Ac-DEVD-AMC

别名: Ac-DEVD-AMC; 169332-61-0; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AMC ammonium salt; CPP32/Apopain Substrate; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AMC; N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-methylcoumarin; (4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid; Ac-DEVD-AMC ammonium salt; AC-ASP-GLU-VAL-ASP-7-氨基-4-甲基香豆素; 7荧光底物AC-DEVD-AMC 蓝; CASPASE 3/7荧光底物AC-DEVD-AMC 蓝; APOPAIN SUBSTRATE;AC-ASP-GLU-VAL-ASP-AMC;胱天蛋白酶CASPASE 3/7荧光底物AC-DEVD-AMC 蓝

目录号: V32356 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

Ac-DEVD-AMC 是 caspase-3/caspase-7 荧光底物。

Ac-DEVD-AMC CAS号: 169332-61-0
产品类别: New2

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
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产品描述

Ac-DEVD-AMC 是 caspase-3/caspase-7 荧光底物。当Ac-DEVD-AMC用细胞裂解液处理时，Ac-DEVD-AMC释放氨基-4-甲基香豆素(AMC)用于荧光检测，激发波长为380 nm，发射波长为460 nm。

生物活性&实验参考方法

靶点	Caspase-3/7
体外研究 (In Vitro)	Ac-DEVD-AMC荧光标记实验方案[2]： 1. caspase缓冲液配制： • 0.5% Igepal CA-630 • 10 mM HEPES (pH 7.4) • 2 mM EDTA • 0.5 mM PMSF • 5 μg/mL 亮肽素 2. 实验步骤： (1) PC12细胞处理：50 μM 6-OHDA处理20小时 (2) 细胞收集： • 250g离心5分钟 • PBS洗涤 • 再次250g离心5分钟 (3) 细胞裂解： • 按2μL/10⁵细胞比例用caspase缓冲液重悬 • 4℃裂解20分钟 (4) 裂解物收集：7200g、4℃离心10分钟 (5) 酶反应： • 20μL裂解物与100μM Ac-DEVD-AMC • 30℃孵育10分钟 (6) 检测： • 荧光分光光度计检测 • 激发波长380nm • 发射波长460nm 注：所有离心步骤均在4℃条件下进行。
酶活实验	检测CD95（Fas/APO-1）激活的胞浆半胱天冬酶。[1] 将Jurkat细胞[如Nobel等人所述进行培养]暴露于250-500 ng mL-1的抗CD95抗体中1小时。然后按照所述制备终蛋白浓度为1.1-1.5 mg mL-1的细胞质S100提取物；通过丹磺酰氯衍生化和HPLC分离测定，提取物中含有约200μM的GSH和2μM的GSSG。对于酶测定，将1体积的S100提取物与5体积的反应缓冲液[100 mM Hepes，pH 7.25/10%（w/v）蔗糖/0.1%（w/w）CHAPS/0.1 mM EDTA]混合，其中含有合成荧光底物Ac-DEVD-AMC（60μM）。使用Fluoroskan II平板读数器，以AMC为标准，在60μL的总体积内测定抗Ac-DEVD-AMC的蛋白水解活性。酶的制备和酶动力学。[1] 纯化的胱天蛋白酶-1以与GSH的混合二硫化物形式提供。使用前，通过在冰上200μM DTT中孵育15分钟来激活酶。在胱天蛋白酶-1缓冲液[100 mM Hepes，pH 7.5/10%（w/v）甘油/0.1%（w/v，CHAPS/0.1 mM EDTA]中进一步稀释200倍，以克服DTT的还原能力，使胱天蛋白酶1的最终浓度约为4 nM。最终反应包含14μM Ac-YVAD AMC底物和不同浓度的DSF和/或DTT，如图3A所示，总体积为100μL。如前所述，在37°C的Fluoroskan II平板读数器中监测蛋白质水解活性。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的纯化如前所述。纯化的蛋白质在-70°C下储存在100 mM Hepes中，pH 7.5/10%（w/v）蔗糖/0.1%（w/v）CHAPS/0.1 mM EDTA/10 mM DTT中，直至使用。为了从半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3储存缓冲液中消除DTT，将酶在相同的缓冲液中稀释10倍（减去DTT），并在氮气气氛中使用Millipore V膜（0.025μm）透析3小时。随后将酶在储存缓冲液中再稀释20倍（减去DTT）至终浓度约为0.2 nM。通过单溴联苯胺偶联和HPLC分离测定，DTT的最终浓度为1-2μM。如上所述，在37°C下，用Fluoroskan II平板读数器在100μL的总体积中用40μMAc-DEVD-AMC和不同浓度的DSF和DTT测定酶活性。
细胞实验	SDS-PAGE和Western Blotting。[1] 按照指示，使用Biorad的微型凝胶系统进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。凝胶（12%聚丙烯酰胺）在非还原条件下运行（不含β-巯基乙醇）。然后使用常规电泳蛋白质印迹技术将蛋白质样品转移到硝化纤维膜上。将膜干燥，在显影前将X射线胶片曝光8-9天。
参考文献	[1]. Disulfiram is a potent inhibitor of proteases of the caspase family. Chem Res Toxicol. 1997 Dec;10(12):1319-24. [2]. Caspases mediate 6-hydroxydopamine-induced apoptosis but not necrosis in PC12 cells. J Neurochem. 1998 Jun;70(6):2637-40. [3]. Yakovlev AA, Gorokhovatsky AY, Onufriev MV, Beletsky IP, Gulyaeva NV. Brain cathepsin B cleaves a caspase substrate. Biochemistry (Mosc). 2008 Mar;73(3):332-6.
其他信息	我们最近发现，二硫代氨基甲酸酯 (DC) 二硫化物能够抑制经抗 CD95 (Fas/APO-1) 抗体处理的 Jurkat T 淋巴细胞中 caspase-3 前体酶的蛋白水解加工。由于 caspase 的活性可以完成这一加工过程，我们研究了 DC 二硫化物（例如双硫仑 (DSF)）对活性 caspase 的影响。DSF 表现出剂量依赖性的抑制作用，而反应缓冲液中加入二硫苏糖醇 (DTT) 可以阻止这种抑制作用，提示抑制剂与靶标之间可能发生了硫醇-二硫键交换。DSF 对纯化的 Ac-DEVD-AMC 裂解蛋白酶 caspase-3 (CPP32/apopain) 的抑制作用证实了 DSF 与 caspase 的直接相互作用。该抑制作用的表观速率常数 (K_app) 估计为 0.45 × 10³ M^-1 s^-1。研究发现，DSF还能抑制纯化的Ac-YVAD-AMC裂解酶caspase-1（白细胞介素-1β转化酶，ICE），其K_app值为2.2 × 10³ M^-1s^-1。本研究使用³⁵S标记的DSF直接证实了DSF与caspase-1之间形成蛋白质混合二硫键。生理性二硫键GSSG也被观察到会影响caspase的活性。与不含GSSG的GSH对照组相比，GSH:GSSG比例为9:1的谷胱甘肽缓冲液（5 mM）使S100胞质提取物中Ac-DEVD-AMC的裂解活性降低了50%。总之，我们的研究表明，半胱天冬酶对硫醇氧化非常敏感，而二硫代硫酸钠（DSF）是一种非常有效的半胱天冬酶蛋白硫醇氧化剂，其氧化能力比二硫化谷胱甘肽强700倍。[1]神经毒素6-羟基多巴胺（6-OHDA）可诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12发生凋亡。6-OHDA诱导的细胞凋亡在形态学上与血清剥夺诱导的细胞凋亡无法区分。低浓度（25 μM）的6-OHDA可诱导PC12细胞凋亡，而高浓度（50 μM）则会导致细胞凋亡和坏死的混合发生。我们使用广谱半胱天冬酶抑制剂苄氧羰基-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-氟甲基酮 (zVAD-fmk) 研究了半胱天冬酶在 6-羟基多巴胺 (6-OHDA) 诱导的 PC12 细胞凋亡中的作用，并将其与已知涉及半胱天冬酶的血清剥夺诱导的细胞凋亡进行了比较。结果表明，zVAD-fmk (100 μM) 完全抑制了 6-OHDA (25 和 50 μM) 或血清剥夺诱导的染色质凝聚的凋亡形态。此外，6-OHDA 处理的细胞裂解液显示，半胱天冬酶-3 样蛋白酶（半胱天冬酶-2、3 和 7）的荧光底物乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-氨甲基香豆素发生裂解，而 zVAD-fmk 可抑制该裂解。然而，尽管 zVAD-fmk 能使血清剥夺细胞或暴露于 25 μM 6-OHDA 的细胞恢复全部存活率，但该抑制剂并不能使暴露于 50 μM 6-OHDA 的细胞恢复存活率。这些数据表明，caspase-3 样蛋白酶参与了 6-OHDA 诱导的细胞凋亡，并且 caspase 抑制剂足以使 PC12 细胞免受 6-OHDA 神经毒性的凋亡成分的影响，但不能使细胞免受坏死成分的影响。[2] 我们发现，大鼠脑中存在一种酶，能够在低 pH 值下切割 caspase-3 特异性肽底物 Ac-DEVD-AMC。该酶具有半胱氨酸蛋白酶的特性，主要定位于溶酶体。我们已从大鼠脑中纯化了该酶，并通过 MALDI-TOF MS 对其进行了鉴定。大鼠脑中具有“酸性”DEVDase活性的酶似乎是组织蛋白酶B。组织蛋白酶B是否参与体内caspase-3底物的裂解尚不清楚。我们认为，在某些条件下（例如缺氧），组织蛋白酶B参与脑细胞中caspase-3底物的裂解。[3]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C30H37N5O13
分子量	675.64048
精确质量	675.238
CAS号	169332-61-0
PubChem CID	9896164
外观&性状	White to off-white solid powder
密度	1.4±0.1 g/cm3
沸点	1200.1±65.0 °C at 760 mmHg
闪点	679.6±34.3 °C
蒸汽压	0.0±0.3 mmHg at 25°C
折射率	1.594
LogP	1.07
tPSA	287.61
氢键供体(HBD)数目	8
氢键受体(HBA)数目	13
可旋转键数目(RBC)	17
重原子数目	48
分子复杂度/Complexity	1330
定义原子立体中心数目	4
SMILES	CC1=CC(=O)OC2=C1C=CC(=C2)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)C
InChi Key	ALZSTTDFHZHSCA-RNVDEAKXSA-N
InChi Code	InChI=1S/C30H37N5O13/c1-13(2)26(35-27(44)18(7-8-22(37)38)33-29(46)19(11-23(39)40)31-15(4)36)30(47)34-20(12-24(41)42)28(45)32-16-5-6-17-14(3)9-25(43)48-21(17)10-16/h5-6,9-10,13,18-20,26H,7-8,11-12H2,1-4H3,(H,31,36)(H,32,45)(H,33,46)(H,34,47)(H,35,44)(H,37,38)(H,39,40)(H,41,42)/t18-,19-,20-,26-/m0/s1
化学名	(4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid
别名	Ac-DEVD-AMC; 169332-61-0; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AMC ammonium salt; CPP32/Apopain Substrate; Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AMC; N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-methylcoumarin; (4S)-4-[[(2S)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid; Ac-DEVD-AMC ammonium salt;
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意：请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	H2O : ~0.67 mg/mL (~0.99 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: 3.33 mg/mL (4.93 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

H2O : ~0.67 mg/mL (~0.99 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: 3.33 mg/mL (4.93 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.4801 mL	7.4004 mL	14.8008 mL
	5 mM	0.2960 mL	1.4801 mL	2.9602 mL
	10 mM	0.1480 mL	0.7400 mL	1.4801 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。