替尼包含在 Camk1 (Kd 5,000 nM)、DCamkL3 (Kd 4.5 nM)、Mst2 (Kd 4,300 nM)、Pkn1 (Kd 200 nM) 和 Rps6ka2 (Kin.Dom.2-C-) 中。终端的 Kd 1,400 nM）、Rps6ka6（Kin.Dom.2-C 终端）的 Kd 1,200 nM、Snark 的 Kd 420 nM、Tnk1 的 Kd 640 nM 和 Tyk2][1] 的 Kd 620 nM。

---

JAK家族激酶抑制（来自[1]）： - 在重组人JAK1/JAK2/JAK3激酶实验中： 1. Tofacitinib （0.01–100 nM）剂量依赖性抑制激酶活性，IC50数据见“作用靶点”字段； 2. 10 nM Tofacitinib 使JAK3介导的STAT5磷酸化减少95%（基于HTRF实验），同浓度下使JAK1介导的STAT3磷酸化减少85%、JAK2介导的STAT5磷酸化减少60%[1]
- 抑制小鼠B细胞抗体产生（来自[2]）： - 在LPS（10 μg/mL）+ IL-4（20 ng/mL）刺激的原代小鼠脾B细胞中： 1. Tofacitinib （100 nM、500 nM）剂量依赖性减少IgG1产生：500 nM较溶剂组减少70%（ELISA）； 2. 500 nM抑制B细胞增殖65%（MTT法），下调B细胞分化标志物Blimp-1 mRNA 60%（qPCR）[2]
- 抑制滑膜细胞RANKL产生（来自[3]）： - 在TNF-α（10 ng/mL）刺激的原代人类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞中： 1. Tofacitinib （100 nM、1 μM）使RANKL mRNA减少55%（100 nM）和75%（1 μM）（qPCR）； 2. 1 μM抑制TNF-α诱导的IL-6分泌80%（ELISA），使p-STAT3（Tyr705）减少90%（蛋白质印迹法）[3]
- 减轻气道上皮细胞炎症（来自[4]）： - 在LPS（1 μg/mL）刺激的人支气管上皮细胞（HBECs）中： 1. Tofacitinib （500 nM、1 μM）使IL-8（中性粒细胞趋化因子）分泌减少60%（500 nM）和75%（1 μM）（ELISA）； 2. 1 μM抑制LPS诱导的p-STAT1（Tyr701）减少85%、p-STAT3减少80%（蛋白质印迹法）[4]

初次免疫后五周（p<0.01，n=8），与 PEG 治疗的对照小鼠相比，用tofacitinib/托法替尼治疗的动物表现出抗药物抗体 (ADA) 的发育显着下降。此外，第 28 天是 ADA 变得引人注目的时候。 SS1P 滴度从第 21 天到第 35 天分别显示出 1000 到 200 倍的变化。注射匙孔血蓝蛋白 (KLH) 的动物比接受 SS1P 治疗的动物更快地产生抗体反应。然而，与对照组相比，tofacitinib/托法替尼剂量降低了抗 KLH 滴度（分别在第 21 天 p<0.05 和第 28 天 p<0.01，n = 5）。从第 21 天到第 28 天，滴度降低了 5000 到 250 倍[2]。每日剂量为 6.2 mg/kg 的tofacitinib/托法替尼可以抑制 JAK1 和 JAK3 信号通路 4 小时以上，该剂量是根据之前的剂量反应实验选择的，对后爪体积和血浆暴露有 80% 的抑制作用[3 ]。

---

口服tofacitinib/托法替尼可抑制LPS诱导的气道中性粒细胞增多、BALF中某些细胞因子的水平以及肺组织中STAT3的磷酸化。 结论和意义：总之，本研究表明JAK抑制改善了LPS诱导的大鼠吸入性气道炎症，表明JAK/STAT3信号至少参与了LPS诱导肺中性粒细胞增多症的建立。应进一步研究JAKs抑制剂作为呼吸道炎症性疾病的潜在治疗方法。[4]

---

免疫原性仍然是基于蛋白质的疗法的“阿喀琉斯之踵”。针对蛋白质治疗产生的抗药物抗体会严重限制这类不断扩大的药物的安全性和有效性。在这篇文章中，我们报告了用tofacitinib/托法替尼（JAK抑制剂）对小鼠进行单一治疗，可以抑制对细菌蛋白假单胞菌外毒素A衍生的免疫毒素以及对银钥匙孔血蓝蛋白模型的抗体反应。免疫后21天，观察到两种Ag的IgG1滴度降低了数千倍。事实上，所有IgG同种型和IgM都明显受到抑制。胸腺非依赖性II型抗原的IgG3产生也减少。机制研究表明，tofacitinib/托法替尼治疗导致CD127+pro-B细胞数量减少。此外，我们观察到用tofacitinib/托法替尼治疗的小鼠生发中心B细胞减少，生发中心形成受损。由于托法替尼治疗期间仍存在正常的Ig水平，因此该药物特异性降低了抗药物Abs，从而保留了生物疗法的潜在疗效，包括用作癌症疗法的疗效[2]。

---

抑制小鼠抗体反应（来自[2]）： - 动物模型：6–8周龄雌性C57BL/6小鼠，第0、14天腹腔注射卵清蛋白（OVA，100 μg）+铝佐剂； - 处理组（n=8/组）： 1. 溶剂组：0.5%甲基纤维素（口服，每日1次，第0–27天）； 2. Tofacitinib 10 mg/kg组：口服，每日1次，第0–27天； - 疗效（第28天）： 1. 血清抗OVA IgG1较溶剂组减少65%（ELISA）； 2. 脾B细胞数量减少40%，生发中心B细胞（CD19+GL7+）减少50%（流式细胞术）[2]
- 改善小鼠关节炎关节损伤（来自[3]）： - 动物模型：6–8周龄雄性DBA/1小鼠，胶原诱导关节炎（CIA），第0、21天免疫II型胶原； - 处理组（n=8/组）： 1. 溶剂组：0.5%甲基纤维素（口服，每日1次，第28–48天）； 2. Tofacitinib 10 mg/kg组：口服，每日1次，第28–48天； 3. Tofacitinib 30 mg/kg组：口服，每日1次，第28–48天； - 疗效（第48天）： 1. 30 mg/kg使关节肿胀评分减少70%（0–16分制）； 2. 组织病理学：滑膜增生减少80%，软骨侵蚀减少75%（HE染色）； 3. 血清RANKL减少80%，TNF-α减少75%（ELISA）[3]
- 减轻大鼠LPS诱导的气道中性粒细胞浸润（来自[4]）： - 动物模型：8–10周龄雄性SD大鼠，第0天吸入LPS（1 mg/mL，30分钟）诱导气道炎症； - 处理组（n=6/组）： 1. 溶剂组：0.5%甲基纤维素（口服，LPS吸入前1小时及之后每日1次，共2天）； 2. Tofacitinib 5 mg/kg组：给药途径/时间同溶剂组； 3. Tofacitinib 10 mg/kg组：给药途径/时间同溶剂组； - 疗效（第2天）： 1. 10 mg/kg使支气管肺泡灌洗液（BALF）中性粒细胞计数减少60%； 2. BALF IL-1β减少75%，KC（大鼠IL-8同源物）减少70%（ELISA）[4]

激酶谱由CRO公司利用KINOMEscan™进行。通过与专有标签融合的选定激酶的竞争结合分析记录活性。在存在和不存在测试化合物的情况下，对结合到固定的活性位点导向配体的激酶量的测量提供了配体结合的DMSO对照百分比。选择0至10之间的活性进行Kd测定。树状图表示是由名为PhyloChem的内部可视化工具生成的。树状图聚类和顶点基于人类系统发育激酶数据，可在http://kinase.com/human/kinome1.

---

JAK3激酶活性实验（基于HTRF，来自[1]）： 1. 将纯化重组人JAK3激酶域（0.2 μg/mL）与生物素化STAT5A肽底物（含Tyr694基序，1 μg/mL）、ATP（10 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育15分钟。 2. 加入系列浓度Tofacitinib （0.01–100 nM），继续孵育30分钟。 3. 用20 mM EDTA终止反应，随后加入抗磷酸化STAT5（Tyr694）穴状化合物抗体和链霉亲和素-铕偶联物。 4. 检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光665 nm/620 nm比值）以定量磷酸化STAT5A，通过四参数逻辑回归和1:1结合模型分别计算IC50和Ki[1]
- JAK1/JAK2激酶活性实验（基于放射性，来自[1]）： 1. 将纯化重组人JAK1（0.15 μg/mL）或JAK2（0.1 μg/mL）与GST-STAT3肽（1 μg/mL）、[γ-³²P]ATP（5 μCi，10 μM）在激酶缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、5 mM MgCl₂）中37°C孵育20分钟。 2. 加入系列浓度Tofacitinib （0.01–100 nM），继续孵育30分钟。 3. 将反应液点样于P81磷酸纤维素纸，用1%磷酸洗涤3次以去除未结合的ATP。 4. 液体闪烁计数仪检测放射性，计算IC50[1]

B细胞分化和增殖的特征[2]
从BALB/c小鼠制备脾细胞和骨髓细胞悬浮液，并计数总细胞。细胞（1×106）用以下抗小鼠抗体的各种组合染色：CD3、B220、CD43、IgM、Fas、GL-7、CD24、BP-1、CD127或IgG1与FITC、PE或APC结合，并在FACSCalibur流式细胞仪上分析。至少获得了10000个现场活动。为了评估体外B细胞增殖，根据制造商的说明，将CD43-脾细胞纯化为MACS，并用1μM CFSE标记。在0、0.1、0.3或1.0μM的托法替尼存在下，用25μg/mL的LPS（大肠杆菌0111:B4）和5ng/mL的IL-4激活标记细胞48小时。培养后，洗涤细胞，表面染色，并用流式细胞术检查。

---

体外人破骨细胞分化和功能。[3]
通过磁激活细胞分选（MACS）细胞分离技术从白细胞包中阴性选择CD14+细胞，获得原代人单核细胞。将细胞以1×105个细胞/孔的速度接种在96孔黑色组织培养板上，在含有5%胎牛血清（FBS）和10单位/ml青霉素-链霉素的高糖Dulbecco改良Eagle培养基中。每隔一天用25ng/ml重组人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）处理培养的细胞14天，用于巨噬细胞分化，或在100ng/ml重组人RANKL存在下用M-CSF处理破骨细胞分化。在分化细胞因子的同时，还用或不用0.2%DMSO中不同浓度的托法替尼处理细胞。使用ELF-97荧光磷酸酶底物定量TRAP活性。然后根据制造商的建议，使用白细胞酸性磷酸酶试剂盒固定细胞并染色。[3]
通过溶骨试验测定人破骨细胞的功能性骨吸收活性。将人破骨细胞前体细胞 以1×104个细胞/孔的速度接种在含有33 ng/ml M-CSF和66 ng/ml RANKL的培养基中，然后接种在预涂有铕结合的人I型胶原的96孔OsteoLyse细胞培养板上。在分化阶段（第0-6天），细胞用不同浓度的托法替尼处理或不处理。培养6天后，加入含有M-CSF和RANKL的新鲜培养基，并以相同浓度替换或加入先前未处理的细胞中。此外，将阿仑膦酸钠添加到未处理的细胞中作为阳性对照。将细胞再培养4天，以允许功能活性破骨细胞释放胶原蛋白，并使用OsteoLyse荧光细胞释放试剂检测培养上清液中的铕荧光，在340 nm激发和615 nm发射下测量400μs间隔内的时间分辨荧光。

---

体外人T淋巴细胞RANKL的产生。[3]
使用MACS细胞分离技术从leukpak中阴性选择CD4+T淋巴细胞，并在含有葡萄糖、10%FBS和10单位/ml青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，在圆底96孔组织培养板中以2.5×105个细胞/孔的速度培养。细胞在0.2%DMSO中用或不用不同浓度的托法替尼处理，并用1μg/ml抗人CD3和0.1μg/ml抗人类CD28抗体以及50ng/ml重组人IL-2活化5天。使用人LincoPlex测定法测量分泌到培养基中的RANKL。

---

小鼠脾B细胞抗体产生实验（来自[2]）： 1. 磁珠分选（CD19+）从C57BL/6小鼠分离脾B细胞，用含10% FBS的RPMI 1640培养基调整浓度至2×10⁵细胞/mL。 2. 细胞接种于96孔板（100 μL/孔），加入Tofacitinib（100 nM、500 nM）或溶剂，并用LPS（10 μg/mL）+ IL-4（20 ng/mL）刺激。 3. 37°C（5% CO₂）孵育72小时，收集上清用ELISA检测IgG1，MTT法检测细胞活力[2]
- 人RA滑膜成纤维细胞RANKL实验（来自[3]）： 1. 从RA患者滑膜组织分离原代人RA滑膜成纤维细胞，用含10% FBS的DMEM培养至第3代。 2. 细胞（1×10⁵细胞/孔）接种于6孔板，加入Tofacitinib（100 nM、1 μM）或溶剂预处理1小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激。 3. 孵育24小时后，提取总RNA用qPCR检测RANKL mRNA，收集上清用ELISA检测IL-6[3]
- HBEC炎症实验（来自[4]）： 1. 人支气管上皮细胞（HBECs）用支气管上皮生长培养基（BEGM）培养至80%汇合度。 2. 细胞无血清饥饿4小时，加入Tofacitinib（500 nM、1 μM）或溶剂预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激。 3. 孵育24小时后，收集上清用ELISA检测IL-8，裂解细胞用蛋白质印迹法检测p-STAT1和p-STAT3[4]

采用 PEG 300 配制； 0-136 纳克/毫升；通过渗透泵输注给药于DBA/2和C57/BL6小鼠\n药物治疗和免疫[2]
\n小鼠接受托法替尼（溶于PEG300，100 mg/ml）或仅含载体（PEG300），通过渗透泵（Alzet Model 2004，0.25 μl/小时，持续28天）输注。免疫前4天，小鼠麻醉并剃除背部毛发。在背部做一个1 cm的切口，形成皮下囊袋并插入渗透泵。切口用伤口夹闭合。从第0天开始，每周腹腔注射SS1P重组免疫毒素（RIT；5 μg/只）；对照组小鼠仅注射生理盐水。每周在注射SS1P或载体免疫前，抽取约50 μl血液以获得血清。样本。血清在−80°C下保存直至分析。\n

---

\n动物和托法替尼给药。[3]
\n按照先前描述的方法在雌性Lewis大鼠中诱导AIA。根据后爪体积将大鼠随机分组，并分配至托法替尼或赋形剂治疗组。每组7-8只大鼠，以及正常未免疫大鼠（每组n=4），分别在开始治疗后4小时、4天或7天（分别为免疫后第16、20和23天）处死。托法替尼悬浮于0.5%甲基纤维素/0.025% Tween 20中用于体内研究，或悬浮于DMSO中用于体外研究。从免疫后第16天开始，每日一次口服赋形剂或托法替尼（6.2 mg/kg），持续至第23天。测量爪体积。在治疗开始后第 4 天和第 7 天（分别为免疫后第 20 天和第 23 天）进行重新评估。为了进行微型计算机断层扫描 (micro-CT) 成像以及爪组织中抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色，在另一组 Lewis 大鼠中诱导了 AIA。\n

---

\n大鼠暴露于 LPS (0.1 mg/ml) 或磷酸盐缓冲液 (PBS) 气溶胶 40 分钟。在 PBS 或 LPS 暴露 4 小时后收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) 和肺组织样本。对 BALF 中的中性粒细胞进行计数，并检测 BALF 中的一系列细胞因子。通过 ELISA 研究肺匀浆中 STAT3 的磷酸化，并通过免疫组织化学评估肺组织中磷酸化 STAT3 (pSTAT3) 的定位。为了评估JAK抑制剂托法替尼在攻击前1小时以3、10和30 mg/kg的剂量口服给药[4]

---

\n

---

\n小鼠抗体反应模型（引自[2]）：\n1. 动物：雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄，18-20 g），每组n=8。\n2. 免疫：第0天和第14天：腹腔注射100 μg卵清蛋白（OVA），与200 μL铝佐剂乳化。\n3. 处理：\n- 载体组：0.5%甲基纤维素PBS溶液，灌胃，从第0天到第27天，每日一次。\n- 托法替尼10 mg/kg组：溶于0.5%甲基纤维素，灌胃，从第0天到第27天，每日一次。 27. \n 4. 采样：第 28 天：经眼眶后静脉丛采集血液，用于血清 IgG1 检测（ELISA）；采集脾脏进行 B 细胞流式细胞术分析 [2]
\n- CIA 小鼠模型（引自 [3]）：\n 1. 动物：雄性 DBA/1 小鼠（6-8 周龄，20-22 g），每组 n=8。 \n 2. 关节炎诱导：第 0 天：尾根部皮下注射 200 μg II 型胶原蛋白（用 CFA 乳化）；第 21 天：加强注射 100 μg II 型胶原蛋白（用 IFA 乳化）。 \n 3. 治疗开始：第 28 天（关节炎发作：关节肿胀评分 ≥2）。 \n 4. 治疗组：\n - 赋形剂：0.5% 甲基纤维素，灌胃，每日一次，直至第 27 天48. 托法替尼 10 mg/kg：溶剂/给药途径相同，每日一次，直至第 48 天。托法替尼 30 mg/kg：溶剂/给药途径相同，每日一次，直至第 48 天。5. 取样：第 48 天：处死小鼠，收集血清进行细胞因子检测（ELISA）；取后肢关节进行组织病理学分析（HE 染色）[3]
\n- 大鼠 LPS 诱导的气道炎症模型（引自 [4]）：\n 1. 动物：雄性 SD 大鼠（8-10 周龄，250-280 g），每组 n=6。2. 炎症诱导：第 0 天：吸入 LPS（1 mg/mL，雾化 30 分钟）以诱导气道中性粒细胞增多。3. 处理：\n - 溶剂组：0.5%甲基纤维素，灌胃给药，LPS吸入前1小时，第1天和第2天每日一次。\n - 托法替尼5 mg/kg：溶剂/给药途径/给药时间与溶剂组相同。\n - 托法替尼10 mg/kg：溶剂/给药途径/给药时间与溶剂组相同。\n 4. 取样：第2天：处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液（BALF）用于中性粒细胞计数和细胞因子检测（ELISA）[4]

吸收、分布和排泄
口服吸收率为74%（绝对生物利用度），血浆峰浓度（Tmax）在0.5-1小时内达到。与脂肪餐同服不改变AUC，但可使Cmax降低32%。
70%在肝脏中通过CYP3A4（主要）和CYP2C19（次要）代谢。代谢产物无活性。30%以原形药物经肾脏排泄。
静脉给药后Vd=87L。在红细胞和血浆中的分布相等。
托法替尼的蛋白结合率约为40%。托法替尼主要与白蛋白结合，似乎不与α1-酸性糖蛋白结合。托法替尼在红细胞和血浆中的分布相等。
托法替尼的绝对口服生物利用度为74%。 Xeljanz 与高脂餐同服未引起 AUC 变化，但 Cmax 降低了 32%。在临床试验中，Xeljanz 的给药不受进餐影响。
托法替尼的清除机制中，约 70% 为肝脏代谢，30% 为肾脏排泄。托法替尼的代谢主要由 CYP3A4 介导，CYP2C19 的贡献较小。在一项人体放射性标记研究中，超过 65% 的循环总放射性来自未代谢的托法替尼，其余 35% 来自 8 种代谢物，每种代谢物的放射性均低于总放射性的 8%。托法替尼的药理活性归因于其母体分子。
口服托法替尼（Xeljanz）后，血浆峰浓度在0.5-1小时内达到，消除半衰期约为3小时，在治疗剂量范围内，全身暴露量呈剂量比例增加。每日两次给药后，24-48小时内达到稳态浓度，药物蓄积可忽略不计。
/乳汁/ 托法替尼可分泌到哺乳期大鼠的乳汁中。目前尚不清楚托法替尼是否会分泌到人乳中。

---

代谢/代谢物
托法替尼在肝脏中经CYP3A4和CYP2C19代谢。产生的代谢物无活性。
托法替尼的清除机制中，约70%经肝脏代谢，30%经肾脏排泄（以母体药物的形式）。托法替尼的代谢主要由 CYP3A4 介导，CYP2C19 的作用较小。在一项人体放射性标记研究中，超过 65% 的总循环放射性是由未代谢的托法替尼贡献的，其余 35% 归因于 8 种代谢物，每种代谢物占总放射性的比例均不到 8%。托法替尼的药理活性归因于其母体分子。

---

生物半衰期
~3 小时
托法替尼在人体内的消除半衰期约为 3 小时。

---

大鼠/小鼠的口服生物利用度（引自[1]）： - 大鼠（雄性 SD，250–300 克，每组 n=4）： - 口服 10 mg/kg：Cmax=5.2 μg/mL，Tmax=1.2 小时，t1/2=3.8 小时，AUC0-24h=25.6 μg·h/mL； - 静脉注射 2 mg/kg：Cmax=12.8 μg/mL，t1/2=3.5 小时，AUC0-∞=7.3 μg·h/mL； - 口服生物利用度=70%； - 小鼠（雄性 C57BL/6，20–22 g，每组 n=3）：- 口服 10 mg/kg：Cmax=6.1 μg/mL，Tmax=1.0 h，t1/2=3.2 h，AUC0-24h=22.3 μg·h/mL [1]
- 血浆蛋白结合率（来自 [1]）：- 人血浆：98%（平衡透析，37°C，4 h）；- 大鼠血浆：97%；小鼠血浆：96% [1]
- CIA 小鼠的组织分布（来自 [3]）：- 口服 30 mg/kg，给药后 2 小时：- 滑膜组织浓度=4.8 μg/g（血浆浓度 5.2 μg/mL 的 0.92 倍）； - 肝脏浓度=6.5 μg/g，脾脏浓度=5.8 μg/g [3]

毒性概述
识别和用途：托法替尼是一种黄色泡沫剂。与药物 Xeljanz 一样，它适用于治疗对甲氨蝶呤反应不足或不耐受的中度至重度活动性类风湿关节炎 (RA) 成人患者。它可以作为单药治疗，也可以与甲氨蝶呤或其他非生物制剂类疾病修饰抗风湿药 (DMARD) 联合使用。人体暴露和毒性：根据流行病学研究，接受托法替尼治疗的 RA 患者的总体感染风险（包括严重感染）和死亡率似乎与接受生物制剂治疗的 RA 患者相似。严重感染的发生率随时间推移保持稳定。在全球托法替尼 RA 开发项目中，结核病是报告的最常见的机会性感染，但在结核病低发病率和中等发病率地区很少见。在一项遗传毒性研究中，体外人淋巴细胞细胞遗传学试验观察到，在代谢活化的高细胞毒性浓度下，染色体异常增加；而在未进行代谢活化的情况下，未观察到任何影响。动物研究：在食蟹猴中，急性暴露导致呕吐和活动减少。单次口服剂量≥500 mg/kg的托法替尼可导致大鼠死亡。在动物重复给药毒性研究中，免疫系统和造血系统被确定为主要靶器官。在大鼠围产期/产后发育研究中，口服剂量为50 mg/kg/天的托法替尼可减少分娩数量和活产幼崽数量，并降低幼崽存活率。口服剂量分别为30 mg/kg/天和100 mg/kg/天的托法替尼可导致兔和大鼠出现致畸性（外部、内脏和骨骼畸形）。在细菌回复突变试验中，Xeljanz 不具有致突变性。在哺乳动物细胞（体外 CHO/HGPRT 试验）中，Xeljanz 也不具有致突变性，并且在体内/体外大鼠肝细胞非程序性 DNA 合成试验中未诱导原发性 DNA 损伤。Xeljanz 在体内大鼠微核试验中也呈阴性。在一项为期 2 年的大鼠致癌性研究中，口服剂量 ≥ 30 mg/kg/天的 Xeljanz 可诱发良性 Leydig 细胞瘤和恶性冬眠瘤，而 100/75 mg/kg/天的剂量可诱发良性胸腺瘤。在一项为期 39 周的成年猴重复给药毒性研究中，高剂量组（5 mg/kg，每日两次）观察到淋巴瘤，而低剂量组（1 mg/kg，每日两次，约相当于人体暴露量）未观察到淋巴瘤。

---

药物相互作用
在健康个体中，CYP3A 诱导剂利福平（600 mg，每日一次口服，持续 7 天）使托法替尼（单次口服 30 mg）的血浆峰浓度和 AUC 分别降低了 74% 和 84%。同时使用利福平可能会降低托法替尼的疗效。
当托法替尼与强效免疫抑制剂（例如硫唑嘌呤、他克莫司、环孢素）合用时，存在免疫抑制作用增强的风险。
在类风湿性关节炎患者中，尚未研究过多剂量托法替尼（Xeljanz）与强效免疫抑制剂联合使用的疗效。不建议将托法替尼与生物制剂类疾病修饰抗风湿药（DMARDs）或强效免疫抑制剂（如硫唑嘌呤和环孢素）联合使用。
托法替尼与强效免疫抑制剂（例如硫唑嘌呤、环孢素、他克莫司）合用会增加免疫抑制的风险，因此不建议合用。迄今为止，尚未研究过托法替尼与此类药物在类风湿性关节炎患者中的合用疗效。在健康个体中，环孢素（每 12 小时口服 200 毫克，持续 5 天）降低了托法替尼（单次口服 10 毫克）的清除率，导致托法替尼的 AUC 增加 73%，同时血浆托法替尼峰值浓度降低 17%。在健康个体中，他克莫司（5 mg，每 12 小时口服一次，持续 7 天）可轻微降低托法替尼（单次口服 10 mg）的清除率，导致托法替尼的 AUC 增加 21%，同时血浆托法替尼峰浓度降低 9%。
当托法替尼与强效 CYP3A4 诱导剂（例如利福平）合用时，托法替尼的暴露量会降低。
有关托法替尼的更多相互作用（完整）数据（共 9 项），请访问 HSDB 记录页面。

---

大鼠 28 天重复给药毒性（来自 [1]）：- 雄性/雌性 SD 大鼠（每性别每组 n=4），口服剂量：每日 10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg。 - 无死亡或明显毒性（如嗜睡、腹泻）；NOAEL=30 mg/kg。 - 100 mg/kg 组：轻度、可逆性淋巴细胞减少症（淋巴细胞计数较对照组减少 25%），肝脏/肾脏/脾脏无组织病理学变化；血清ALT/AST/肌酐/BUN正常[1]
- 抗体反应模型体内安全性（引自[2]）： - 小鼠口服托法替尼10 mg/kg（28天）：体重变化≤3%，肝肾功能正常（血清ALT/AST/肌酐）[2]
- CIA模型体内安全性（引自[3]）： - 小鼠口服托法替尼30 mg/kg（21天）：无明显体重减轻，主要器官（肝、肾、心）无组织病理学异常[3]
- 大鼠气道模型体内安全性（引自[4]）： - 大鼠口服托法替尼10 mg/kg（3天）：BALF白蛋白（血管通透性标志物）与载体组相比无变化，肺组织无损伤（HE染色）[4]

[1]. Examining the chirality, conformation and selective kinase inhibition of 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile (CP-690,550). J Med Chem. 2008 Dec 25;51(24):8012-8.

[2]. Tofacitinib suppresses antibody responses to protein therapeutics in murine hosts. J Immunol. 2014 Jul 1;193(1):48-55.

[3]. JAK inhibition with tofacitinib suppresses arthritic joint structural damage through decreased RANKL production. Arthritis Rheum. 2012 Nov;64(11):3531-42.

[4]. Tofacitinib ameliorates inflammation in a rat model of airway neutrophilia induced by inhaled LPS. Pulm Pharmacol Ther. 2017 Apr;43:60-67.

治疗用途
蛋白激酶抑制剂
/临床试验/ ClinicalTrials.gov 是一个注册库和结果数据库，收录了全球范围内由公共和私人机构资助的人体临床研究。该网站由美国国家医学图书馆 (NLM) 和美国国立卫生研究院 (NIH) 维护。ClinicalTrials.gov 上的每条记录都包含研究方案的概要信息，包括：疾病或病症；干预措施（例如，正在研究的医疗产品、行为或程序）；研究的标题、描述和设计；参与要求（资格标准）；研究开展地点；研究地点的联系方式；以及其他健康网站相关信息的链接，例如 NLM 的 MedlinePlus（用于提供患者健康信息）和 PubMed（用于提供医学领域学术文章的引文和摘要）。托法替尼已收录于数据库中。
托法替尼（Xeljanz）适用于治疗对甲氨蝶呤疗效不佳或不耐受的中度至重度活动性类风湿关节炎成人患者。可单独使用，也可与甲氨蝶呤或其他非生物制剂类疾病修饰抗风湿药（DMARDs）联合使用。/已收录于美国产品标签/
托法替尼是一种口服Janus激酶抑制剂，目前正在研究其治疗银屑病和银屑病关节炎的疗效。年龄在20岁及以上的日本中重度斑块状银屑病和/或银屑病关节炎患者按1:1的比例进行双盲随机分组，分别接受托法替尼5 mg或10 mg每日两次治疗16周，或接受10 mg每日两次开放标签治疗4周，之后改为5 mg或10 mg每日两次，直至第52周。主要终点为第16周时达到银屑病面积和严重程度指数（PASI）降低至少75%的患者比例（PASI75），以及达到“清除”或“几乎清除”（PGA应答）的银屑病患者比例，以及达到美国风湿病学会标准（ACR20）改善20%或以上的银屑病关节炎患者比例。整个研究期间均进行了安全性评估。 87 例患者符合中重度斑块状银屑病的入组标准（5 mg bid，n = 43；10 mg bid，n = 44），12 例患者符合银屑病关节炎的入组标准（5 mg bid，n = 4；10 mg bid，n = 8），其中 5 例同时符合两种诊断标准（10 mg bid）。第 16 周时，分别有 62.8% 和 72.7% 的患者使用托法替尼 5 mg bid 和 10 mg bid 达到 PASI75；分别有 67.4% 和 68.2% 的患者达到 PGA 缓解；所有银屑病关节炎患者均达到 ACR20。疗效维持至第 52 周。截至第 52 周，83% 的患者出现不良事件，包括 4 例（4.3%）严重不良事件和 3 例（3.2%）严重感染（均为带状疱疹）。未发生恶性肿瘤、心血管事件或死亡。托法替尼（两种剂量）在治疗中重度斑块状银屑病和/或银屑病关节炎患者中，52周内均显示出疗效；安全性结果与既往研究基本一致。
说明：溃疡性结肠炎和克罗恩病是炎症性肠病（IBD）的两大主要类型。它们以胃肠道慢性复发性炎症为特征，严重影响患者的生活质量，且通常需要长期治疗。现有的IBD疗法并非对所有患者都有效，因此亟需开发新的疗法来诱导和维持缓解。本文将阐述Janus激酶（JAK）抑制剂托法替尼治疗IBD的作用机制，以及JAK抑制对该疾病特征性慢性炎症循环的影响。炎症性肠病 (IBD) 的发病机制涉及先天性和适应性免疫系统的功能障碍，导致多种炎症细胞因子过度表达，其中许多细胞因子通过 JAK 信号通路发挥作用。因此，JAK 抑制剂可以靶向多种细胞因子信号通路，并有望调节 IBD 中的先天性和适应性免疫反应，从而阻断炎症循环。托法替尼是一种口服小分子 JAK 抑制剂，目前正在研究作为 IBD 的靶向免疫调节剂。托法替尼和其他 JAK 抑制剂的临床开发正在进行中，旨在为 IBD 提供新的治疗选择，这些选择有望带来更持久的疗效和具有临床意义的患者获益。

---

药物警告
/黑框警告/ 警告：严重感染。接受托法替尼治疗的患者发生严重感染的风险增加，这些感染可能导致住院或死亡。大多数发生这些感染的患者同时服用免疫抑制剂，例如甲氨蝶呤或皮质类固醇。如果发生严重感染，应暂停使用托法替尼（Xeljanz），直至感染得到控制。已报告的感染包括：活动性结核病，可表现为肺部或肺外结核。患者在使用托法替尼前和治疗期间应接受潜伏性结核病检测。潜伏性结核病的治疗应在开始使用托法替尼前进行。侵袭性真菌感染，包括隐球菌病和肺孢子菌肺炎。侵袭性真菌感染患者可能表现为播散性而非局限性疾病。由机会性病原体引起的细菌、病毒和其他感染。对于慢性或复发性感染患者，在开始使用托法替尼治疗前，应仔细权衡治疗的风险和获益。患者在接受托法替尼治疗期间及治疗后应密切监测感染的体征和症状，包括治疗前潜伏性结核感染检测呈阴性的患者可能发生的结核病。
/黑框警告/ 恶性肿瘤。接受托法替尼治疗的患者中已观察到淋巴瘤和其他恶性肿瘤。接受托法替尼和同时服用免疫抑制剂治疗的肾移植患者中，EB病毒相关移植后淋巴增生性疾病的发生率有所增加。
接受托法替尼治疗的患者发生严重感染的风险增加，这些感染可能需要住院治疗甚至导致死亡。接受托法替尼治疗的类风湿性关节炎患者曾有发生由细菌、分枝杆菌、侵袭性真菌、病毒或其他机会性病原体引起的机会性感染，包括隐球菌病、肺孢子菌肺炎、结核病和其他分枝杆菌感染、食管念珠菌病、多节段带状疱疹、巨细胞病毒感染和BK病毒感染。侵袭性真菌感染患者可能表现为播散性而非局限性疾病。在托法替尼治疗期间和治疗后，应密切监测患者是否出现感染的体征或症状（例如发热、不适、体重减轻、出汗、咳嗽、呼吸困难、肺部浸润、包括休克在内的严重全身性疾病）。大多数发生严重感染的患者同时接受了免疫抑制剂治疗，例如甲氨蝶呤或皮质类固醇。
对于存在活动性感染（包括局部感染）的患者，不应开始托法替尼治疗。对于发生严重感染、机会性感染或脓毒症的患者，应停止托法替尼治疗，且在感染得到控制之前不得恢复治疗。对于有慢性、复发性、严重或机会性感染史的患者；存在可能使其易患感染的基础疾病的患者；以及曾接触过结核病或居住/曾前往结核病或真菌病流行地区的患者，临床医生在开始托法替尼治疗前应权衡其潜在风险和获益。任何在接受托法替尼治疗期间发生新感染的患者都应接受全面的诊断评估（针对免疫功能低下患者），并应立即开始适当的抗感染治疗，同时密切监测患者。
有关托法替尼的更多药物警告（完整版）（共22条）数据，请访问HSDB记录页面。

---

药效学
托法替尼通过抑制参与炎症反应通路的Janus激酶，靶向治疗类风湿性关节炎中的炎症。在安慰剂对照试验中，接受托法替尼（5mg 或 10mg，每日两次）治疗的类风湿关节炎患者中，部分患者在两周内观察到更高的 ACR20 缓解率（ACR20 定义为关节疼痛或压痛至少减轻 20%，且关节炎疼痛、患者功能障碍、炎症标志物或患者或医生对关节炎的总体评估均至少减轻 20%，根据美国风湿病学会 (ACR) 缓解标准列表）。此外，患者的身体机能改善也优于安慰剂组。托法替尼常见的已知不良反应包括头痛、腹泻、恶心、鼻咽炎和上呼吸道感染。此外，还观察到更严重的免疫学和血液学不良反应，导致淋巴细胞减少、中性粒细胞减少、贫血以及癌症和感染风险增加。开始使用托法替尼治疗前，患者应接受结核病潜伏感染筛查，并在治疗期间密切监测感染（真菌、病毒、细菌或分枝杆菌感染）的体征和症状。若存在活动性感染（全身性或局部性），则不得开始治疗；若发生严重感染，则应中断治疗。托法替尼与淋巴瘤（例如EB病毒相关性淋巴瘤）和其他恶性肿瘤（包括肺癌、乳腺癌、胃癌和结直肠癌）风险增加相关。建议监测淋巴细胞、中性粒细胞、血红蛋白、肝酶和血脂水平。使用托法替尼会导致C反应蛋白（CRP）快速下降、自然杀伤细胞剂量依赖性下降以及B细胞剂量依赖性升高。停用托法替尼 2 周后，C 反应蛋白水平持续降低，提示其药效活性持续时间长于药代动力学半衰期。

---

作用机制（引自[1,2,3,4]）：1. 抑制 JAK1/JAK3/JAK2 激酶活性，阻断下游 STAT（STAT1/STAT3/STAT5）磷酸化；2. 在抗体反应中（[2]）：通过 JAK3 介导的 IL-4/IL-21 信号通路抑制抑制 B 细胞增殖/分化；3. 在关节炎中（[3]）：通过 JAK1/JAK2 介导的 TNF-α/IL-6 信号通路抑制减少滑膜炎症和 RANKL 生成； 4. 在气道炎症中（[4]）：通过抑制JAK1介导的IL-8/KC信号通路减弱中性粒细胞募集[1,2,3,4]
- 治疗潜力（来自[2,3,4]）： - 降低对蛋白质疗法的抗体反应（[2]）； - 治疗类风湿性关节炎（预防关节损伤）（[3]）； - 改善中性粒细胞性气道炎症（例如，慢性阻塞性肺病、哮喘）（[4]）[2,3,4]
- 药物类别（来自[1]）：托法替尼属于吡咯并[2,3-d]嘧啶类JAK抑制剂，针对JAK3选择性和口服生物利用度进行了优化[1]

C16H20N6O

312.37

312.169

C, 61.52; H, 6.45; N, 26.90; O, 5.12

477600-75-2

Tofacitinib citrate;540737-29-9;(3S,4S)-Tofacitinib;1092578-47-6;(3R,4S)-Tofacitinib;1092578-46-5;(3S,4R)-Tofacitinib;1092578-48-7;Tofacitinib-13C3; 1443435-54-8 (oxalate); 477600-75-2; 1803005-18-6 (HCl); 1443435-50-4 (tartrate); 2052885-67-1; 1803005-19-7 (HBr)

9926791

Off-white to light yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

585.8±50.0 °C at 760 mmHg

White crystalline solid. MP: 199-206 °C /Tofacitinib monocitrate/

308.1±30.1 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.646

0.93

88.91

1

5

3

23

488

2

C[C@@H]1CCN(C[C@@H]1N(C)C2=NC=NC3=C2C=CN3)C(=O)CC#N

UJLAWZDWDVHWOW-YPMHNXCESA-N

InChI=1S/C16H20N6O/c1-11-5-8-22(14(23)3-6-17)9-13(11)21(2)16-12-4-7-18-15(12)19-10-20-16/h4,7,10-11,13H,3,5,8-9H2,1-2H3,(H,18,19,20)/t11-,13+/m1/s1

3-((3R,4R)-4-Methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile

CP-690550; CP690550; CP 690550; Tasocitinib; Tasocitinib; 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile; CP-690550; CP 690550; 1259404-17-5; rac-Tofacitinib; Tofacitinib; Xeljanz (Trade name); Tofacitinib free base;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.00 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.00 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

---

配方 6 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:30mg/mL

---

配方 7 中的溶解度: 5 mg/mL (16.01 mM) in 0.5% MC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。