Bcl-xL (IC50 = 1.1 nM)

WEHI-539 增强了 NSC 241240 诱导的 caspase 3/7 活性、PARP 裂解和膜联蛋白 V 标记。在 Ovcar-4（Ovcar-4 中为 5 μM）和 Ovsaho（Ovsaho 中为 1 μM）细胞中，单独使用 WEHI-539 即可显着增加 PARP 裂解[2]。

每天新鲜制备测定缓冲液（库存 50 mM HEPES 和 100 mM NaCl，pH 7.5），并调整至 5 mM DTT、酪蛋白（0.1 mg/mL 钠盐；等分试样储存于 -20 °C）和 Tween 20。

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促生存BCL-2家族蛋白BCL-X（L）在实体瘤中经常过表达，使恶性肿瘤细胞对抗癌治疗产生耐药性。通过抑制BCL-X（L）增强细胞凋亡反应很可能在癌症治疗中具有广泛的实用性，而不是抑制多个促存活BCL-2家族成员，BCL-X选择性抑制剂有望将对正常组织的毒性降至最低。我们描述了使用高通量筛选来发现一系列新的靶向BCL-X（L）的小分子，并通过药物化学指导其结构的开发。优化的化合物WEHI-539（7）对BCL-X（L）具有高亲和力（nM级）和选择性，并通过选择性拮抗其促生存活性有效杀死细胞。WEHI-539将成为区分BCL-X（L）与其促生存亲属在正常细胞中的作用的宝贵工具，尤其是在恶性肿瘤细胞中，其中许多细胞可能依赖于BCL-X的持续生长。[1]

Ovcar-8、Ovcar-3、Ovcar-4 和 Ovsaho 细胞在 RPMI 培养基中生长，Igrov-1、Cov-362 和 Cov-318 细胞在 DMEM 中生长，Fuov-1 细胞在 DMEM/ F-12营养液。 DMSO 用于制备 ABT-737、ABT-199 和 WEHI-539的 20 mM 溶液。将细胞铺板于 96 孔板中进行细胞生长测定（所有细胞系为 5,000 个细胞/孔，Ovcar-8 为 2,500 个细胞/孔）。第二天细胞接受药物治疗。 72小时后，取出培养基，用100μL冷的10%三氯乙酸（TCA）固定细胞，冰上孵育30分钟，并用0.4%磺胺罗丹明B（SRB）染色。使用 Graphpad Prism 4 程序检查数据。使用非线性回归拟合四参数希尔方程。对于药物组合研究，细胞同时暴露于一系列 NSC 241240 浓度以及固定浓度的 BH3 模拟物，单药研究预测这会导致 5% 的生长抑制：ABT-737，1 μM，Ovcar- 8、Ovcar-3 和 Igrov-1，Ovcar-4 和 Ovsaho 中为 2 μM，Cov-362 中为 6 μM； ABT-199，Ovcar-4 中为 1 μM，Ovcar-3、Igrov-1、Cov-362 和 Ovsaho 中为 2 μM，Ovcar-8 中为 3 μM； WEHI-539，Igrov-1 中 0.2 μM，Ovcar-8 中 0.3 μM，Ovcar-3 和 Ovsaho 中 1 μM，Cov-362 中 3.1 μM，Ovcar-4 中 5 μM。 SRB 染色用于确定活细胞的数量。它计算组合指数（CI）[2]。

[1]. Structure-guided design of a selective BCL-X(L) inhibitor. Nat Chem Biol. 2013 Jun;9(6):390-7.

[2]. Antagonism of Bcl-XL is necessary for synergy between NSC 241240 and BH3 mimetics in ovarian cancer cells. J Ovarian Res. 2016 Apr 14;9:25.

Background: BH3 mimetics are a class of drugs that antagonize the Bcl-2 family of apoptosis inhibitors. We have previously shown that these compounds can potentiate the activity of carboplatin against several ovarian cancer cell lines. However, recent clinical studies have highlighted that BH3 mimetics which antagonise Bcl-XL are associated with significant thrombocytopenia. This has led to the development of ABT-199 which specifically inhibits Bcl-2. Unfortunately, Bcl-XL appears to be more frequently deregulated in ovarian cancer than Bcl-2. We therefore compared the ability of ABT-199, and the Bcl-XL selective compound WEHI-539, to potentiate the activity of carboplatin in ovarian cancer cell lines. Methods: WEHI-539, ABT-737 and ABT-199 were tested in combination with carboplatin using a panel of 6 ovarian cancer cell lines. The activity of the drugs was evaluated using cell growth assays, staining with trypan bue and measurement of apoptosis by measuring caspase 3/7 activity, PARP cleavage and annexin-V/propidium iodide staining. Results: We found that WEHI-539 and ABT-737, but not ABT-199, were synergistic with carboplatin in cell growth assays and potentiated cell death when assessed by trypan blue staining. Furthermore, WEHI-539 and ABT-737 augmented carboplatin induced caspase 3/7 activity, PARP cleavage and annexin V labelling, but ABT-199 failed to do so. Conclusions: These observations suggest that compounds which target Bcl-XL are necessary if BH3 mimetics are to be successfully used to treat patients with ovarian cancer and this highlights the need to develop strategies to minimize thrombocytopenia induced by such compounds.[2]

C31H30CLN5O3S2

620.184603214264

619.15

C, 60.04; H, 4.88; Cl, 5.72; N, 11.29; O, 7.74; S, 10.34

2070018-33-4

WEHI-539;1431866-33-9

78357795

Light yellow to yellow solid powder

179Ų

4

10

10

42

903

0

C1CC2=C(C=C(C=C2)C3=NC(=C(S3)CCCOC4=CC=C(C=C4)CN)C(=O)O)/C(=N/NC5=NC6=CC=CC=C6S5)/C1.Cl

GJBYTVIQTMIXGA-DYICZVFTSA-N

InChI=1S/C31H29N5O3S2.ClH/c32-18-19-10-14-22(15-11-19)39-16-4-9-27-28(30(37)38)34-29(40-27)21-13-12-20-5-3-7-24(23(20)17-21)35-36-31-33-25-6-1-2-8-26(25)41-31;/h1-2,6,8,10-15,17H,3-5,7,9,16,18,32H2,(H,33,36)(H,37,38);1H/b35-24+;

5-[3-[4-(aminomethyl)phenoxy]propyl]-2-[(8E)-8-(1,3-benzothiazol-2-ylhydrazinylidene)-6,7-dihydro-5H-naphthalen-2-yl]-1,3-thiazole-4-carboxylic acid;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。