Nucleoside analogue; Influenza virus

Triazavirin 对蜱传脑炎病毒的有效性是在敏感的细胞培养物中测量的。 Triazavirin 在 SKEV 细胞培养物中的浓度为 128 mcg/mL，可有效抑制蜱传脑炎病毒（Sofiin 株）的繁殖[2]。

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在第一阶段，我们研究了三氮唑核苷钠水合物（Triazavirin sodium hydrate，Riamilovir）和乙酰水杨酸对体外血小板聚集的影响。ADP诱导的兔全血对照阻抗为8.3 Ω。100 μM浓度的参比药物将血小板聚集幅度降至3.4 Ω，相当于相对于对照显著抑制了59.8%的血小板功能活性（表1）。将乙酰水杨酸浓度降至10和1 μM后，血小板聚集幅度分别降至5.5和6.6 Ω。因此，在上述浓度下，乙酰水杨酸分别抑制了23.7%和11.6%的血小板聚集。参比药物的IC50为57.5 μM。 100 μM浓度的三氮唑核苷钠（Riamilovir）将ADP诱导的血小板聚集幅度降至6.9 Ω，即抑制了17.1%的聚集过程（表1）。在全血与LPS孵育时，血小板聚集幅度从8.3显著增加至11.9 Ω，表明血小板止血系统在巨噬细胞激活后活性增强（表2）。研究药物的抗血小板活性评估基于ADP诱导的完整血小板与LPS处理血小板聚集水平差异范围。
100 μM浓度的乙酰水杨酸将血小板聚集幅度显著降至8.91 Ω，即抑制了83.2%的聚集过程（表2，图1）。10和1 μM浓度下，乙酰水杨酸分别抑制了52.4%和3.2%的活性，血小板聚集幅度分别降至10.02和11.8 Ω。乙酰水杨酸的IC50值为12.4 μM（表2）。因此，在LPS刺激巨噬细胞后，参比药物的活性比在完整血液中提高了4.6倍。
三氮唑核苷钠（Riamilovir）在LPS存在下显示出高抗血小板活性：100 μM浓度下抑制了96.3%的血小板聚集（图1），并将该过程幅度降至8.43 Ω（表2）。当riamilovir浓度降至10和1 μM时，血小板聚集幅度分别降至9.9和10.9 Ω，即分别抑制了56.1%和26.8%的血小板聚集（图1）。riamilovir的IC50为5.2 μM。因此，体外实验表明，在LPS刺激巨噬细胞的条件下，riamilovir的IC50值比乙酰水杨酸高2.4倍。[4]

研究了三氮唑核苷治疗白化小鼠实验性森林泉脑炎的有效性。研究结果表明，高剂量（200-400 mg/kg）的三氮杂韦林可以适度保护受感染的动物。测试组的动物寿命显着延长（从 4.1 天延长至 4.8 天），并且靶器官中病毒积累量显着下降[3]。

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第二阶段旨在验证三氮唑核苷钠（Riamilovir）在体内实验是否具有相同效应。对照组大鼠ADP诱导的血小板聚集幅度为7.9Ω。20mg/kg剂量的抗病毒药物Riamilovir使血小板聚集幅度降至5.57Ω，血小板功能活性抑制率达29.4%（表3），证实该药物在体内具有抗血小板作用。 静脉注射LPS的大鼠，其ADP诱导的血小板聚集幅度较空白对照组显著升高（达10.9Ω），表明高细胞因子血症可激活血小板。Riamilovir将血小板聚集幅度降至8.98Ω，在细胞因子中毒条件下的抗血小板活性较正常动物提高2.2倍。[4]

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两种治疗方案中，三氮唑核苷钠（Riamilovir）均能缩短住院周期。每日高剂量给药组患者住院时间最短。该药物可减轻疾病全身感染症状的持续时间和严重程度，其中每日1250mg、持续5天给药方案的患者发热总时长和呼吸道综合征持续时间最短，且未记录不良反应。该剂量组在治疗第6天实现100%的急性呼吸道病毒感染病原体清除率。 结论：三氮唑核苷钠（Riamilovir）在两种治疗方案中均表现出临床有效性和良好安全性。每日1250mg给药方案能产生更显著的临床效果，研究组在住院第6天即实现病原体完全清除。[5]

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TZV/三氮唑病毒（利阿昔洛韦）在动物模型中的抗流感活性。[6]
如表3所示，当根据治疗和预防方案给药时（感染前24和1小时以及感染后24、48和72小时），TZV保护小鼠免受A型和B型流感病毒引起的死亡。TZV以1至200mg/kg体重的剂量范围通过i.g.途径给药。确定最佳有效剂量为50至100mg/kg体重。从数据中可以明显看出，TZV和金刚乙胺对感染血清型a流感病毒（a/Aichi/2/68[H3N2]）的小鼠提供了相似水平的保护，但感染B型（B/Lee/40）并以大约相同剂量治疗的动物的存活率是金刚乙胺的三到四倍。因此，TZV可以保护65%至75%的感染A或B病毒的小鼠。当应用TZV给药的治疗（+24小时、+48小时和+72小时）或预防（-24小时和-1小时）方案时，TZV也是有效的（数据未显示）。同样值得注意的是，TZV的毒性较低：小鼠腹腔注射TZV后，LD50为1400±120mg/kg体重，肌肉注射TZV的LD50为2200±96mg/kg体重。潜在抗病毒药物的基本特征是它们的稳定性、代谢转化、药代动力学和生物利用度。

本研究依据现行《新药理学物质临床前研究手册》要求进行。三氮唑核苷钠水合物（Triazavirin sodium hydrate，Riamilovir）作为抗病毒药物被选为研究对象。体外实验中以抗血小板药物乙酰水杨酸作为对照药，选择依据是该药物作为循证等级较高的抗血小板剂被广泛应用。 三氮唑核苷钠水合物（Riamilovir）使用生理盐水溶解；对照药先溶于30μl DMSO，再用生理盐水稀释至所需体积。采用Chrono-Log-700双通道发光聚集仪，通过阻抗法检测药物对血小板聚集的影响。 体外实验用兔血经耳缘静脉自由滴落法采集，用3.8%枸橼酸钠（9:1）抗凝。取450μl恒定体积全血用于研究。将100μM浓度的药物直接加入含全血的比色杯，5μM ADP作为血小板聚集诱导剂。 若显示高抗血小板活性，为计算IC50值（抑制50%血小板聚集的浓度），需追加检测10μM和1μM浓度样本。同时在高细胞因子血症条件下分析抗血小板活性：将终浓度20μM的LPS溶液（大肠杆菌O111:B4）与受试药同步加入全血样本比色杯，孵育5分钟后加入血小板聚集诱导剂。[4]

与活性药物利巴韦林相比，在敏感细胞培养物中评估了三唑韦林对蜱传脑炎病毒的疗效。在128 mcg/ml的浓度下，三唑韦灵通过在SKEV细胞培养物内积累而对蜱传乙脑病毒繁殖（Sofin株）具有抑制活性[2]。

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CAM模型中抗病毒活性的体外研究[6]
选取11-13日龄鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)剪切成约1mm³碎片，悬浮于含青霉素和硫酸链霉素的Hanks盐溶液中。将含病毒的起始尿囊液按10⁻¹至10⁻⁷梯度稀释后加入单层细胞长满的孔板，每孔悬浮液37℃孵育1小时，随后加入不同浓度的三氮唑核苷(Riamilovir)TZV水溶液。参照文献26方法，经36-37℃孵育48小时后，通过血凝素滴度测定和空斑试验评估抗病毒活性。

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三氮唑核苷(Riamilovir)在兔肝匀浆中的稳定性[6]
按类似文献方法制备兔肝匀浆，反应体系含25mg/ml蛋白和500μM TZV，37℃孵育。定时取样后立即加入预冷甲醇至66%(v/v)终止反应，10000×g离心4分钟收集沉淀。上清液经SpeedVac冷冻干燥后，残渣水溶解，通过前述HPLC方法分析产物浓度（按峰面积定量）。

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TZV/三氮唑核苷(Riamilovir)在细胞培养中的代谢[6]
将TZV水溶液加入含6×10⁶个HEK 293T肾细胞或Huh7肝细胞单层的培养皿，终浓度1mM。细胞与化合物共孵育1.5小时或24小时后，用PBS缓冲液洗涤三次，等体积PBS重悬并通过三次冻融法裂解。加入等体积6%三氟乙酸离心后取上清，用饱和Na₂CO₃调至中性pH，按上述HPLC方法分析代谢产物。

对白化小鼠实验性森林-泉脑炎中，三唑韦林与活性药物利巴韦林®的治疗效果比较研究表明，高剂量（200-400 mg/kg）三唑韦林对感染动物具有中等程度的保护作用。试验组动物的寿命显著延长（从4.1天延长至4.8天），且靶器官（脑）中病毒的积累量显著降低（p ≤ 0.05）[3]。

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体内实验采用大鼠，分为4组（每组6只）：两组未给予LPS（完整大鼠和灌胃给予三唑韦林钠水合物（利阿米洛韦）的大鼠），两组LPS中毒（对照组大鼠静脉注射LPS，实验组大鼠静脉注射LPS并灌胃利阿米洛韦）。在采血前1小时（对应于血液中药物浓度峰值），使用无创胃探针经胃内灌注给予大鼠20 mg/kg剂量的利米洛韦（相当于人类剂量，该剂量使用种间转换因子计算）。大鼠用水合氯醛（400 mg/kg，腹腔注射）麻醉，并从腹主动脉（如上所述，血液稳定剂）获取研究用生物材料。通过尾静脉注射2 mg/kg脂多糖（LPS）建立细胞因子风暴模型。在LPS给药前1小时经口给予利米洛韦，并在LPS给药后4小时采血。对照组经胃内灌注等体积的蒸馏水。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析（单因素方差分析，Bonferroni校正，p<0.05）。使用 Microsoft Excel 2020 内置函数计算各组的 IC50、均值和标准差。[4]

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目的：评估不同给药方案下抗病毒药物三氮唑韦林钠水合物（利阿米洛韦）治疗非冠状病毒（SARS-CoV-2）病因引起的急性呼吸道病毒感染（ARVI）患者的临床疗效和安全性。
材料与方法：本研究纳入 150 例年龄在 18-27 岁之间的 ARVI 患者（50 例患者接受三氮唑韦林钠水合物（利阿米洛韦）治疗，剂量为 250 mg，每日 3 次，疗程 5 天；50 例患者接受利阿米洛韦治疗，剂量为 250 mg，每日 5 次，疗程 5 天，属于超适应症用药；50 例患者仅接受抗病毒药物治疗）。治疗）。[5]

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三唑韦林（Riamilovir）在动物模型中的抗流感活性。[6]
评估了感染A/Aichi/2/68 (H3N2)或B/Lee/40流感病毒的CBA小鼠的抗病毒活性。每组小鼠包含20只。在轻度乙醚麻醉下，通过鼻内途径给予1和10个半数致死剂量（LD50）的病毒。根据以下三种方案之一，通过胃内灌注（ig）途径给予TZV水溶液（0.2 ml）：治疗和预防方案（感染前24小时和1小时[-24和-1 h]以及感染后24、48和72小时[+24、+48和+72 h]）、预防方案（-24 h和-1 h）或治疗方案（+24 h、+48 h和+72 h）。以金刚烷胺作为对照。观察动物14天，每日记录对照组和实验组的死亡情况。基于这些数据，计算TZV对动物的保护程度，并与金刚烷胺的保护程度进行比较。

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兔体内的药代动力学。 [6]
对兔子进行单次三唑韦林（Riamilovir）/TZV灌胃给药时，将动物（n = 4）用10:1的乙醚-氟烷混合物麻醉，并将聚氨酯胃肠管插入15厘米深。三唑韦林（Riamilovir）/TZV以水溶液（12毫升）的形式给药，剂量为105毫克/公斤体重。对4只兔子（n = 4）进行静脉给药时，按照参考文献11的方法，将TZV（4.3 mg/kg体重）溶于生理盐水（1 ml）中，经耳缘静脉注射1分钟。在给药后24小时内的预定时间点，从耳缘静脉自然采集血样（平均1 ml），置于含有5 μl肝素（5,000 U/ml）的微量离心管中。摇匀后，取出0.5 ml血样，加入1 ml甲醇混匀，并于-24℃保存。对照组血样在给药前采集。进行高效液相色谱（HPLC）分析前，将样品以1,500 × g离心10分钟；上清液真空蒸发；残余物溶于100 μl水中。然后，在上述条件下，采用高效液相色谱法（HPLC）分析样品。
药代动力学参数采用 Kinetica 程序计算。采用 Thermo Kinetica 程序的血管外非房室模型研究了肠内给药后的药代动力学。对于静脉给药，则采用非房室静脉输注模型。测定的参数包括：血浆浓度-时间曲线下面积（AUCtot）、表观消除半衰期（T1/2）、血浆中化合物的最大浓度（Cmax）、达峰时间（Tmax）和平均滞留时间（MRT）。化合物的肠内生物利用度（F）计算公式为 (AUCi.g./dosei.g.)/(AUCi.v./dosei.v.)，其中 AUCi.g. 为肠内给药后化合物的 AUC，dosei.g. 为肠内给药剂量，AUCi.v. 为静脉给药后的 AUC，dosei.v. 为静脉给药剂量。是静脉注射剂量。血浆总清除率 (CL) 计算公式为剂量/AUC。TZV 稳态分布容积 (Vss) 计算公式为 CL × MRT。

TZV/三唑韦林（Riamilovir）单次静脉注射或肌注给药后，在兔体内的药代动力学参数。[6]
为了确定TZV的肌注生物利用度，将该化合物通过肌注和静脉注射途径给予兔子（n = 4）。在给药后24小时内的预定时间点采集血样，并用高效液相色谱法（HPLC）进行分析。肌注给药后10分钟内，在兔血中仅观察到TZV峰，保留时间（Tret）为22.5分钟；而2小时后，出现一个新的峰（M1），其保留时间随时间增加，为27.5分钟。图2A显示了给药（105 mg/kg体重）后12小时内兔血中TZV和M1的浓度。 TZV 的血药浓度峰值 (Cmax) 为 1.1 mg/L，达到时间为 0.40 ± 0.16 小时，消除半衰期为 1.1 小时。TZV 的清除率 (CL) 为 37.0 ± 11.2 L/h·kg，稳态分布容积 (Vss) 为 83.5 ± 19.2 L/kg。代谢物 M1 的浓度在 3 小时内升高，随后在接下来的 5 小时内略有下降。给兔子静脉注射 4.3 mg/kg 剂量的 TZV 后，血浆中 TZV 的浓度迅速下降，半衰期 (T1/2) 为 0.9 小时（图 2B）。与灌胃给药的结果相反，未检测到代谢物 M1。在整个实验期间（24 小时），观察到的唯一产物是 TZV。表4总结了TZV及其代谢物的药代动力学参数值。TZV在兔体内的免疫生物利用度(F)计算为12.5%。

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TZV/三唑韦林（利阿米洛韦）代谢物(M1)在兔肝匀浆中的生成。[6]
TZV代谢物很可能是在肝脏或肾脏中生成的。为了验证这一假设，将TZV与兔肝匀浆孵育。图3显示了肝匀浆与500 μM TZV孵育后的HPLC分析结果。如图所示，孵育10分钟后出现了一个新的峰，且峰强度随时间增加。该峰的保留时间与兔血中经肠内注射TZV后形成的代谢物的保留时间吻合良好。

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TZV/三唑韦林（利阿米洛韦）在HEK 293T肾细胞和Huh7肝细胞培养物中的代谢。[6]
将HEK 293T或Huh7细胞培养物与500 μM TZV孵育不同时间。对细胞提取物进行HPLC分析，结果显示存在TZV及其代谢物，该代谢物的保留时间与兔肝匀浆中形成的M1代谢物以及经肠内注射TZV后在兔血中检测到的代谢物的保留时间一致（图4）。

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TZV/三唑韦林（利阿米洛韦）代谢物结构。 [6]
通过比较HPLC分析、紫外光谱和质谱数据的保留时间，确认了在细胞培养物和兔血中发现的代谢物（包括经肠内给药和在兔肝匀浆中孵育TZV后）的身份。图5显示了TZV及其与兔肝匀浆孵育后形成的代谢物的紫外光谱图。TZV和M1的光谱图明显不同：TZV有两个λmax，分别位于257 nm和360 nm，而M1的λmax位于249 nm和320 nm。我们推测TZV的硝基可以被还原生成2-甲基硫代-6-氨基-1,2,4-三唑并[5,1-c]-1,2,4-三嗪-7(4H)-酮（AMTZV）。我们合成了AMTZV，并证实其紫外吸收光谱与M1的紫外吸收光谱相同。为了验证肝匀浆中生成的M1代谢物的结构，我们将其质谱图与合成化合物的质谱图进行了比较（图6A和B）。主要离子为[MH]−，分子量为197，与AMTZV的分子量一致。此外，还出现了TZV的[MH]−离子峰227。对于离子197和227，我们观察到了相应的卫星离子，分别为198 [M + 1-H]−和199 [M + 2-H]−，以及228 [M + 1-H]−和229 [M + 1-H]−。峰213对应的离子结构尚不明确。峰 167 可能与代谢物降解产物有关，通过混合 [M1 + AMTZV] 和 [M1 + 15N-AMTZV] 证实了这一点（数据未显示）。

蛋白质结合
关于三唑病毒素的蛋白质结合数据尚不明确。

[1]. Preparation of chitosan-coated liposomes as a novel carrier system for the antiviral drug Triazavirin. Pharm Dev Technol. 2018 Apr;23(4):334-342.

[2]. Investigation of Triazavirin antiviral activity against tick-borne encephalitis pathogen in cell culture. Antibiot Khimioter. 2014;59(1-2):3-5.

[3]. Investigation of Therapeutic Efficacy of Triazavirin Against Experimental Forest-Spring Encephalitis on Albino Mice. Antibiot Khimioter. 2015;60(7-8):11-3.

[4]. Antiplatelet Activity of Riamilovir under Conditions of Lipopolysaccharide Intoxication. Bull Exp Biol Med. 2022 May 26;173(1):41–45.

[5]. Clinical efficiency and safety of riamilovir under various dosage regimens for treatment of acute respiratory viral infections in adults. Ter Arkh. 2023 Dec 22;95(11):930-936.

[6]. Antiviral properties, metabolism, and pharmacokinetics of a novel azolo-1,2,4-triazine-derived inhibitor of influenza A and B virus replication. Antimicrob Agents Chemother . 2010 May;54(5):2017-22.

本文阐述了一种新型的带正电荷脂质体包覆改性壳聚糖的方法。脂质体通过孔径分别为0.2 μm和0.1 μm的无机膜（Anotop）逐步挤出制备。壳聚糖衍生物通过Ugi多组分反应合成。制备了多组脂质体，并比较了它们的粒径、多分散指数（PDI）、zeta电位和稳定性等性质。研究了各种添加剂的影响，并确定了脂质膜的最佳组成。添加不带电荷的脂肪酸酯可使挤出法制备的脂质体的粒径减小至145-150 nm，PDI为0.13-0.15。将制备的脂质体负载新型抗病毒药物三唑韦林，并用于测定其释放曲线。三唑韦林以盐的形式包覆在脂质体层中，盐由生物相容性胆碱衍生物和限制性脂肪酸组成。采用合适的脂质组成制备了大量改性壳聚糖包覆的脂质体。结果表明，脂质体与多糖层的适当组合可将胶体稳定性延长至3个月，并展现出广泛的表面修饰功能。[1]

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在敏感细胞培养物中，评估了Triazavirin对蜱传脑炎病毒的疗效，并与活性药物利巴韦林进行了比较。结果表明，浓度为128 mcg/ml的Triazavirin可通过在SKEV细胞培养物中的积累抑制蜱传脑炎病毒（Sofiin株）的复制。[2]

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在敏感细胞培养物中，评估了Triazavirin对蜱传脑炎病毒的疗效，并与活性药物利巴韦林进行了比较。在浓度为 128 mcg/ml 时，三唑韦林可通过在 SKEV 细胞培养物中的积累，有效抑制蜱传脑炎病毒（Sofiin 株）的复制。[3] 我们研究了抗病毒药物利阿米洛韦在有无 LPS 存在下对 ADP 诱导的血小板聚集的影响。与乙酰水杨酸（参考药物）不同，利阿米洛韦在体外未表现出抗血小板作用。然而，它显著抑制了 LPS 处理的血液样本中的血小板反应性，其 IC50 值是乙酰水杨酸的 2.2 倍。在体内实验中，在细胞因子风暴条件下，利阿米洛韦可抑制大鼠 64% 的血小板聚集。[4] 甲型和乙型流感病毒会在人群中引起周期性大流行。目前获准用于对抗流感病毒感染的抗病毒药物种类有限。我们研究了一种新型有效的甲型和乙型流感病毒抑制剂——三唑韦林[2-甲基硫代-6-硝基-1,2,4-三唑并[5,1-c]-1,2,4-三嗪-7(4I)-酮] (TZV)。TZV能够抑制细胞培养和鸡绒毛尿囊膜中流感病毒的复制，并能保护小鼠免于甲型和乙型流感病毒感染导致的死亡。TZV对金刚烷胺耐药的流感病毒株和禽流感A型病毒H5N1株也有效。在给兔子服用TZV后，我们计算了其药代动力学参数和生物利用度。在灌胃给予TZV后，在IAK 293T和Huh7细胞培养物、肝脏匀浆和兔血中发现了TZV代谢物AMTZV [2-甲基硫代-6-氨基-1,2,4-三唑并[5,1-s]-1,2,4-三嗪(e)-7(4I)-酮]。AMTZV无毒，且在细胞培养中不抑制流感病毒。该代谢物很可能是TZV的消除产物。[6]

C₅H₇N₆NAO₅S

286.20

286.009

C, 20.98; H, 2.47; N, 29.37; Na, 8.03; O, 27.95; S, 11.20

928659-17-0

116061-59-7 (sodium);123606-06-4 (free);928659-17-0 (sodium hydrate);

52947239

Light yellow to yellow solid powder

2.0

152Ų

2

10

1

18

262

0

[Na].O=C1N2C(NC(SC)=N2)=NN=C1[N+](=O)[O-].O

GDVSBVWTWGUDAW-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C5H4N6O3S.Na.2H2O/c1-15-5-6-4-8-7-2(11(13)14)3(12)10(4)9-5;;;/h12H,1H3;;2*1H2/q;+1;;/p-1

sodium;7-methylsulfanyl-3-nitro-[1,2,4]triazolo[5,1-c][1,2,4]triazin-4-olate;dihydrate

Triazavirin; Riamilovir; TZV; Triazavirin; 928659-17-0; Riamilovir sodium dihydrate; Sodium 7-(methylthio)-3-nitro-4-oxo-4H-[1,2,4]triazolo[5,1-c][1,2,4]triazin-6-ide dihydrate; G1JE34QF2S; sodium;7-methylsulfanyl-3-nitro-[1,2,4]triazolo[5,1-c][1,2,4]triazin-4-olate;dihydrate; [1,2,4]Triazolo[5,1-c][1,2,4]triazin-4(6H)-one, 7-(methylthio)-3-nitro-,sodium salt, hydrate (1:1:2); (1,2,4)Triazolo(5,1-C)(1,2,4)triazin-4(6H)-one, 7-(methylthio)-3-nitro-, sodium salt, hydrate; Riamilovir sodium hydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~125 mg/mL (~436.8 mM)
H2O: ~50 mg/mL (~174.7 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。