10-Deacetylbaccatin-III (10-DAB)

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目录号: V2324 纯度: =99.54%
10-De乙酰基浆果赤霉素-III(也称为10-DAB、10-De乙酰基浆果赤霉素)是一种具有抗癌活性的中间体。
10-Deacetylbaccatin-III (10-DAB) CAS号: 32981-86-5
产品类别: Disease Research Fields
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产品描述
10-De乙酰基浆果赤霉素-III(也称为10-DAB、10-De乙酰基浆果赤霉素)是一种具有抗癌活性的中间体。用于制备紫杉醇,紫杉醇是从太平洋紫杉树短叶红豆杉以及红豆杉属其他物种的内皮中分离出来的一种抗白血病和肿瘤抑制剂。由于天然来源中紫杉醇的利用率较低,10-DAB被用作制备紫杉醇及其衍生物的原料。 10-DAB很容易从一年生红豆杉叶中提取,其化学结构非常折叠,α羟基受阻在C-13处,很容易与4α乙酰基形成氢键。
生物活性&实验参考方法
靶点
Intermediate for synthesis of paclitaxel
体外研究 (In Vitro)
尽管在转录水平上对紫杉醇生物合成的调控尚不清楚,但10-脱乙酰基浆果赤霉素III-10β-O-乙酰基转移酶(DBAT)是紫杉醇生物合成中的关键酶。从红豆杉细胞中克隆了dbat基因的1740 bp片段5'侧翼序列。通过缺失分析,在中华鳖细胞中定位了dbat启动子活性所需的重要调控元件。以重要调控元件为诱饵,利用酵母单杂交系统从中华鳖细胞cDNA文库中分离出一种新的WRKY转录因子TcWRKY1。茉莉酸甲酯(MeJA)特异性诱导TcWRKY1在中华鳖悬浮细胞中的基因表达。生化分析表明,TcWRKY1蛋白与重要调控元件中的两个W-box(TGAC)顺式元件特异性相互作用。TcWRKY1的过表达增强了中华绒螯蟹悬浮细胞中dbat的表达,RNA干扰(RNAi)降低了dbat转录物的水平。这些结果表明,TcWRKY1参与了中国红豆杉细胞紫杉醇生物合成的调控,dbat是该转录因子的靶基因。这项研究还为工程增加紫杉醇在红豆杉细胞培养中的积累提供了一个潜在的候选基因。[2]
紫杉醇和其他紫杉烷存在时的吸收[2]
为了确定其他紫杉烷对Flutax-2®摄取的影响,使用了聚集的悬浮细胞培养物。悬浮细胞培养物与Flutax-2®在其他紫杉烷(紫杉醇、浆果赤霉素III、头孢甘露碱和10-脱乙酰紫杉醇)存在下孵育。这些紫杉烷在结构上与紫杉醇相似,但有几个不同之处:浆果赤霉素III缺乏苯丙氨酸衍生的侧链;头孢甘露碱在侧链的第三个碳位置具有直链碳链,而不是苯基;10-脱乙酰基紫杉醇在C-10位缺少乙酰基(图3)。只有紫杉醇被发现显著(p<0.05)抑制Flutax-2®的细胞摄取(图4A)。这些结果清楚地表明了紫杉醇摄取的特异性。此外,Flutax-2®的抑制作用与存在的未标记紫杉醇的量呈线性关系(图4B)。在Flutax-2®的恒定浓度下,紫杉醇的加入能够竞争性地抑制荧光标记配体的细胞结合。竞争性抑制表明这两种化合物是通过特定的机制运输的。
体内研究 (In Vivo)
醋酸诱导的扭体反应[3]
所有化合物[例如10-脱乙酰基浆果赤霉素III(10-DAB)]均显示出显著的镇痛活性,尤其是与仅用生理盐水治疗的组相比,在40mg/kg剂量下,tasumatrol B将乙酸诱导的扭动减少了72.23%(表1)。
热板试验[3]
根据热板试验的结果,用紫杉类治疗的动物和用生理盐水治疗的动物之间没有统计学上的显著差异(表2)。
卡拉胶诱导的水肿[3]
分离的化合物[例如10-Deacetylbaccatin-III (10-DAB)/10-脱乙酰基浆果赤霉素III(10-DAB)]显著减少了卡拉胶引起的水肿。然而,发现tasumatrol B是最具活性的化合物,在20和40mg/kg的试验剂量下显示出显著(p<0.05)和高度显著(p<0.01)的活性。
酶活实验
体外脂肪氧合酶抑制试验[3]
通过使用不同浓度的分离化合物Sieboldogenin进行酶抑制试验。通过稍微修改Tappel(1962)开发的光谱法来测量脂氧合酶抑制活性。使用I-B型脂肪氧合酶(EC 1.13.11.12)(大豆)和亚油酸,无需进一步纯化。160μL磷酸钠缓冲液,0.1毫米(pH 7.0),将10 mL样品溶液(试验化合物)和20μL脂肪氧合酶溶液混合,在258°C下孵育5分钟。通过加入10μL亚油酸底物溶液引发反应,并在10分钟内观察吸收随(9Z,11E)-13S)-13-氢过氧化十八碳-9,11-二烯酸酯的形成而变化。将测试样品和对照品溶解在50%乙醇中。所有反应均进行三次。黄芩素被用作脂肪氧化酶抑制的阳性对照(Khan等人,2009)。使用EZFit酶动力学程序计算抑制浓度(IC50)值。
动物实验
醋酸诱导扭体反应[3]
醋酸腹部扭体试验(Koster等,1959)根据Nisar等(2008b)的方法进行了改进。小鼠被分为若干组,每组5只,禁食18小时。阴性对照组灌胃给予生理盐水10 mL/kg,试验组灌胃给予不同剂量的试验化合物。同时,阳性对照组灌胃给予乙酰水杨酸(ASA)100 mg/kg。半小时后,所有小鼠腹腔注射0.7%醋酸水溶液10 mg/kg,并计数注射醋酸后10分钟内的扭体次数。
热板试验[3]
热板潜伏期试验按照Zhang等(2009)描述的方法进行。动物事先进行两次热板适应性训练。测试时,将小鼠置于温度维持在 55 ± 0.5°C 的热板上。记录小鼠舔舐后爪或跳离热板表面的时间,作为热板潜伏期。基线潜伏期 < 5 秒或 > 30 秒的小鼠被排除在研究之外。确定基线反应潜伏期后,分别在口服给药后 30、60 和 120 分钟重新测定热板潜伏期(以阿司匹林为参考药物)。
角叉菜胶诱导水肿[3]
采用 Winter 等人 (1962) 的方法,通过测试受试样品抑制角叉菜胶诱导的后爪水肿的能力来评估其抗炎潜力,如先前报道 (Khan 等人,2009) 所述。将受试样品和对照样品分组口服给予大鼠。 1小时后,在大鼠右后爪足底注射1%角叉菜胶悬浮液(0.1 mL),以2%阿拉伯胶为悬浮剂,在生理盐水中,诱导目标部位发生急性炎症。分别于注射角叉菜胶后0小时和3小时,使用体积描记仪(Ugo Basile,意大利)测量爪体积。以5 mg/kg吲哚美辛(溶于2%阿拉伯胶)作为阳性对照。通过对原始数据进行统计分析,计算各组与对照组的炎症抑制率。比较公式为:%I = 1 − (dt/dc) × 100,其中dt为药物治疗组爪体积的变化值,dc为对照组爪体积的变化值,I代表炎症抑制率。
棉球水肿模型[3]
为了评估分离化合物对棉球水肿模型的抗炎作用,将雄性大鼠分为四组,每组五只。每只大鼠腹部两侧皮下植入两颗重18±1 mg的棉球。动物采用Swingle和Shideman(1972)报道的方法进行轻度乙醚麻醉。在为期7天的实验期间,每天给药一次。植入后第8天,用戊巴比妥钠(50 mg/kg,腹腔注射)麻醉大鼠。麻醉诱导后,取出棉球,在55℃下干燥15小时,冷却后称重。计算肉芽肿平均重量以及各测试化合物的肉芽肿抑制率。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
急性毒性[3]
所有化合物(例如10-脱乙酰巴卡亭-III (10-DAB))在给药48小时后均被证实安全。统计学分析显示,阴性对照组与其他治疗组在死亡率和发病率方面均无显著差异。
参考文献

[1]. Functional analysis of a WRKY transcription factor involved in transcriptional activation of the DBAT gene in Taxus chinensis. Plant Biol (Stuttg). 2013 Jan;15(1):19-26.

[2]. Paclitaxel uptake and transport in Taxus cell suspension cultures. Biochem Eng J. 2012 Apr 15;63:50-56.

[3]. Analgesic and antiinflammatory activities of taxoids from Taxus wallichiana Zucc. Phytother Res. 2012 Apr;26(4):552-6.

[4]. Taxol biosynthesis: Molecular cloning of a benzoyl- CoA:taxane 2α-O-benzoyltransferase cDNA from Taxus and functional expression in Escherichia coli. PNAS, 2000 , 97(25):13591-13596.

其他信息
10-脱乙酰巴卡亭III是一种四环二萜类化合物,属于仲α-羟基酮。其功能与巴卡亭III相关。
据报道,10-脱乙酰巴卡亭III存在于苏门答腊红豆杉(Taxus sumatrana)、尖叶红豆杉(Taxus cuspidata)以及其他有相关数据的生物体中。
本研究采用紫杉醇荧光类似物(Flutax-2®)结合流式细胞术检测,研究了紫杉醇在加拿大红豆杉(Taxus canadensis)悬浮培养物中的转运。实验分别使用分离的原生质体和聚集的悬浮细胞培养物进行。结果表明,在所需的孵育时间(24小时)内,Flutax-2®在红豆杉悬浮培养物中的稳定性超过90%。未标记的紫杉醇被证实能抑制Flutax-2®的细胞摄取,而结构相似的紫杉烷类药物,如头孢拉明、巴卡亭III和10-去乙酰巴卡亭III,则不抑制Flutax-2®的摄取。Flutax-2®的摄取动力学呈饱和状态。这些结果表明存在紫杉醇的特异性转运系统。经茉莉酸甲酯诱导的悬浮细胞比未诱导的细胞积累了多60%的Flutax-2®,这可能是由于茉莉酸甲酯诱导后细胞储存能力增强所致。紫杉醇特异性转运机制的存在是一个重要的初步结果,将为更深入的研究以及开发靶向策略以增加紫杉醇向细胞外介质的分泌奠定基础。[2]
一项研究旨在鉴定可能具有镇痛和抗炎作用的成分。从红豆杉(Taxus wallichiana Zucc.)树皮提取物中分离得到塔苏马醇B、1,13-二乙酰基-10-脱乙酰基巴卡亭III (10-DAD) 和4-脱乙酰基巴卡亭III (4-DAB)。采用醋酸扭体模型、热板试验、角叉菜胶诱导的小鼠足爪水肿模型、棉球水肿模型和体外脂氧合酶抑制试验,对所有化合物的镇痛和抗炎活性进行了评价。在醋酸诱导的小鼠足爪水肿模型中,所有化合物,尤其是塔苏马醇B,均表现出显著的镇痛活性,优于生理盐水组。同样,所有测试化合物,尤其是塔苏马醇B,均表现出显著的抗炎活性。然而,所有化合物在热板试验和体外脂氧合酶抑制试验中均未表现出明显的活性。本研究强调了tasumatrol B作为治疗疼痛和炎症的新型先导化合物的潜力,该化合物的发现源于对传统药用植物T. wallichiana Zucc.的科学验证。[3]
从红豆杉(Taxus cuspidata)中分离出一种编码紫杉烷2α-O-苯甲酰转移酶的cDNA克隆。该重组酶催化半合成底物2-去苯甲酰基-7,13-二乙酰巴卡亭III转化为7,13-二乙酰巴卡亭III,因此似乎在紫杉醇生物合成途径的后期酰化步骤中发挥作用。利用基于同源性的PCR克隆策略生成酰基转移酶寡脱氧核苷酸探针,扩增了多个基因片段,并用其筛选从茉莉酸甲酯诱导的红豆杉细胞中分离的mRNA构建的cDNA文库,从中获得了多个全长酰基转移酶,并在大肠杆菌中分别进行了表达。通过放射性HPLC、1H-NMR以及HPLC-MS联用技术验证了功能性表达的苯甲酰转移酶。该酶的产物为7,13-二乙酰巴卡亭III,由2-去苯甲酰基-7,13-二乙酰巴卡亭III和苯甲酰辅酶A作为共底物在相应的无细胞提取物中转化而来。全长cDNA具有1320个碱基对的开放阅读框,编码一个由440个氨基酸残基组成的蛋白质,分子量为50089。重组苯甲酰转移酶的最适pH值为8.0,对紫杉烷类底物和苯甲酰辅酶A的Km值分别为0.64 mM和0.30 mM,并且对功能化紫杉烷核的2α-羟基酰化具有明显的区域选择性。该酶可用于提高紫杉醇的生产收率,并用于在C2位带有修饰芳酰基的药物类似物的半合成。[4]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C29H36O10
分子量
544.59
精确质量
544.23
元素分析
C, 63.96; H, 6.66; O, 29.38
CAS号
32981-86-5
相关CAS号
32981-86-5
PubChem CID
154272
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
716.8±60.0 °C at 760 mmHg
熔点
231-236 °C
闪点
233.5±26.4 °C
蒸汽压
0.0±2.4 mmHg at 25°C
折射率
1.624
LogP
3.51
tPSA
159.82
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
39
分子复杂度/Complexity
1090
定义原子立体中心数目
9
SMILES
CC1=C2[C@H](C(=O)[C@@]3([C@H](C[C@@H]4[C@]([C@H]3[C@@H]([C@@](C2(C)C)(C[C@@H]1O)O)OC(=O)C5=CC=CC=C5)(CO4)OC(=O)C)O)C)O
InChi Key
YWLXLRUDGLRYDR-ZHPRIASZSA-N
InChi Code
InChI=1S/C29H36O10/c1-14-17(31)12-29(36)24(38-25(35)16-9-7-6-8-10-16)22-27(5,23(34)21(33)20(14)26(29,3)4)18(32)11-19-28(22,13-37-19)39-15(2)30/h6-10,17-19,21-22,24,31-33,36H,11-13H2,1-5H3/t17-,18-,19+,21+,22-,24-,27+,28-,29+/m0/s1
化学名
(2aR,4S,4aS,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-12b-acetoxy-4,6,9,11-tetrahydroxy-4a,8,13,13-tetramethyl-5-oxo-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-dodecahydro-1H-7,11-methanocyclodeca[3,4]benzo[1,2-b]oxet-12-yl benzoate
别名

10DAB; 10-Deacetylbaccatin III; 32981-86-5; 10-Deacetylbaccatin; 10-Deacetylbaccatine III; UNII-4K6EWW2Z45; 10-Deacetyl baccatin III; CHEBI:18193; 10-DB III; 10DAB III

HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:109 mg/mL (200.2 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.8362 mL 9.1812 mL 18.3624 mL
5 mM 0.3672 mL 1.8362 mL 3.6725 mL
10 mM 0.1836 mL 0.9181 mL 1.8362 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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