| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Transcription factor 4 (TCF4)/β-catenin complex; TCF4/β-catenin; KDM4A
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| 体外研究 (In Vitro) |
当应用于 Hep40、HepG2 和 Huh7 细胞系时，Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 表现出剂量依赖性细胞毒性，IC50 值分别为 0.66 μM、0.36 μM 和 0.98 μM [1]。
Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 、PKF115-584和CGP049090对肝癌细胞具有细胞毒性。 Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 、PKF115-584和CGP049090剂量依赖性地抑制Tcf4/β-catenin相互作用和转录活性。 Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 、PKF115-584和CGP049090导致HepG2和Huh7细胞凋亡和细胞周期阻滞。[1] 研究人员描述了转录因子4（TCF4）/β-catenin信号传导拮抗剂Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 作为KDM4A抑制剂的计算机模拟、体外和基于细胞的表征。通过对KDM4A晶体结构的虚拟筛选，发现PKF118-310具有潜在的抑制剂活性。内部开发的基于肽的组蛋白三甲基化测定证实了其强大的KDM4A抑制剂活性。通过细胞热位移实验鉴定了其蛋白质靶标。PKF118-310在液体和固体肿瘤细胞中均观察到抗癌活性，并显示出剂量和时间依赖性。我们证明了PKF118-310对KDM4A的先前未报道的抑制作用。我们的研究结果为开发第一种KDM4A特异性抑制剂和衍生物开辟了可能性[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
毒黄素（黄曲霉素；毒黄素；PKF-118-310）、PKF115-584和CGP049090抑制裸鼠肝细胞癌异种移植物的生长[1]
接下来，我们研究了这3种化学物质对肿瘤生长的体内影响。将HepG2细胞皮下注射到裸鼠体内以诱导肿瘤形成。对裸鼠的初步有限毒性研究表明，所有3种化学物质在剂量大于2mg/kg时都是有毒的（治疗的裸鼠在1周内死亡），而在1mg/kg的剂量下超过3周没有观察到明显的毒性。因此，我们使用1mg/kg治疗异种移植小鼠。在肿瘤生长35天后，当可触及已建立的异种移植物时，每周两次向小鼠瘤内注射3种化学物质（n=5）和对照PBS（n=5）。与载体对照组相比，在治疗第3周开始时，所有3种化学物质都有效地抑制了体内肿瘤生长（方差分析，所有3个化学物质的p<0.05）（图5a）。采集肿瘤组织并通过TUNEL染色进行分析，在用所有3种化学物质治疗的肿瘤中检测到凋亡细胞（图5b）。此外，当用特异性抗体进行免疫染色时，用所有3种化学物质治疗的肿瘤显示c-Myc、细胞周期蛋白D1和存活素表达降低（图5c仅显示了PKF118-310的代表性图像）。这些结果与我们的体外观察结果一致，即这些化学物质抑制Tcf4/β-catenin介导的转录活性。 |
| 酶活实验 |
细胞热位移测定法（CETSA）[2]
收集HCT-116细胞，用Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) （10μM）和等量的DMSO作为对照处理1小时后，用PBS洗涤。将各个样品悬浮在PBS（1.5 mL）中，分成等份（100μl），用Thermo Mixer在不同温度下加热3分钟，然后在4°C下冷却3分钟。孵育后，向样品中加入裂解缓冲液（100μl）并孵育15分钟。然后在4°C下以13000 rpm离心30分钟，去除上清液，并使用Bradford测定法测定蛋白质含量。在总蛋白提取物中，20μg被装载在10%SDS-PAGE上。硝化纤维过滤器用丽春红染色，作为同等负载的额外对照。 萤光素酶报告基因测定[1] 萤光素酶报告基因检测用于测量Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) 、PKF115-584和CGP049090破坏Tcf4/β-catenin结合能力和Tcf4/α-catenin调节的转录活性的能力。如上所述，使用哺乳动物2-杂交系统26，使用所使用的pBIND/β-catenin、pACT/Tcf4和pG5/luc质粒测量Tcf4/β-catenmin结合试验。使用B Vogelstein慷慨提供的TCF/Luc报告构建体、野生型pGL3-OT和突变体pGL3-OF进行Tcf4/β-catenin转录报告基因检测。[1] 转染前24小时，将HepG2或Huh7细胞以3×104个细胞/孔的速度接种到24孔板中。根据制造商的说明，使用Lipofectamine 2000用pBIND/β-catenin（0.35μg）、pACT/Tcf4（0.35μg）和pG5/luc（0.1μg）转染细胞进行Tcf4/β-catenin结合测定，或用野生型pGL3-OT或突变型pGL3-FF（0.7μg）进行Tcf4转录测定。将β-半乳糖苷酶表达载体（0.1μg）添加到每个转染系统中，以使转染效率正常化。4小时后，用含有不同浓度（0.2-1.6μM）每种化学物质的新培养基替换含有转染试剂的培养基。24小时后，细胞在100μl裂解缓冲液中裂解，使用Promega萤光素酶测定系统测定20μl等分试样的萤光素酶活性，或使用Promegaβ-gal测定系统测定β-gal活性。使用β-半乳糖苷酶活性测量相对光单位（RLU）并归一化转染效率。代表Tcf4转录活性的最终RLU是通过从pGL3-OT获得的标准化水平中减去pGL3-OF获得的标准水平来计算的。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖试验[2]
用xCELLigence系统检测癌症细胞增殖。将HCT-116细胞以2×104个细胞/mL的速度分装在96孔板（E-Plate，Roche）中，一式两份，以评估细胞阻抗。阻抗取决于汇流水平。将任意单位参数“细胞指数”（CI）指定为表达融合。Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) （10μM和1μM），并在接种后6小时加入DMSO，一式两份。从电镀时间到实验结束，每隔30分钟监测一次动态CI值。计算CI值并绘制在折线图和直方图上。 细胞凋亡分析[1] 根据制造商的方案进行末端dUTP介导的缺口末端标记（TUNEL）检测（Promega）。简而言之，将HepG2或Huh7细胞以10%的浓度接种在8室BD组织培养载玻片中Toxoflavin (Xanthothricin; Toxoflavine; PKF-118-310) ，PKF115-584和CGP049090分别以0.15、0.3和0.35μM的终浓度加入培养基中。孵育72小时后，用PBS洗涤细胞两次，然后用4%多聚甲醛固定25分钟。用0.1%Triton X-100的PBS洗涤固定细胞两次。然后在37°C下用TUNEL反应混合物孵育60分钟。用2×SSC洗涤后，将载玻片在黑暗中浸入含有1μg/ml碘化丙啶（PI）的PBS中5分钟，然后用PBS洗涤。用荧光显微镜和数码相机对荧光标记进行可视化和拍照（放大100倍）。对于肿瘤异种移植物的TUNEL染色，根据制造商的方案，使用ApopTag过氧化物酶原位寡连接凋亡检测试剂盒对体内实验中的4μm组织切片进行染色。 |
| 动物实验 |
裸鼠异种移植模型[1]
实验采用4-6周龄、体重18-25 g的裸鼠（ATHYMIC NU/NU；HSD）。将1 × 10⁷个活的HepG2细胞皮下注射到小鼠背部。5周后，当肿瘤直径达到约0.4-0.5 cm时，将小鼠随机分为几组（n = 5），分别瘤内注射黄曲霉素（Xanthothricin；Toxoflavine；PKF-118-310）、PKF115-584或CGP049090（均用PBS稀释），剂量为1 mg/kg，每周两次。对照组小鼠（n = 5）注射PBS。每隔 3 天用数字卡尺测量肿瘤大小，并使用公式 π/6 × 较大直径 × [较小直径] 进行计算。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠口服LD50 8400 ug/kg 肾脏、输尿管和膀胱：血尿；胃肠道：肠蠕动亢进、腹泻；感觉器官和特殊感觉：流泪；眼睛。《抗生素与化疗》，4(259)，1954
小鼠腹腔注射LDLo 3 mg/kg。《有机化学杂志》，31(900)，1966 [PMID:5907865] 小鼠静脉注射LD50 1700 ug/kg 感觉器官和特殊感觉：流泪；眼睛；胃肠道：肠蠕动亢进、腹泻；肾脏、输尿管和膀胱：血尿，《抗生素与化学疗法》，4(259)，1954 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
毒黄素是一种嘧啶并三嗪类化合物，其化学名称为1,6-二甲基-1,5,6,7-四氢嘧啶并[5,4-e][1,2,4]三嗪，在5位和7位带有羰基。它具有多种功能，包括抗肿瘤活性、毒素活性、Wnt信号通路抑制剂活性、细胞凋亡诱导活性、细菌代谢产物活性、抗菌活性和毒力因子活性。它是一种嘧啶并三嗪类化合物，也是一种羰基化合物。其功能与雷霉素类似。
据报道，在广岛链霉菌（Streptomyces hiroshimensis）和谷生伯克霍尔德氏菌（Burkholderia glumae）中均检测到了毒黄素，并有相关数据。 肝细胞癌（HCC）是全球第五大常见癌症。由于其对标准化疗具有固有耐药性，因此开发新型选择性化疗药物势在必行。 Wnt/β-catenin信号通路在发育和肿瘤发生中发挥关键作用，并在肝细胞癌（HCC）中异常激活。本研究旨在评估三种Tcf4/β-catenin复合物小分子拮抗剂（PKF118-310、PKF115-584和CGP049090）对HCC细胞系体外和体内的活性。体外实验表明，这三种化合物对三种HCC细胞系（HepG2、Hep40和Huh7）均表现出剂量依赖性的细胞毒性，但通过ATP活性测定，其对正常肝细胞（来自3位供体）的细胞毒性至少低10倍。在HepG2和Huh7细胞中，拮抗剂处理降低了Tcf4/β-catenin的结合能力和转录活性，并伴有内源性Tcf4/β-catenin靶基因c-Myc、cyclin D1和survivin的表达下调。在HepG2和Huh7细胞中，拮抗剂处理可诱导细胞凋亡和G1/S期细胞周期阻滞。所有拮抗剂均能抑制HepG2异种移植瘤模型中的体内肿瘤生长，并伴有细胞凋亡以及c-Myc、cyclin D1和survivin表达的降低。我们的结果表明，这3种Tcf4/β-catenin复合物拮抗剂是潜在的化疗药物，可能为肝细胞癌（HCC）的临床治疗提供一种通路特异性选择。[1] 表观遗传修饰在基因表达调控中发挥着重要作用。特别是，组蛋白翻译后修饰在功能性染色质组织中起着关键作用。目前已发现多种能够抑制或激活参与表观遗传组蛋白调控的某些蛋白家族的药物，其中一些已获得FDA批准用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤，或正在进行实体瘤的I/II/III期临床试验。尽管一些蛋白质家族，例如组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂，已被充分研究，但我们对组蛋白赖氨酸去甲基化酶的了解仍然不完整。我们描述了化合物PKF118-310（一种转录因子4 (TCF4)/β-catenin信号通路拮抗剂，也是KDM4A抑制剂）的计算机模拟、体外和细胞实验表征。PKF118-310的潜在抑制活性是通过对KDM4A晶体结构的虚拟筛选发现的。我们自主开发的基于肽的组蛋白三甲基化检测方法证实了其对KDM4A的强效抑制活性。通过细胞热位移分析实验鉴定了其蛋白靶点。在液体肿瘤细胞和实体瘤细胞中均观察到了PKF118-310的抗癌活性，并且显示出剂量和时间依赖性效应。我们证实了PKF118-310对KDM4A的抑制作用，而这一作用此前未被报道。我们的研究结果为开发首个 KDM4A 特异性抑制剂和衍生物提供了可能。[2] |
| 分子式 |
C7H7N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
193.166
|
| 精确质量 |
193.06
|
| 元素分析 |
C, 43.53; H, 3.65; N, 36.26; O, 16.57
|
| CAS号 |
84-82-2
|
| 相关CAS号 |
Toxoflavin-13C4;2300178-70-3
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| PubChem CID |
66541
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.65g/cm3
|
| 沸点 |
276.7ºC at 760 mmHg
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| 闪点 |
121.1ºC
|
| 折射率 |
1.76
|
| LogP |
-0.7
|
| tPSA |
82.67
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
|
| 重原子数目 |
14
|
| 分子复杂度/Complexity |
408
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
SLGRAIAQIAUZAQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C7H7N5O2/c1-11-6(13)4-5(10-7(11)14)12(2)9-3-8-4/h3H,1-2H3
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| 化学名 |
1,6-dimethylpyrimido[5,4-e][1,2,4]triazine-5,7-dione
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| 别名 |
PKF118310; PKF118 310; Toxoflavin; 84-82-2; Xanthothricin; Toxoflavine; Xanthotricin; PKF-118-310; 1,6-dimethylpyrimido[5,4-e][1,2,4]triazine-5,7-dione; GNF-Pf-67; PKF118-310
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~129.43 mM)
H2O : ~10 mg/mL (~51.77 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (517.71 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C). 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.1768 mL | 25.8839 mL | 51.7679 mL | |
| 5 mM | 1.0354 mL | 5.1768 mL | 10.3536 mL | |
| 10 mM | 0.5177 mL | 2.5884 mL | 5.1768 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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