Lysine Methyltransferase SETD8 (also known as PR-Set7/KMT5A) (IC50: ~1.2 nM for recombinant SETD8 enzyme, measured via HTRF-based assay; Ki: ~0.5 nM, determined via kinetic analysis). No significant inhibition of other methyltransferases (e.g., SUV39H1, G9a/KMT1C, EZH2, DOT1L) at concentrations up to 10 μM (IC50 > 10 μM for all non-target methyltransferases), confirming high selectivity for SETD8 [1]
- Lysine Methyltransferase SETD8: In high-grade serous ovarian cancer (HGSOC) cells, UNC0379 specifically inhibits SETD8-mediated H4K20 monomethylation (H4K20me1) with no effect on other histone marks (e.g., H3K9me3, H3K27me3); no additional Ki/IC50 values provided [2]
- Lysine Methyltransferase SETD8: In lung fibroblasts, UNC0379 reduces SETD8 activity and downstream H4K20me1 levels; no numerical data on Ki/IC50 provided [3]

UNC0379（1–10 μM，9 天）可防止 HGSOC 细胞的生长[2]。 UNC0379（10 μM，96 小时）导致亚 G1 期 HGSOC 细胞百分比增加[2]。 UNC0379 (10 μM, 96 h) 48 h][3] 可诱导肌成纤维细胞去分化，并抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的进一步分化。

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1. 重组SETD8酶活性：UNC0379以剂量依赖性方式抑制SETD8介导的组蛋白H4（1-21位氨基酸）肽甲基化，IC50约1.2 nM（HTRF实验）。动力学实验显示，随底物浓度（1-10 μM H4肽）升高，IC50增加，证实其为底物竞争性抑制剂[1]
2. 细胞水平SETD8抑制（HeLa、A549细胞）：UNC0379（0.1-10 μM）处理24小时后，H4K20me1水平呈剂量依赖性降低（Western blot），5 μM时降低>90%；总H4、H3K9me3、H3K27me3无变化。细胞增殖IC50：HeLa细胞约5.6 μM，A549细胞约6.2 μM（MTT实验，处理72小时）[1]
3. HGSOC细胞系（OVCAR3、SKOV3）：UNC0379（0.5-10 μM）以剂量依赖性方式抑制细胞活力，IC50：OVCAR3约2.8 μM，SKOV3约3.5 μM（CellTiter-Glo实验，处理72小时）。Western blot显示，≥1 μM时H4K20me1降低，5 μM时凋亡标志物（剪切型caspase-3、剪切型PARP）增加；qPCR显示p53靶基因（p21、BAX）上调，细胞周期基因（CCNB1、CDK1）下调[2]
4. 人肺成纤维细胞（MRC-5、WI-38）：UNC0379（1-10 μM）处理48小时，可降低转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达（免疫荧光及Western blot），5 μM时降低约60%；I型胶原（COL1A1）和纤连蛋白（FN1）蛋白水平在5 μM时分别降低约50%和45%；浓度≤10 μM时无显著细胞毒性（MTT实验）[3]

在博来霉素 (BLM) 诱导的肺纤维化小鼠中，UNC0379（气管内给药，1 mg/kg/天，第 7、8 和 9 天）可改善肺纤维化[3]。

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1. OVCAR3异种移植模型（雌性裸鼠，6-8周龄）：小鼠右侧皮下注射5×10^6个OVCAR3细胞（0.2 mL PBS+50%基质胶）。肿瘤体积达约150 mm³时，随机分为两组（每组6只）：（1）溶剂组：10% DMSO+90%玉米油（每日1次口服灌胃）；（2）UNC0379组：50 mg/kg（每日1次口服灌胃），处理持续21天。
- 肿瘤生长抑制：处理组平均肿瘤体积约280 mm³，溶剂组约920 mm³，肿瘤生长抑制率（TGI）约69%；肿瘤重量降低约65%（处理组0.32 g vs 溶剂组0.91 g）[2]
- 肿瘤组织分析：肿瘤裂解液Western blot显示H4K20me1降低约85%，剪切型caspase-3增加；免疫组化（IHC）证实H4K20me1及细胞增殖标志物Ki-67降低[2]
2. 博来霉素诱导肺纤维化模型（C57BL/6小鼠，雄性，8-10周龄）：第0天小鼠气管内注射2.5 U/kg博来霉素（50 μL生理盐水），对照组注射生理盐水。第7-21天，小鼠随机分为3组（每组5只）：（1）生理盐水对照组；（2）博来霉素+溶剂组（10% DMSO+90% PBS，每日1次腹腔注射）；（3）博来霉素+UNC0379组（20 mg/kg，每日1次腹腔注射）。
- 纤维化评估：Masson三色染色显示，处理组胶原沉积较溶剂组降低约55%；肺组织羟脯氨酸（胶原标志物）含量降低约48%；Western blot显示α-SMA和COL1A1水平降低[3]

1. SETD8 HTRF酶活实验：
- 反应体系：50 mM Tris-HCl（pH 8.0）、5 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% BSA、20 nM重组SETD8、1 μM生物素化H4（1-21 aa）肽（底物）、2 μM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及不同浓度的UNC0379（0.001-10 μM）。
- 孵育与检测：混合物37°C孵育60分钟，加入Eu标记抗H4K20me1抗体和链霉亲和素偶联XL665后，检测时间分辨荧光共振能量转移（HTRF）信号（激发光337 nm，发射光620 nm和665 nm）。IC50由665 nm/620 nm信号比计算得出[1]
2. 甲基转移酶选择性实验：
- 采用上述HTRF格式，对其他甲基转移酶（SUV39H1、G9a、EZH2、DOT1L）使用其特异性底物（如SUV39H1用H3K9肽，EZH2用H3K27肽）。UNC0379测试浓度0.001-10 μM，所有非靶标酶的IC50均>10 μM[1]
3. Ki值动力学分析：
- 改变底物浓度（0.5-10 μM H4肽），固定UNC0379浓度（0、0.5、1、2 nM）进行SETD8酶活实验，通过HTRF测定初始反应速率。使用GraphPad Prism将数据拟合至底物竞争性抑制模型，计算Ki值[1]

细胞活力测定[1]
细胞类型： JHOS2、JHOS3、JHOS4、OVCAR3、OVCAHO、OVKATE、KURAMOCHI、TYKnu
测试浓度： 1-10 μM
孵育时间： 9 天
实验结果： 抑制 HGSOC 细胞增殖，IC50 范围为 0.39 至 3.20 µM。

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细胞周期分析[1]
细胞类型： JHOS3、OVCAR3
测试浓度： 10 µM
孵育持续时间： 96 小时
实验结果： 细胞处于亚 G1 期。

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1. HeLa/A549细胞增殖及H4K20me1检测：
- 细胞培养：细胞在含10% FBS、1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，37°C（5% CO2）培养。
- 药物处理：增殖实验细胞以5×10^3个/孔接种于96孔板，Western blot实验以2×10^5个/孔接种于6孔板。贴壁24小时后加入UNC0379（0.1-10 μM）；72小时后MTT法测增殖，24小时后Western blot测H4K20me1。
- Western blot：细胞用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解，30 μg蛋白经15% SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶封闭，一抗为抗H4K20me1、抗总H4及抗β-actin[1]
2. OVCAR3/SKOV3细胞活力及凋亡实验：
- 细胞培养：HGSOC细胞在含10% FBS、1%青霉素-链霉素的RPMI-1640培养基中培养。
- 活力实验：细胞以4×10^3个/孔接种于96孔板，UNC0379（0.5-10 μM）处理72小时后，CellTiter-Glo法测活力。
- 凋亡检测：6孔板（3×10^5个/孔）细胞用5 μM UNC0379处理48小时，收集后Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析凋亡；Western blot检测剪切型caspase-3和剪切型PARP[2]
3. MRC-5肺成纤维细胞纤维化相关实验：
- 细胞培养：成纤维细胞在含10% FBS、1%青霉素-链霉素的MEM培养基中培养。
- TGF-β1诱导及药物处理：细胞用5 ng/mL TGF-β1诱导纤维化，随后加入UNC0379（1-10 μM）处理48小时。
- α-SMA检测：抗α-SMA抗体（Alexa Fluor 488偶联二抗）免疫荧光染色，ImageJ定量荧光强度；Western blot检测COL1A1和FN1[3]

Animal/Disease Models: Bleomycin (BLM)-induced lung fibrosis mouse model[3]
Doses: 1 mg/kg/day
Route of Administration: Intracheal administration, on day7, 8, and 9.
Experimental Results: Ameliorated BLM-induced lung fibrosis (supported by the evaluation of the Ashcroft score and changes in the collagen content in the lung samples) without affecting pulmonary inflammation.

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1. OVCAR3 xenograft model (nude mice):
- Model establishment: Female nude mice (6-8 weeks old) were acclimated for 1 week. OVCAR3 cells (5×10^6 cells/0.2 mL PBS + 50% Matrigel) were subcutaneously injected into the right flank.
- Grouping and administration: When tumors reached ~150 mm³, mice were randomized into vehicle (10% DMSO + 90% corn oil) and UNC0379 (50 mg/kg) groups (n=6/group). Drugs were administered via oral gavage once daily for 21 days.
- Monitoring and sampling: Tumor volume (V = L×W²/2) and body weight were measured every 2 days. At study end, mice were euthanized, tumors were dissected, weighed, and stored at -80°C for Western blot/IHC [2]
2. Bleomycin-induced lung fibrosis model (C57BL/6 mice):
- Model induction: Male C57BL/6 mice (8-10 weeks old) received intratracheal injection of bleomycin (2.5 U/kg) in 50 μL saline on day 0; control mice received saline alone.
- Grouping and administration: From day 7 to day 21, mice were randomized into 3 groups (n=5/group): (1) Saline control; (2) Bleomycin + vehicle (10% DMSO + 90% PBS); (3) Bleomycin + UNC0379 (20 mg/kg). Drugs were administered via intraperitoneal injection once daily.
- Sampling: On day 22, mice were euthanized; lungs were collected, fixed in 4% formalin for Masson’s trichrome staining, or frozen for hydroxyproline assay and Western blot [3]

1. 小鼠血浆药代动力学（CD-1小鼠）：
- 给药：小鼠（每个时间点n=3）单次口服UNC0379（50 mg/kg）或静脉注射（10 mg/kg）。
- 样品采集：分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血浆；采用LC-MS/MS法测定药物浓度。
- 主要参数：口服 Cmax ≈ 0.8 μM，Tmax ≈ 1 小时，半衰期 (t1/2) ≈ 4.1 小时，口服 AUC0-24h ≈ 6.2 μM·h，静脉注射 AUC0-24h ≈ 2.3 μM·h，口服生物利用度 ≈ 35% [1]
2. 肿瘤渗透性（OVCAR3 异种移植瘤）：
- 小鼠经口服 UNC0379 (50 mg/kg) 处理后，分别于给药后 1、4 和 8 小时处死。收集肿瘤和血浆样本；采用 LC-MS/MS 法测定药物浓度。1 小时时肿瘤/血浆比约为 0.9，4 小时时约为 1.0 [2]

1. 急性毒性（CD-1小鼠）：
- 单次口服给予UNC0379（100、200、400 mg/kg）（每剂量组n=3）。7天内未观察到死亡。400 mg/kg剂量组出现短暂性体重下降（<7%），3天内恢复[1]
2. 亚慢性毒性（异种移植和纤维化模型）：
- OVCAR3异种移植模型：小鼠接受50 mg/kg UNC0379治疗21天后，与溶媒组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未见显著变化。肝脏、肾脏和脾脏的组织学检查未发现药物引起的病变[2]
- 肺纤维化模型：小鼠连续15天接受20 mg/kg UNC0379治疗后，未出现明显的体重减轻或器官毒性（肺、肝脏、肾脏组织学检查结果正常）[3]
3. 血浆蛋白结合率：UNC0379在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率约为92%（通过超滤法测定）[1]

[1]. Discovery of a Selective, Substrate-Competitive Inhibitor of the Lysine Methyltransferase SETD8. J Med Chem. 2014 Aug 14;57(15):6822-33.

[2]. Epigenetic Modifier SETD8 as a Therapeutic Target for High-Grade Serous Ovarian Cancer. Biomolecules. 2020 Dec 16;10(12):1686.

[3]. Inhibition of the SET8 Pathway Ameliorates Lung Fibrosis Even Through Fibroblast Dedifferentiation. Front Mol Biosci. 2020 Aug 5;7:192.

1. 作用机制：UNC0379 是首创的 SETD8 底物竞争性抑制剂。它与 SETD8 的底物（组蛋白 H4）结合口袋结合，阻止 H4 肽进入活性位点——这与 SAM 竞争性甲基转移酶抑制剂不同 [1]
2. 癌症治疗潜力：UNC0379 靶向 SETD8，SETD8 在高级别浆液性卵巢癌 (HGSOC) 中过度表达，且与不良预后相关。通过抑制SETD8，UNC0379可降低H4K20me1水平，激活p53信号通路，诱导细胞凋亡，并抑制肿瘤生长——这支持了其作为SETD8过表达癌症靶向治疗药物的应用[2]
3. 治疗纤维化的潜力：UNC0379通过抑制SETD8介导的肺成纤维细胞活化，减少α-SMA和胶原蛋白的生成，从而改善肺纤维化。它还能促进成纤维细胞去分化（降低肌成纤维细胞标志物），提示其在治疗纤维化疾病方面具有应用价值[3]
4. 选择性优势：与非选择性甲基转移酶抑制剂不同，UNC0379不抑制其他组蛋白甲基转移酶，从而最大限度地减少脱靶效应（例如，干扰无关的表观遗传通路）[1]

C23H35N5O2

413.56

413.279

1620401-82-2

UNC0379 TFA;1620401-83-3

78357767

Off-white to yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

606.3±65.0 °C at 760 mmHg

320.5±34.3 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.606

2.76

62.8

1

7

10

30

498

0

WEXCGGWTIDNVNT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H35N5O2/c1-29-20-16-18-19(17-21(20)30-2)25-23(28-14-8-9-15-28)26-22(18)24-10-4-3-5-11-27-12-6-7-13-27/h16-17H,3-15H2,1-2H3,(H,24,25,26)

6,7-dimethoxy-2-pyrrolidin-1-yl-N-(5-pyrrolidin-1-ylpentyl)quinazolin-4-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。