| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Mdm2-MdmX RING domain interaction. MMRi6 specifically inhibits the E3 ligase activity of the Mdm2-MdmX heterodimer complex without affecting Mdm2 RING domain homodimer E3 activity or NEDD4-1 autoubiquitination. The compound disrupts the protein-protein interaction between Mdm2 and MdmX RING domains [1].
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性： 在生化实验中，MMRi6（10 μM）有效抑制MdmX刺激的Mdm2自身泛素化和Mdm2-MdmX介导的p53多聚泛素化，但不抑制NEDD4-1自身泛素化，表明其对Mdm2-MdmX E3复合物具有特异性。使用重组FLAG-MdmX和HA-Mdm2 RING蛋白的pull-down实验证明，MMRi6及其类似物MMRi64有效抑制了体外Mdm2-MdmX相互作用。相比之下，相同浓度的Mdm2-p53结合抑制剂Nutlin3a对Mdm2-MdmX介导的p53多聚泛素化无影响 [1]。
在HCT-8结肠癌细胞中，MMRi6（5 μM处理8小时）诱导p53蛋白积累。其类似物MMRi64（0.31-5 μM）以时间和浓度依赖性方式诱导p53积累和Mdm2诱导，并显著下调MdmX。在前B急性淋巴细胞白血病NALM6细胞中，MMRi64（1-10 μM）以时间和浓度依赖性方式激活p53，并强烈降低Mdm2表达（与HCT-8细胞相反）和MdmX水平。与Nutlin3a不同，MMRi64诱导强效的PUMA表达，但p21仅瞬时诱导，24小时时降至基础水平以下。PARP裂解在8小时时明显，并在24小时时增加，表明内在凋亡通路被激活。在wt-p53 Emu-myc小鼠淋巴瘤细胞中，MMRi64（0.1-2 μM）在0.1 μM的低浓度下即可诱导p53积累，并在约0.5 μM时诱导PARP裂解，而p53-null Emu-myc细胞未显示PARP裂解。流式细胞术显示，MMRi64在0.5和1 μM处理48小时分别诱导7.3%和20%的sub-G1群体，而Nutlin3a在0.5、1和2 μM仅诱导0.4%、0.8%和3.0%的sub-G1群体 [1]。 在生长抑制实验中，MMRi6在wt-p53 Emu-myc淋巴瘤细胞中的IC50约为0.5 μM，在p53-null Emu-myc细胞中约为3 μM（相差6倍）。在HCT116结肠癌细胞中，与HCT116-p53-/-细胞相比，p53对MMRi64的生长抑制贡献最大约10%。MMRi64（0.2-0.4 μM）与Nutlin3a（2 μM）联合使用协同诱导凋亡，将sub-G1群体从单独MMRi64的2.5%和单独Nutlin3a的1.3%分别提高至8.7%和16% [1]。 MMRi6 (10 μM) 在体外抑制 Mdm2 的自泛素化和 Mdm2-MdmX 介导的 p53 泛素化 [1]。MMRi6 (5 μM，8 小时) 诱导 HCT-8 细胞和野生型 p53 Emu-myc 淋巴瘤细胞中 p53 蛋白的积累 [1]。MMRi6 (0.5 μM，24 小时) 诱导野生型 p53 Emu-myc 淋巴瘤细胞中 PARP 的裂解 [1]。MMRi6 (0.5-1 μM，72 小时) 抑制野生型 p53 和 p53 缺失型 Emu-myc 淋巴瘤细胞的生长，IC50 值分别约为 0.5 μM 和 3 μM [1]。 |
| 酶活实验 |
基于FRET的体外泛素化实验适用于HTS。预混液一含有40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl2、2 mM DTT、5 mM ATP、20 nM E1、350 nM E2（UbcH5）、25 nM HA标记的Mdm2、200 nM MdmX。通过机器人针头工具加入化合物（每孔8 nL）。通过加入含有250 nM HA-泛素和50 nM泛素cryptate的预混液二（每孔2 μL）启动反应。在37°C孵育1.5小时后，加入检测缓冲液（50 mM磷酸盐缓冲液pH 7.0、0.1% BSA、0.1 M EDTA、0.8 M KF、20 nM XL665偶联的抗HA抗体）终止反应。室温孵育1小时后，在615 nm（供体）和665 nm（受体）处测量FRET信号。Z'-因子确定为0.52，表明该HTS实验适用 [1]。
对于体外验证，在10 μM化合物存在下，于30°C进行Mdm2自身泛素化和p53泛素化实验1小时（p53实验含100 nM p53），然后进行SDS-PAGE和WB。NEDD4-1自身泛素化（200 nM）作为特异性对照。对于pull-down实验，将HA-Mdm2 RING结构域（500 nM）和Flag-MdmX（250 nM）与10 μM化合物在NP40缓冲液中孵育30分钟，然后稀释并用抗FLAG M2珠子进行pull-down。结合的蛋白用3×Flag肽洗脱，并用抗HA抗体通过WB检测 [1]。 使用DOCK6程序和Mdm2-MdmX RING结构域的3-D结构进行对接分析，表明MMRi62和MMRi64结合到MdmX RING结构域，干扰其与Mdm2 RING结构域的相互作用 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验： 对于生长抑制实验，将Emu-myc淋巴瘤细胞（wt-p53和p53-null）与0.5和1 μM MMRi6培养72小时，通过台盼蓝拒染法计数活细胞。对于HCT116和HCT116-p53-/-细胞，用指定浓度的药物处理72小时，通过MTT法测量生长抑制 [1]。
对于Western blot分析，用指定浓度和时间的MMRi6或MMRi64处理HCT-8、NALM6和Emu-myc细胞。使用特异性抗体分析全细胞裂解物中的p53、Mdm2、MdmX、PUMA、p21、PARP、裂解的caspase 3和微管蛋白（上样对照）[1]。 对于流式细胞术凋亡分析，用MMRi64或Nutlin3a单独或联合处理NALM6细胞48小时，固定，碘化丙啶染色，进行流式细胞术分析以定量sub-G1群体 [1]。 Western Blot 分析[1] 细胞类型： HCT-8 细胞、野生型 p53 Emu-myc 淋巴瘤细胞和 p53 缺失型 Emu-myc 淋巴瘤细胞 测试浓度： 0.5、5、10 μM 孵育时间： 8、24 小时 实验结果： 诱导 HCT-8 细胞和野生型 p53 Emu-myc 淋巴瘤细胞中 p53 蛋白的积累。诱导野生型 p53 Emu-myc 淋巴瘤细胞中 PARP 的裂解，但在 p53 缺失型 Emu-myc 淋巴瘤细胞中未观察到 PARP 的裂解。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MMRi6是通过基于FRET的E3连接酶活性实验对55,230个化合物的多样性文库（ChemBridge DIVERSet）进行高通量筛选鉴定出的小分子抑制剂。该化合物特异性靶向Mdm2-MdmX RING-RING相互作用，这是一个此前未被探索的药物开发界面。在鉴定的七个特异性MMRi中，MMRi6及其类似物MMRi64被表征为Mdm2-MdmX相互作用的破坏剂。与Nutlin3a（Mdm2-p53结合抑制剂）不同，MMRi64选择性激活p53通路的凋亡臂（PUMA诱导），而生长阻滞效应因子p21的诱导极少。MMRi64还在白血病细胞中下调Mdm2和MdmX，这有助于其促凋亡作用。该化合物与Nutlin3a协同诱导淋巴瘤细胞凋亡。本研究表明，靶向Mdm2-MdmX RING-RING相互作用代表了一种基于p53的癌症治疗新策略 [1]。
|
| 分子式 |
C21H15CL2N3O
|
|---|---|
| 分子量 |
396.269302606583
|
| CAS号 |
709009-15-4
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| SMILES |
ClC1C2=CC=CN=C2C(=C(C=1)C(C1C=CC=C(C=1)Cl)NC1C=CC=CN=1)O
|
| 别名 |
MMRi6; MMRi-6
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气下），避免暴露在潮湿和光照下。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~126.18 mM; with sonication)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5235 mL | 12.6177 mL | 25.2353 mL | |
| 5 mM | 0.5047 mL | 2.5235 mL | 5.0471 mL | |
| 10 mM | 0.2524 mL | 1.2618 mL | 2.5235 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
dsP53-285 saRNA
ZM484
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
