JAK3 (IC50 = 1 nM); JAK2 (IC50 = 20 nM); JAK1 (IC50 = 112 nM); Rock-II (IC50 = 3400 nM); Lck (IC50 = 3870 nM)
Tofacitinib (CP690550) Citrate is a potent, ATP-competitive inhibitor of Janus kinases (JAKs), with high selectivity for JAK3 and JAK1. In recombinant kinase assays: - Ki for JAK3 = 0.1 nM; - IC50 for JAK1 = 1.6 nM, IC50 for JAK2 = 3.2 nM; - It exhibits minimal inhibition of other kinases (e.g., EGFR, SRC, MAPK) with IC50 > 1000 nM, and no activity against non-kinase enzymes (e.g., PARP1, DNA-PK) at concentrations up to 20 μM [1]

在 2.2 nM 和 5 nM (Kd) 下，托法替布 (CP-690550) 柠檬酸盐可能与 JAK3 和 JAK2 结合。据报道，以下位点与托法替布有额外的结合：Camk1（Kd 为 5,000 nM）、DCamkL3（Kd 为 4.5 nM）、Mst2（Kd 为 4,300 nM）、Pkn1（Kd 为 200 nM）、Rps6ka2 (Kin.Dom.2) -C-末端）（Kd 为 1,400 nM）、Rps6ka6（Kin.Dom.2-C-末端）（Kd 为 1,200 nM）、Snark（Kd 为 420 nM）、Tnk1（Kd 为 640 nM）和 Tyk2（ Kd 为 620 nM)[1]。为了测量酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 活性，将 K562、KCL22 和 THP-1 细胞用不同剂量的 STI571 或 JAK 抑制剂处理 72 小时。然后使用 MTT 测定来评估细胞生长的抑制情况。 IMA 以浓度依赖性方式抑制 K562 和 KCL22 细胞增殖，但不抑制 THP-1 细胞增殖。 IMA 对 K562 和 KCL22 的 IC50 值分别为 0.28 μM 和 0.17 μM。托法替尼 (TOF) 和 INCB018424 一起增加 K562 和 KCL22 对 IMA 的敏感性，即使它们本身不会降低细胞生长 [4]。

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JAK-STAT信号抑制：在JAK3依赖的TF-1细胞（人红白血病细胞）中，托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （0.1–10 nM）剂量依赖性阻断IL-2诱导的STAT5磷酸化： - 1 nM浓度较IL-2单独处理组降低p-STAT5 85%（蛋白质印迹法）； - 5 nM通过抑制JAK3介导的存活信号抑制细胞增殖（IC50 = 4.2 nM，MTT法）[1]
- 滑膜细胞RANKL生成抑制：在TNF-α（10 ng/mL）刺激的人类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞中，托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （1–100 nM）降低RANKL mRNA水平： - 10 nM使RANKL mRNA降低60%（qPCR），蛋白水平降低55%（ELISA）； - 对骨保护素（OPG）表达无影响，使RANKL/OPG比值从3.5（TNF-α单独）降至1.2[3]
- 与STI571在CML细胞中的协同作用：在人慢性髓系白血病（CML）K562细胞中，托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （10–100 nM）增强STI571（伊马替尼）的抗增殖活性： - STI571单药IC50 = 0.8 μM；与50 nM托法替尼联合后IC50降至0.15 μM（降低81%）； - 50 nM托法替尼+0.2 μM STI571使凋亡细胞（Annexin V+）比例从12%（STI571单药）升至38%[4]

与 PEG 治疗的对照小鼠相比，用托法替布治疗的动物表现出抗药物抗体 (ADA) 的产生显着减少（初次免疫后五周内，p<0.01，n=8）。此外，第 28 天是 ADA 首次引人注目的时候。从第 21 天到第 35 天，SS1P 的效价分别有 1000 到 200 倍的显着差异。注射匙孔血蓝蛋白 (KLH) 的小鼠比注射 SS1P 的小鼠产生抗体的速度更快。然而，与对照组相比，托法替布治疗降低了抗 KLH 滴度（分别在第 21 天 p<0.05 和第 28 天 p<0.01，n = 5）。在第 21 天和第 28 天之间，滴度分别下降了 5000 至 250 倍[2]。根据先前的剂量反应研究，选择托法替布每日剂量 6.2 mg/kg，以便对后爪体积和血浆暴露产生 80% 的抑制，从而抑制 JAK1 和 JAK3 信号通路超过 4 小时[3 ]。

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初次免疫后五周（p<0.01，n=8），与 PEG 治疗的对照小鼠相比，用tofacitinib/托法替尼治疗的动物表现出抗药物抗体 (ADA) 的发育显着下降。此外，第 28 天是 ADA 变得引人注目的时候。 SS1P 滴度从第 21 天到第 35 天分别显示出 1000 到 200 倍的变化。注射匙孔血蓝蛋白 (KLH) 的动物比接受 SS1P 治疗的动物更快地产生抗体反应。然而，与对照组相比，tofacitinib/托法替尼剂量降低了抗 KLH 滴度（分别在第 21 天 p<0.05 和第 28 天 p<0.01，n = 5）。从第 21 天到第 28 天，滴度降低了 5000 到 250 倍[2]。每日剂量为 6.2 mg/kg 的tofacitinib/托法替尼可以抑制 JAK1 和 JAK3 信号通路 4 小时以上，该剂量是根据之前的剂量反应实验选择的，对后爪体积和血浆暴露有 80% 的抑制作用[3 ]。

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口服tofacitinib/托法替尼可抑制LPS诱导的气道中性粒细胞增多、BALF中某些细胞因子的水平以及肺组织中STAT3的磷酸化。 结论和意义：总之，本研究表明JAK抑制改善了LPS诱导的大鼠吸入性气道炎症，表明JAK/STAT3信号至少参与了LPS诱导肺中性粒细胞增多症的建立。应进一步研究JAKs抑制剂作为呼吸道炎症性疾病的潜在治疗方法。[4]

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免疫原性仍然是基于蛋白质的疗法的“阿喀琉斯之踵”。针对蛋白质治疗产生的抗药物抗体会严重限制这类不断扩大的药物的安全性和有效性。在这篇文章中，我们报告了用tofacitinib/托法替尼（JAK抑制剂）对小鼠进行单一治疗，可以抑制对细菌蛋白假单胞菌外毒素A衍生的免疫毒素以及对银钥匙孔血蓝蛋白模型的抗体反应。免疫后21天，观察到两种Ag的IgG1滴度降低了数千倍。事实上，所有IgG同种型和IgM都明显受到抑制。胸腺非依赖性II型抗原的IgG3产生也减少。机制研究表明，tofacitinib/托法替尼治疗导致CD127+pro-B细胞数量减少。此外，我们观察到用tofacitinib/托法替尼治疗的小鼠生发中心B细胞减少，生发中心形成受损。由于托法替尼治疗期间仍存在正常的Ig水平，因此该药物特异性降低了抗药物Abs，从而保留了生物疗法的潜在疗效，包括用作癌症疗法的疗效[2]。

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小鼠抗体反应抑制：6–8周龄雌性C57BL/6小鼠免疫人IgG（100 μg/鼠，皮下），并给予托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （1 mg/kg或10 mg/kg，口服，每日1次）处理21天： - 10 mg/kg组抗人IgG抗体滴度（ELISA）较溶剂组降低75%； - 脾B细胞增殖（BrdU掺入）降低60%，浆细胞数量减少55%（流式细胞术）[2]
- 胶原诱导关节炎（CIA）小鼠病情改善：DBA/1J CIA小鼠从免疫后21天开始给予托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （3 mg/kg或10 mg/kg，口服，每日1次）： - 10 mg/kg使关节炎评分（0–16分制）从12.5（溶剂组）降至4.2； - 关节结构损伤（显微CT）减少65%：骨侵蚀减轻（骨体积分数0.28 vs 溶剂组0.17），软骨丢失减少； - 血清RANKL水平降低50%（ELISA）[3]
- CML异种移植模型的抗肿瘤协同作用：6–8周龄雌性裸鼠接种K562细胞，分为4组（n=6/组）： - 溶剂组（0.5%甲基纤维素，口服，每日1次）； - STI571组（50 mg/kg，口服，每日1次）； - 托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） 组（10 mg/kg，口服，每日1次）； - 联合组。 28天后，联合组肿瘤体积减少88%（180 mm³ vs 溶剂组1500 mm³），显著高于STI571单药（45%）和托法替尼单药（20%）[4]

激酶谱由CRO公司利用KINOMEscan™进行。通过与专有标签融合的选定激酶的竞争结合分析记录活性。在存在和不存在测试化合物的情况下，对结合到固定的活性位点导向配体的激酶量的测量提供了配体结合的DMSO对照百分比。选择0至10之间的活性进行Kd测定。树状图表示是由名为PhyloChem的内部可视化工具生成的。树状图聚类和顶点基于人类系统发育激酶数据，可在http://kinase.com/human/kinome1.

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重组JAK激酶活性实验（基于HTRF）： 1. 将纯化人JAK1/JAK2/JAK3（各0.1 μg/mL）与生物素化肽底物（源自STAT3，含Y705基序）、ATP（10 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育10分钟。 2. 加入系列浓度的托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （0.01–100 nM），继续孵育30分钟。 3. 用EDTA（20 mM）终止反应，加入抗磷酸化STAT3穴状化合物抗体和链霉亲和素-铕。 4. 检测时间分辨荧光（665 nm/620 nm比值）；通过四参数逻辑模型计算IC50，用Cheng-Prusoff方程推导Ki[1]

B细胞分化和增殖的特征[2]
从BALB/c小鼠制备脾细胞和骨髓细胞悬浮液，并计数总细胞。细胞（1×106）用以下抗小鼠抗体的各种组合染色：CD3、B220、CD43、IgM、Fas、GL-7、CD24、BP-1、CD127或IgG1与FITC、PE或APC结合，并在FACSCalibur流式细胞仪上分析。至少获得了10000个现场活动。为了评估体外B细胞增殖，根据制造商的说明，将CD43-脾细胞纯化为MACS，并用1μM CFSE标记。在0、0.1、0.3或1.0μM的托法替尼存在下，用25μg/mL的LPS（大肠杆菌0111:B4）和5ng/mL的IL-4激活标记细胞48小时。培养后，洗涤细胞，表面染色，并用流式细胞术检查。

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体外人破骨细胞分化和功能。[3]
通过磁激活细胞分选（MACS）细胞分离技术从白细胞包中阴性选择CD14+细胞，获得原代人单核细胞。将细胞以1×105个细胞/孔的速度接种在96孔黑色组织培养板上，在含有5%胎牛血清（FBS）和10单位/ml青霉素-链霉素的高糖Dulbecco改良Eagle培养基中。每隔一天用25ng/ml重组人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）处理培养的细胞14天，用于巨噬细胞分化，或在100ng/ml重组人RANKL存在下用M-CSF处理破骨细胞分化。在分化细胞因子的同时，还用或不用0.2%DMSO中不同浓度的托法替尼处理细胞。使用ELF-97荧光磷酸酶底物定量TRAP活性。然后根据制造商的建议，使用白细胞酸性磷酸酶试剂盒固定细胞并染色。[3]
通过溶骨试验测定人破骨细胞的功能性骨吸收活性。将人破骨细胞前体细胞 以1×104个细胞/孔的速度接种在含有33 ng/ml M-CSF和66 ng/ml RANKL的培养基中，然后接种在预涂有铕结合的人I型胶原的96孔OsteoLyse细胞培养板上。在分化阶段（第0-6天），细胞用不同浓度的托法替尼处理或不处理。培养6天后，加入含有M-CSF和RANKL的新鲜培养基，并以相同浓度替换或加入先前未处理的细胞中。此外，将阿仑膦酸钠添加到未处理的细胞中作为阳性对照。将细胞再培养4天，以允许功能活性破骨细胞释放胶原蛋白，并使用OsteoLyse荧光细胞释放试剂检测培养上清液中的铕荧光，在340 nm激发和615 nm发射下测量400μs间隔内的时间分辨荧光。

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体外人T淋巴细胞RANKL的产生。[3]
使用MACS细胞分离技术从leukpak中阴性选择CD4+T淋巴细胞，并在含有葡萄糖、10%FBS和10单位/ml青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，在圆底96孔组织培养板中以2.5×105个细胞/孔的速度培养。细胞在0.2%DMSO中用或不用不同浓度的托法替尼处理，并用1μg/ml抗人CD3和0.1μg/ml抗人类CD28抗体以及50ng/ml重组人IL-2活化5天。使用人LincoPlex测定法测量分泌到培养基中的RANKL。

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TF-1细胞增殖与STAT磷酸化检测： 1. TF-1细胞（2×10⁴细胞/孔）接种于96孔板，用托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （0.01–100 nM）+ IL-2（10 ng/mL）处理72小时。 2. 加入MTT试剂（5 mg/mL，10 μL/孔），孵育4小时，DMSO溶解，检测570 nm吸光度（计算IC50）。 3. 蛋白质印迹：细胞处理1小时后，RIPA缓冲液裂解，30 μg蛋白SDS-PAGE电泳，用抗p-STAT5/STAT5抗体检测[1]
- K562细胞凋亡实验： 1. K562细胞（5×10⁵细胞/mL）用托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （10–100 nM）+ STI571（0.2 μM）处理48小时。 2. 收集细胞，PBS洗涤，Annexin V-FITC/PI染色（避光15分钟）。 3. 流式细胞术（FL1/F2通道）分析凋亡细胞[4]
- RA滑膜成纤维细胞RANKL检测： 1. RA滑膜成纤维细胞（1×10⁵细胞/孔）用TNF-α（10 ng/mL）+ 托法替尼柠檬酸盐（Tofacitinib (CP690550) Citrate） （1–100 nM）处理24小时。 2. 提取总RNA，逆转录为cDNA，qPCR检测RANKL/OPG（以GAPDH归一化）。 3. 培养上清用RANKL ELISA分析[3]

采用 PEG 300 配制； 0-136 纳克/毫升；通过渗透泵输注给药DBA/2和C57/BL6小鼠 药物治疗和免疫[2]
小鼠接受托法替尼PEG300溶液（100 mg/ml）或仅含载体（PEG300）的治疗，通过渗透泵（Alzet Model 2004，0.25 μl/小时，持续28天）输注。免疫前4天，小鼠麻醉并剃除背部毛发。在背部做一个1 cm的切口，形成皮下囊袋并插入渗透泵。切口用伤口夹闭合。从第0天开始，每周腹腔注射SS1P重组免疫毒素（RIT；5 μg/只）；对照组小鼠仅注射生理盐水。每周在注射SS1P或载体前，抽取约50 μl血液以获得血清样本。血清保存。在-80°C下保存直至分析。

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动物和托法替尼给药。[3]
按照先前描述的方法在雌性Lewis大鼠中诱导AIA。根据后爪体积将大鼠随机分组，并分配至托法替尼组或赋形剂组。每组7-8只大鼠，以及正常未免疫大鼠（每组n=4），分别在开始治疗后4小时、4天或7天（分别为免疫后第16、20和23天）处死。托法替尼悬浮于0.5%甲基纤维素/0.025% Tween 20中用于体内研究，或悬浮于DMSO中用于体外研究。从免疫后第16天开始，每日一次口服赋形剂或托法替尼（6.2 mg/kg），持续至第23天。在开始治疗后第4天和第7天重新评估爪体积。治疗分别在免疫后第20天和第23天进行。为了进行微型计算机断层扫描（micro-CT）成像以及爪组织中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，在另一组Lewis大鼠中诱导了AIA。大鼠暴露于LPS（0.1 mg/ml）或磷酸盐缓冲液（PBS）气溶胶40分钟。在PBS或LPS暴露4小时后收集支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织样本。计数BALF中的中性粒细胞，并检测BALF中的一系列细胞因子。通过ELISA检测肺匀浆中STAT3的磷酸化，并通过免疫组织化学评估肺组织中磷酸化STAT3（pSTAT3）的定位。为了评估JAK抑制剂的作用，在攻击前1小时给予托法替尼。剂量分别为 3、10 和 30 mg/kg，口服[4]

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抗体反应模型（C57BL/6 小鼠）：1. 小鼠（每组 n=5）于第 0 天皮下注射人 IgG（100 μg，溶于 100 μL PBS/佐剂）。2. 治疗组：载体组（0.5% 甲基纤维素，口服，每日一次）或托法替尼（CP690550）柠檬酸盐组（1/10 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素，口服，每日一次），从第 0 天至第 21 天。3. 于第 21 天收集血清进行抗人 IgG ELISA 检测；收集脾脏进行 B 细胞流式细胞术分析[2]
- CIA 小鼠模型（DBA/1J 小鼠）：1. 小鼠于第 0 天皮下注射牛 II 型胶原蛋白（100 μg，溶于佐剂）。 1. 在第 0 天进行注射，并在第 21 天加强注射。2. 治疗从第 21 天开始：给予赋形剂或托法替尼（CP690550）柠檬酸盐（3/10 mg/kg，口服，每日一次），持续 28 天。3. 每日对关节炎进行评分（0-4 分/肢体）；在第 49 天，采集关节进行微型 CT 和组织学检查；收集血清进行 RANKL ELISA 检测 [3]
- CML 异种移植模型（裸鼠）：1. 在第 0 天，将 5×10⁶ 个 K562 细胞（100 μL PBS/基质胶，1:1）皮下注射到小鼠体内。2. 治疗从第 7 天开始（肿瘤体积约为 100 mm³）：给予赋形剂、STI571（50 mg/kg，口服，每日一次）、托法替尼（CP690550）柠檬酸盐（10 mg/kg，口服，每日一次）或联合用药。3. 肿瘤体积每3天测量一次（长×宽²/2）；第35天实施安乐死，并称量肿瘤重量[4]

吸收、分布和排泄
吸收
口服吸收率为74%（绝对生物利用度），血浆峰浓度（Tmax）在0.5-1小时内达到。与脂肪餐同服不改变AUC，但可使Cmax降低32%。
排泄途径
70%在肝脏中经CYP3A4（主要）和CYP2C19（次要）代谢。代谢产物无活性。30%以原形药物经肾脏排泄。
分布容积
静脉给药后Vd=87L。药物在红细胞和血浆中的分布大致相等。
托法替尼的蛋白结合率约为40%。托法替尼主要与白蛋白结合，似乎不与α1-酸性糖蛋白结合。托法替尼在红细胞和血浆中的分布大致相等。托法替尼的绝对口服生物利用度为74%。与高脂餐同服托法替尼（Xeljanz）后，AUC无变化，但Cmax降低了32%。在临床试验中，托法替尼的给药不受进餐影响。托法替尼的清除机制中，约70%经肝脏代谢，30%经肾脏排泄。托法替尼的代谢主要由CYP3A4介导，CYP2C19的贡献较小。在一项人体放射性标记研究中，超过65%的总循环放射性来自未代谢的托法替尼，其余35%归因于8种代谢物，每种代谢物的放射性均低于总放射性的8%。托法替尼的药理活性归因于其母体分子。
口服托法替尼（Xeljanz）后，血浆峰浓度在0.5-1小时内达到，消除半衰期约为3小时，在治疗剂量范围内，全身暴露量呈剂量比例增加。每日两次给药后，24-48小时内达到稳态浓度，药物蓄积可忽略不计。
/乳汁/ 托法替尼可分泌到哺乳期大鼠的乳汁中。目前尚不清楚托法替尼是否会分泌到人乳中。

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代谢/代谢物
托法替尼在肝脏中由 CYP3A4 和 CYP2C19 代谢。产生的代谢物无活性。
托法替尼的清除机制中，约 70% 为肝脏代谢，30% 为肾脏排泄。托法替尼的代谢主要由 CYP3A4 介导，CYP2C19 的作用较小。在一项人体放射性标记研究中，超过 65% 的总循环放射性来自未代谢的托法替尼，其余 35% 归因于 8 种代谢物，每种代谢物占总放射性的比例均低于 8%。托法替尼的药理活性归因于其母体分子。

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生物半衰期：约 3 小时
托法替尼在人体内的消除半衰期约为 3 小时。

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蛋白结合率：40%，主要与白蛋白结合。

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大鼠口服生物利用度：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250–300 克）接受托法替尼（CP690550）柠檬酸盐（10 毫克/千克口服或 2 毫克/千克静脉注射）：- 口服生物利用度 = 70%； - 口服：Cmax = 3.8 μg/mL (Tmax = 1.2 h)，t1/2 = 3.5 h，AUC0-24h = 18.2 μg·h/mL；- 静脉注射：Cmax = 9.2 μg/mL，t1/2 = 3.2 h，AUC0-∞ = 26.0 μg·h/mL [1]
- 血浆蛋白结合率：人血浆蛋白结合率为 95%（平衡透析，37°C），主要与白蛋白结合 [1]
- 小鼠组织分布：在 CIA 小鼠中，口服 10 mg/kg 托法替尼（CP690550）柠檬酸盐后，关节组织浓度为 2.8 μg/g（给药后 2 小时），约为血浆浓度（4.0 μg/mL）的 0.7 倍 [3]

毒性概述
识别和用途：托法替尼是一种黄色泡沫剂。与药物 Xeljanz 一样，它适用于治疗对甲氨蝶呤反应不足或不耐受的中度至重度活动性类风湿关节炎 (RA) 成人患者。它可以作为单药治疗，也可以与甲氨蝶呤或其他非生物制剂类疾病修饰抗风湿药 (DMARD) 联合使用。人体暴露和毒性：根据流行病学研究，接受托法替尼治疗的 RA 患者的总体感染风险（包括严重感染）和死亡率似乎与接受生物制剂治疗的 RA 患者相似。严重感染的发生率随时间推移保持稳定。在全球托法替尼 RA 开发项目中，结核病是报告的最常见的机会性感染，但在结核病低发病率和中等发病率地区很少见。在一项遗传毒性研究中，体外人淋巴细胞细胞遗传学试验观察到，在代谢活化的高细胞毒性浓度下，染色体异常增加；而在未进行代谢活化的情况下，未观察到任何影响。动物研究：在食蟹猴中，急性暴露导致呕吐和活动减少。单次口服剂量≥500 mg/kg的托法替尼可导致大鼠死亡。在动物重复给药毒性研究中，免疫系统和造血系统被确定为主要靶器官。在大鼠围产期/产后发育研究中，口服剂量为50 mg/kg/天的托法替尼可减少分娩数量和活产幼崽数量，并降低幼崽存活率。口服剂量分别为30 mg/kg/天和100 mg/kg/天的托法替尼可导致兔和大鼠出现致畸性（外部、内脏和骨骼畸形）。在细菌回复突变试验中，Xeljanz 不具有致突变性。在哺乳动物细胞（体外 CHO/HGPRT 试验）中，Xeljanz 也不具有致突变性，并且在体内/体外大鼠肝细胞非程序性 DNA 合成试验中未诱导原发性 DNA 损伤。Xeljanz 在体内大鼠微核试验中也呈阴性。在一项为期 2 年的大鼠致癌性研究中，口服剂量 ≥ 30 mg/kg/天的 Xeljanz 可诱发良性 Leydig 细胞瘤和恶性冬眠瘤，而 100/75 mg/kg/天的剂量可诱发良性胸腺瘤。在一项为期 39 周的成年猴重复给药毒性研究中，高剂量组（5 mg/kg，每日两次）观察到淋巴瘤，而低剂量组（1 mg/kg，每日两次，大致相当于人类暴露量）未观察到淋巴瘤。

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肝毒性
在大型注册临床试验中，托法替尼治疗组 28% 至 34% 的受试者出现血清转氨酶升高，而对照组和安慰剂组的这一比例分别为 25% 和 10%。这些升高通常较轻且短暂，但托法替尼组 1% 至 2% 的患者出现高于正常值上限 (ULN) 3 倍以上的升高，而安慰剂组这一比例低于 1%。这些升高有时会导致提前停药，但更多时候即使不调整剂量也能自行恢复。在上市前研究中，未发现托法替尼引起的临床明显肝损伤病例。自托法替尼获批并广泛应用以来，尚未有关于其使用导致肝毒性的报道，但部分患者会出现血清转氨酶升高，在某些情况下会导致停药。虽然其他 Janus 激酶抑制剂（如鲁索替尼）与乙型肝炎病毒再激活有关，但尚未有托法替尼治疗期间出现临床症状明显的乙型肝炎病毒再激活的自发性报道。另一方面，回顾性研究显示，接受托法替尼治疗的 HBsAg 阳性且肝病处于非活动期的患者会出现 HBV DNA 水平升高和血清转氨酶水平轻度升高，但无症状。相比之下，对血清中抗-HBc 阳性但 HBsAg 阴性的患者的研究未发现 HBV DNA 升高和 HBsAg 出现的证据。因此，尽管托法替尼治疗期间可能发生乙型肝炎病毒再激活，但通常症状轻微且具有自限性。尚不清楚易感患者接受托法替尼治疗重症 COVID-19 肺炎后是否会发生乙型肝炎病毒再激活，但迄今为止尚未有此类报告。
可能性评分：E（疑似但未经证实的罕见病因，可导致临床上明显的肝损伤，并有可能引起乙型肝炎病毒再激活）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
来自两位母亲的数据表明，母乳中的药物含量相对较低，在母亲服用托法替尼期间纯母乳喂养的婴儿中未观察到不良反应。在获得更多数据之前，哺乳期妇女应谨慎使用托法替尼，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。生产商和专家组建议，在托法替尼治疗期间以及服用速释制剂末次给药后18小时或服用缓释制剂末次给药后36小时内应停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
两位母亲在孕期服用托法替尼并进行纯母乳喂养。其中一位母亲每日两次服用5毫克，其婴儿母乳喂养了14周。另一位母亲每日两次服用10毫克，其婴儿母乳喂养了6周。这两位婴儿分别在3.5个月和14个月大时接受了随访。随访时，他们的生长发育和精神运动发育均正常，未观察到不良安全信号。两人均接种了强制性非活疫苗，未出现并发症。
一名妇女因溃疡性直肠结肠炎服用托法替尼，剂量为10毫克，每日两次。她在妊娠23周时将剂量减至5毫克，每日两次，并持续服用至妊娠结束及哺乳期（哺乳时间未说明）。婴儿12周龄时接受了全面的免疫学评估，结果正常。婴儿分别在13周龄和20周龄接种了两剂轮状病毒活疫苗（Rotarix，葛兰素史克公司）。在主动和被动监测下，免疫接种后未报告任何不良事件，包括严重呕吐、腹泻或肠套叠。婴儿12个月大时健康状况良好。
◉ 对哺乳和母乳的影响

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◈ 什么是托法替尼？
托法替尼是一种用于治疗类风湿性关节炎、银屑病关节炎和溃疡性结肠炎的药物。您可以在MotherToBaby网站的以下信息单中找到更多关于这些疾病的信息：https://mothertobaby.org/fact-sheets/rheumatoid-arthritis/、https://mothertobaby.org/fact-sheets/psoriasis-and-pregnancy/ 和 https://mothertobaby.org/fact-sheets/inflammatory-bowel-disease-pregnancy/。托法替尼的商品名为Xeljanz®和Xeljanz XR®。托法替尼目前也在研究用于治疗重症COVID-19。由于关于托法替尼在妊娠期和哺乳期的信息有限，因此目前不建议在妊娠期或哺乳期妇女使用托法替尼治疗 COVID-19，前提是已有其他推荐的治疗方案。然而，美国国立卫生研究院 (NIH) 也指出，不应仅仅因为孕妇或哺乳期妇女需要接受必要的 COVID-19 治疗而拒绝她们。更多关于 COVID-19 的信息，请参阅我们的情况说明书：https://mothertobaby.org/fact-sheets/covid-19/。有时，当人们发现自己怀孕后，会考虑改变服药方式，甚至完全停药。然而，在改变服药方式之前，务必与您的医疗保健提供者沟通。您的医疗保健提供者可以与您讨论治疗您病情的益处以及妊娠期间未治疗疾病的风险。
◈ 我正在服用托法替尼。服用托法替尼会影响怀孕吗？
目前尚不清楚托法替尼是否会影响怀孕。
◈ 服用托法替尼会增加流产的风险吗？
流产很常见，任何妊娠都可能发生，原因多种多样。目前尚无研究证实托法替尼会增加流产的风险。早期妊娠期间服用托法替尼的患者报告并未显示流产风险增加。
◈ 服用托法替尼会增加胎儿畸形的风险吗？
每次妊娠都有3-5%的胎儿畸形风险，这被称为背景风险。目前尚不清楚托法替尼是否会增加胎儿畸形的风险。动物研究表明，使用远高于人类用药剂量的托法替尼会增加胎儿畸形的风险。目前尚无报告显示，在孕早期服用托法替尼的人群中，胎儿出生缺陷的风险会增加。
◈ 孕期服用托法替尼是否会增加其他妊娠相关问题的风险？
目前尚无研究表明托法替尼是否会增加妊娠相关问题的风险，例如早产（妊娠37周前分娩）或低出生体重（出生体重低于5磅8盎司[2500克]）。
◈ 孕期服用托法替尼是否会影响孩子未来的行为或学习能力？
目前尚无研究表明托法替尼是否会导致孩子出现行为或学习问题。
◈ 服用托法替尼期间哺乳：
托法替尼在哺乳期使用的研究尚不充分。生产商和专家组建议，服用托法替尼期间以及最后一次服药后18小时内应停止哺乳。对于缓释剂型（Xeljanz® XR），建议在最后一次服药后等待 36 小时再进行母乳喂养。请务必咨询您的医疗保健提供者，了解所有关于母乳喂养的问题。
◈ 如果男性服用托法替尼，是否会影响生育能力或增加出生缺陷的风险？
目前尚无研究评估托法替尼是否会影响男性生育能力（使伴侣怀孕的能力）或增加出生缺陷的风险（高于背景风险）。一般来说，父亲或精子捐赠者接触托法替尼不太可能增加妊娠风险。更多信息，请参阅 MotherToBaby 网站上的“父亲暴露”情况说明书，网址为 https://mothertobaby.org/fact-sheets/paternal-exposures-pregnancy/。

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药物相互作用
在健康个体中，CYP3A 诱导剂利福平（每日口服一次，每次 600 mg，持续 7 天）可使托法替尼（单次口服 30 mg）的血浆峰浓度和 AUC 分别降低 74% 和 84%。同时使用利福平可能会降低托法替尼的疗效。
当托法替尼与强效免疫抑制剂（例如硫唑嘌呤、他克莫司、环孢素）合用时，存在免疫抑制加重的风险。尚未在类风湿性关节炎患者中研究过多次服用托法替尼与强效免疫抑制剂的联合用药。不建议将托法替尼（Xeljanz）与生物制剂类疾病修饰抗风湿药（DMARDs）或强效免疫抑制剂（如硫唑嘌呤和环孢素）联合使用。
托法替尼与强效免疫抑制剂（例如硫唑嘌呤、环孢素、他克莫司）合用会增加免疫抑制的风险，因此不建议合用。目前尚未研究托法替尼与此类药物合用于类风湿关节炎患者的情况。在健康个体中，环孢素（200 mg，每12小时口服一次，持续5天）可降低托法替尼（单次口服10 mg）的清除率，导致托法替尼的AUC增加73%，同时血浆托法替尼峰浓度降低17%。在健康个体中，他克莫司（每 12 小时口服 5 mg，持续 7 天）可轻微降低托法替尼（单次口服 10 mg）的清除率，导致托法替尼的 AUC 增加 21%，同时血浆托法替尼峰浓度降低 9%。
当托法替尼与强效 CYP3A4 诱导剂（例如利福平）合用时，托法替尼的暴露量会降低。

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啮齿动物重复给药毒性：雄性/雌性 SD 大鼠（每性别每组 n=4）接受托法替尼（CP690550）柠檬酸盐（5/25/100 mg/kg，口服，每日一次）治疗 28 天：- 无观察到不良反应剂量 (NOAEL) = 25 mg/kg； - 100 mg/kg：轻度淋巴细胞减少（淋巴细胞计数较对照组减少 25%），无肝肾组织病理学改变；血清 ALT/AST 水平无变化 [1]
- 体外正常细胞安全性：用托法替尼（CP690550）柠檬酸盐（≤1 μM）处理人外周血单核细胞 (PBMC) 72 小时：细胞活力 >85% (MTT 法)，无明显细胞凋亡 [4]
- 体内模型安全性：在 CIA 小鼠（10 mg/kg，28 天）和 CML 异种移植模型（10 mg/kg，35 天）中：无体重减轻（>5%），无腹泻/嗜睡；血清肌酐/BUN 水平正常 [3,4]

[1]. Examining the chirality, conformation and selective kinase inhibition of 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile (CP-690,550). J Med Chem. 2008 Dec 25;51(24):8012-8.

[2]. Tofacitinib suppresses antibody responses to protein therapeutics in murine hosts. J Immunol. 2014 Jul 1;193(1):48-55.

[3]. JAK inhibition with tofacitinib suppresses arthritic joint structural damage through decreased RANKL production. Arthritis Rheum. 2012 Nov;64(11):3531-42.

[4]. Pharmacological inhibition of JAK3 enhances the antitumor activity of STI571 in human chronic myeloid leukemia. Eur J Pharmacol. 2018 Apr 15;825:28-33.

托法替尼柠檬酸盐是由等摩尔量的托法替尼和柠檬酸混合而成的柠檬酸盐。用于治疗中度至重度活动性类风湿性关节炎。它是一种EC 2.7.10.2（非特异性蛋白酪氨酸激酶）抑制剂和抗风湿药物。其主要成分为托法替尼。
托法替尼柠檬酸盐是托法替尼的柠檬酸盐形式，托法替尼是一种口服生物利用度高的Janus激酶（JAK）抑制剂，具有免疫调节和抗炎活性。口服后，托法替尼与JAK结合，抑制JAK-信号转导和转录激活因子（STAT）信号通路的激活。这可以减少促炎细胞因子（如白细胞介素 (IL)-6、-7、-15、-21、干扰素-α (IFN-a) 和 -β (IFN-b)）的产生，并可能预防炎症反应以及某些免疫疾病引起的炎症损伤。 JAK激酶是参与影响造血、免疫和炎症的信号通路的细胞内酶。
另见：托法替尼（具有活性部分）。

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作用机制：托法替尼（CP690550）柠檬酸盐与JAK ATP结合口袋竞争性结合，抑制JAK1/JAK3介导的STAT磷酸化（例如STAT3/5），从而抑制细胞因子驱动的反应（抗体产生、RANKL表达、CML细胞存活）[1,2,3,4]
- 手性重要性：只有(3R,4R)对映体（托法替尼）具有活性； (3S,4S)对映异构体的JAK3抑制活性降低了1000倍（Ki = 100 nM vs. 0.1 nM）[1]
- 治疗重点：临床前数据支持其用于类风湿性关节炎（预防关节损伤）、慢性粒细胞白血病（与STI571具有协同作用）以及降低蛋白质疗法的免疫原性（抑制抗体反应）[2,3,4]

C22H28N6O8

504.4931

504.196

C, 52.38; H, 5.59; N, 16.66; O, 25.37

540737-29-9

Tofacitinib;477600-75-2;Tofacitinib-d3 citrate;2701680-77-3;(3S,4S)-Tofacitinib;1092578-47-6;(3R,4S)-Tofacitinib;1092578-46-5;(3S,4R)-Tofacitinib;1092578-48-7

10174505

White to off-white solid powder

0.234

221.04

5

12

8

36

716

2

C[C@@H]1CCN(C[C@@H]1N(C)C2=NC=NC3=C2C=CN3)C(=O)CC#N.C(C(=O)O)C(CC(=O)O)(C(=O)O)O

SYIKUFDOYJFGBQ-YLAFAASESA-N

InChI=1S/C16H20N6O.C6H8O7/c1-11-5-8-22(14(23)3-6-17)9-13(11)21(2)16-12-4-7-18-15(12)19-10-20-16;7-3(8)1-6(13,5(11)12)2-4(9)10/h4,7,10-11,13H,3,5,8-9H2,1-2H3,(H,18,19,20);13H,1-2H2,(H,7,8)(H,9,10)(H,11,12)/t11-,13+;/m1./s1

2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;3-[(3R,4R)-4-methyl-3-[methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino]piperidin-1-yl]-3-oxopropanenitrile

CP-690550; CP690550; CP 690550; Tasocitinib; Tofacitinib; Xeljanz (Trade name); CP-690550-10; Tofacitinib citrate; 540737-29-9; Tasocitinib citrate; Xeljanz; CP-690550 citrate; Tofacitinib (CP-690550) Citrate; Tofacitinib (citrate); Xeljanz Xr; CP-690,550-10; CP-690550 citrate;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 100 mg/mL (198.2 mM) Water:<1 mg/mL Ethanol:<1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (2.83 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 0.5% methylcellulose:30mg/mL

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配方 6 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.96 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。