Caspase 3/8/9; antifungal

作为身体最外层，皮肤在接触农药时扮演重要角色，这可能对人类健康产生负面影响。Trifloxystrobin是一种广泛使用的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，但关于其皮肤接触相关毒性机制的信息很少。因此，本研究采用HaCaT（人皮肤角质形成细胞）细胞来阐明Trifloxystrobin的皮肤毒性机制。经过24或48小时处理后，通过细胞活力检测、Annexin V-FITC/碘化丙啶双染、TUNEL实验和蛋白质印迹分析研究了细胞死亡机制。Trifloxystrobin暴露导致HaCaT细胞活力呈时间和浓度依赖性下降。细胞死亡是通过HaCaT细胞的凋亡途径实现的。此外，我们通过siRNA转染探究了Trifloxystrobin对TRAIL介导的外源性凋亡的影响。死亡受体5的敲除抑制了Trifloxystrobin诱导的细胞凋亡。这些结果表明Trifloxystrobin通过TRAIL介导途径诱导角质形成细胞凋亡，其抑制作用可能干扰皮肤的屏障功能和完整性。这可能是Trifloxystrobin皮肤毒性的作用机制，在农药暴露管理中应予以考虑。[1]

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甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂是醌外部抑制剂（QoI），用于防治农业和住宅领域的真菌病原体。本研究比较了两种常用杀菌剂嘧菌酯（AZS）和Trifloxystrobin/肟菌酯（TFS）在分化的人SH-SY5Y细胞中的潜在神经毒性。200 µM浓度下均未观察到细胞毒性，但48小时后两者均导致细胞活力下降，其中TFS毒性略高于AZS。50 µM AZS和25 µM TFS处理48小时后均能诱导SH-SY5Y细胞caspase 3/7活性。暴露24小时后，>25 µM AZS和>6.25 µM TFS均能降低ATP水平，且两种杀菌剂在~12.5 µM（AZS）和~3.125 µM（TFS）浓度下即可迅速损伤氧化呼吸功能，降低寡霉素诱导的ATP生成、最大呼吸能力和线粒体备用容量。100 µM AZS在4-48小时间持续损伤线粒体膜电位（MMP），而>50 µM TFS在24小时即降低MMP。综上，在SH-SY5Y细胞中，TFS在更低浓度下即表现出比AZS更强的线粒体毒性。为探究毒性机制，对6.25 µM和25 µM AZS处理的细胞进行脂质组学分析，共检测到1595种脂质，涵盖49个亚类。含量最高的脂质类别包括甘油三酯（17%）、磷脂酰乙醇胺（8%）、醚键甘油三酯（8%）、磷脂酰胆碱（7%）、醚键磷脂酰乙醇胺（6%）和二酰基甘油（5%），这五类占总脂质的50%以上。AZS上调的脂质包括参与长链脂肪酸β氧化的酰基肉碱，以及未修饰、醚键和氧化型甘油三酯，提示甘油三酯生物合成的代偿性上调。与神经退行性疾病相关的神经酰胺HexCer-NS在AZS暴露后含量降低。综上，甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂能快速抑制神经元细胞线粒体氧化呼吸并改变多种脂质含量，这对理解其神经毒性相关的环境暴露风险具有重要意义。[2]

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泰勒虫是导致毁灭性牛病的病原体，在非洲和亚洲造成重大经济损失。泰勒虫属不同于其他顶复门寄生虫，其能将宿主白细胞转化为永生化、过度增殖的侵袭性细胞，迅速致死感染动物。由于对特效药布帕伐醌耐药性的出现，亟需开发新型抗泰勒虫药物。我们建立了基于显微成像的药物筛选平台，对疟疾药物风险基金（MMV）病原体化合物库中的药物进行重定位研究。结果显示Trifloxystrobin/肟菌酯（MMV688754）能选择性杀死感染环形泰勒虫或小泰勒虫的淋巴细胞/巨噬细胞。肟菌酯在体外降低寄生虫负荷的效果与布帕伐醌相当，对宿主基因表达、细胞增殖和细胞周期的影响也相似，还能抑制寄生虫向裂殖子分化（裂殖生殖）。其杀虫作用不依赖寄生虫TaPin1脯氨酰异构酶通路。分子模拟预测肟菌酯与布帕伐醌可能以不同方式与寄生虫细胞色素B相互作用，实验证实肟菌酯对携带TaCytB突变的布帕伐醌耐药细胞仍然有效。本研究表明肟菌酯有望成为布帕伐醌的替代药物，是抗泰勒虫新药开发的候选化合物。[3]

甲氧基丙烯酸酯类是目前使用最广泛的杀菌剂，但据报道对某些水生生物具有高毒性。本研究将斑马鱼胚胎暴露于三种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂（吡唑醚菌酯、Trifloxystrobin/肟菌酯和啶氧菌酯）的不同浓度下（受精后96小时内），以评估其水生毒性。三种杀菌剂对胚胎的96小时半致死浓度（LC50）分别为：吡唑醚菌酯61μg/L、肟菌酯55μg/L、啶氧菌酯86μg/L。急性暴露期间观察到发育胚胎出现一系列症状，包括心跳减缓、孵化抑制、生长迟滞和形态畸形。此外，这三种杀菌剂通过增加活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）含量、抑制超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）含量，并差异性地改变过氧化氢酶（CAT）活性及抗氧化系统相关基因（Mn-sod、Cu/Zn-sod、Cat、Nrf2、Ucp2和Bcl2）的mRNA水平，从而诱导胚胎产生氧化应激。暴露还导致与先天免疫系统相关的IFN和CC-chem显著上调，并差异性地改变TNFa、IL-1b、C1C和IL-8的表达水平，表明这些杀菌剂在斑马鱼胚胎发育过程中引发了免疫毒性。三种杀菌剂暴露下胚胎酶活性和基因表达的差异响应可能是导致其毒性差异的原因。本研究通过多层面比较了三种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对斑马鱼胚胎的毒性，为理解该类杀菌剂对水生生物的毒理效应提供了更全面的认知。[3]

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肟菌酯/Trifloxystrobin是一种新型杀菌剂，因其卓越的抗真菌活性而被广泛应用。本研究通过人工土壤和褐土（0.1-2.5mg/kg）中的亚慢性毒性实验，评估了肟菌酯暴露对赤子爱胜蚓诱导的氧化应激和DNA损伤。在整个暴露周期（第7、28和56天）检测了六项生化指标：活性氧（ROS）、抗氧化酶（SOD和CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）、脂质过氧化以及DNA损伤标志物（8-羟基脱氧鸟苷）。通过计算整合生物标志物响应（IBR）指数，比较了两种土壤类型的毒理学响应差异。结果表明，根据六项生化指标的综合计算，肟菌酯可诱发蚯蚓氧化应激和DNA损伤，且褐土中的亚慢性毒性高于人工土壤。由于肟菌酯对赤子爱胜蚓的毒性在人工土壤中被低估，基于人工土壤的毒理实验可能无法准确评估其在自然土壤生态系统中的真实毒性。[4]

酶活性测定[3]
使用PBS缓冲液（7.4）中的电动均质器将斑马鱼胚胎/幼虫样品（96 hpf）均质化（1:9，w/v），并在12000℃下离心 × g代表15 min at 4 °C以获得用于生化分析的上清液。 根据制造商的说明，分别使用SOD检测试剂盒、CAT检测试剂盒和GSH检测试剂盒测量超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性以及谷胱甘肽（GSH）的含量。基于WST-1法，使用酶标仪在450℃下测定SOD活性 nm.一个单位的SOD活性被定义为将氧化反应抑制50%所需的酶量，并表示为U/mg蛋白质。在405时监测CAT活性 在紫外分光光度计上显示nm。一个单位的CAT活性被定义为消耗1 μmol过氧化氢 s，并以U/mg蛋白表示。在405℃下，根据DTNB法测定GSH含量 μmol/g蛋白。按照制造商的说明，使用Bradford蛋白质测定试剂盒以牛血清白蛋白（BSA）为标准测量总蛋白质含量。

细胞活力检测 [1]
采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定细胞活力。将约4000个细胞/孔接种于96孔板，设置培养基对照组和0.1% DMSO溶剂对照组。肟菌酯/TRF从500μM至2μM进行梯度稀释。处理24或48小时后，每孔加入20μl MTT溶液（5mg/ml）。37°C避光孵育2小时后移除上清，加入DMSO溶解甲瓒结晶。使用酶标仪在540nm波长处检测吸光度，结果以对照组百分比计算。

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末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）实验 [1]
采用DeadEnd™比色法TUNEL检测试剂盒检测凋亡细胞。0.5μM TRF/肟菌酯处理48小时后，按说明书进行操作。该技术通过生物素标记核苷酸和末端转移酶（TdT）标记双链DNA断裂的3'-OH末端，原位检测核DNA断裂和染色质凝聚的凋亡细胞。使用显微镜采集图像。

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siRNA转染 [1]
采用Neon®电转染系统，按2.5×10⁵细胞/500nM siRNA的比例转染HaCaT细胞。转染24小时后，分别用0.05% DMSO或0.5μM 肟菌酯/TRF处理。设置乱序siRNA（siScr）对照和DR5 siRNA组，DR5 siRNA序列为：正义链5'-CAGACUUGGUGCCCUUUGA-3'，反义链5'-UCAAAGGGCACCAAGUCUG-3'。

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Apotox Glo三重检测：细胞活力、细胞毒性与凋亡 [2]
进行ApoTox-Glo™三重检测时，细胞经200g离心5分钟（室温）收集后计数。将约10,000个细胞/100μl培养基接种至三块黑色96孔板，设置4个无细胞培养基孔用于荧光/发光背景校正。分化细胞分别暴露于25-200μM嘧菌酯或25-200μM 肟菌酯（n=4孔/浓度）。在4、24和48小时时间点，移除100μl培养基使终体积保持100μl，每孔加入20μl复溶的Viability/Cytotoxicity试剂。400rpm轨道震荡30秒后，37°C CO₂培养箱孵育1.5小时。

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ATP与代谢活性细胞 [2]
CellTiter-Glo®发光法细胞活力检测通过测定SH-SY5Y细胞ATP水平反映代谢活性。将约10,000个细胞/100μl接种至三块白色96孔板。分化细胞分别处理6、24和48小时。设置抗霉素A（AM，10μM）作为细胞呼吸链抑制剂阳性对照，氟啶胺（25/50μM）作为线粒体解偶联剂阳性对照。实验组包括培养基对照、0.1% DMSO溶剂对照、阳性对照及0.1-200μM嘧菌酯或肟菌酯（每个时间点≥8个浓度）。37°C 5% CO₂条件下孵育相应时间后，等体积加入CellTiter-Glo®试剂，400rpm震荡30秒，室温反应10分钟。使用Synergy™ 4多功能酶标仪（BioTek）自动增益模式下检测发光信号。

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线粒体膜电位（MMP）检测 [2]
采用线粒体膜电位检测试剂盒（ MAK160–1KT），参照实验室既定方法（Sanchez等, 2020）测定SH-SY5Y细胞在4、24和48小时（n=4/组）的MMP变化。将10,000个细胞/100μl接种至三块黑色96孔板，分化后分别暴露于6.25-100μM嘧菌酯或肟菌酯、溶剂对照（0.1% DMSO）、培养基对照或阳性对照（4/8μM FCCP或10μM AM）。使用Synergy™ 4酶标仪（自动增益模式）检测540/590nm（红）和490/525nm（绿）荧光强度。结果以三次独立实验的红绿荧光强度比均值表示。

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分化SH-SY5Y细胞内活性氧检测 [2]
采用ROS-Glo™ H₂O₂检测试剂盒，参照说明书及实验室方法（Sanchez等, 2020）（n=4/组）测定ROS。将10,000个细胞分别暴露于6.25/12.5/25/50/100μM嘧菌酯或肟菌酯4小时，同时加入20μl H₂O₂底物溶液。37°C孵育4小时后，每孔加入100μl复溶的ROS-Glo™检测液，室温反应20分钟。使用Synergy™ 4酶标仪（自动增益模式）检测化学发光信号。实验独立重复三次，设置不同浓度甲萘醌作为ROS阳性对照。

胚胎急性毒性暴露[3]
\n根据经合组织鱼类胚胎毒性（FET）测试草案提案（经合组织，2013）和先前提出的方法（Fraysse等人，2006）对斑马鱼胚胎进行了急性毒性测试。将受精后2小时（2 hpf）的胚胎随机分配到24孔培养板中（每孔2 mL溶液，1个胚胎），暴露于不同浓度的测试溶液（吡唑醚菌酯：30.0、37.5、47.0、58.6、73.0 μg/L；三氟苯嘧菌酯：30.0、37.5、47.0、58.6、73.0 μg/L；吡唑醚菌酯：60、69、79、91、105 μg/L）中96小时。测试浓度是根据预实验数据（数据未显示）设计的。所有测试溶液均使用复水配制，复水也用作空白对照。溶剂对照组的丙酮和吐温-80含量与各杀菌剂最高浓度测试溶液中的含量相同。在每个24孔板中，20个孔装有测试溶液，4个孔装有复原水作为内对照。每个浓度和对照均重复三次（每个孔板作为一个重复），每个孔板包含60个胚胎。所有测试的24孔板均置于培养箱中（27 ± 1 °C；14:10 小时光照/黑暗周期）。孔板用透明盖覆盖以防止蒸发。每24小时更换一次暴露溶液，以保持合适的杀菌剂浓度和水质。暴露期间立即移除死亡个体。每天使用倒置显微镜检查并记录形态发育和异常情况。使用显微镜计数72小时后存活的斑马鱼胚胎/幼虫在20秒内的心跳次数来测量心率。胚胎孵化率计算为72小时后孵化卵数的百分比。使用Aigo GE-5测量96 hpf幼虫的体长。\n

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\n\n酶活性和基因表达测试的暴露[3]
\n将2 hpf的胚胎随机转移至1 L烧杯中的测试溶液（吡唑醚菌酯：0、10、20、40 μg/L；三氟苯嘧菌酯：0、10、20、40 μg/L；吡唑醚菌酯：0、15、30、60 μg/L）。浓度的选择基于急性毒性试验结果和一些已报道的环境浓度。最低浓度约为96 h-LC50值的1/6，低于中国稻田水中检测到的浓度（Cao et al., 2015; Guo et al., 2016）。最高浓度约为96小时LC50值的2/3，对胚胎有不良影响。每个烧杯中盛有500 mL暴露溶液和200个胚胎，每个浓度处理组设置3个烧杯。暴露期间的外部条件，包括温度、湿度和光照周期，与急性毒性试验相同。每24小时更换一次暴露溶液，以保持适宜的杀菌剂浓度和水质。在受精后96小时（96 hpf），从每个重复组中收集胚胎（120个用于抗氧化指数测定；30个用于RNA提取），并用重构水洗涤两次。胚胎样本储存在−80 °C下以备后续研究。\n

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\n\n土壤和蚯蚓[4]
\n根据经济合作与发展组织（OECD，2016）指南的建议，本研究制备的人工土壤由硅砂（70%）、高岭土（20%）和泥炭藓（10%）组成，pH值为5.5–6.5，用碳酸钙调节。通过添加去离子水，将土壤含水量设定为干土重量的35%。本研究选用的天然土壤为棕壤，取自中国山东省泰安市（北纬36°09′，东经117°09′）的农田。根据中国土壤遗传分类（GSCC），该土壤被归类为棕壤。棕壤采集地没有施用过三氟苯嘧菌酯的历史。本研究使用的棕壤过筛至粒径小于2.0 mm。人工土壤和棕壤的基本数据见“补充材料”表S1。\n蚯蚓（Eisenia fetida）购自京永津蚯蚓养殖场，在毒性试验前饲养两周以适应实验室条件。随机选取具有完全发育的环带的健康个体（体重0.3至0.6 g）。在接触三氟苯嘧菌酯之前，将蚯蚓置于无毒目标土壤中24小时。\n

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\n\n毒性试验设计[4]
\n在人工土壤和棕壤中同时进行亚慢性毒性试验。土壤制备方法为：将50 g土壤加入1 mL三氟苯嘧菌酯-乙腈溶液。将添加三氟苯嘧菌酯的土壤与未添加三氟苯嘧菌酯的土壤混合，制备500 g的样品，其中三氟苯嘧菌酯的浓度分别为0.1、1.0和2.5 mg/kg。对照组土壤的制备方法相同，不添加三氟苯嘧菌酯。通过添加去离子水将土壤湿度调节至田间持水量的60%。每个处理剂量设置三个重复，每个重复加入10条蚯蚓，并在20 ± 1 °C下培养至多56天。培养皿用带孔塑料薄膜密封以确保通风，并在整个处理期间监测土壤湿度（通过重量法），必要时进行调整。在第7、28和56天，从每个浓度组中随机抽取9条蚯蚓（每个重复3条），并在测定暴露指标（ROS、SOD、CAT、GST、MDA和8-OHdG）前进行过夜净化处理。其中，3条赤子爱胜蚓用于ROS含量测定，3条赤子爱胜蚓用于8-OHdG含量测定，3条赤子爱胜蚓用于其他酶指标测定。在整个暴露期间，所有对照组蚯蚓的死亡率均为0，所有暴露组的死亡率均≤90%，符合OECD（2016）指南的要求。

吸收、分布和排泄
雄性和雌性大鼠分别灌胃给予[乙醛基苯基-(U)-(14)C]（比活度范围：54.3至63.5 uCi/mg，放射化学纯度范围：>97%至>99%）或[三氟甲基苯基-(U)-14C]/三氟苯嘧菌酯/（CGA-279202）（比活度：59.2 uCi/mg，放射化学纯度：>99%）。除D2组外，所有组均给予[乙醛基苯基-(U)-(14)C]/三氟苯嘧菌酯/（CGA 279202）。在B1组和D1组中，分别从每性别5只动物（分别给予0.5 mg/kg或100 mg/kg的试验物质）中收集尿液和粪便样本，持续7天。在C1组中，每性别5只动物先用0.5 mg/kg的未标记三氟苯嘧菌酯（CGA 279202）（纯度：99.7%）预处理14天，随后给予0.5 mg/kg的标记试验物质。同样，从这些动物中收集尿液和粪便样本，持续7天。在D2组中，每性别5只动物（给予100 mg/kg的[三氟甲基苯基-(U)-(14)C]三氟苯嘧菌酯（CGA-279202），并收集尿液和粪便样本，持续7天。 F1组和F5组以及F2组和F6组分别对12只雌雄动物分别给予0.5 mg/kg或100 mg/kg的试验物质。根据先前各组的药代动力学测定结果，在4个时间点测定组织残留量。G组动物的胆管被插管。G1组和G3组中，6只雄性动物和5只雌性动物分别给予0.5 mg/kg的试验物质。G2组和G4组中，6只雄性动物和4只雌性动物分别给予100 mg/kg的试验物质。低剂量组的吸收率为56%至65%，胆汁中回收率为41%至47%。高剂量组的吸收率为25%至45%，胆汁中回收率为19%至35%。在低剂量组中，雄性动物尿液和粪便分别排出18%至19%和79%的剂量。雌性动物尿液和粪便分别排出35%至42%和56%至63%的剂量。用未标记的测试物质进行预处理并未改变排泄模式。在高剂量组中，雄性动物尿液和粪便分别排出10%至12%和82%至84%的剂量。雌性动物尿液和粪便分别排出27%和64%至66%的剂量。从D2组动物的呼出气体中回收的放射性标记物含量极低。除高剂量组雌性动物的脾脏和血液（分别为68小时和82小时）外，其他组织中放射性标记物消耗的半衰期为13至42小时。血液中受试物质达到最大浓度的时间为给药后 12 至 24 小时。达到最大浓度的时间范围为给药后 23 至 67 小时。7 天后，胴体中放射性标记物的残留量极低，仅回收了给药剂量的 0.3% 至 0.5%。
三氟苯嘧菌酯在胃肠道中吸收适中，分布迅速。在低剂量组中，雄性和雌性分别吸收了约 56% 和 65% 的给药剂量（基于尿液、粪便、胆汁和组织中的总回收量），其中雄性和雌性胆汁中的含量分别为 41% 和 47%。在高剂量组中，雄性和雌性的吸收率分别为 41% 和 27%，而胆汁中的含量分别为 35% 和 19%。血液动力学研究显示，雌雄动物的吸收率均适中，且均出现两个吸收峰（低剂量组分别在0.5小时和12小时后，高剂量组分别在12小时和24小时后）。血液、肾脏、脾脏和肝脏中的放射性残留量最高，且雌雄动物之间的残留量相当。放射性物质的排泄迅速，约85-96%的剂量在48小时内排出体外。排泄途径受动物性别的影响，雌性动物经尿液排泄的放射性物质量是雄性动物的两倍，分别占总剂量的27-42%和12-19%。雄性动物和雌性动物经粪便排泄的放射性物质量分别占总剂量的79-82%和56-64%。胆汁排泄是雌雄动物的主要排泄途径。研究表明肠肝分流机制参与了药物的清除过程。

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代谢/代谢物
在大鼠体内，吸收的化合物通过广泛的代谢迅速清除，特别是通过酯基的水解。其他重要的代谢途径包括甲氧基亚氨基的O-去甲基化以及甲基侧链氧化为相应的醇和羧酸。
雄性和雌性大鼠分别灌胃给予[乙醛基-苯基-(U)-14C]（放射化学纯度范围：>97%至>99%）或[三氟甲基-苯基-(U)-14C]-/三氟苯嘧菌酯/（CGA-279202）（放射化学纯度：>99%）。除D2组外，所有动物均接受了[乙醛基苯基-(U)-14C]-/三氟苯嘧菌酯/（CGA 279202）的给药。……从尿液、粪便和胆汁样本中分离并鉴定了35种代谢物。主要代谢途径包括：1）甲酯水解为相应的酸；2）甲氧基亚氨基的O-去甲基化；以及3）甲基侧链氧化为伯醇，随后进一步氧化为羧酸。最后一种反应在雌性大鼠中更为显著，并由此分离出主要的性别特异性尿代谢物。乙醛基苯基和三氟甲基苯基部分的裂解占给药剂量的10%。对于三氟甲基苯基片段，羟基亚氨基的氧化生成硝基化合物，甲基的氧化生成羧酸。此外，亚氨基的水解生成中间体酮，后续反应最终生成三氟甲基苯甲酸。对于乙醛基苯基部分，氧化生成苯甲酸。甲氧基亚氨基的O-去甲基化生成羟基亚氨基化合物。亚氨基水解生成α-酮酸，随后脱羧生成邻苯二甲酸。从胆汁中分离出与葡萄糖醛酸或硫酸盐结合的物质。低剂量组和高剂量组分别有4%至7%和31%至47%的未代谢试验物质经粪便排出。吸收的剂量主要在胆汁中分离。进一步处理后，测试物质和/或代谢物返回肠道，并通过粪便排出或经肠肝途径重新吸收。

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生物半衰期
大鼠组织半衰期为 13 至 42 小时。

毒性概述
识别和用途：三氟苯嘧菌酯是一种白色粉末，用作农业杀菌剂。人体暴露和毒性：三氟苯嘧菌酯经皮肤吸收有害。长期或频繁的皮肤接触可能导致部分个体出现过敏反应。动物研究：三氟苯嘧菌酯经口服途径对小鼠和大鼠、经皮肤途径对兔以及经吸入途径对大鼠的急性毒性均较低。三氟苯嘧菌酯经急性灌胃或亚慢性饮食给药后，对大鼠无选择性神经毒性。对大鼠的交配、生育能力或产仔数均无治疗相关影响。在鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA102、TA1535或TA1357菌株以及经代谢活化或未经代谢活化的WP2 uvrA大肠杆菌菌株中，三氟苯嘧菌酯均未表现出致突变性。生态毒性研究：三氟苯嘧菌酯对非目标水生生物具有毒性。三氟苯嘧菌酯可能影响抗氧化酶的活性，干扰普通小球藻的光合作用，并破坏细胞结构。三氟苯嘧菌酯对鱼类胚胎具有剧毒。它对大型蚤（Daphnia magna）具有很强的毒性，即使在环境相关浓度下也能对大型蚤造成伤害。三氟苯嘧菌酯对羊头鱥具有极高的毒性。

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毒性数据
LC50（大鼠）> 4,646 mg/m3

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非人类毒性值
LD50 兔皮肤给药 >2000 mg/kg
LD50 大鼠口服 >4000 mg/kg
LD50 大鼠口服 >5000 mg/kg
LD50 大鼠皮肤给药 >2000 mg/kg

[1]. Trifloxystrobin induces tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)-mediated apoptosis in HaCaT, human keratinocyte cells . Drug and Chemical Toxicology, 2017, 40(1): 67-73.

[2]. Neurotoxicity assessment of QoI strobilurin fungicides azoxystrobin and trifloxystrobin in human SH-SY5Y neuroblastoma cells: Insights from lipidomics and mitochondrial bioenergetics. Neurotoxicology, 2022, 91: 290-304.

[3]. Developmental toxicity, oxidative stress and immunotoxicity induced by three strobilurins (pyraclostrobin, trifloxystrobin and picoxystrobin) in zebrafish embryos . Chemosphere, 2018, 207: 781-790.

[4]. Oxidative stress and DNA damage induced by trifloxystrobin on earthworms (Eisenia fetida) in two soils . Science of The Total Environment, 2021, 797: 149004.

[5]. Trifloxystrobin blocks the growth of Theileria parasites and is a promising drug to treat Buparvaquone resistance . Communications Biology, 2022, 5(1): 1253.

作用机制
……本研究旨在利用HaCaT（人皮肤角质形成细胞）细胞，探究三氟苯嘧菌酯的皮肤毒性机制。在处理24或48小时后，检测细胞活力，并进行Annexin V-FITC/碘化丙啶双染、TUNEL和Western blotting实验，以研究三氟苯嘧菌酯的细胞死亡机制。结果表明，三氟苯嘧菌酯处理导致HaCaT细胞活力呈时间和浓度依赖性下降。HaCaT细胞的死亡是通过凋亡途径发生的。此外，我们还利用siRNA转染技术，探讨了三氟苯嘧菌酯对TRAIL介导的外源性凋亡的影响。敲低死亡受体5可抑制三氟苯嘧菌酯诱导的细胞凋亡。这些结果表明，三氟苯嘧菌酯可诱导TRAIL介导的细胞凋亡，并对角质形成细胞具有抑制作用，从而干扰皮肤的屏障功能和完整性……
甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂通过破坏细胞色素复合物抑制线粒体呼吸，从而阻断电子传递。/甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂/

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三氟苯嘧菌酯是(2E)-(甲氧基亚氨基)[2-({[(E)-{1-[3-(三氟甲基)苯基]亚乙基}氨基]氧基}甲基)苯基]乙酸的甲酯。它是一种叶面喷施的谷类杀菌剂，对子囊菌、半知菌和卵菌尤其有效。它作为线粒体细胞色素bc1复合物抑制剂和抗真菌农药发挥作用。它是一种肟醚、有机氟化合物、甲酯和甲氧基亚氨基乙酸酯类抗真菌剂。
苯乙酸，α-(甲氧基亚氨基)-2-[[[(E)-[1-[3-(三氟甲基)苯基]亚乙基]氨基]氧基]甲基]-，甲酯，(αE)-，已在中华蜜蜂(Apis cerana)中被报道，并有相关数据。
三氟苯嘧菌酯是一种叶面喷施的谷类杀菌剂，对子囊菌、半知菌和卵菌尤其有效。它具有广谱杀菌作用，兼具预防和治疗功效。它是一种呼吸抑制剂（生活质量杀菌剂）。

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总之，由于农业领域持续使用甲氧基亚氨基乙酸酯类杀菌剂，人们开始研究这些广谱杀菌剂对非目标人群和动物的潜在不良影响。这些杀菌剂可能影响神经元线粒体的生物能量学，因此有必要研究其神经毒性，尤其考虑到线粒体功能障碍与神经退行性疾病之间存在直接的因果关系。事实上，流行病学研究已将与自闭症、脑衰老和神经退行性疾病相关的转录标记归因于环境神经毒物的影响，包括甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，例如吡唑醚菌酯、三氟苯嘧菌酯和苯甲胺酮（Pearson等，2016）。因此，有必要开展机制研究，量化甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂在环境和职业暴露后对神经元细胞的风险并研究其神经毒性。[2]

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总之，我们的结果表明，吡唑醚菌酯、三氟苯嘧菌酯和吡唑醚菌酯对斑马鱼胚胎表现出较高的急性毒性。暴露于三种杀菌剂的胚胎表现出心率降低、孵化抑制、生长倒退和形态畸形，且这些症状均呈浓度依赖性。这种发育毒性的潜在机制可能部分与活性氧（ROS）的异常生成、丙二醛（MDA）含量的增加、抗氧化酶活性的变化以及与氧化应激和免疫系统相关的基因mRNA水平的改变有关。这些参数的不同变化可能是造成三种杀菌剂毒性差异的原因。由于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对真菌的分子靶点是线粒体复合物Ⅲ，因此未来需要研究这些杀菌剂对鱼类线粒体的影响，以充分了解甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对水生生物的毒性机制。[3]

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本研究加深了对三氟苯嘧菌酯对蚯蚓毒性机制的理解，并在此基础上评估了人工土壤和棕色土壤中毒性的差异。蚯蚓暴露于三氟苯嘧菌酯后，其体内活性氧（ROS）含量积累，且随暴露浓度的增加而升高。ROS的产生导致赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）体内抗氧化酶（SOD、CAT）和解毒酶（GST）的活性发生不同的变化。这些结果表明，三氟苯嘧菌酯能够诱导人工土壤和棕壤中赤子爱胜蚓的氧化应激。此外，三氟苯嘧菌酯（浓度高于2.5 mg/kg）还能引起脂质过氧化和DNA损伤，表现为蚯蚓体内丙二醛（MDA）和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量的增加。经2.5 mg/kg三氟苯嘧菌酯暴露56天后，蚯蚓的IBR值表明，三氟苯嘧菌酯在棕壤中的毒性高于人工土壤。在人工土壤中进行的生态毒理学实验可能低估了三氟苯嘧菌酯对蚯蚓的毒性。上述结果为进一步了解甲氧基丙烯酸酯类在实际情况下的毒理学效应提供了理论基础，并且可能有助于评估土壤生态系统中甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的暴露情况。[4]

C20H19F3N2O4

408.3772

408.129

C, 58.82; H, 4.69; F, 13.96; N, 6.86; O, 15.67

141517-21-7

Trifloxystrobin-d6;2470226-50-5;Trifloxystrobin-d3

9578570

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

470.3±55.0 °C at 760 mmHg

72.9°

238.3±31.5 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.511

5.11

69.15

0

9

8

29

607

0

C/C(=N\OCC1=CC=CC=C1/C(=N/OC)/C(=O)OC)/C2=CC(=CC=C2)C(F)(F)F

ONCZDRURRATYFI-QTCHDTBASA-N

InChI=1S/C20H19F3N2O4/c1-13(14-8-6-9-16(11-14)20(21,22)23)24-29-12-15-7-4-5-10-17(15)18(25-28-3)19(26)27-2/h4-11H,12H2,1-3H3/b24-13+,25-18-

methyl (2Z)-2-methoxyimino-2-[2-[[(E)-1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]ethylideneamino]oxymethyl]phenyl]acetate

CGA 279202; 141517-21-7; Benzeneacetic acid, alpha-(methoxyimino)-2-[[[(E)-[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]ethylidene]amino]oxy]methyl]-, methyl ester, (alphaE)-; CHEBI:81833; CGA 279202; Consist; Trifloxystrobine; Zato; Trifloxystrobin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~306.09 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (5.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (5.31 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。