β-Apo-13-carotenone (D'Orenone)   中文名称: β-载脂蛋白-13-胡萝卜素

Natural β-apocarotenoid; RXRα.

在大鼠肠粘膜匀浆中，发现β-apo-13-胡萝卜素是β-胡萝卜素的酶裂解产物。研究发现，浓度低至 1 nM 时，β-apo-13-胡萝卜素可有效对抗 9-顺式视黄酸对 RXRα 的激活。分子模型研究已证明 β-apo-13-胡萝卜素可产生类似于 RXRα 拮抗剂的分子相互作用 [1]。 β-apo-13-胡萝卜素 (7-8 nM) 对 9cRA 与 RXRα 的结合亲和力与 9cRA 相同。 β-apo-13-carotenone 对全长 hRXRα 的 9cRA 激活具有拮抗作用，与众所周知的 UVI-3003 相当。 β-apo-13-胡萝卜素不会阻止共激活子招募到分离的 LBD，但它确实会导致 RXRα 转录沉默四聚体的形成 [2]。由于 β-apo-13-胡萝卜素的吸收和/或代谢，这些 β-胡萝卜素代谢物不能在细胞中积聚。用 β-apo-类胡萝卜素处理可诱导 3T3-L1 脂肪细胞标记基因的表达 [3]。

RXRα转激活试验[1]
Cos-1细胞在含10%胎牛血清的DMEM中，以1.5 × 105个/35-mm2的组织培养板进行培养。细胞在37°C、5% CO2条件下培养过夜。第二天，将细胞转染到无血清培养基中，每孔用3个质粒按以下量混合，0.05µg pRL-TK， 2µg prxre -荧光素酶，2.5µg pSG5-RXRα，按制造商的方案使用Lipofectamine 2000。转染后，在37°C 5% CO2中孵育4小时。然后更换培养基以完成DMEM。请注意，完整的DMEM含有10%的木炭剥离FBS，而不是10%的FBS。活性炭处理活性炭剥离的FBS吸附亲脂性化合物，包括类维生素a。转染20小时后，用乙醇或0.1%乙醇单独溶解的测试化合物处理细胞24小时。用PBS洗涤细胞一次，在室温下用500µl被动裂解缓冲液孵育15分钟。然后根据供应商的建议，使用GloMax 96微孔板发光计（Promega）和Dual luciferase Reporter （DLR）检测系统检测20µl细胞裂解液的荧光素酶活性。对于每个实验，将萤火虫荧光素酶（实验报告）活性归一化为Renilla荧光素酶（对照报告）活性。计算归一化萤火虫荧光素酶活性的变化，相对于用载体（乙醇）转染的细胞，其设为1。 折叠激活=测试化合物的平均值（萤火虫/Renilla） /载体（乙醇处理细胞）的平均值（萤火虫/Renilla）

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视黄酮X受体（RXRα）被9-顺式视黄酸（9cRA）激活，作为同二聚体或与其他核受体作为异二聚体调节转录。我们之前已经证明，在过表达RXRα受体的哺乳动物细胞中，β-Apo-13-carotenone （β-胡萝卜素的偏心切割产物）可以拮抗9cRA对RXRα的激活。然而，β-Apo-13-carotenone调节RXRα转录活性的分子机制尚不清楚，这是本报告的主题。我们使用全长RXRα和报告基因构建体（RXRE-Luc）转染COS-7细胞进行转激活实验，并检测荧光素酶活性。将β- apo -13-胡萝卜素与RXRα拮抗剂UVI3003进行比较。结果表明，β-Apo-13-carotenone和UVI3003均通过9cRA改变了RXRα的剂量依赖性激活。相比之下，使用Gal4-DBD:RXRαLBD受体杂交报告细胞试验检测9cra诱导的辅激活因子与配体结合域的结合结果表明，UVI3003显著抑制9cra诱导的辅激活因子与RXRαLBD的结合，但β-Apo-13-carotenone没有。而β-Apo-13-carotenone和UVI3003均能抑制9- cra诱导乳腺癌细胞系MCF-7中caspase 9基因的表达。为了解决这一明显的矛盾，我们研究了β-Apo-13-carotenone对纯化重组RXRαLBD寡聚状态的影响。β- apo -13-胡萝卜素诱导RXRαLBD的四聚化，而UVI3003对其寡聚状态没有影响。这些观察结果表明，β-Apo-13-carotenone通过诱导“转录沉默”RXRα四聚体的形成来调节RXRα的转录活性。[2]

核受体报告细胞全长hRXRα测定[2]
COS-7细胞在96孔板中培养过夜。将pSV运动载体（Addgene）全长人RXRα cDNA与Renilla （pRL-tk）和Firefly荧光素酶（RXRE-Luc）报告基因构建物共转染到无血清DMEM的COS-7细胞中，并添加X-tremeGENE 9 DNA。转染24小时后，用9cRA处理含有10%炭条FBS的DMEM中的COS-7细胞，无论是否存在β-Apo-13-carotenone或UVI3003，再处理24小时。细胞裂解液用于双荧光素酶实验，以确定9cRA对hRXRα的激活和β-Apo-13-carotenone和UVI3003对hRXRα的抑制作用。对于每个实验，萤火虫荧光素酶（实验报告）活性归一化为Renilla荧光素酶（对照报告）。

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人RXRαLBD报告细胞试验[2]
将表达人RXRαLBD的报告细胞与GAL-4 DBD融合，按照制造商的方案进行处理。报告细胞与0、0.32、1.6、8、40、200、1000和5000 nm的9cRA在37℃下孵育24小时，同时存在或不存在固定浓度的β-Apo-13-carotenone或UVI3003。用Glomax96光度计检测发光。

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β-apo-类胡萝卜素，包括β- apo- 13-胡萝卜素和β-apo-14'-胡萝卜素，在转激活试验中是有效的视黄酸受体（RAR）拮抗剂。我们询问这些因素如何影响活细胞中依赖rar的过程。最初，我们探索了β-载脂蛋白13-胡萝卜素和β-载脂蛋白14′-胡萝卜素对P19细胞的影响，P19细胞是一种小鼠胚胎癌细胞系，经全反式维甲酸处理后分化为神经元。用任何一种化合物处理P19细胞都不能阻断全反式维甲酸诱导的分化。然而，液相色谱串联质谱研究证实，这两种β-载胡萝卜素在P19细胞中均不积累。全反式维甲酸在P19细胞中积累到高水平。这表明，某些细胞对β-载胡萝卜素的摄取和代谢不涉及类维甲酸的相同过程，这些可能是细胞类型特异性的。我们还研究了两种β-载胡萝卜素对脂肪细胞分化过程中3T3-L1脂肪细胞标记基因表达的影响。用缺乏RAR拮抗剂活性的β-Apo-13-carotenone或β-apo-10'-胡萝卜素酸处理3T3-L1脂肪细胞，刺激脂肪细胞标记基因表达。两者都不能阻断相对大剂量外源性全反式维甲酸对脂肪细胞分化的抑制作用。我们的数据表明，除了作为转录拮抗剂，一些β-载胡萝卜素类通过其他机制影响3T3-L1脂肪细胞分化。［3］

[1]. The eccentric cleavage product of β-carotene, β-apo-13-carotenone, functions as an antagonist of RXRα. Arch Biochem Biophys. 2010 Dec 1;504(1):11-6.

[2]. β-Apo-13-carotenone regulates retinoid X receptor transcriptional activity through tetramerization of the receptor. J Biol Chem. 2014 Nov 28;289(48):33118-24.

[3]. Actions of β-apo-carotenoids in differentiating cells: differential effects in P19 cells and 3T3-L1 adipocytes. Arch Biochem Biophys. 2015 Apr 15;572:2-10.

13-脱辅基β-胡萝卜素酮是一种脱辅基类胡萝卜素化合物，由β,β-胡萝卜素骨架在13位发生氧化降解而来。它既是脱辅基类胡萝卜素，也是烯酮。

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本研究探讨了β-胡萝卜素的偏心裂解产物，即β-脱辅基类胡萝卜素（BACs），对视黄醇X受体α（RXRα）信号通路的影响。我们进行了转录激活实验，以检测BACs是否激活或拮抗RXRα。将报告基因构建体（RXRE-Luc、pRL-tk）和RXRα转染至Cos-1细胞，并用于进行这些实验。结果表明，所有测试的BACs均未激活RXRα。在测试的化合物中，β-apo-13-胡萝卜素被发现能够拮抗9-顺式维甲酸对RXRα的激活作用，且在低至1 nM的浓度下即可发挥作用。分子建模研究表明，β-apo-13-胡萝卜素的分子相互作用类似于RXRα的拮抗剂。这些结果提示β-apo-13-胡萝卜素可能在RXRα信号通路中发挥作用。[1] 视黄酸X受体（RXRα）可被9-顺式维甲酸（9cRA）激活，并以同源二聚体或与其他核受体形成异源二聚体的形式调控转录。我们此前已证实，β-apo-13-胡萝卜素（β-胡萝卜素的偏心裂解产物）能够拮抗9cRA在过表达该受体的哺乳动物细胞中对RXRα的激活作用。然而，β-apo-13-胡萝卜素调控RXRα转录活性的分子机制尚不清楚，这也是本报告的研究主题。我们利用转染至COS-7细胞的全长RXRα和报告基因构建体（RXRE-Luc）进行转录激活实验，并检测了荧光素酶活性。同时，我们将β-apo-13-胡萝卜素与RXRα拮抗剂UVI3003进行了比较。结果表明，β-apo-13-胡萝卜素和UVI3003均能改变9cRA对RXRα的剂量依赖性激活作用。相反，使用混合型 Gal4-DBD:RXRαLBD 受体报告细胞检测 9cRA 诱导的共激活因子与配体结合域结合的实验结果表明，UVI3003 显著抑制了 9cRA 诱导的共激活因子与 RXRαLBD 的结合，而 β-apo-13-胡萝卜素则没有这种作用。然而，β-apo-13-胡萝卜素和 UVI3003 均抑制了 9-cRA 诱导的乳腺癌细胞系 MCF-7 中 caspase 9 基因的表达。为了解释这一明显的矛盾，我们研究了 β-apo-13-胡萝卜素对纯化重组 RXRαLBD 寡聚状态的影响。结果表明，β-apo-13-胡萝卜素诱导 RXRαLBD 形成四聚体，而 UVI3003 对寡聚状态没有影响。这些观察结果表明，β-apo-13-胡萝卜素通过诱导“转录沉默”的RXRα四聚体的形成来调节RXRα的转录活性。[2] 总之，本研究揭示了拮抗剂β-apo-13-胡萝卜素配体依赖性调节RXRα转录活性的机制。研究结果提示，RXR的四聚化以及调节寡聚体状态的因子可能参与细胞信号传导的调控。β-apo-13-胡萝卜素诱导的四聚化可能使RXRα保持为一种无活性的核受体库，在9cRA生成后能够迅速提供二聚体或单体RXRα。这也可能提示配体依赖性调节控制着RXRα与其他参与多种信号通路的核受体伴侣形成异二聚体的可用性。[2]

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总之，我们在P19细胞中的研究表明，β-apo-13-胡萝卜素和β-apo-14′-胡萝卜醛的摄取和/或代谢不允许这些β-胡萝卜素代谢物在细胞内积累。这表明，这两种β-apo-类胡萝卜素的RAR拮抗活性将受到细胞获取/保留足够数量的它们的固有能力的限制，从而无法发生转录调控作用。我们的数据还表明，β-apo-类胡萝卜素，例如apo-13-胡萝卜素和apo-10′-胡萝卜酸，可能对多种细胞过程具有重要的调节作用，并且其中一些观察到的作用可能是通过RAR拮抗作用以外的其他机制介导的。这两个结论都需要进行更深入的研究，才能了解 β-胡萝卜素的酶促和非酶促 β-脱辅基类胡萝卜素副产物的生物学作用。[3]

C₁₈H₂₆O

258.40

258.198

17974-57-1

5363697

Light yellow to yellow ointment

5.16

17.07

0

1

4

19

456

0

CC(/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)=O

UBTNVRPIHJRBCI-LUXGDSJYSA-N

InChI=1S/C18H26O/c1-14(8-6-10-16(3)19)11-12-17-15(2)9-7-13-18(17,4)5/h6,8,10-12H,7,9,13H2,1-5H3/b10-6+,12-11+,14-8+

(3E,5E,7E)-6-methyl-8-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)octa-3,5,7-trien-2-one

beta-Apo-13-carotenone; 17974-57-1; 13-apo-beta-carotenone; (beta)-Apo-13-carotenone; 13-apo-beta-caroten-12-one; D'Orenone; (3E,5E,7E)-6-methyl-8-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)octa-3,5,7-trien-2-one; CHEBI:53175;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~110 mg/mL (~425.70 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.75 mg/mL (10.64 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。