| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 靶点 |
The PROTAC compound MZ1 (and related analogues MZ2, MZ3) are heterobifunctional molecules designed to bind two targets simultaneously:
1) The first or second bromodomains (BD1, BD2) of BET proteins (BRD2, BRD3, BRD4) via the JQ1 moiety. Isothermal titration calorimetry (ITC) measured binding affinities (Kd) of MZ1 for these bromodomains ranging from 115 nM to 382 nM. 2) The von Hippel-Lindau protein–ElonginB–ElonginC complex (VBC) via the VHL ligand moiety. ITC measured Kd of MZ1 for VBC was 150 nM. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
VHL 蛋白是两种广泛表达且具有生理意义的 Cullin RING E3 泛素连接酶复合物之一，可识别底物。双功能 PROTAC 会诱导靶蛋白泛素化并随后被蛋白酶体破坏，它利用了 VHL（最著名的 E3 连接酶之一）。
用1 μM MZ1 处理HeLa细胞24小时，可诱导BRD4蛋白完全去除（降解），而对BRD2和BRD3的去除不完全，表明其对BRD4具有优于其旁系同源物的选择性降解效果。 MZ1 在HeLa细胞中诱导浓度依赖性的BET蛋白降解，在浓度低至1 μM时可观察到超过90%的所有BET蛋白被去除。在较低浓度（例如0.1–0.5 μM）下，对BRD4的优先降解更为明显。 在HeLa细胞中进行的时间进程实验显示，MZ1（1 μM或100 nM）能随时间推移逐步且快速地去除BET蛋白，其中BRD4始终表现出最强和最快的减少。 在用GFP-BRD4转染的U2OS细胞中，用5 μM MZ1 处理可在3小时内导致细胞核内GFP-BRD4荧光完全消失，通过活细胞成像监测证实。 MZ1 的降解活性依赖于其对VHL的有效招募，因为立体异构体对照物 cisMZ1（不能结合VHL）完全无活性。 MZ1 诱导的降解可被蛋白酶体抑制剂MG132联合处理所阻断，证实了其蛋白酶体依赖性。 用 MZ1（高达10 μM）处理不会稳定HeLa细胞中的HIF-1α蛋白水平，这与缺氧模拟对照CoCl2不同，表明其在有效浓度下不会干扰天然的VHL-HIF-1α相互作用。 MZ1 处理（1 μM和100 nM）36小时，不会诱导已报道的JQ1脱靶蛋白DDB1和RAD23B的降解。 MZ1 的降解效应是可逆的。用1 μM MZ1 脉冲处理4小时并随后洗去化合物后，细胞内BRD4水平在洗脱后约20小时开始可检测地恢复。 用100 nM MZ1 处理HeLa细胞24小时的基因表达分析显示，MYC下调，P21和AREG上调，这与泛BET抑制剂JQ1的效果相似。然而，与JQ1相比，MZ1 对FAS、TYRO3和FGFR1的影响更轻微且显著性较低，这与其选择性降解BRD4的特性相关。 |
| 酶活实验 |
等温滴定量热法（ITC）测定结合亲和力： 使用ITC量化 MZ1 与其蛋白靶标的结合亲和力。对于BET溴结构域，滴定在30 °C下进行。将 MZ1 溶液（150 μM）滴定到单个溴结构域蛋白（BRD2、BRD3或BRD4的第一个或第二个溴结构域）溶液（15 μM）中。测量每次注射的热量变化，并将数据拟合到结合模型以推导解离常数（Kd）、焓变（ΔH）和化学计量数（N）。
对于与VBC复合物的结合，滴定在25 °C下进行。将 MZ1 溶液（150 μM）滴定到VBC复合物溶液（15 μM）中。在反向滴定中，将VBC（150 μM）滴定到 MZ3（15 μM）中。还在类似条件下进行了母体VHL配体（VHL-1, VHL-2）和失活对照 cisMZ1 的对照滴定，以作为结合力的基准。 |
| 细胞实验 |
PROTAC处理与蛋白质印迹分析： 在标准培养基中培养HeLa或U2OS细胞。对于降解实验，用指定浓度的 MZ1、MZ2、MZ3、cisMZ1、JQ1或载体对照（DMSO）处理细胞指定时间（例如4、12、24、36小时）。对于机制研究，在PROTAC处理前1小时和处理期间，用10 μM蛋白酶体抑制剂MG132进行预处理或共处理。处理后，收集细胞并裂解。通过SDS-PAGE分离蛋白质，转印至膜上，并用针对BRD2、BRD3、BRD4、HIF-1α、VHL、DDB1、RAD23B或内参对照（如β-actin）的特异性一抗进行检测。使用适当的二抗和成像系统可视化蛋白质水平。
siRNA转染： 为与基因敲低进行比较，使用标准转染试剂将靶向单个BET蛋白（BRD2、BRD3、BRD4）的siRNA或阴性对照siRNA转染到HeLa细胞中。转染24小时后，用PROTACs、JQ1或载体再处理细胞24小时，然后收集用于蛋白质印迹分析或基因表达分析。 GFP-BRD4降解的活细胞成像： 用编码GFP标记的BRD4的质粒转染U2OS细胞。转染后24小时，用5 μM MZ1 或 cisMZ1 处理细胞。使用活细胞成像系统在4小时的时间过程中监测并成像细胞核内的荧光。 基因表达分析（RT-qPCR）： 用化合物（例如100 nM MZ1、JQ1或对照）处理HeLa细胞12或24小时。提取总RNA，逆转录成cDNA。使用针对MYC、P21、AREG、FAS、FGFR1、TYRO3和内参基因GAPDH的基因特异性引物进行定量PCR。使用比较Ct法（2^(-ΔΔCt)）计算相对基因表达水平，并相对于载体对照进行标准化。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MZ1 is the representative PROTAC molecule described in this study. PROTACs are heterobifunctional compounds designed to recruit E3 ubiquitin ligases (here, VHL) to target proteins (here, the BET bromine domain), leading to ubiquitination and proteasome degradation of the target protein. This study demonstrates that linking the pan-BET inhibitor JQ1 to a high-affinity, drug-like VHL ligand (VHL-1) yields a compound (MZ1) that selectively degrades BRD4, but not BRD2 and BRD3, despite JQ1 itself having similar affinities for all BET bromine domains. This selectivity is unexpected and may stem from differences in ternary complex formation or ubiquitination efficiency. MZ1 can be used as a chemical probe to elucidate the biological function of individual BET proteins, revealing that selective degradation of BRD4 elicits a different transcriptional response than JQ1's inhibition of pan-BET proteins. The VHL ligands used in CisMZ1 are derived from optimized non-peptide small molecules (VHL-1, VHL-2) that bind to the VHL-HIF-1α interface, representing an improvement over earlier peptide-based PROTACs. The inactive control cisMZ1 has an inverted stereochemistry configuration at hydroxyproline residues crucial for VHL binding, used to validate the observed VHL-dependent degradation.
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| 分子式 |
C27H38N4O5S
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|---|---|
| 分子量 |
530.6794257164
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| 精确质量 |
530.256
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| CAS号 |
1448189-98-7
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| PubChem CID |
117727555
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
755.7±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
410.9±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.572
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| LogP |
2.63
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| tPSA |
149
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
819
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CC1=C(SC=N1)C2=CC=C(C=C2)CNC(=O)[C@@H]3C[C@H](CN3C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)OC(C)(C)C)O
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| InChi Key |
PKNFPFFOAWITLF-RZUBCFFCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H38N4O5S/c1-16-21(37-15-29-16)18-10-8-17(9-11-18)13-28-23(33)20-12-19(32)14-31(20)24(34)22(26(2,3)4)30-25(35)36-27(5,6)7/h8-11,15,19-20,22,32H,12-14H2,1-7H3,(H,28,33)(H,30,35)/t19-,20+,22-/m1/s1
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| 化学名 |
tert-butyl ((S)-1-((2S,4R)-4-hydroxy-2-((4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)carbamoyl)pyrrolidin-1-yl)-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamate
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| 别名 |
VHL Ligand 3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~188.44 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8844 mL | 9.4219 mL | 18.8437 mL | |
| 5 mM | 0.3769 mL | 1.8844 mL | 3.7687 mL | |
| 10 mM | 0.1884 mL | 0.9422 mL | 1.8844 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Bamirastine
戊双氟酚
PROTAC-PEG3-Amino
MT-3014
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
