| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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描述:UNC3230 是一种选择性脂质激酶 PIP5K1C 抑制剂。它通过降低背根神经节 (DRG) 神经元中的 PIP2 水平来减轻过敏反应。
| 靶点 |
UNC3230 targets phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase type 1C (PIP5K1C) and phosphatidylinositol-5-phosphate 4-kinase, type II, gamma (PIP4K2C).
IC50 for PIP5K1C: ~41 nM (using a microfluidic mobility shift assay). Kd for PIP4K2C: <0.2 μM (using competitive binding assays). At 10 μM, it did not inhibit PIP5K1A, a highly similar family member. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
与载体对照组相比,用 100 nM UNC3230(约为 IC50 的 2 倍)处理的背根神经节 (DRG) 神经元膜 PIP2 水平显著降低约 45%。在 DRG 神经元中,与载体培养相比,UNC3230 培养显著抑制了溶血磷脂酸 (LPA) 诱导的钙信号传导 [1]。
UNC3230 降低了培养的背根神经节 (DRG) 神经元膜磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸 (PIP2) 水平。用 100 nM UNC3230 处理 20 小时后,与载体对照组相比,膜 PIP2 水平显著降低约 45%,这是通过使用 PIP2 特异性抗体的平均周长染色强度进行定量分析得出的。 [1] UNC3230显著降低了培养的背根神经节 (DRG) 神经元中溶血磷脂酸 (LPA) 诱导的钙信号传导。用浓度分别为 10 nM、100 nM 和 1000 nM 的 UNC3230 预孵育 20 小时后,钙反应曲线下面积 (AUC) 降低,表明其信号传导作用减弱。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在野生型小鼠鞘内注射UNC3230(2 nmol)两小时后,害虫的热诱导缩爪潜伏期显著延长,表明其具有抗炎作用[1]。鞘内注射UNC3230(2 nmol)一小时后,再同时鞘内注射1 nmol LPA。与对照组相比,UNC3230显著降低了机械性痛觉过敏和热痛觉过敏[1]。鞘内注射UNC3230(2 nmol)可显著降低热痛觉过敏和机械性痛觉过敏[1]。在数天的观察中,与对照组相比,佐剂(CFA)诱导的后爪炎症表现出机械性痛觉过敏和热痛觉过敏,但未炎症后爪的热觉和机械觉均未受到影响[1]。鞘内注射UNC3230(2 nmol,溶于20% DMSO)可显著延长野生型(WT)小鼠对有害热刺激的缩爪潜伏期,该作用可持续至注射后两小时,表明其具有镇痛作用。但UNC3230对机械敏感性无急性影响[1]。在LPA诱导的神经病理性疼痛模型中,鞘内注射UNC3230(2 nmol,与LPA(1 nmol)同时注射一小时)可显著减轻热痛觉过敏和机械性痛觉过敏,与溶剂对照组相比差异显著。 [1] 在弗氏完全佐剂 (CFA) 炎症疼痛模型中,在 CFA 注射前后两小时分别给予 UNC3230 (2 nmol) 可显著减轻炎症后爪的热痛觉过敏和机械性痛觉异常,且作用持续数天。[1] 在 CFA 注射后 48 小时给予 UNC3230 (2 nmol) 可显著降低 CFA 诱导的热痛觉过敏。在 CFA 炎症后给予 UNC3230 对已存在的机械性痛觉异常无影响。[1] 外周给予 UNC3230 (8 nmol) 可减轻 CFA 炎症后爪的热痛觉过敏。[1]
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| 酶活实验 |
主要酶活性测定采用高通量微流控迁移率变动分析法,用于筛选重组人PIP5K1C的抑制剂。该分析在384孔板中进行,将N端His6标签的全长重组人PIP5K1C与或不与小分子在测定缓冲液中孵育10分钟。随后加入荧光素标记的底物[PI(4)P]和浓度为PIP5K1C Km值(15 μM)的ATP,并孵育40分钟。反应用EDTA终止。使用微流控迁移率变动分析法分离并定量荧光素标记的PIP2和剩余的PI(4)P。该分析法用于测定UNC3230的IC50值(~41 nM)。[1]
选择性评估采用两种不同的分析方法。ProfilerPro分析法评估了对48种激酶的选择性。将UNC3230加入到预先配制好的384孔板中,每个激酶均设置两个复孔,孵育15分钟。然后加入与每种激酶Km值相匹配的荧光底物和ATP,继续孵育90分钟。使用微流控迁移率分析法分离并定量荧光底物和产物。[1] 采用DiscoveRx KINOMEscan竞争性结合分析法定量检测UNC3230与100种不同激酶之间的相互作用。在该分析中,将UNC3230和每种DNA标记的激酶同时加入到含有每种激酶固定化配体的384孔板中。孵育1小时后,使用qPCR定量与固定化配体结合的激酶量。该检测方法测定了UNC3230与多种激酶相互作用的Kd值,包括与PIP4K2C的Kd值<0.2 μM。[1] |
| 细胞实验 |
从成年小鼠中培养背根神经节 (DRG) 神经元。为评估 PIP2 水平,将神经元用载体 (0.002% DMSO) 或 100 nM UNC3230 处理 20 小时。然后固定细胞,并用 PIP2 特异性抗体和神经元标记物 NeuN 进行免疫染色。采集共聚焦图像,并量化平均周长(膜)染色强度。[1]
对于钙成像,将培养的 DRG 神经元与载体或不同浓度的 UNC3230 (10 nM、100 nM、1000 nM) 孵育 20 小时。随后,用比率钙指示剂 Fura-2-AM 加载神经元。通过用 10 μM LPA 刺激神经元 90 秒来测量钙反应。对每个响应神经元的钙反应曲线下面积(AUC)进行定量分析。LPA刺激后,用HBSS洗涤培养物120秒,然后用100 mM KCl刺激30秒以确认神经元身份。[1] |
| 动物实验 |
所有动物实验程序均已获得机构动物护理和使用委员会的批准。实验采用成年雄性野生型小鼠(6-8周龄)。
采用直接腰椎穿刺法,在清醒小鼠中进行鞘内注射(5 μL)。鞘内注射用UNC3230的最终浓度为0.4 mM(2 nmol/5 μL),溶于20% DMSO;或0.6 mM(3 nmol/5 μL),溶于50% DMSO。[1] 腹腔注射:腹腔注射用UNC3230的最终浓度为5 mM,溶于90%玉米油和10%乙醇的混合溶液中,给药剂量为20 mg/kg。 [1] 足底(后爪)注射:外周给药时,将UNC3230配制成终浓度为0.4 mM的20% DMSO溶液,并注射到后爪(每只后爪20 μL;总计8 nmol)。[1] LPA诱导的神经性疼痛模型:注射UNC3230(2 nmol,足底)或溶剂。一小时后,再次注射UNC3230(2 nmol,足底)和1 nmol LPA。[1] CFA炎症性疼痛模型:在向一只后爪注射CFA前后两小时,分别注射UNC3230(2 nmol,足底)或溶剂。在另一项测试其对已建立疼痛的影响的实验中,于CFA注射48小时后给予UNC3230(2 nmol,注射)。[1] 热敏感性(Hargreaves试验):使用足底热敏试验装置加热每只后爪。记录后爪缩回的潜伏期。辐射热源强度经过校准,使野生型小鼠的平均缩爪潜伏期约为10秒,截断时间为20秒。[1] 机械敏感性(von Frey试验):使用带有半柔性探头的电子von Frey装置。对每只后爪进行三次测量并取平均值,以确定以克为单位的缩爪阈值。[1] 转棒试验:通过转棒试验评估运动功能。UNC3230(2 nmol,注射)不影响其运动功能。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
UNC3230(2 nmol,即)不影响转棒试验中的表现,表明未观察到急性运动功能障碍。[1]
UNC3230的非活性类似物(在伯酰胺上添加了甲基)未表现出热镇痛活性,提示观察到的UNC3230镇痛活性反映的是靶向结合而非脱靶毒性。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
UNC3230 [5-(环己烷甲酰胺基)-2-(苯氨基)噻唑-4-甲酰胺] 是从激酶靶向化合物库(约5000个化合物)的高通量筛选中发现的,是首个报道的PIP5K1C和PIP4K2C抑制剂。[1]
UNC3230的选择性评分(S-score)为0.12(评分范围为0至1.0)。在类似检测方法中,对38种激酶抑制剂进行了基准测试,其中大多数(n=22)的选择性低于UNC3230。[1] UNC3230的有效窗口较窄,且在合适的载体中溶解度较低,这限制了其在体外和体内进行完整剂量反应研究的能力。 [1] UNC3230 的镇痛作用强度与在 Pip5k1c+/-(单倍体不足)小鼠中观察到的镇痛作用强度相似。[1] |
| 分子式 |
C17H20N4O2S
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|---|---|
| 分子量 |
344.43
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| 精确质量 |
344.13
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| 元素分析 |
C, 59.28; H, 5.85; N, 16.27; O, 9.29; S, 9.31
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| CAS号 |
1031602-63-7
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| 相关CAS号 |
1031602-63-7;
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| PubChem CID |
46355372
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.687
|
| LogP |
2.49
|
| tPSA |
125
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
450
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(N)C=1NC(SC1NC(C2CCCCC2)=O)=NC3=CC=CC=C3
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| InChi Key |
RZCNASHHHSKTGP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H20N4O2S/c18-14(22)13-16(21-15(23)11-7-3-1-4-8-11)24-17(20-13)19-12-9-5-2-6-10-12/h2,5-6,9-11H,1,3-4,7-8H2,(H2,18,22)(H,19,20)(H,21,23)
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| 化学名 |
5-(Cyclohexanecarboxamido)-2-(phenylamino)thiazole-4-carboxamide
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| 别名 |
UNC3230 UNC-3230 UNC 3230
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~362.92 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9033 mL | 14.5167 mL | 29.0335 mL | |
| 5 mM | 0.5807 mL | 2.9033 mL | 5.8067 mL | |
| 10 mM | 0.2903 mL | 1.4517 mL | 2.9033 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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