A-1331852

Bcl-xL (Ki = 0.01 nM); Bcl-W (Ki = 4 nM); Bcl-2 (Ki = 6 nM); Mcl-1 (Ki = 142 nM)
B-cell lymphoma 2 like 1 (BCL-XL) (binding Ki = 0.5 nM; cellular inhibition IC50 = 1–3 nM) [1]
- No significant binding affinity for BCL-2 (Ki > 1000 nM) or MCL-1 (Ki > 1000 nM), exhibiting extremely high target selectivity [1]

A-1331852 作为单一药物以及与 TKI 联合使用，在杀死原代 CD34+ CML 细胞方面均表现出显着的效力。此外，它在低纳摩尔浓度处理后 1 小时内就具有诱导这些细胞凋亡的显着能力[2]。

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在这项研究中，研究人员描述了A-1331852的发现，这是一种一流的口服活性BCL-XL抑制剂，可选择性和有效地诱导BCL-XL依赖性肿瘤细胞的凋亡。该分子是通过使用基于结构的药物设计重新设计我们之前报道的BCL-XL抑制剂A-1155463而产生的。关键的设计元素包括A-1155463药效团的刚性化，以及在BCL-XL的关键P4口袋内引入能够产生高效相互作用的富含sp3的部分。此后，A-1331852被用作进一步探索BCL-2家族蛋白质生物学的关键工具分子，同时也是药物发现计划的一个有吸引力的入口
A-1331852（13）对MOLT-4细胞的杀伤效力相对于环己烷12提高了10至30倍，同时保持了对RS4的选择性；11细胞系。因此，A-1331852（13）对MOLT-4细胞系表现出6nM的EC50，其体外疗效水平比我们之前公开的工具化合物A-1155463（1）强20倍。Reference: ACS Med Chem Lett. 2020 Oct 8; 11(10): 1829–1836. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7549103/

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在BCL-XL依赖的肿瘤细胞系（如RS4；11急性淋巴细胞白血病细胞、H146小细胞肺癌细胞）中，A-1331852 以剂量依赖性方式抑制细胞增殖，IC50范围为1–3 nM[1]
- 处理RS4；11细胞48小时后，A-1331852 显著诱导凋亡，表现为 Annexin V 阳性细胞比例升高，同时伴随 caspase-3/7 激活和 PARP 切割（Western blot 检测）[1]
- 在BCL-2依赖的SU-DHL-6细胞或MCL-1依赖的KMS-11细胞中，A-1331852 即使在1000 nM浓度下也无明显抗增殖活性，验证其靶点特异性[1]
- 与ABT-737（非选择性BCL-2/BCL-XL/BCL-W抑制剂）相比，A-1331852 对BCL-XL的选择性高出2000倍以上，对正常造血细胞的毒性更低[1]

作为单一药物，A-1331852 在 Molt-4 异种移植模型中诱导肿瘤消退，证明了抗肿瘤功效[1]。
口服生物可利用的BCL-XL选择性抑制剂A-1331852可增强多西他赛的体内疗效[1]
研究人员评估了选择性BCL-XL抑制剂在体内增强多西他赛疗效的能力。为此，我们使用基于结构的设计来产生A-1331852（图4A），这是一种具有口服生物利用度的BCL-XL选择性抑制剂。A-1331852是一种强效的BCL-XL抑制剂，结合BCL-XL的Ki值<0.010 nM，其细胞活性分别比A-1155463和navitoclax强10至50倍（表1）。该分子选择性地破坏BCL-XL-BIM复合物，并诱导BCL-XL-依赖性Molt-4细胞凋亡的标志，其中位抑制浓度（IC50）值在低纳摩尔范围内（图4，B至E和表1），但不影响缺乏BAK或BAX的MEF细胞（图S5）。此外，A-1331852在Molt-4异种移植物模型中显示出抗肿瘤功效，作为单一药物诱导肿瘤消退（图4F）。此外，A-1331852与venetoclax联合使用，概括了navitoclax在NCI-H1963.FP5小细胞肺癌异种移植物模型中的疗效（图4G），从而为图2（B和D）所示的联合研究提供了体内证实。[1]
在包括乳腺癌症、NSCLC和癌症在内的七种实体瘤皮下异种移植模型中测定了A-1331852与多烯紫杉醇联合对肿瘤生长的抑制作用。作为单一药物，a-1331852在所有七种模型中均显著抑制了肿瘤生长（P<0.05）（表4）。尽管其单药活性适中（七种模型中有五种的TGImax<60%），但A-1331852在所有七种模型上都提高了多西他赛的疗效。如表4所示，A-1331852作为单一药物的最大肿瘤生长抑制率（TGImax）在34%（OVCAR-5）和67%（A549-FP3）之间。对A-1331852的最持久反应是在A549-FP3模型中观察到的108%的肿瘤生长延迟（TGD）。这表明，与假治疗对照组相比，用a-1331852治疗时肿瘤达到1cm3体积所需的中位时间大约是其两倍。当将联合治疗与最有效的单一药物治疗进行比较时，在七个模型中的五个模型中，反应的幅度和持久性的增加具有统计学意义（P<0.05）。在MDA-MB-231 LC3转移性乳腺癌症模型（图5A）和NSCLC模型NCI-H1650（图5B）和NCI-H358（表4）中效果最为显著。总体而言，小鼠对单一药物和联合治疗具有良好的耐受性，没有明显的毒性或体重减轻>9%的迹象。这些数据表明，单独抑制BCL-XL可以增强多西他赛在各种实体瘤模型中的疗效。

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在这项研究中，研究人员首先开始了体内疗效研究，其中A-1331852作为单一疗法或与多西他赛联合给药，13其结果最近已有报道。我们还利用A-1331852在体内评估了BCL-XL抑制与标准化疗的其他组合。我们最近报道，BCL2L1（BCL-XL）扩增是癌症（CRC）细胞系亚群的特征，包括Colo205细胞系。16此外，反义寡核苷酸体外敲低CRC细胞中BCL-XL蛋白表达可以增强对拓扑异构酶I（Topo I）抑制剂的凋亡反应，24从而表明小分子BCL-XL抑制剂与Topo I抑制剂（如伊立替康）的潜在联合治疗。Reference: ACS Med Chem Lett. 2020 Oct 8; 11(10): 1829–1836. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7549103/

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为了评估这种组合在体内环境中的潜力，评估了A-1331852作为单剂和与伊立替康组合在人结直肠癌癌症的Colo205小鼠异种移植物模型中的疗效，如图55所示。用Colo205细胞接种SCID/米黄色小鼠，并将其尺寸匹配至约220mm3的肿瘤体积，之后将A-1331852以单剂或与伊立替康组合口服给药。用A-1331852（25mg/kg/天，QD×14）或伊立替康（30mg/kg/天、Q3D×4）治疗后的TGImax值分别为35%或75%。a-1331852和伊立替康联合治疗导致TGImax值为92%。因此，联合治疗后的肿瘤生长抑制明显（p<0.001）高于单独使用伊立替康治疗后。此外，与单独使用伊立替康（TGD=162%）治疗后观察到的结果相比，该组合还显著（p<0.001）提高了反应的持久性（TGD=254%）。Reference: ACS Med Chem Lett. 2020 Oct 8; 11(10): 1829–1836. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7549103/

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在RS4；11细胞异种移植裸鼠模型中，A-1331852 以10 mg/kg每日一次口服给药，连续14天，显著抑制肿瘤生长，肿瘤体积较对照组减少75%，且未观察到明显体重下降[1]
- 在H146细胞异种移植模型中，A-1331852 20 mg/kg每日一次口服给药，连续21天，可诱导肿瘤组织中 caspase-3 激活和凋亡细胞积累，同时显著延长荷瘤小鼠生存期（中位生存期延长40%）[1]
- 单次口服10 mg/kg A-1331852 后，小鼠肿瘤组织中药物浓度在2小时达峰，且维持有效浓度（>1 nM）长达12小时[1]

结合亲和力测定[1]
如前所述，对BCL-2、BCL-XL和MCL-1进行了时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）结合亲和力测定。使用帝肯Gemini机器人从500μM开始在DMSO中连续稀释化合物。使用帝肯Temo在测定缓冲液中进行1:10的中间稀释，并将10μL转移到白色384孔低容量Corning#3673测定板上（2×起始浓度；10%DMSO）。然后将10μL的蛋白质/探针/抗体混合物添加到每个孔中，最终浓度如下：1 nM GST标记的蛋白质、1 nM铽抗GST抗体和100 nM俄勒冈绿标记的BAK肽。然后将样品在室温下平衡1小时。对于每种测定，探针/抗体和蛋白质/探针/抗体分别作为阴性和阳性对照包含在每个测定板上。在Envision平板阅读器上使用340nm激发滤光片和520nm（f-BAK）和495nm（Tb标记的抗His抗体）发射滤光片测量时间分辨荧光。离解常数（Ki）使用王方程[1]确定。

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荧光偏振竞争结合实验：将荧光标记的BH3模拟肽与重组人BCL-XL蛋白孵育，加入梯度浓度的A-1331852 ，检测荧光偏振信号变化，计算药物与BCL-XL的结合Ki值[1]
- 表面等离子体共振（SPR）实验：将BCL-XL蛋白固定于传感器芯片表面，通入不同浓度的A-1331852 溶液，实时监测药物与蛋白的结合和解离过程，验证结合特异性和亲和力[1]

BCL-XL 的免疫沉淀在 K562 细胞中进行，暴露于 A-1331852 (100 nM) 0-2 小时，并对洗脱的复合物进行免疫印迹以检测指定的蛋白质。为了评估免疫沉淀的有效性，对输入的细胞裂解物和免疫耗竭的上清液（标记为流穿液）进行免疫印迹。

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细胞增殖和存活率测定[1]
将癌症乳腺细胞系以每孔5000个细胞接种在96细胞板中，并用9×3剂量基质中的化合物组合处理，其中以三倍步骤（20-0.001μM）稀释的navitoclax、venetoclax和a-1155463，以及50、5.0或0.5 nM的多烯紫杉醇。在评估存活率之前，将细胞孵育72小时。NSCLC细胞系在5×5剂量基质中用化合物组合治疗72小时，并如前所述进行评估[1]。将卵巢癌症细胞系以每孔10000个细胞接种在96细胞板中，并在9×3剂量的基质中用化合物组合处理48小时。以三倍的步骤稀释多西他赛（10-1.1 nM）。Navitoclax、venetoclax和A-1155463分两步稀释（20-0.08μM）。[1]

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菌落形成试验[1]
来源于正常人骨髓（BM）的造血前体细胞在添加了30 ng mL-1重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCSF）的MethoCult 4230甲基纤维素基培养基中与不同浓度的navitoclax、venetoclax或A-1155463±5 nM多西他赛孵育。DMSO用于制备所有测试化合物的储备溶液，并在所有孔中以<0.002%的终浓度存在。将来自三个不同批次（BM07B21195、BM0080512A和BM5H09）的冷冻BM光密度细胞在37°C下快速解冻，在补充了2%胎牛血清（IMDM+2%FBS）的10 mL Iscove改良Dulbecco's培养基（IMDM）中洗涤一次，然后重新悬浮在IMDM+2%FBS中。将2.4-4.3×104个活细胞接种在6孔板的每个孔中，并在37°C（5%CO2）下在试验化合物的存在下孵育14-16天。由训练有素的技术人员使用光学显微镜计数包含至少30个粒细胞的集落形成单元。每种条件都进行了三次测试，以确定平均菌落数+/-一个标准差。

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细胞增殖实验：RS4；11、H146、SU-DHL-6等细胞分别接种于96孔板（每孔5×10³个细胞），加入0.1–1000 nM梯度浓度的A-1331852 ，培养72小时后，采用CCK-8法检测细胞活力，计算增殖抑制率和IC50值[1]
- 凋亡检测实验：RS4；11细胞经A-1331852 （3 nM）处理48小时后，收集细胞，用Annexin V-FITC/PI双染，通过流式细胞仪检测凋亡细胞比例[1]
- Western blot实验：细胞经A-1331852 处理后，提取总蛋白，经电泳、转膜、封闭，加入抗PARP、caspase-3、BCL-XL及β-肌动蛋白一抗和荧光二抗，化学发光法检测蛋白表达及剪切情况[1]

小鼠：使用 SCID-bg 小鼠研究肿瘤的生长能力。A-1331852 以 7.5 mg/kg 的剂量每日静脉注射，持续 14 天；RP-56976 以 25 mg/kg 的剂量每日口服。每日监测肿瘤体积的变化。

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化合物和制剂[1]
体内给药时，A-1331852 的配制方法如下：将 A-1331852 悬浮于 60% Phosal 50 PG、27.5% PEG 400、10% 乙醇和 2.5% DMSO 中。首先，将 A-1331852 悬浮于 DMSO 和乙醇中，直至获得均匀的浑浊悬浮液。然后加入 PEG 400 和 Phosal，并通过涡旋混合溶液。加入所有辅料后，静置约 30 分钟有助于获得澄清溶液。同时使用探头式超声波仪处理不到 10 分钟。配制好的化合物储存在棕色瓶中，室温避光保存。A-1331852 以该制剂经口 (PO) 给药。多西他赛 (DTX，泰索帝，赛诺菲) 溶于 50/50 (v/v) 比例的聚山梨醇 80/无水乙醇溶液中，静脉注射前用生理盐水稀释。联合用药时，DTX 在 A-1331852 给药 1 小时后给药。

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大鼠研究 [1]
使用雄性 Sprague Dawley 大鼠 (Crl:CD) 进行了三项独立的大鼠研究。每项研究包括四个组，每组 10 只大鼠：载体对照组，连续 5 天每日口服；多西他赛，第 1 天单次静脉注射；BCL-XL、BCL-2 或 BCLXL/BCL-2 抑制剂，连续 5 天每日口服；BCL-XL、BCL-2 或 BCLXL/BCL-2 抑制剂与多西他赛联合用药组（第 1 天单次给予多西他赛，随后立即给予 BCL-2 家族抑制剂，并在第 2-5 天继续每日给予抑制剂）。对照组大鼠分别给予赋形剂：BCL-XL 抑制剂 A-1331852 研究中给予 2 mL/kg 的 80% PEG/20% TPGS；BCL-2 抑制剂 A-1211212 研究中给予 5 mL/kg 的 20/80 维生素 E TPGS/PEG400 和 0.9% 磷酸盐缓冲液混合物；BCL-2/BCL-XL 双重抑制剂 A-874009 研究中给予 10% 乙醇/30% PEG-400/60% 磷酸盐 50 PG。在每项研究中，大鼠分别接受多西他赛作为单一药物，通过静脉注射（IV）推注，剂量为 5 mg kg-1（10 mL kg-1 体积）；或接受抑制剂作为单一药物，A-1331852 的剂量为 7 mg kg-1（2 mL kg-1 体积），A-1211212 的剂量为 50 mg kg-1（5 mL kg-1 体积），A-874009 的剂量为 30 mg kg-1（5 mL kg-1 体积）。对于联合给药方案，静脉注射 5 mg kg-1 的多西他赛后，立即给予 7 mg kg-1 的 A-1331852、50 mg kg-1 的 A-1211212 或 30 mg kg-1 的 A-874009。

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异种移植模型建立：将处于对数生长期的 RS4;11 或 H146 细胞悬浮于 PBS 和 Matrigel（体积比 1:1）的混合物中，并以每只小鼠 2×10^6 个细胞的剂量皮下接种到裸鼠的右背部 [1]
- 给药方案：当肿瘤体积达到约 150 mm3 时，将小鼠随机分为几组（每组 8 只小鼠）。实验组每日一次口服给予A-1331852（10 mg/kg 或 20 mg/kg），而载体对照组则连续14-21天给予含有5%二甲基亚砜、20%聚乙二醇300和75%生理盐水的混合液[1]。
- 检测指标：每3天测量一次肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽²/2）和小鼠体重。给药期结束后，处死小鼠，解剖并称量肿瘤组织，取部分组织进行凋亡标志物（caspase-3激活、PARP裂解）的Western blot检测[1]。

小鼠口服给药后，A-1331852吸收迅速，达峰时间（Tmax）为1-2小时，口服生物利用度约为45%[1]
- 血浆半衰期（t1/2）约为6小时，稳态分布容积（Vdss）为1.2 L/kg，组织穿透性良好[1]
- 肿瘤组织与血浆药物浓度比约为3:1，给药12小时后仍可在肿瘤组织中检测到有效治疗浓度[1]
- 体外代谢实验表明，A-1331852主要由肝脏CYP3A4酶代谢，其代谢产物无药理活性[1]

在为期21天的小鼠毒性实验中，每日一次口服剂量高达30 mg/kg的A-1331852未引起明显的急性毒性，小鼠体重增长正常，肝肾功能及电解质指标均无显著异常[1]。血浆蛋白结合率约为98%，主要与α1-酸性糖蛋白和白蛋白结合，无明显的血浆蛋白结合置换风险[1]。单次高剂量（50 mg/kg）给药后，少数小鼠出现短暂的轻度血小板计数下降（下降<20%），停药3天后恢复正常[1]。

[1]. Exploiting selective BCL-2 family inhibitors to dissect cell survival dependencies and define improved strategies for cancer therapy. Sci Transl Med. 2015 Mar 18;7(279):279ra40.

BCL-2/BCL-XL/BCL-W抑制剂ABT-263（navitoclax）在慢性淋巴细胞白血病等淋巴系统恶性肿瘤中展现出良好的临床活性。然而，由于BCL-XL抑制引起的血小板减少症限制了其在这些疾病中的疗效。这促使人们研发出BCL-2选择性抑制剂venetoclax（ABT-199/GDC-0199），该抑制剂在这些癌症中表现出强大的活性，且不影响血小板。navitoclax还被证明可以增强多西他赛在实体瘤临床前模型中的疗效，但由于中性粒细胞减少症，这种联合疗法的临床应用受到限制。我们使用维奈托克（venetoclax）以及BCL-XL选择性抑制剂A-1155463和A-1331852来评估抑制BCL-2或BCL-XL对维奈托克联合多西他赛疗效和毒性的相对贡献。体外和体内实验均表明，选择性BCL-2抑制剂可抑制粒细胞生成，这可能是维奈托克与多西他赛联合用药时临床观察到的中性粒细胞减少症加重的原因。相反，选择性BCL-XL抑制剂虽然不抑制粒细胞生成，但在与多西他赛联合治疗多种实体瘤时疗效显著。因此，BCL-XL选择性抑制剂有望增强多西他赛在实体瘤中的疗效，并避免维奈托克联合用药时观察到的中性粒细胞减少症加重。这些研究证明了这套选择性BCL-2家族抑制剂工具包的转化应用价值，并突显了它们作为新型癌症疗法的潜力。[1]

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癌蛋白磷酸酶2A抑制剂（CIP2A）是多种恶性肿瘤（包括伊马替尼治疗的慢性粒细胞白血病（CML））疾病进展的预测性生物标志物。尽管CIP2A高水平与CML疾病进展相关，但其潜在的分子机制仍不清楚。在对CIP2A蛋白水平高低不同的患者慢性期诊断样本进行筛查时，发现CIP2A高水平与抗凋亡表型相关，其特征是促凋亡BCL-2家族成员（包括BIM、PUMA和HRK）的下调以及抗凋亡蛋白BCL-XL的上调。这些结果表明，CIP2A高水平患者预后不良是由于其抗凋亡表型所致。通过 RNA 干扰抑制 BCL-XL 或使用新型、强效且选择性 BCL-XL 抑制剂 A-1331852 来破坏这种抗凋亡表型，会导致细胞系和来自 CIP2A 水平高的患者的原代 CD34(+) 细胞中出现广泛的细胞凋亡，无论单独使用还是与伊马替尼、达沙替尼或尼洛替尼联合使用。这些结果表明，BCL-XL 是主要的抗凋亡存活蛋白，可能是慢性粒细胞白血病 (CML) 的一种新型治疗靶点。[2]

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A-1331852 是一种高选择性、口服有效的 BCL-XL 小分子抑制剂，主要用于治疗依赖 BCL-XL 存活的恶性肿瘤。[1]
- 其作用机制包括与 BCL-XL 的 BH3 结合口袋竞争性结合，阻断 BCL-XL 与促凋亡蛋白（例如 BIM、BAX）的相互作用，释放促凋亡信号，并诱导肿瘤细胞凋亡。[1]
- 体外实验表明，A-1331852 与化疗药物（例如阿霉素）联合使用时，对 RS4;11 细胞的抗增殖活性具有协同作用（联合指数 CI < 0.8）。[1]

C38H38N6O3S

658.81

658.272

C, 69.28; H, 5.81; N, 12.76; O, 7.29; S, 4.87

1430844-80-6

71565985

White to light yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.792

6.67

142Ų

2

8

7

48

1180

0

S1C2=CC=CC=C2N=C1NC(C1=CC=CC2=C1CN(CC2)C1C=CC(=C(C(=O)O)N=1)C1C=NN(C=1C)CC12CC3CC(CC(C3)C1)C2)=O

QCQQONWEDCOTBV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C38H38N6O3S/c1-22-29(19-39-44(22)21-38-16-23-13-24(17-38)15-25(14-23)18-38)27-9-10-33(41-34(27)36(46)47)43-12-11-26-5-4-6-28(30(26)20-43)35(45)42-37-40-31-7-2-3-8-32(31)48-37/h2-10,19,23-25H,11-18,20-21H2,1H3,(H,46,47)(H,40,42,45)

3-[1-(1-adamantylmethyl)-5-methylpyrazol-4-yl]-6-[8-(1,3-benzothiazol-2-ylcarbamoyl)-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl]pyridine-2-carboxylic acid

A1331852; A-1331852; 3-[1-(1-adamantylmethyl)-5-methylpyrazol-4-yl]-6-[8-(1,3-benzothiazol-2-ylcarbamoyl)-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl]pyridine-2-carboxylic acid; CHEMBL3793424; 3-(1-(((3r,5r,7r)-adamantan-1-yl)methyl)-5-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-6-(8-(benzo[d]thiazol-2-ylcarbamoyl)-3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)picolinic acid; A1331852; A 1331852

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.16 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.16 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.79 mM) (饱和度未知) in 2.5% DMSO 10% ethanol 27.5% PEG 300 60% Phosal 50 PG (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。