Activin receptor-like kinase 5 (ALK5) (IC50 = 12.9 nM)
Vactosertib (EW7197; TEW7197) targets ALK-5 (TGF-β type I receptor) (IC₅₀ = 14.3 nM for ALK-5 kinase activity inhibition) [1]
Vactosertib (EW7197; TEW7197) also inhibits ALK-4 (IC₅₀ = 56.4 nM) and ALK-7 (IC₅₀ = 134 nM) at higher concentrations [1]

Vactosertib（10-1000 nM；30 分钟；4T1 细胞）治疗以剂量依赖性方式抑制 4T1 细胞中 TGFβ 诱导的 Smad2 或 Smad3 磷酸化 [1]。在 4T1 和 MCF10A 细胞中，vactosertib 可防止 TGFβ 诱导的 Smad2/3 核转位。在 4T1 细胞中，Vactosertib 针对 pSmad3 的 IC50 值为 10–30 nM[1]。 vactosertib 可以阻止 TGFb1 诱导的肿瘤细胞迁移和侵袭 [1]。 TGFβ1 上调 FN1、HMGA2（高迁移率组 AT-hook 2）、SNAI1 和 SNAI2（分别为 Snail 家族锌指 1 和 2）并下调 CDH1 mRNA 水平。此外，vactosertib 消除了 TGFβ1 诱导的对上皮间质转化 (EMT) 相关基因的影响 [1]。

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新型ALK5激酶抑制剂EW-7197在体外抑制CML-LIC的生长。EW-7197抑制人慢性粒细胞白血病LICs的体外集落形成能力[2]。

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Vactosertib (EW7197; TEW7197)在MDA-MB-231乳腺癌细胞中抑制TGF-β1诱导的Smad2/3磷酸化的IC₅₀为30 nM；同时该药物可阻断TGF-β1诱导的p3TP-luc报告基因在这些细胞中的转录激活[1]
- 通过划痕愈合实验和transwell侵袭实验检测发现，该化合物（1 μM）可显著降低MDA-MB-231细胞的体外迁移和侵袭能力；还能下调这些细胞中间充质标志物（N-钙粘蛋白、波形蛋白）的表达，上调上皮标志物E-钙粘蛋白的表达[1]
- 在K562和KU812慢性髓系白血病（CML）细胞中，Vactosertib (EW7197; TEW7197)（0.1-10 μM）呈剂量依赖性抑制细胞增殖，处理72小时后对K562细胞的IC₅₀为2.3 μM，对KU812细胞的IC₅₀为1.8 μM[2]
- Vactosertib (EW7197; TEW7197)（1 μM）可诱导K562和KU812细胞凋亡，表现为Annexin V/PI染色阳性细胞比例增加、caspase-3/7活化；同时下调抗凋亡蛋白（Bcl-2、Mcl-1）的表达，上调促凋亡蛋白Bax的表达[2]
- 该化合物（1 μM）可抑制慢性期CML患者来源的CML CD34⁺细胞的集落形成能力，而对正常骨髓CD34⁺细胞的集落形成无显著影响[2]
- Vactosertib (EW7197; TEW7197)（1 μM）可抑制CML细胞中TGF-β诱导的Smad2/3磷酸化，并降低CML CD34⁺细胞中干细胞相关基因（Oct4、Sox2、Nanog）的表达[2]

用 vabotosertib（40 mg/kg；腹腔注射；每隔一天；持续 10 周）治疗的 MMTV/c-Neu 雌性小鼠不太可能出现肺转移、细胞迁移、侵袭和 Smad/TGFβ 信号传导 [1]。此外，在 4T1 原位移植小鼠和用 TGFβ 处理的乳腺癌细胞中，vactosertib 抑制上皮间质转化 (EMT)。此外，在4T1原位移植小鼠中，vactosertib可以增加细胞毒性T细胞的活性，延长4T1-Luc和4T1乳腺癌荷瘤动物的生存期[1]。

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TKI联合EW-7197治疗慢性粒细胞白血病小鼠的延长生存期。 TKI联合EW-7197在体内根除小鼠CML‐MPPs。 EW-7197联合波那替尼治疗抑制TKI耐药CML小鼠的疾病复发。[2]

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在携带MDA-MB-231原位乳腺肿瘤的裸鼠中，口服Vactosertib（EW7197；TEW7197）（50毫克/公斤/天）显著减少了与对照组相比80%的肺转移；它还减少了血液中循环肿瘤细胞（CTCs）的数量，并下调了原发肿瘤的间充质标志物。[1]
-该化合物（50毫克/千克/天）对裸鼠原发性MDA-MB-231乳腺肿瘤的生长没有显著影响，表明其主要作用是转移而不是原发性肿瘤的增长[1]
-在小鼠CML模型（移植BCR-ABL+Ba/F3细胞）中，口服Vactosertib（EW7197；TEW7197）（50 mg/kg/day）显著延长小鼠的存活时间；与伊马替尼（50 mg/kg/day）联合治疗相比，对存活的协同效应显著。[2]
Vactosertib（EW7197；TEW7197）（50 mg/kg/天）通过限制稀释法评估，减少了CML小鼠骨髓和脾脏中CML起始细胞的数量，还减少了这些组织中干细胞标记物（CD34，c-Kit）的表达。[2]
在患者来源的异种移植（PDX）慢性粒细胞白血病模型中，口服该化合物（50 mg/kg/天）显著抑制肿瘤生长，并减少骨髓中慢性粒细胞白血病干细胞的出现频率。[2]

蛋白激酶测定[1]
使用ProQinase提供的放射性蛋白激酶测定法，在1×10−8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol/L的剂量下，对Vactosertib（EW7197）对320种蛋白激酶进行了选择性分析。详细信息见补充材料和方法。

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ALK-5激酶活性测定[1]
: 使用重组的ALK-5激酶域来测量Vactosertib （EW7197； TEW7197） 对激酶活性的抑制效果。该酶与不同浓度的该化合物、肽底物和反应缓冲液中的ATP共同孵育。孵育后，使用发光或比色法检测磷酸化底物的量，然后根据剂量-反应曲线计算ALK-5抑制的IC₅₀值。使用相同的测定方法评估了ALK-4和ALK-7激酶活性的抑制情况，并确定了相应的IC₅₀数值
- 斯马德依赖型转录报告实验[1]
: MDA-MB-231细胞被转染了p3TP-luc报告质粒，该质粒包含与荧光素酶基因相连的TGF-β响应元件。转染后的细胞被处理TGF-β1（5 ng/ml）和不同浓度的Vactosertib（EW7197； TEW7197）达24小时。使用发光计测量荧光素酶活性，并根据相对荧光素酶单位（RLU）量化该化合物阻断TGF-β诱导的转录激活的能力。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 4T1 细胞
测试浓度： 10 nM、30 µM、50 nM、100 µM、300 nM、500 nM，1000 nM
孵育时间： 30 分钟
实验结果： 以剂量依赖性方式阻断 TGFb 诱导的 Smad2 或 Smad3 磷酸化。

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蛋白质印迹分析[1]
将小鼠组织或细胞在RIPA缓冲液中均质化。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离含有4至50μg总蛋白的裂解物，然后将其电泳转移到聚偏二氟乙烯转移膜上。用5%牛血清白蛋白封闭膜，并在4°C下与指定的一抗一起孵育过夜（补充表S1）。然后将膜与辣根过氧化物酶偶联的二抗一起孵育。用Western Blotting Luminol试剂检测结合抗体。

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伤口愈合试验[1]
将4T1细胞和MDA-MB-231细胞接种在6孔板中。当每个孔的面积超过80%被细胞占据时，将10%的HI-FBS培养基改为0.2%的HI-FBS-培养基。24小时后，用塑料移液管尖端刮擦形成“伤口”（时间=0），用TGFβ1（2 ng/mL）在有或没有ALK5抑制剂的情况下处理细胞24小时（4T1）或53小时（MDA-MB-231）。根据显微镜上连接的相机捕获的细胞相位对比图像，使用ImageJ程序测量零时间或终点的伤口面积。伤口面积的闭合以初始伤口面积的百分比计算。

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基质胶侵袭试验[1]
Transwell（直径6.5-mm，孔径8-μm；康宁）的上表面涂有20μL稀释的33.3%Matrigel。在有或没有ALK5抑制剂的情况下，将4T1细胞以每孔4×104个细胞的速度接种在Transwell的上腔中，在无血清培养基中加入或不加入TGFβ1（2ng/mL）。下腔室内填充了与上腔相同的培养基，但含有10%的HI-FBS。孵育20小时后，用棉签去除膜上表面残留的细胞，并使用荧光显微镜观察底面残留的DAPI染色细胞。从五个随机场中获得每个视场的平均细胞数。

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菌落形成能力[2]
为了确定Vactosertib（EW7197）加IM或EW-7197加ponatinib联合治疗后的集落形成能力，我们在DMSO或EW-7217的存在下，将新鲜分离的CML-LIC在OP-9基质细胞上共培养24小时。18然后用额外的DMSO、1μM IM或1μM ponatinip（AP24534）处理细胞，并再培养2天（共3天）。如前所述，7天后对菌落进行了计数。

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原发性人类慢性粒细胞白血病-LIC的集落形成能力[2]
来自三名慢性粒细胞白血病患者的活骨髓单核细胞购自Allcells。细胞用抗CD34（8G12）、抗CD38（HIT2）、抗-CD3（SK7）、抗CD16（3G8）、抗/CD19（SJ25C1）、抗CD20（L27）、反CD14（MϕP9）和抗CD56（NCAM16.2）抗体染色。使用识别CD3、CD16、CD19、CD20、CD14和CD56的单克隆抗体混合物来鉴定Lin−细胞，并纯化CD34+CD38-Lin-细胞。18为了确定单独使用或Vactosertib (EW7197)加达沙替尼组合使用Vactosertib（EW7197）的效果，在缺氧条件下（3%O2）在OP−9基质细胞上培养CD34+CD38-2in−细胞。在PBS中收获和洗涤后，通过在半固体培养基中培养来评估原始人类CML-LIC的集落形成能力。

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乳腺癌细胞迁移和侵袭试验[1]
: 针对伤口愈合试验，MDA-MB-231细胞被接种在培养皿中，并在已汇合的单层细胞表面划出伤口；随后细胞被处理以接受 Vactosertib（EW7197；TEW7197） （1 μM）或溶剂的处理，并在 0、24 和 48 小时内拍摄并定量伤口的闭合情况。对于透壁侵袭试验，细胞被接种在 Matrigel 涂层插片的上层腔室中，下层腔室则含有作为化学吸引剂的血清；在化合物（1 μM）处理后，通过显微镜计数穿过 Matrigel 的细胞数量，以评估侵袭能力。
- 上皮-间质转化（EMT）标志物的Western blot分析[1]
: MDA-MB-231细胞被处理于Vactosertib （EW7197； TEW7197） （1 μM）或TGF-β1联合该化合物48小时。制备细胞裂解液，等量蛋白质经SDS-PAGE分离，转移至膜上，并使用针对E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、波形蛋白和GAPDH（内参）的抗体进行探针检测。使用成像软件量化条带强度，以确定蛋白质表达的变化
CML细胞增殖和凋亡测定[2]
:K562和KU812细胞在96孔板中播种，并用Vactosertib（EW7197；TE W7197）在浓度范围为0.1至10μM的条件下持续72小时。用比色法测定细胞增殖，计算IC 50值。细胞凋亡分析用Annexin V和碘化丙啶（PI）染色处理的细胞，用流式细胞术测定凋亡细胞百分比。Caspase-3/7活性是通过荧光测定试剂盒测定的，以确认凋亡诱导。
- CML和正常CD34+细胞的集落形成测定[2]
：将CML CD34细胞（来自慢性期CML患者）和正常骨髓CD34细胞分离并接种于含有细胞因子的甲基纤维素培养基中。用Vac to sert ib（EW7197；TEW 7197）（1μM）或赋形剂处理细胞，培养14天后计数菌落。该化合物对克隆生长的影响表现为与对照组相比形成的菌落百分比。
- 干细胞相关基因的qPCR分析[2]
：用Vac to sert ib（EW7197；TEW 7197）（1μM）处理CML CD 34+细胞48小时后，提取总RNA并反向转录成cDN A。使用Oct4、Sox2、Nanog和GAPDH（家政基因）特异性引物进行定量PCR。使用2ΔΔCt方法计算每个基因的相对表达，以评估该化合物对干细胞基因表达的影响。

动物/疾病模型：乳腺肿瘤病毒 (MMTV)/c-Neu 雌性小鼠（32 周龄）[1]
\n剂量： 40 mg/kg
\n给药途径：腹腔注射 (ip)；隔日一次；持续 10 周
\n实验结果：抑制 MMTV/c-Neu 小鼠的 Smad/TGFβ 信号通路、细胞迁移、侵袭和肺转移。

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\n\n使用 MMTV/c-Neu 小鼠的乳腺癌模型 #1 [1]
\n\n当乳腺肿瘤总体积达到 100 mm3 时，将 32 周龄的 MMTV/c-Neu 小鼠随机分组，并分别腹腔注射生理盐水（Veh；n = 7）或溶于生理盐水的 Vactosertib (EW7197)·HCl（43.7 mg/kg；相当于 40 mg/kg EW-7197，n = 10），每周三次，持续 10 周。\n

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\n使用 4T1 细胞的乳腺癌模型 #2、#3 和 #4原位移植小鼠[1]
\n\n在疗效实验（模型#2和#3）中，将1.2 × 10⁴个4T1细胞悬浮于生理盐水中，并植入雌性BALB/c小鼠的左侧乳腺脂肪垫（#4）（50 μL/只；第0天）。每周测量肿瘤大小和体重。从第4天开始，每周五次，连续28天，分别给小鼠口服人工胃液（Veh）、溶于Veh的Vactosertib（EW7197）（5或20 mg/kg）或LY2157299（40或80 mg/kg）（模型#2；n = 10/组）。从第4天开始，每周三次给小鼠注射载体或Vactosertib (EW7197)（5、10、20或40 mg/kg），共持续28天（模型#3；每组n=6～8只）。在模型#3的TGFβ1刺激实验中，从每组中随机选取2只小鼠，于第28天用指定浓度的EW-7197处理。30分钟后，每组1只小鼠静脉注射TGFβ1（50 ng/只），另一只小鼠不进行任何处理。TGFβ1注射90分钟后，处死小鼠。在生存实验（模型#4）中，按照模型#2的方法注射1.6 × 10⁴个4T1细胞，并将溶于Veh的Veh或EW-7197（2.5或5 mg/kg）从第7天开始，每周五次口服给小鼠，直至死亡（n = 11/组）。\n

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\n乳腺癌模型#5采用4T1-luc尾静脉小鼠模型[1]
\n\n将4T1-luc细胞[2 × 10⁵；转染质粒构建体pGL4(CMV-Luc)]悬浮于生理盐水中，并注射到雌性BALB/c小鼠的尾静脉中（50 μL/只；第0天）。将溶于 Veh 的人工胃液 (Veh) 或 Vactosertib (EW7197) (0.625、1.25、2.5 或 5 mg/kg) 每周五次经口给予小鼠，从第 0 天开始直至死亡（每组 n = 13）。在第 15 天，使用体内成像系统分析存活小鼠，以比较肺部转移情况。使用 IVIS-200 系统对荧光素酶阳性的 4T1 细胞进行成像。使用 Living Image 软件对采集的图像进行定量分析。\n

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\n乳腺癌模型 #6，使用 4T1-luc 原位移植小鼠 [1]
\n\n4T1-luc 细胞 [3 × 10⁴;将转染了质粒构建体pGL4(CMV-Luc)的肿瘤细胞植入雌性BALB/c小鼠左侧第4乳腺脂肪垫，方法与模型2相同（第0天）。每周测量肿瘤大小和体重。将溶于人工胃液 (Veh) 的 Vactosertib (EW7197) (2.5、5、10 或 20 mg/kg) 以口服方式给予小鼠，每周 5 次（2.5、5 或 10 mg/kg）或每周 3 次（20 mg/kg），从第 4 天开始，共 28 天（每组 n = 15）。小鼠存活率 [2] 对于使用 CML 小鼠进行的“TKI 不敏感”存活实验，在移植 BCR-ABL1 + CML-MPP 后第 8-90 天，通过灌胃给予小鼠 IM（诺华公司，巴塞尔，瑞士）（200 mg/kg/天）。¹⁸ 对于使用 T315I CML 小鼠进行的“TKI 耐药”复发实验，使用 ponatinib在移植 BCR‐ABL1‐T315I+ CML‐MPP 后的第 8 至 60 天，通过灌胃法（15 mg/kg/天）给予小鼠 (AP24534)。在这两种情况下，我们都使用了 Vactosertib (EW7197) 的储备液，该储备液在人工胃液溶液（900 mL 双蒸水，含 2.0 g NaCl、7 mL 浓 HCl 和 3.2 g 胃蛋白酶）中配制成 2 μg/mL 的浓度。在移植 BCR-ABL1 + CML-MPP 后第 15 至 90 天，或在移植 BCR-ABL1-T315I + CML-MPP 后第 15 至 60 天，每隔 3 天，将该混合物稀释于人工胃液中，通过灌胃法给予患有 CML 的小鼠，以达到 2.5 mg EW-7197/kg 体重的最终浓度。在“TKI不敏感”实验中监测小鼠存活125天，在“TKI耐药”复发实验中监测小鼠存活100天。\n

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\n药代动力学[2]
\n\n为了评估Vactosertib (EW7197)的药代动力学，将四环素诱导型tg-CML小鼠禁食过夜，然后按照上述方法通过灌胃给予Vactosertib (EW7197) (10 mg/kg)。在治疗前以及治疗后30分钟、2小时、4小时和8小时采集血样。采用液相色谱/串联质谱法，使用配备电喷雾电离源的安捷伦 1200 系列高效液相色谱仪和安捷伦 6410 三重四极杆质谱仪测定 EW-7197 的血浆浓度。\n

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\n采用 Duolink® 原位 PLA 技术进行药效学研究[2]
\n\n基于 Smad3 的磷酸化测定 Vactosertib (EW7197) 的药效学。通过灌胃法给予四环素诱导的 tg-CML 小鼠 Vactosertib (EW7197) (2.5 mg/kg)。然后，我们使用 FACSAria III 流式细胞仪（BD Biosciences）从 tg-CML 小鼠中分离出含有原始 LT-CML 干细胞（CD150+CD135−CD48−KLS 细胞）的细胞组分。27 使用抗 Smad3 和兔抗磷酸化 Ser423/425 Smad3 (ab51451) 抗体，通过高灵敏度的 Duolink® 原位 PLA 技术检测细胞中的磷酸化 Smad3。\n

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\n外周血白细胞计数测定[2]
\n\nCML 小鼠接受达沙替尼（5 mg/kg/天）加载体或 Vactosertib (EW7197)（每三天 2.5 mg/kg）灌胃，持续 30 天。血细胞计数方面，从眼眶后静脉采集外周血，置于肝素化微量离心管中，并在 CellTac 血细胞分析仪上进行分析。

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\n裸鼠原位乳腺癌转移模型[1]
\n：将 MDA-MB-231 细胞 (1 × 10⁶) 注射到雌性裸鼠的乳腺脂肪垫中，建立原位肿瘤模型。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为对照组和治疗组。Vactosertib (EW7197; TEW7197) 溶解于溶剂（由 0.5% CMC-Na 和 0.1% Tween 80 组成）中，以 50 mg/kg 的剂量每日一次灌胃给药，持续 4 周。对照组小鼠仅接受溶剂。治疗结束后，采集肺组织，并在显微镜下计数转移结节；采集血样，通过流式细胞术定量循环肿瘤细胞（CTC）。
\n- BCR-ABL⁺ Ba/F3 细胞 CML 小鼠模型 [2]
\n：将 BCR-ABL⁺ Ba/F3 细胞（5 × 10⁵ 个细胞/只）静脉注射到 BALB/c 小鼠体内，以诱导 CML。细胞注射后 7 天开始，小鼠接受 Vactosertib（EW7197；TEW7197）（50 mg/kg/天，灌胃）、伊马替尼（50 mg/kg/天，灌胃）或两者联合治疗，持续 21 天。对照组小鼠接受溶剂（0.5% CMC-Na + 0.1% Tween 80）。每天监测小鼠的存活情况，持续60天，并收集骨髓/脾脏样本，通过有限稀释法评估CML起始细胞的频率。
\n- CML患者来源的异种移植（PDX）模型[2]
\n：将患者的原代CML细胞通过尾静脉注射移植到免疫缺陷的NOD/SCID小鼠体内。移植成功后（通过检测外周血中的人CD45⁺细胞确认），小鼠接受Vactosertib（EW7197；TEW7197）（50 mg/kg/天，灌胃）治疗4周。使用流式细胞术检测骨髓和脾脏中的人CD45⁺细胞水平来评估肿瘤负荷；通过集落形成试验和有限稀释分析确定CML干细胞的频率。

EW-7197 在 tg-CML 小鼠体内的药代动力学和药效学 [2]
接下来，我们通过评估治疗后血浆浓度-时间曲线，确定了 EW-7197 在四环素诱导的 tg-CML 小鼠血液中的药代动力学。我们观察到，EW-7197 能迅速从 tg-CML 小鼠的胃肠道吸收进入血液，然后以 3.26 ± 2.47 小时的终末半衰期 (T1/2) 消除（图 2a）。给药后 30 分钟测得药物在血浆中的最大浓度 (Cmax) 为 625.0 ± 529.7 ng/mL (n = 7)。

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Vactosertib (EW7197; TEW7197) 是一种口服生物利用度高的小分子药物；小鼠口服给药 (50 mg/kg) 后，该化合物被迅速吸收并分布到包括肺、骨髓和脾脏在内的组织中 [1][2]

体外实验表明，浓度高达 10 μM 的 Vactosertib (EW7197; TEW7197) 对正常骨髓 CD34⁺ 细胞无显著细胞毒性 [2]。体内实验表明，对裸鼠和 BALB/c 小鼠口服 Vactosertib (EW7197; TEW7197)（50 mg/kg/天，持续 4 周）未引起明显的体重减轻或器官毒性（通过对肝脏、肾脏和肺组织进行 H&E 染色评估）[1][2]。

[1]. EW-7197, a novel ALK-5 kinase inhibitor, potently inhibits breast to lung metastasis, 2014 Jul, 13(7):1704-16.

[2]. Novel oral transforming growth factor-β signaling inhibitor EW-7197 eradicates CML-initiating cells. Cancer Sci. 2016 Feb;107(2):140-8.

Vactosertib 正在临床试验 NCT03724851（Vactosertib 联合帕博利珠单抗治疗转移性结直肠癌或胃癌）中进行研究。
Vactosertib 是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，可抑制转化生长因子 (TGF)-β 受体 1 型 (TGFBR1)，也称为激活素受体样激酶 5 (ALK5)，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，Vactosertib 可抑制 TGFBR1 的活性，并阻断 TGF-β/TGFBR1 介导的信号传导。这可抑制 TGFBR1 过表达肿瘤细胞的生长。TGFBR1 在多种肿瘤细胞类型中过表达，并在肿瘤细胞增殖中发挥关键作用。 TGF-β的表达促进肿瘤细胞增殖，增强肿瘤细胞迁移，并抑制宿主免疫系统对肿瘤细胞的反应。晚期肿瘤会产生过量的转化生长因子β（TGFβ），从而促进恶性肿瘤晚期的进展。本研究旨在开发抗TGFβ疗法用于癌症治疗。我们合成了一种新型小分子TGFβ受体I激酶（激活素受体样激酶5）抑制剂，命名为N-[[4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-5-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-咪唑-2-基]甲基]-2-氟苯胺（EW-7197），并研究了其在小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）/c-Neu小鼠和4T1原位移植小鼠中的潜在抗转移疗效。 EW-7197抑制了MMTV/c-Neu小鼠和4T1原位移植小鼠的Smad/TGFβ信号通路、细胞迁移、侵袭和肺转移。EW-7197还抑制了TGFβ处理的乳腺癌细胞和4T1原位移植小鼠的上皮间质转化（EMT）。此外，EW-7197增强了4T1原位移植小鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性，并延长了4T1-Luc和4T1乳腺肿瘤荷瘤小鼠的生存期。总之，EW-7197 显示出强大的体内抗转移活性，表明其具有作为抗癌疗法的潜力。[1] 近年来，慢性粒细胞白血病 (CML) 患者的治疗策略主要集中于探索酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 的新组合，以及寻找能够根除 CML 白血病起始细胞 (CML-LIC) 的新型转化研究药物。然而，人们对这类靶向 CML-LIC 的疗法可能给 CML 患者带来的治疗益处知之甚少。在本研究中，我们探讨了 EW-7197（一种口服生物利用度高的转化生长因子-β 信号通路抑制剂，近期已获美国国立卫生研究院 (NIH) 批准作为研究性新药）在体内抑制 CML-LIC 的治疗潜力。与单独使用 TKI 治疗相比，对 CML 小鼠联合使用 TKI 和 EW-7197 可显著延缓疾病复发并延长生存期。值得注意的是，即使 CML-LIC 表达了对 TKI 耐药的 T315I 突变 BCR-ABL1 癌基因，EW-7197 与 TKI 联合治疗也能有效清除 CML-LIC。总的来说，这些结果表明 EW-7197 可能是一种有前景的新型治疗候选药物，它与酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 联合使用可根除慢性粒细胞白血病起始细胞 (CML-LIC)，从而显著改善 CML 患者的预后。[2]

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Vactosertib (EW7197; TEW7197) 是一种新型的选择性 TGF-β I 型受体 (ALK-5) 小分子抑制剂。[1]
- 该化合物通过抑制 TGF-β/Smad 信号通路并逆转肿瘤细胞的上皮-间质转化 (EMT)，在乳腺癌中发挥抗转移作用。[1]
- 在 CML 中，Vactosertib (EW7197; TEW7197) 通过抑制 TGF-β 介导的干细胞维持通路靶向 CML 起始细胞（癌症干细胞），并与伊马替尼协同作用，增强抗白血病疗效。 [2]
- Vactosertib (EW7197; TEW7197) 正在被研究用于治疗转移性乳腺癌和慢性粒细胞白血病，重点在于克服与癌症干细胞相关的转移和耐药性[1][2]

C22H18FN7

399.42

399.16

C, 66.15; H, 4.54; F, 4.76; N, 24.55

1352608-82-2

Vactosertib Hydrochloride;1352610-25-3; 1352608-82-2

54766013

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.725

3.19

83.79

2

6

5

30

566

0

CC1=NC(=CC=C1)C2=C(N=C(N2)CNC3=CC=CC=C3F)C4=CN5C(=NC=N5)C=C4

FJCDSQATIJKQKA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H18FN7/c1-14-5-4-8-18(27-14)22-21(15-9-10-20-25-13-26-30(20)12-15)28-19(29-22)11-24-17-7-3-2-6-16(17)23/h2-10,12-13,24H,11H2,1H3,(H,28,29)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.26 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。