| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bcl-xL (IC50 = 1.1 nM)
BCL-X(L) (Ki = 1.1 nM; IC₅₀ = 13 nM for BCL-X(L)-dependent cell viability); no significant binding to BCL-2 (Ki > 1000 nM) or MCL-1 (Ki > 1000 nM) [1] BCL-X(L) [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：WEHI-539 是 Bcl-XL 的选择性抑制剂。 WEHI-539 增强了卡铂诱导的 caspase 3/7 活性、PARP 裂解和膜联蛋白 V 标记。单独使用时，Ovcar-4（Ovcar-4 中为 5 μM）和 Ovsaho（Ovsaho 中为 1 μM）细胞响应 WEHI-539 表现出明显的 PARP 裂解[2]。
WEHI-539是一种高选择性BCL-X(L)抑制剂。它以高亲和力结合BCL-X(L)的BH3结合沟（Ki = 1.1 nM），并抑制BCL-X(L)介导的细胞凋亡保护作用（在表达BCL-X(L)的FL5.12细胞中IC₅₀ = 13 nM）。它对BCL-2（Ki > 1000 nM）和MCL-1（Ki > 1000 nM）的结合可忽略不计，显示出对BCL-X(L)相对于BCL-2和MCL-1>900倍的选择性。用WEHI-539（1-10 μM）处理可通过激活半胱天冬酶3、7和9，在BCL-X(L)依赖性细胞系（FL5.12-BCL-X(L)、H146小细胞肺癌细胞）中诱导剂量依赖性凋亡，PARP和半胱天冬酶底物的切割证实了这一点。在浓度高达30 μM时，它不会诱导依赖BCL-2（FL5.12-BCL-2）或MCL-1（FL5.12-MCL-1）的细胞凋亡。共结晶研究表明，WEHI-539以与天然BH3肽相似的构象结合BCL-X(L)，与BCL-X(L)的Asp103、Arg139和Tyr195残基形成关键氢键 [1] WEHI-539与卡铂协同抑制卵巢癌细胞系（OVCAR-3、SKOV-3、A2780）的活力并诱导凋亡。通过Chou-Talalay法计算的联合指数（CI）<1，表明协同作用。用WEHI-539（0.5-2 μM）联合卡铂（10-40 μM）处理72小时，与单独使用任一药物相比，增加了半胱天冬酶3/7的激活和PARP的切割。siRNA沉默BCL-X(L)模拟了WEHI-539与卡铂的协同作用，而BCL-X(L)的过表达则消除了这种协同作用。WEHI-539单独使用对卵巢癌细胞活力的影响极小（IC₅₀ > 10 μM），但增强了卡铂诱导的DNA损伤（γ-H2AX灶形成）并抑制了卡铂诱导的BCL-X(L)蛋白表达上调 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
WEHI-539在BCL-X(L)依赖性FL5.12-BCL-X(L)异种移植模型中表现出抗肿瘤活性。雌性裸鼠皮下接种FL5.12-BCL-X(L)细胞，当肿瘤达到~100 mm³时开始治疗。每日两次腹腔注射50 mg/kg WEHI-539，持续5天，显著抑制肿瘤生长（与溶媒对照组相比，肿瘤体积减少~60%；P < 0.01）。肿瘤生长抑制与凋亡增加相关，TUNEL染色（凋亡指数从~5%增加到~25%；P < 0.001）和肿瘤组织中半胱天冬酶3的切割证实了这一点。WEHI-539不会抑制FL5.12-BCL-2异种移植物的肿瘤生长，证实了其对BCL-X(L)的选择性 [1]
WEHI-539在OVCAR-3卵巢癌异种移植模型中增强了卡铂的抗肿瘤疗效。携带皮下OVCAR-3肿瘤（~150 mm³）的雌性裸鼠接受WEHI-539（25 mg/kg腹腔注射，每周两次）联合卡铂（20 mg/kg腹腔注射，每周一次）治疗，持续4周。联合治疗与单独使用卡铂相比，显著减少了肿瘤体积（肿瘤体积~300 mm³ vs. ~650 mm³；P < 0.01）并延长了总生存期（中位生存期52天 vs. 38天；P < 0.05）。肿瘤组织的TUNEL染色显示，联合治疗组的凋亡指数（~30%）高于单独使用卡铂组（~10%；P < 0.01） [2] |
| 酶活实验 |
每天新鲜制备测定缓冲液（库存 50 mM HEPES 和 100 mM NaCl，pH 7.5），并调整至 5 mM DTT、酪蛋白（0.1 mg/mL 钠盐；等分试样储存于 -20 °C）和 Tween 20。
促生存BCL-2家族蛋白BCL-X（L）在实体瘤中经常过表达，使恶性肿瘤细胞对抗癌治疗产生耐药性。通过抑制BCL-X（L）增强细胞凋亡反应很可能在癌症治疗中具有广泛的实用性，而不是抑制多个促存活BCL-2家族成员，BCL-X选择性抑制剂有望将对正常组织的毒性降至最低。我们描述了使用高通量筛选来发现一系列新的靶向BCL-X（L）的小分子，并通过药物化学指导其结构的开发。优化的化合物WEHI-539（7）对BCL-X（L）具有高亲和力（nM级）和选择性，并通过选择性拮抗其促生存活性有效杀死细胞。WEHI-539将成为区分BCL-X（L）与其促生存亲属在正常细胞中的作用的宝贵工具，尤其是在恶性肿瘤细胞中，其中许多细胞可能依赖于BCL-X的持续生长。[1] 表面等离子体共振（SPR）实验：将BCL-X(L)、BCL-2和MCL-1蛋白固定在传感器芯片上。将系列稀释的WEHI-539（0.1-1000 nM）注射到芯片表面，通过将传感图拟合到1:1结合模型来计算结合亲和力（Ki）。荧光偏振（FP）实验：将荧光标记的BH3肽（源自BAD）与BCL-X(L)（20 nM）和系列浓度的WEHI-539（0.1-1000 nM）在结合缓冲液中孵育。测量FP信号，并确定肽置换的IC₅₀值 [1] |
| 细胞实验 |
野生型 (WT)、mcl-1−/−、bcl-2−/− 或 bcl-x−/− MEF 用 10 μM WEHI-539 或 ABT-737 处理 1 小时，并分级为富含线粒体的（沉淀）和胞质（可溶）级分，对其进行 SDS-PAGE 并用抗细胞色素 c 的抗体（抗 cyt c）进行免疫印迹； HSP70 用作上样对照。
细胞活力实验：将FL5.12-BCL-X(L)、FL5.12-BCL-2、FL5.12-MCL-1或卵巢癌细胞（OVCAR-3、SKOV-3、A2780）接种到96孔板中，用WEHI-539（0.1-30 μM）单独或与卡铂（10-40 μM）联合处理72小时。通过CellTiter-Glo实验测量活力，并计算IC₅₀值或联合指数（CI）。凋亡实验：用WEHI-539（1-2 μM）联合卡铂（20 μM）处理细胞48小时，用Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析。蛋白质印迹法：用WEHI-539（0.5-2 μM）和/或卡铂（10-40 μM）处理细胞24-72小时，裂解后通过免疫印迹检测蛋白质（PARP、半胱天冬酶3/7/9、BCL-X(L)、γ-H2AX）。siRNA敲低：用BCL-X(L) siRNA或 scramble siRNA转染OVCAR-3细胞48小时，然后用卡铂（20 μM）处理72小时；通过CellTiter-Glo实验测量活力 [1][2] |
| 动物实验 |
FL5.12-BCL-X(L)/BCL-2 异种移植瘤模型：将 5×10⁶ 个 FL5.12-BCL-X(L) 或 FL5.12-BCL-2 细胞悬浮于 Matrigel 中，皮下注射至 6-8 周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组和 WEHI-539 组（每组 n=6）。WEHI-539 溶于含 DMSO 和 Cremophor EL 的载体中，以 50 mg/kg 的剂量腹腔注射，每日两次，连续 5 天。每 2 天测量一次肿瘤体积，并在治疗后 7 天处死小鼠。收集肿瘤组织进行TUNEL染色和Western blot（cleaved caspase-3）检测[1] OVCAR-3卵巢癌异种移植模型：将2×10⁶个OVCAR-3细胞悬浮于Matrigel基质胶中，皮下注射至6-8周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为四组（每组n=8）：载体组、WEHI-539单药组（25 mg/kg，腹腔注射，每周两次）、卡铂单药组（20 mg/kg，腹腔注射，每周一次）和联合用药组。治疗持续4周，每3天测量一次肿瘤体积。观察生存期60天。收集肿瘤组织进行TUNEL染色和免疫组织化学分析[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
WEHI-539在体内显示出极低的毒性。对裸鼠腹腔注射50 mg/kg WEHI-539，每日两次，连续5天，未引起体重减轻、死亡或明显的器官损伤（肝脏、肾脏和脾脏的组织学分析未见异常）。WEHI-539（25 mg/kg，腹腔注射，每周两次）与卡铂（20 mg/kg，腹腔注射，每周一次）联合用药，与单独使用卡铂相比，并未增加毒性，也未观察到明显的体重减轻或死亡[1][2]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景：BH3 模拟物是一类拮抗 Bcl-2 家族凋亡抑制因子的药物。我们此前已证实，这些化合物可增强卡铂对多种卵巢癌细胞系的活性。然而，近期临床研究表明，拮抗 Bcl-XL 的 BH3 模拟物与显著的血小板减少症相关。因此，我们开发了特异性抑制 Bcl-2 的 ABT-199。遗憾的是，Bcl-XL 在卵巢癌中的异常表达似乎比 Bcl-2 更为常见。因此，我们比较了 ABT-199 和 Bcl-XL 选择性化合物 WEHI-539 增强卡铂对卵巢癌细胞系活性的能力。方法：我们使用 6 种卵巢癌细胞系，测试了 WEHI-539、ABT-737 和 ABT-199 与卡铂联合用药的效果。我们采用细胞生长实验、台盼蓝染色以及通过检测 caspase 3/7 活性、PARP 裂解和 Annexin-V/碘化丙啶染色来评估药物活性。结果：我们发现，WEHI-539 和 ABT-737（而非 ABT-199）在细胞生长实验中与卡铂具有协同作用，并且在台盼蓝染色评估中增强了细胞死亡。此外，WEHI-539 和 ABT-737 增强了卡铂诱导的 caspase 3/7 活性、PARP 裂解和 Annexin-V 标记，而 ABT-199 则没有这种作用。结论：这些观察结果表明，如果BH3模拟物要成功用于治疗卵巢癌患者，则必须使用靶向Bcl-XL的化合物，这也凸显了开发策略以最大限度减少此类化合物引起的血小板减少症的必要性。[2]
WEHI-539是一种首创的选择性BCL-X(L)抑制剂，其设计基于BCL-X(L)与BH3肽结合的晶体结构，并通过结构导向药物发现方法实现。[1] 它对BCL-X(L)相对于BCL-2和MCL-1的高选择性避免了与泛BCL-2家族抑制剂相关的靶向毒性（例如，BCL-2抑制引起的血小板减少症）[1] WEHI-539通过破坏BCL-X(L)与促凋亡蛋白之间的相互作用，诱导BCL-X(L)依赖性肿瘤细胞凋亡。 BH3结构域蛋白（例如BAD、BIM）[1] 在卵巢癌中，BCL-X(L)过表达导致卡铂耐药；WEHI-539通过拮抗BCL-X(L)来克服这种耐药性，增强卡铂诱导的细胞凋亡和DNA损伤[2] |
| 分子式 |
C31H29N5O3S2
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|---|---|---|
| 分子量 |
583.72
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| 精确质量 |
583.171
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| 元素分析 |
C, 63.79; H, 5.01; N, 12.00; O, 8.22; S, 10.98
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| CAS号 |
1431866-33-9
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| 相关CAS号 |
WEHI-539 hydrochloride;2070018-33-4
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| PubChem CID |
71297207
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
827.6±75.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
454.3±37.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±3.2 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.737
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| LogP |
6.85
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| tPSA |
179.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
10
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
41
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| 分子复杂度/Complexity |
903
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
OC(C1=C(CCCOC2=CC=C(CN)C=C2)SC(C3=CC4=C(CCC/C4=N\NC5=NC(C=CC=C6)=C6S5)C=C3)=N1)=O
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| InChi Key |
JKMWZKPAXZBYEH-JWHWKPFMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C31H29N5O3S2/c32-18-19-10-14-22(15-11-19)39-16-4-9-27-28(30(37)38)34-29(40-27)21-13-12-20-5-3-7-24(23(20)17-21)35-36-31-33-25-6-1-2-8-26(25)41-31/h1-2,6,8,10-15,17H,3-5,7,9,16,18,32H2,(H,33,36)(H,37,38)/b35-24+
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| 化学名 |
5-[3-[4-(aminomethyl)phenoxy]propyl]-2-[(8E)-8-(1,3-benzothiazol-2-ylhydrazinylidene)-6,7-dihydro-5H-naphthalen-2-yl]-1,3-thiazole-4-carboxylic acid
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7132 mL | 8.5658 mL | 17.1315 mL | |
| 5 mM | 0.3426 mL | 1.7132 mL | 3.4263 mL | |
| 10 mM | 0.1713 mL | 0.8566 mL | 1.7132 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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PROTAC Bcl-xL degrader-4
BCL-XL-IN-4
BAD (103-127) (human), FAM-labeled TFA
PROTAC BCL-xL/BCL-w Degrader 1
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