| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Transcription factor 4 (TCF4)/β-catenin complex; TCF4/β-catenin; KDM4A
Toxoflavin targets the TCF4/β-catenin complex as an antagonist and inhibits KDM4A. It functions as an antagonist of transcription factor 4 (TCF4)/β-catenin signaling and inhibits the expression of survivin. As a KDM4A inhibitor, it was identified through virtual screening on the crystal structure of KDM4A and confirmed by peptide-based histone trimethylation assays. The compound also acts as an inhibitor of flavoproteins. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
当应用于 Hep40、HepG2 和 Huh7 细胞系时，黄霉素表现出剂量依赖性细胞毒性，IC50 值分别为 0.66 μM、0.36 μM 和 0.98 μM [1]。
黄霉素（黄霉素；黄霉素；PKF-118-310）、PKF115-584 和 CGP049090 对肝癌细胞具有细胞毒性，但对正常肝细胞无细胞毒性。黄霉素（黄霉素；黄霉素；PKF-118-310）、PKF115-584 和 CGP049090 剂量依赖性地抑制 Tcf4/β-catenin 相互作用和转录活性。 毒黄素（黄霉素；毒黄素；PKF-118-310）、PKF115-584 和 CGP049090 可诱导 HepG2 和 Huh7 细胞凋亡和细胞周期阻滞。[1] 研究人员描述了化合物 毒黄素（黄霉素；毒黄素；PKF-118-310） 的计算机模拟、体外和细胞实验表征，该化合物是转录因子 4 (TCF4)/β-catenin 信号通路的拮抗剂，也是 KDM4A 的抑制剂。PKF118-310 的潜在抑制活性是通过对 KDM4A 晶体结构的虚拟筛选发现的。内部开发的基于肽的组蛋白三甲基化分析证实了其强效的 KDM4A 抑制活性。其蛋白靶点通过细胞热位移分析实验确定。在液体和实体瘤细胞中均观察到PKF118-310的抗癌活性，且该活性呈剂量和时间依赖性。我们证实了PKF118-310对KDM4A具有此前未报道的抑制作用。我们的发现为开发首个KDM4A特异性抑制剂及其衍生物提供了可能[2]。 托索黄素在Hep40、HepG2和Huh7细胞系中表现出剂量依赖性的细胞毒性，IC50值分别为0.66 μM、0.36 μM和0.98 μM。它呈剂量依赖性地抑制Tcf4/β-catenin相互作用和转录活性。该化合物可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡和细胞周期阻滞。它对肝癌细胞具有细胞毒性，但对正常肝细胞无细胞毒性。此外，它还表现出对恶性疟原虫的强效抑制作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
黄素（黄霉素；黄素；PKF-118-310）、PKF115-584 和 CGP049090 可抑制裸鼠体内肝细胞癌异种移植瘤的生长[1]
接下来，我们研究了这三种化合物对肿瘤生长的体内影响。将 HepG2 细胞皮下注射到裸鼠体内以诱导肿瘤形成。初步的裸鼠毒性研究表明，这三种化合物在剂量大于 2 mg/kg 时均具有毒性（受试裸鼠在 1 周内死亡），而在 1 mg/kg 剂量下，3 周以上未观察到明显的毒性。因此，我们使用 1 mg/kg 的剂量治疗异种移植瘤小鼠。肿瘤生长35天后，当异种移植瘤形成并可触及时，每周两次向小鼠瘤内注射3种化学物质（n = 5）和对照PBS（n = 5）。与载体对照组相比，所有3种化学物质均在治疗第3周开始时有效抑制了体内肿瘤的生长（ANOVA，所有3种化学物质的p值均< 0.05）（图5a）。收集肿瘤组织并进行TUNEL染色分析，结果显示所有3种化学物质处理的肿瘤中均检测到凋亡细胞（图5b）。此外，使用特异性抗体进行免疫染色显示，所有3种化学物质处理的肿瘤中c-Myc、cyclin D1和survivin的表达均降低（图5c仅显示了PKF118-310的代表性图像）。这些结果与我们体外观察结果一致，即这些化学物质抑制Tcf4/β-catenin介导的转录活性。 Toxoflavin抑制裸鼠体内HCC异种移植瘤的生长。在体内研究中，将HepG2细胞皮下注射到裸鼠体内以诱导肿瘤形成，用Toxoflavin（以及PKF115-584和CGP049090）治疗可抑制肿瘤生长。该化合物的抗癌活性在液体和实体瘤细胞中均有观察到，且呈剂量和时间依赖性。 |
| 酶活实验 |
细胞热位移分析 (CETSA)[2]
HCT-116 细胞经 10 μM 毒黄素（黄霉素；毒黄素；PKF-118-310）处理 1 小时后，收集细胞并用 PBS 洗涤。同时加入等量的 DMSO 作为对照。将各样品悬浮于 1.5 mL PBS 中，分装成 100 μL 的等分试样，用恒温混匀仪在不同温度下加热 3 分钟，然后在 4°C 下冷却 3 分钟。孵育后，向样品中加入 100 μL 裂解缓冲液，并孵育 15 分钟。然后将样品在 4°C 下以 13,000 rpm 离心 30 分钟，去除上清液，并使用 Bradford 法测定蛋白质含量。取总蛋白提取物 20 μg 上样至 10% SDS-PAGE 凝胶。硝酸纤维素滤膜用丽春红染色作为上样量均一性的对照。 荧光素酶报告基因检测[1] 采用荧光素酶报告基因检测来测定毒黄素（黄霉素；毒黄素；PKF-118-310）、PKF115-584 和 CGP049090 破坏 Tcf4/β-catenin 结合能力和 Tcf4/β-catenin 调控的转录活性的能力。Tcf4/β-catenin 结合检测采用哺乳动物双杂交系统，具体方法见文献26，所用质粒为 pBIND/β-catenin、pACT/Tcf4 和 pG5/luc。使用 TCF/Luc 报告基因构建体（野生型 pGL3-OT 和突变型 pGL3-OF，由 B Vogelstein 慷慨提供）进行 Tcf4/β-catenin 转录报告基因检测。[1] 转染前 24 小时，将 HepG2 或 Huh7 细胞以 3 × 10⁴ 个细胞/孔的密度接种于 24 孔板中。使用 Lipofectamine 2000 转染试剂，按照制造商的说明，将细胞分别转染 pBIND/β-catenin (0.35 μg)、pACT/Tcf4 (0.35 μg) 和 pG5/luc (0.1 μg) 进行 Tcf4/β-catenin 结合检测，或转染野生型 pGL3-OT 或突变型 pGL3-OF (0.7 μg) 进行 Tcf4 转录检测。在每个转染体系中加入β-半乳糖苷酶表达载体（0.1 μg）以校正转染效率。4小时后，将含有转染试剂的培养基更换为含有不同浓度（0.2–1.6 μM）各化学物质的新鲜培养基。24小时后，用100 μl裂解缓冲液裂解细胞，取20 μl裂解液，分别使用Promega荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性，或使用Promega β-半乳糖苷酶检测系统检测β-半乳糖苷酶活性。测量相对光单位（RLU），并使用β-半乳糖苷酶活性校正转染效率。最终RLU值代表Tcf4转录活性，通过从pGL3-OT的标准化RLU值中减去pGL3-OF的标准化RLU值计算得出。 针对毒黄素的特异性无细胞酶/受体结合分析方案包括TCF4/β-catenin相互作用抑制分析。 KDM4A抑制剂活性通过我们自主开发的基于肽的组蛋白三甲基化检测方法进行验证。蛋白质靶点通过细胞热位移分析实验进行鉴定。该化合物抑制Tcf4/β-catenin转录活性的能力可通过报告基因检测进行评估。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验[2]
使用 xCELLigence 系统检测癌细胞增殖。将 HCT-116 细胞以 2 × 10⁴ 个细胞/mL 的浓度接种于 96 孔板（E-Plate，Roche）中，每个处理重复两次，以评估细胞阻抗。阻抗取决于细胞汇合度。我们设定一个任意单位参数“细胞指数”（CI）来表示细胞汇合度。接种 6 小时后，分别加入 10 μM 和 1 μM 的毒黄素（黄霉素；毒黄素；PKF-118-310）和 DMSO，每个处理重复两次。从接种开始到实验结束，每隔 30 分钟监测一次动态 CI 值。计算 CI 值，并绘制成折线图和直方图。 细胞凋亡分析[1] 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测（Promega），并按照制造商的方案进行操作。简而言之，将HepG2或Huh7细胞以10%的汇合度接种于8孔BD组织培养载玻片上。黄曲霉毒素（Xanthothricin；Toxoflavine；PKF-118-310）、PKF115-584和CGP049090分别以0.15、0.3和0.35 μM的终浓度加入培养基中。孵育72小时后，用PBS洗涤细胞两次，然后用4%多聚甲醛固定25分钟。固定后的细胞用含0.1% Triton X-100的PBS缓冲液洗涤两次，然后在37℃下与TUNEL反应混合物孵育60分钟。用2×SSC洗涤后，将载玻片浸入含1 μg/ml碘化丙啶（PI）的PBS缓冲液中避光孵育5分钟，然后用PBS缓冲液洗涤。使用荧光显微镜和数码相机观察并拍摄荧光标记（100倍放大）。对于肿瘤异种移植瘤的TUNEL染色，根据制造商的方案，使用ApopTag过氧化物酶原位寡核苷酸连接凋亡检测试剂盒对体内实验中肿瘤异种移植瘤的4 μm组织切片进行染色。体外细胞毒性黄素检测采用肝癌细胞系，包括Hep40、HepG2和Huh7。将细胞用不同浓度的托索黄素处理，并评估其细胞毒性以确定IC50值（分别为0.66 μM、0.36 μM和0.98 μM）。采用流式细胞术评估细胞凋亡和细胞周期阻滞。使用荧光素酶报告基因检测评估该化合物对Tcf4/β-catenin转录活性的影响。 |
| 动物实验 |
裸鼠异种移植模型[1]
实验采用4-6周龄、体重18-25 g的裸鼠（ATHYMIC NU/NU；HSD）。将1 × 10⁷个活的HepG2细胞皮下注射到小鼠背部。5周后，当肿瘤直径达到约0.4-0.5 cm时，将小鼠随机分为几组（n = 5），分别瘤内注射黄曲霉素（Xanthothricin；Toxoflavine；PKF-118-310）、PKF115-584或CGP049090（均用PBS稀释），剂量为1 mg/kg，每周两次。对照组小鼠（n = 5）注射PBS。每隔3天使用数字游标卡尺测量肿瘤大小，并使用公式π/6 × 较大直径 × [较小直径] 进行计算。 Toxoflavin的体内动物研究采用皮下移植HepG2异种肿瘤的裸鼠。荷瘤小鼠接受Toxoflavin治疗，并监测肿瘤生长抑制情况。观察到该化合物的抗癌活性呈剂量和时间依赖性。这些研究表明该化合物具有抑制体内肝细胞癌生长的潜力。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
毒黄素的详细药代动力学特性尚未得到充分报道。该化合物的分子式为C7H7N5O2，是一种电子载体。已知其作用机制之一是产生过氧化氢。该化合物被归类为强效细菌毒素。现有文献中未详细描述其具体的药代动力学参数，例如吸收、分布、代谢和排泄。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠口服LD50：8400 μg/kg。肾脏、输尿管和膀胱：血尿；胃肠道：蠕动亢进、腹泻；感觉器官和特殊感觉：流泪；眼睛。《抗生素与化疗》，4(259)，1954。小鼠腹腔注射LD50：3 mg/kg。《有机化学杂志》，31(900)，1966 [PMID:5907865]。小鼠静脉注射LD50：1700 μg/kg。感觉器官和特殊感觉：流泪；眼睛；胃肠道：蠕动亢进、腹泻；肾脏、输尿管和膀胱：血尿。 《抗生素与化疗》，4(259)，1954。
毒黄素是一种强效细菌毒素，它作为电子载体，导致过氧化氢的产生。它抑制细胞色素P450酶系统。该化合物的毒性源于其产生活性氧的能力。它仅供研究使用，不得用于人类治疗。现有资料中并未详细列出其正式的毒理学特征。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
毒黄素是一种嘧啶并三嗪类化合物，化学名称为1,6-二甲基-1,5,6,7-四氢嘧啶并[5,4-e][1,2,4]三嗪，其5位和7位含有羰基。它具有多种功能，包括抗肿瘤活性、毒性活性、Wnt信号通路抑制活性、诱导细胞凋亡活性、细菌代谢活性、抗菌活性和毒力因子活性。它既是一种嘧啶并三嗪类化合物，也是一种羰基化合物。其功能与富里酸类似。据报道，在广岛链霉菌（Streptomyces hiroshimensis）和谷生伯克霍尔德氏菌（Burkholderia glumae）中检测到了毒黄素，并有相关数据可供参考。肝细胞癌（HCC）是全球第五大常见癌症。由于其对标准化疗药物具有固有的耐药性，因此开发新型选择性化疗药物势在必行。 Wnt/β-catenin信号通路在发育和肿瘤发生中起着至关重要的作用，并在肝细胞癌（HCC）中异常激活。本研究旨在评估三种Tcf4/β-catenin复合物小分子拮抗剂（PKF118-310、PKF115-584和CGP049090）对HCC细胞系的体外和体内活性。体外实验表明，这三种化合物均对三种HCC细胞系（HepG2、Hep40和Huh7）表现出剂量依赖性的细胞毒性，但通过ATP活性测定发现，它们对正常肝细胞（来自三位供体）的细胞毒性至少低10倍。在HepG2和Huh7细胞中，拮抗剂处理降低了Tcf4/β-catenin的结合能力和转录活性，同时下调了内源性Tcf4/β-catenin靶基因c-Myc、cyclin D1和survivin的表达。在HepG2和Huh7细胞中，拮抗剂处理诱导了细胞凋亡和G1/S期细胞周期阻滞。所有拮抗剂均抑制了HepG2异种移植瘤模型中的体内肿瘤生长，并伴有细胞凋亡以及c-Myc、cyclin D1和survivin表达的降低。我们的结果表明，这三种Tcf4/β-catenin复合物拮抗剂是潜在的化疗药物，可能为肝细胞癌（HCC）的临床治疗提供一种通路特异性的选择。[1]
表观遗传修饰在基因表达调控中发挥着重要作用。组蛋白翻译后修饰在功能性染色质的组织中发挥着关键作用。目前已发现多种药物能够抑制或激活参与表观遗传组蛋白调控的特定蛋白家族，其中一些药物已获FDA批准用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤，或正在进行实体瘤的I/II/III期临床试验。尽管一些蛋白家族，例如组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂，已被深入研究，但我们对组蛋白赖氨酸去甲基化酶的理解仍不完整。本文描述了化合物PKF118-310的计算机模拟、体外和细胞表征，PKF118-310是一种转录因子4 (TCF4)/β-catenin信号通路拮抗剂，同时也是一种KDM4A抑制剂。PKF118-310的潜在抑制活性是通过对KDM4A晶体结构的虚拟筛选发现的。我们自主开发的基于肽的组蛋白三甲基化检测方法证实了其对KDM4A的强效抑制活性。通过细胞热位移分析鉴定了其蛋白靶点。在液体肿瘤细胞和实体瘤细胞中均观察到了PKF118-310的抗癌活性，且该活性呈剂量和时间依赖性。我们证实了PKF118-310对KDM4A的抑制作用，这一作用此前未见报道。我们的研究结果为开发首个KDM4A特异性抑制剂及其衍生物提供了可能。[2] 毒黄素（CAS 84-82-2），又名黄霉素和PKF118-310，是TCF4/β-catenin复合物的拮抗剂和KDM4A抑制剂，具有抗肿瘤和抗菌活性。它在Hep40、HepG2和Huh7细胞系中表现出剂量依赖性的细胞毒性，IC50值分别为0.66 μM、0.36 μM和0.98 μM。该化合物可抑制裸鼠体内肝细胞癌异种移植瘤的生长。目前尚无临床试验或已批准适应症的数据。 |
| 分子式 |
C7H7N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
193.166
|
| 精确质量 |
193.06
|
| 元素分析 |
C, 43.53; H, 3.65; N, 36.26; O, 16.57
|
| CAS号 |
84-82-2
|
| 相关CAS号 |
Toxoflavin-13C4;2300178-70-3
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| PubChem CID |
66541
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.65g/cm3
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| 沸点 |
276.7ºC at 760 mmHg
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| 闪点 |
121.1ºC
|
| 折射率 |
1.76
|
| LogP |
-0.7
|
| tPSA |
82.67
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
|
| 重原子数目 |
14
|
| 分子复杂度/Complexity |
408
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
SLGRAIAQIAUZAQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C7H7N5O2/c1-11-6(13)4-5(10-7(11)14)12(2)9-3-8-4/h3H,1-2H3
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| 化学名 |
1,6-dimethylpyrimido[5,4-e][1,2,4]triazine-5,7-dione
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| 别名 |
PKF118310; PKF118 310; Toxoflavin; 84-82-2; Xanthothricin; Toxoflavine; Xanthotricin; PKF-118-310; 1,6-dimethylpyrimido[5,4-e][1,2,4]triazine-5,7-dione; GNF-Pf-67; PKF118-310
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~129.43 mM)
H2O : ~10 mg/mL (~51.77 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (517.71 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C). 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.1768 mL | 25.8839 mL | 51.7679 mL | |
| 5 mM | 1.0354 mL | 5.1768 mL | 10.3536 mL | |
| 10 mM | 0.5177 mL | 2.5884 mL | 5.1768 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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