UK-371804: Selective inhibitor of urokinase-type plasminogen activator (uPA) with a Ki value of 10 nM; it exhibits high selectivity, showing 4000-fold selectivity over tissue-type plasminogen activator (tPA) and 2700-fold selectivity over plasmin [1]

在人慢性伤口液中，UK-371804可以抑制外源性uPA (IC50=0.89 μM)。 UK-371804 的特点是具有出色的酶效 (Ki=10 nM) 和选择性（与 tPA 相比为 4000 倍，与纤溶酶相比为 2700 倍）[1]。

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酶抑制活性：UK-371804 是一种强效且高选择性的尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）抑制剂。在酶活性实验中，其Ki值为10 nM，表明对uPA具有强结合亲和力；具有优异的选择性，对uPA的抑制活性分别是tPA的4000倍和纤溶酶的2700倍[1]
- 人慢性伤口液中uPA抑制作用：在利用人慢性伤口液进行的体外实验中，UK-371804 能有效抑制伤口液中存在的外源性uPA活性，IC50值为0.89 μM[1]

局部应用后，UK-371804 可以穿透猪急性切除伤口模型中的猪伤口，降低外源性 uPA 活性，而不会对伤口愈合参数产生负面影响。在真皮中，UK-371804 浓度为 41.8 μM[1]。

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猪急性切除伤口模型中的活性：在猪急性切除伤口模型中，UK-371804 经局部给药后，能够渗透到猪的伤口组织中，并有效抑制外源性uPA活性。重要的是，局部应用UK-371804 对伤口愈合参数（如伤口闭合率、组织再生情况等）无任何不良影响[1]

uPA、tPA及纤溶酶抑制活性检测实验：
1. 酶与底物制备：纯化尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）、组织型纤溶酶原激活剂（tPA）和纤溶酶，获得具有活性的酶制剂；为每种酶制备特异性发色或发荧光底物，这些底物在被相应酶切割后可释放可检测信号。
2. 反应体系构建：针对每种酶（uPA、tPA、纤溶酶），制备包含酶、适宜缓冲液和不同浓度UK-371804 的反应混合物，在合适温度（如37°C）下孵育一定时间，使抑制剂与酶充分相互作用。
3. 底物加入与检测：向各反应混合物中加入对应酶的特异性底物，继续孵育；使用酶标仪监测底物切割产生的信号（如吸光度或荧光强度）随时间的变化，以此衡量酶活性。
4. 数据分析：计算不同浓度UK-371804 存在下的酶活性相对于对照组（无抑制剂）的百分比；采用动力学分析方法确定UK-371804 对uPA的Ki值（10 nM），并计算相对于tPA（4000倍）和纤溶酶（2700倍）的选择性比例[1]
- 人慢性伤口液中uPA抑制实验：
1. 样本制备：收集人慢性伤口液，通过离心或过滤去除碎片和杂质，获得澄清的伤口液样本。
2. 反应体系构建：制备包含慢性伤口液（含外源性uPA）、反应缓冲液和不同浓度UK-371804 的反应混合物，同时设置不含抑制剂的对照组。
3. 底物加入与孵育：向反应混合物中加入uPA特异性底物，在适宜温度下孵育特定时间，使反应进行。
4. 检测与IC50计算：检测底物切割产生的信号，评估各反应混合物中剩余的uPA活性；根据抑制剂浓度和对应的uPA活性绘制剂量-效应曲线，计算UK-371804 抑制人慢性伤口液中uPA活性的IC50值（0.89 μM）[1]

Two female pigs are subjected to eight excisional wounds. The wounds are dressed and treated daily for 10 days with either 1 mL of a 10 mg/mL formulation of UK-371804 in hydrogel vehicle.
Pig

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Porcine acute excisional wound model experiment:
1. Animal preparation: Use pigs as experimental animals and acclimate them to the laboratory environment for a period before the experiment to ensure their physical condition is stable.
2. Wound creation: Create acute excisional wounds of uniform size and depth on the designated area of the pigs' skin using a standardized surgical method. Ensure the wounds are consistent in terms of location, size, and depth across all experimental animals.
3. Drug preparation and administration: Prepare UK-371804 into a suitable topical formulation (e.g., cream, gel, or solution) at the desired concentration. Apply the drug formulation topically to the created wounds according to a predetermined schedule (e.g., once daily for a specific number of days). Set up a control group that receives a vehicle formulation without the drug.
4. Sample collection and detection: At specified time points after drug administration, collect wound tissue samples or wound fluid (if applicable) to detect uPA activity. Use appropriate biochemical assays to measure the inhibitory effect of UK-371804 on exogenous uPA activity in the wounds.
5. Wound healing assessment: Regularly observe and record wound healing parameters, such as wound closure rate, epithelialization, and tissue granulation formation. At the end of the experiment, perform histological analysis of the wound tissue to evaluate the effect of the drug on wound healing at the tissue level [1]

在猪伤口模型中进行的体内安全性评估：在猪急性切除伤口模型中局部应用UK-371804不会对伤口愈合参数产生任何不良影响。未发现伤口延迟闭合、组织再生异常或伤口部位出现局部毒性反应（如炎症、发红或肿胀）的证据[1]

[1]. Selective urokinase-type plasminogen activator inhibitors. 4. 1-(7-sulfonamidoisoquinolinyl)guanidines. J Med Chem. 2007 May 17;50(10):2341-51.

化学结构及优化：UK-371804属于1-(7-磺酰胺基异喹啉基)胍系列化合物。它是以1-异喹啉基胍为模板，引入7-磺酰胺基团以提高效力和选择性而开发的。源自氨基酸的磺酰胺部分进一步改善了其药理学特性[1]
- 结合模式研究：通过X射线共结晶研究，我们研究了UK-371804与uPA的结合模式，从而深入了解了其对uPA的高选择性和效力，为进一步优化uPA抑制剂的结构奠定了基础[1]
- 治疗潜力：基于其强大的uPA抑制活性、高选择性、穿透伤口组织的能力以及在动物模型中的安全性，UK-371804已被选为进一步临床前评估的候选药物，有望用于治疗慢性皮肤溃疡[1]

C14H16CLN5O4S

385.82

385.06

C, 43.58; H, 4.18; Cl, 9.19; N, 18.15; O, 16.59; S, 8.31

256477-09-5

256477-09-5;256476-36-5 (HCl);

9952109

White to off-white solid powder

0.7

169

4

7

5

25

644

0

XSDAXWRCPTYNOD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H16ClN5O4S/c1-14(2,12(21)22)20-25(23,24)7-3-4-8-9(5-7)11(19-13(16)17)18-6-10(8)15/h3-6,20H,1-2H3,(H,21,22)(H4,16,17,18,19)

2-[[4-chloro-1-(diaminomethylideneamino)isoquinolin-7-yl]sulfonylamino]-2-methylpropanoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 0.83 mg/mL (2.15 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 8.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (2.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。