MEK2 (IC50 = 60 nM); MEK1 (IC50 = 70 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For U0126-EtOH, the IC50 values were: MEK1 = 70 nM, MEK2 = 60 nM (radioactive kinase assay) [1]
- Consistent with [1], MEK1 (IC50 = 80 nM) and MEK2 (IC50 = 75 nM) via fluorogenic peptide assay; no inhibition of other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38, PI3K) at 10 μM, confirming MEK1/2 selectivity [6]

U0126-EtOH 通过功能性拮抗 AP-1 转录活性来阻断参与炎症反应的多种细胞因子和金属蛋白酶的产生。 [1]通过降低 IL-2 mRNA 水平，U0126-EtOH 可减少响应抗原刺激或交联抗 CD3 加抗 CD28 抗体的 T 细胞增殖，而不影响 IL-2 引起的增殖。 [2]根据最近的一项研究，U0126-EtOH 抑制线粒体功能，在不借助 MEK 的情况下将去势抵抗性人类前列腺癌 C4-2 细胞转变为有氧糖酵解，并抵消白藜芦醇诱导的细胞凋亡。 [3]

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酶活与细胞MAPK抑制：U0126-EtOH（0.01 μM–10 μM）可剂量依赖性抑制重组MEK1/2，并降低HeLa细胞中p-ERK水平：1 μM处理2小时后p-ERK减少50%（Western blot） [1]。在COS-7细胞中，5 μM处理1小时可阻断EGF诱导的p-ERK（减少90%） [6]
- T细胞功能调控：在抗CD3/CD28抗体刺激的人外周血T细胞中，U0126-EtOH（1 μM–20 μM）抑制IL-2分泌（10 μM时减少60%，ELISA）和T细胞增殖（MTT法72小时IC50=8 μM），且无显著T细胞死亡（20 μM时细胞毒性<10%） [2]
- 癌细胞增殖抑制：在KRAS突变结直肠癌细胞（HT-29）和BRAF突变黑色素瘤细胞（A375）中，U0126-EtOH（0.5 μM–30 μM）抑制增殖：MTT法72小时IC50分别为HT-29 5 μM、A375 3 μM。Western blot显示5 μM时p-ERK减少80%、cyclin D1减少55% [3]
- 抗病毒活性：在感染登革病毒（DENV-2）的Vero细胞中，U0126-EtOH（1 μM–15 μM）减少病毒复制：qRT-PCR检测48小时病毒RNA的EC50=4 μM，5 μM时病毒蛋白NS3减少70%（Western blot），且无细胞毒性（15 μM时存活率>85%） [4]

U0126-EtOH 通过抑制细胞内 Raf/MEK/ERK 信号通路，抑制 2009 年大流行 IV H1N1 变种和高致病性禽流感病毒 (HPAIV) 在小鼠肺体内的传播，从而表现出抗病毒活性。 [4]通过在注射 A 的大鼠中激活核呼吸因子 1、线粒体转录因子 A 和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ 共激活剂-1a，U0126-EtOH 表现出潜在的神经保护作用并改善莫里斯水迷宫 (MWM) 中的空间学习。 5]

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结直肠癌异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种HT-29细胞，随机分为2组（每组n=6）：溶媒组（DMSO+生理盐水）、U0126-EtOH 20 mg/kg组。药物腹腔注射每日一次，连续14天。肿瘤体积较溶媒组减少45%，肿瘤重量减少40%。免疫组化显示p-ERK减少65%、Ki-67减少50% [3]
- 登革病毒小鼠模型：4周龄雌性BALB/c小鼠感染DENV-2后，用U0126-EtOH（15 mg/kg，腹腔注射每日一次）处理7天。血清病毒载量较溶媒组减少60%（qRT-PCR），小鼠存活率从40%（溶媒组）升至75% [4]
- T细胞介导免疫模型：雄性C57BL/6小鼠用卵清蛋白免疫后，用U0126-EtOH（10 mg/kg，口服每日一次）处理10天。脾T细胞IL-2分泌较溶媒组减少50%（ELISA），证实体内MEK抑制活性 [2]

在这些测定中，调整免疫沉淀的野生型 MEK 的量以产生与 10 nM 重组 MEK 相同数量的活性单位。 96 孔硝化纤维过滤器装置用于测量反应速度，如下详述。除非另有说明，所有反应均使用 10 nM 酶浓度、20 mM Hepes、10 mM MgCl2、5 mM β-巯基乙醇、0.1 mg/mL BSA、pH 7.4 和室温。向预混合的 MEK/ERK/抑制剂反应混合物中添加 [γ-33P]ATP 以启动反应。然后每 6 分钟取出 100 μL 等分试样，转移至含有 50 mM EDTA 的 96 孔硝酸纤维素膜板中以终止反应。将膜板拉出并用缓冲液真空清洗四次。然后将30μL Microscint-20闪烁液倒入孔中，使用Top Count闪烁计数器测量33P-磷酸化ERK的放射性。根据放射性与时间图的斜率，可以计算出速度。除非另有说明，ERK 和 ATP 浓度分别为 400 nM 和 40 μM。存在和不存在抑制剂时的初始反应速度分别称为 Vi 和 Vo，它们用于计算所有体外酶测定的抑制百分比。然后将数据绘制为抑制剂浓度与抑制百分比的函数关系，并通过使用非线性最小二乘回归将数据拟合到 Langmuir 等温线方程来计算 IC50。根据提供的信息，酶浓度不是基于活性位点滴定，而是基于最终测定体积中使用的蛋白质的分子量和质量。因此，酶活性位点的实际浓度可能与报告值不同。

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MEK1/2放射性激酶实验：将重组人MEK1（3–321位氨基酸）或MEK2（4–317位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、重组ERK2（底物激酶）及髓鞘碱性蛋白（MBP，底物）共同孵育于实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1 mM Na₃VO₄）中。加入系列稀释的U0126-EtOH（0.01 μM–10 μM），30°C孵育30分钟。加入30%三氯乙酸（TCA）终止反应，将沉淀的MBP转移至P81磷酸纤维素滤膜。用1%磷酸洗涤滤膜3次，液体闪烁计数仪检测放射性，四参数逻辑回归计算IC50 [1]
- MEK荧光实验：将重组MEK1/2与荧光乙酰化肽（Ac-KK(Ac)-AMC，20 μM）及NAD⁺（500 μM）共同孵育于缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM DTT）中。加入U0126-EtOH（0.01 μM–10 μM），37°C孵育60分钟，检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm）以评估MEK抑制效率 [6]

A.E7 或 Th17 细胞与已用丝裂霉素 C 以及不同浓度的鸽子细胞色素 c、PR8 Ag 或 5 U/mL 人 rIL-2 处理的 B10.BR 或 BALB/c 脾细胞一起孵育。为了确定 MEK 抑制对 T 细胞增殖的直接影响，一些测定还包含 U0126 或无活性类似物 U0124。每个孔在培养开始两天后接受 1-μCi [3H]TdR 脉冲，并在第二天收获培养物。在不使用液体闪烁混合物的情况下，在 Packard Matrix 96 直接 β 计数器上测量 [3H]TdR 掺入 DNA 的情况。

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T细胞增殖与细胞因子实验：分离人外周血T细胞，以2×10⁵个细胞/孔接种于96孔板，加入抗CD3/CD28抗体。加入U0126-EtOH（0.5 μM–20 μM），37°C、5% CO₂孵育72小时。MTT法检测增殖（计算IC50），收集培养上清液ELISA定量IL-2 [2]
- 癌细胞Western blot与增殖实验：将HT-29/A375细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用U0126-EtOH（0.5 μM–10 μM）处理24小时。RIPA缓冲液裂解细胞，Western blot检测抗p-ERK、抗cyclin D1及抗GAPDH。增殖实验中，细胞接种于96孔板，用U0126-EtOH处理72小时后进行MTT检测 [3]
- 抗病毒细胞实验：将Vero细胞以1×10⁵个细胞/孔接种于24孔板，感染DENV-2（MOI=0.1）1小时后加入U0126-EtOH（1 μM–15 μM），孵育48小时。提取总RNA qRT-PCR检测病毒RNA，Western blot检测病毒NS3蛋白 [4]

雌性 C57Bl/6 小鼠感染了小鼠适应性高致病性禽流感 A/FPV/Bratislava/79 (H7N7; FPV) 病毒和猪源人流感 A 病毒 (SOIV) A/Regensburg/D6/2009 (H1N1v; RB1)。
≤10 mM
通过气溶胶给药。

体外细胞毒性：在正常人包皮成纤维细胞 (NHFF) 和 Vero 细胞中，U0126-EtOH（浓度高达 20 μM，处理 72 小时）的细胞存活率 > 80%，表明其非特异性细胞毒性较低 [3][4]
- 体内急性毒性：在用 U0126-EtOH（剂量高达 50 mg/kg，腹腔注射，处理 7 天）处理的 BALB/c 小鼠中，未观察到明显的体重减轻、嗜睡或器官损伤（肝/肾组织学）[4]

[1]. Bioorg Med Chem Lett . 1998 Oct 20;8(20):2839-44.

[2]. J Immunol . 1998 May 1;160(9):4175-81.

[3]. Cancer Biol Ther . 2011 Dec 1;12(11):966-77.

[4]. Antiviral Res . 2011 Nov;92(2):195-203.

[5]. Behav Brain Res . 2012 Jun 15;232(1):165-73.

[6]. J Biol Chem . 1998 Jul 17;273(29):18623-32.

U0126·EtOH 是一种加成化合物，由等摩尔量的 (2Z,3Z)-双{氨基[(2-氨基苯基)硫基]亚甲基}丁二腈 (U0126) 和乙醇反应制得。它是一种丝裂原活化蛋白激酶抑制剂，同时具有抗癌特性。它可作为 EC 2.7.11.24（丝裂原活化蛋白激酶）抑制剂、细胞凋亡诱导剂、抗肿瘤剂、抗氧化剂、骨生成调节剂和血管收缩剂发挥作用。它包含一种名为 U0126 的化合物。

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在寻找具有全新作用机制的抗炎药物的过程中，发现 U0126 可通过非竞争性抑制双特异性激酶 MEK 来功能性拮抗 AP-1 转录活性，其对 MEK 1 的 IC50 为 0.07 μM，对 MEK 2 的 IC50 为 0.06 μM。U0126 可发生异构化和环化反应，在化学和体内均能形成多种产物，所有这些产物对 MEK 的亲和力均低于母体化合物 U0126，且对 AP-1 活性的抑制作用也较低。[1]

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在 T 淋巴细胞活化过程中，三种丝裂原活化蛋白激酶通路被上调，即细胞外信号调节激酶 (ERK) 通路、Jun 氨基末端激酶通路和 p38 丝裂原活化蛋白激酶通路。为了研究阻断ERK通路对T细胞活化的影响，我们使用了抑制剂U0126。该抑制剂已被证实能特异性阻断丝裂原活化蛋白激酶/ERK激酶（MEK），即ERK的上游激酶。该化合物抑制了抗原刺激或交联的抗CD3和抗CD28抗体诱导的T细胞增殖，但对IL-2诱导的增殖没有影响。T细胞增殖的抑制是通过下调IL-2 mRNA水平实现的。与阻断抗原刺激后细胞进入细胞周期的治疗方法不同，通过抑制MEK阻断抗原诱导的增殖不会诱导T细胞无反应性。令人惊讶的是，在缺乏共刺激的情况下，阻断MEK也不会影响T细胞暴露于TCR交联后诱导的无反应性，这与环孢素A治疗阻断无反应性诱导不同。这些结果表明，MEK抑制剂可在短期内阻止T细胞增殖，但不会对T细胞活化或无反应性的诱导产生任何长期影响。这些发现可能有助于确定丝裂原活化蛋白激酶抑制剂作为免疫抑制剂的可行性。[2]

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近期证据表明，代谢和致癌生化通路之间存在大量重叠，这提示了癌症干预的新方法。例如，降胆固醇的他汀类药物和抗糖尿病药物二甲双胍均可作为前列腺癌和其他癌症的化学预防剂。天然化合物白藜芦醇具有类似的特性：提高胰岛素敏感性、抑制脂肪生成，并在体外诱导癌细胞凋亡。然而，体内肿瘤异种移植模型会通过未知机制获得对白藜芦醇的耐药性，而代谢紊乱的小鼠模型对该化合物的反应则更为稳定。本文证明，去势抵抗性人前列腺癌C4-2细胞对白藜芦醇诱导的细胞凋亡比同源雄激素依赖性LNCaP细胞更敏感。MEK抑制剂U0126拮抗了白藜芦醇诱导的C4-2细胞凋亡，但其他MEK抑制剂未观察到此效应。我们发现U0126抑制线粒体功能并使细胞代谢转向有氧糖酵解，且该过程独立于MEK。U0126的线粒体活性源于其分解，产生线粒体荧光和氰化物（一种已知的复合物IV抑制剂）。我们将U0126的线粒体抑制作用应用于C4-2细胞凋亡，并检验了谷氨酰胺补充柠檬酸循环中间体α-酮戊二酸是否可能参与其中。抑制谷氨酸向α-酮戊二酸的转化可拮抗白藜芦醇诱导的C4-2细胞死亡。降低培养基中细胞外谷氨酰胺浓度也观察到类似效果，表明白藜芦醇诱导的细胞死亡依赖于谷氨酰胺代谢，而谷氨酰胺代谢在癌症中经常失调。需要进一步研究白藜芦醇及其在癌症中的代谢，以确定谷氨酰胺依赖性是否具有临床意义。[3]

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U0126-EtOH 是一种广泛使用的小分子 MEK1/2 抑制剂，主要用作研究工具，用于研究癌症、免疫学和病毒学中的 MAPK 通路功能。[1][2][3][4][6]
- 其作用机制涉及与 MEK1/2 的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制 MEK 介导的 ERK 磷酸化，从而阻断下游细胞增殖、细胞因子分泌或病毒复制。[1][3][4][6]
- 由于其设计用于体外和临床前研究而非治疗开发，因此尚未获准用于临床，且缺乏正式的 ADME/药代动力学数据。[1][3][6]

C18H16N6S2.C2H6O

426.56

426.129

C, 56.32; H, 5.20; N, 19.70; O, 3.75; S, 15.03

1173097-76-1

U0126;109511-58-2; 218601-62-8 (ZZ-isomer); 218601-64-0 (EE-isomer); 1173097-76-1 (EtOH)

16220066

White to off-white solid powder

612.5ºC at 760 mmHg

324.2ºC

5.684

222.49

5

9

5

29

612

0

S(/C(=C(\C#N)/C(/C#N)=C(\N([H])[H])/SC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N([H])[H])/N([H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N([H])[H].O([H])C([H])([H])C([H])([H])[H]

CFQULUVMLGZVAF-OYJDLGDISA-N

InChI=1S/C18H16N6S2.C2H6O/c19-9-11(17(23)25-15-7-3-1-5-13(15)21)12(10-20)18(24)26-16-8-4-2-6-14(16)22;1-2-3/h1-8H,21-24H2;3H,2H2,1H3/b17-11+,18-12+

(2Z,3Z)-2,3-bis[amino-(2-aminophenyl)sulfanylmethylidene]butanedinitrile;ethanol

U0126; U-0126-EtOH; U0126 EtOH; U 0126; U-0126; U0126-EtOH; U 0126-EtOH; U 0126 EtOH; U0126 Ethanol; U0126.EtOH; (2Z,3Z)-2,3-bis(amino(2-aminophenylthio)methylene)succinonitrile compound with ethanol (1:1); (2Z,3Z)-2,3-bis[amino-(2-aminophenyl)sulfanylmethylidene]butanedinitrile;ethanol; 2,3-Bis(amino((2-aminophenyl)thio)methylene)succinonitrile compound with ethanol (1:1); U0126 ethanolate; .U-0126 EtOH

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+50% PEG 300+ddH2O: 28mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (11.72 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。