AGN 193109 是一种非常有效的视黄酸受体拮抗剂，对 RARα、RARβ 和 RARγ 等的 Kd 分别为 2 nM、2 nM 和 3 nM。由于 AGN 193109 不与任何 RXR 结合或反式激活，因此它完全是 RAR 特异性的[1]。在 ECE16-1 细胞中，AGN 193109 (100 nM) 可防止依赖于 TTNPB（一种视黄酸受体激动剂）的形态改变。在 ECE16-1 细胞中，AGN193109 在 100 nM 浓度下完全显示了类视黄醇依赖性生长抑制的效果，但在 10 nM 浓度下它会部分逆转该效果。此外，TTNPB 诱导的 K5、K6、K14、K16 和 K17 水平降低以及 K7、K8 和 K19 水平升高可被 AGN193109 (100 nM) 消除[2]。

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维甲酸是调节上皮细胞分化和增殖的重要生理因子。这些药物在调节生长、发育和分化方面的重要性促使人们寻找新的类维生素a激动剂和拮抗剂。在本手稿中，我们发现类维生素a类似物AGN193109是人类宫颈上皮细胞中类维生素a作用的有效拮抗剂。用天然或合成维甲酸处理ECE16-1细胞可降低细胞角蛋白K5、K6、K14、K16和K17水平，增加细胞角蛋白K7、K8和K19水平，增加视黄酸受体β（RARβ）mRNA水平，抑制增殖，改变细胞形态。与AGN193109联合治疗可以预防这些反应。当AGN193109与类维生素a激动剂的摩尔比分别为1:1和10:1时，观察到半最大和最大拮抗作用。单独给药时，AGN193109没有激动剂活性。因此，AGN193109与RARα、RARβ和RARγ结合，Kd值分别为2、2和3 nm，但不能与维甲酸X受体结合，是ECE16-1细胞中维甲酸作用的高活性拮抗剂[2]。

AGN 193109 (1.15 μmol/kg) 可减少 TTNPB 引起的小鼠脾脏重量的增加，但不会引起明显的毒性或影响动物的脾脏重量。此外，AGN 193109 还可显着减轻 ATRA 引起的皮肤毒性。局部施用 AGN 193109（0.30 或 1.20 μmol/kg）可有效降低口服 TTNPB 联合治疗带来的皮肤毒性和体重减轻[3]。

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AGN 193109最近在体外被鉴定为一种强效的视黄酸受体（RAR）拮抗剂。本研究的目的是确定AGN 193109是否在体内作为RAR拮抗剂发挥作用，从而预防和/或治疗类维生素A毒性。雌性无毛小鼠连续5天局部使用合成视黄酸受体激动剂（E）-4-[2-（5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基）丙烯-1-基]苯甲酸（TTNPB）单独治疗，或在1、4或16倍摩尔过量AGN 193109存在下治疗。TTNPB引起皮肤剥落、皮肤擦伤和脾肿大，这些影响被AGN 193109联合治疗以剂量依赖的方式阻断。在同一模型中，AGN 193109还减少了天然RAR激动剂全反式维甲酸引起的局部刺激。为了确定局部AGN 193109是否可以阻断口服维甲酸诱导的毒性，小鼠接受TTNPB（0.75 mumol/kg/天）灌胃治疗，并局部使用0、0.3或1.2 mumol/kg/日的AGN 1931094天。单独使用TTNPB治疗会引起皮肤刺激和体重减轻，这些作用被AGN 193109联合治疗所抑制。为了确定AGN 193109是否可用于治疗预先存在的类维生素A毒性，在第1-2天用TTNPB（0.72 mumol/kg/天）对小鼠进行局部预处理，然后在第3-5天用0、1.44、7.2或36.0 mumol/kg的AGN 193109。TTNPB预处理导致体重急剧下降，在没有AGN 193109干预的情况下，死亡率为60%。所有剂量水平的AGN 193109治疗显著加速了TTNPB中毒小鼠的体重恢复，并防止了死亡。这些数据表明，AGN 193109是一种强效的RAR拮抗剂，也是体内维甲酸中毒的潜在解毒剂。除了在预防和治疗类维生素a毒性方面的潜在临床应用外，AGN 193109还应为阐明类维生素a生物学提供强有力的实验工具[3]。

蛋白质和核酸方法[2]
制备聚（A）+RNA，电泳，转移到尼龙膜上，并与32P标记的编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶、细胞角蛋白K6或RARβ的cDNA杂交，如前所述。为了检测细胞角蛋白，用[35S]甲硫氨酸标记ECE16-1细胞，制备细胞角蛋白并按照之前所述进行二维电泳。

将细胞 (10,000/cm2) 接种在完全培养基中并贴壁过夜。然后将细胞转移至确定成分培养基(DM)中，平衡24小时，并通过添加新鲜DM或含有表皮生长因子(EGF)或类维生素A的DM来启动治疗。每天用类视黄醇处理 3 天后，用 0.025% 胰蛋白酶、1 mM EDTA 收获细胞，固定在含有 4% 甲醛的等渗缓冲液中，并使用计数器进行计数 [2]。

动物：**本研究使用5-11周龄的雌性无毛小鼠（Crl:SKH1-hrBR）。实验期间，小鼠单独饲养，可自由摄取食物和水。[3]
- **药物配制和给药：**将维甲酸类药物溶解于含有丙酮和DMSO的溶剂中（不同比例，例如97.6%丙酮/2.4% DMSO、92.5%丙酮/7.5% DMSO或70%丙酮/30% DMSO），用于局部外用。口服给药时，将TTNPB溶解于玉米油中。局部外用药物以4或6 mL/kg的剂量涂抹于整个背部皮肤表面。口服药物通过灌胃给药。所有给药均每日一次。 [3] - **实验 1（局部联合治疗）：** 小鼠（每组 n=5-6）局部接受为期 5 天的治疗，治疗药物分别为赋形剂、TTNPB（0.072 μmol/kg）、AGN 193109（1.15 μmol/kg）或 TTNPB（0.072 μmol/kg）联合递增剂量的 AGN 193109（0.072、0.288 或 1.15 μmol/kg）。于第 8 天处死小鼠。测量小鼠的体重、皮肤毒性（每日记录脱屑和擦伤情况）以及脾脏重量。 [3]
- **实验 2（口服 TTNPB + 局部应用 AGN 193109）：** 小鼠（每组 n=5-6）连续 4 天口服 TTNPB（0.75 μmol/kg/天）或赋形剂（玉米油），同时局部应用 AGN 193109（0.3 或 1.20 μmol/kg/天）或赋形剂。第 5 天处死小鼠。评估体重变化和皮肤毒性。[3]
- **实验 3（治疗预先存在的毒性）：** 小鼠（每组 n=5）在第 1-2 天局部预先应用高剂量 TTNPB（0.72 μmol/kg/天）。在第3-5天，小鼠局部涂抹赋形剂或AGN 193109（1.44、7.2或36.0 μmol/kg/天）。对照组全程涂抹赋形剂。每日监测小鼠体重并记录死亡率。小鼠于第8天处死。[3]
- **皮肤毒性评分：**采用半定量评分法每日对皮肤脱屑（0-5分）和擦伤（0-4分）进行评分。将这些评分合并计算综合“皮肤毒性评分”（范围0-17分），该评分考虑了最大严重程度、平均严重程度和发病时间。[3]

[1]. Synthesis and characterization of a highly potent and effective antagonist of retinoic acid receptors. J Med Chem. 1995 Nov 24;38(24):4764-7.

[2]. AGN193109 is a highly effective antagonist of retinoid action in human ectocervical epithelial cells. J Biol Chem. 1996 May 24;271(21):12209-12.

[3]. Specific antagonist of retinoid toxicity in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 1996 May;138(1):169-75.

基于已知的拮抗剂AGN 193109 (2)，制备了一系列高亲和力视黄酸受体 (RAR) 拮抗剂。引入不同的苯基后发现，与间位相比，对位取代更具优势。对RAR具有最高亲和力的拮抗剂含有疏水基团，但极性官能团的存在也具有良好的耐受性。Bioorg Med Chem Lett. 1999 Feb 22;9(4):573-6. doi: 10.1016/s0960-894x(99)00047-5.

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AGN193109拮抗ECE16-1细胞中的一系列反应[2]
类视黄醇对组织和细胞产生多种效应，不同类型的类视黄醇在细胞系内和细胞系间可能产生不同的效应。在ECE16-1细胞中，RAR特异性配体比RXR特异性配体具有更强的类视黄醇活性。本研究探讨了一种新型合成类视黄醇AGN193109对ECE16-1细胞中多种类视黄醇依赖性反应的影响。我们发现AGN193109能够消除类视黄醇引起的细胞形态改变，并阻止类视黄醇对细胞增殖的抑制作用。此外，在生化水平上，AGN193109还能阻止类视黄醇引起的标记基因表达改变。我们检测了类视黄醇处理后表达上调的基因（K7、K8、K19、RARβ）以及表达下调的基因（K5、K6、K14、K16、K17）。结果表明，AGN193109能够拮抗类视黄醇的依赖性反应。因此，AGN193109 可抑制刺激性和抑制性反应。综上所述，这些结果表明 AGN193109 可能是 ECE16-1 细胞中类视黄醇作用的全局拮抗剂（即，它可能拮抗大多数甚至所有类视黄醇依赖性反应）。
AGN193109 是一种高效拮抗剂，不具有激动剂活性[2]
受体拮抗剂可能存在一些问题。首先，它们可能具有部分激动剂活性。这会使对其在体内系统中的作用进行解释变得复杂。为了确定 AGN193109 是否具有内在的激动剂或拮抗剂活性，我们在未添加类视黄醇激动剂的情况下评估了其对 ECE16-1 细胞功能的影响。浓度范围为 0.01 至 1000 nM 的 AGN193109 均未引起细胞形态、细胞增殖或类视黄醇反应标记基因表达的可检测变化。基于这些结果，我们得出以下结论：(i) AGN193109 是这些细胞中类视黄醇作用的高效拮抗剂；(ii) 它本身不具有激动剂活性。
其次，拮抗剂可能对靶受体具有较低的亲和力。此类配体必须以极高的浓度使用才能发挥拮抗作用。然而，AGN193109 对 RAR 的亲和力为 2-3 nM。考虑到 tRA、13-cRA 和 9-cRA 的受体亲和力范围为 7 至 141 nM，而 TTNPB 的亲和力范围为 20 至 51 nM，AGN193109 是一种高亲和力配体。这体现在其抑制生物终末反应的效力上。当浓度为 10 倍摩尔过量时，该化合物对类视黄醇激动剂活性的抑制效果最佳；当浓度为等摩尔时，其抑制效果为最大抑制效果的一半。因此，AGN193109 是一种高亲和力拮抗剂。
与 RAR 和 RXR 受体相互作用的天然配体[2]
我们最初的研究表明，合成类视黄醇 AGN193109 仅与 RAR 受体相互作用，能够有效拮抗 RAR 特异性类视黄醇激动剂 TTNPB 的作用。然而，尚不清楚AGN193109是否会抑制天然配体的活性。因此，我们测试了AGN193109拮抗tRA、13-cRA和9-cRA作用的能力。13-cRA、9-cRA和tRA均与RAR相互作用，而9-cRA对RXR也具有高亲和力。结果表明，AGN193109是这些配体活性的有效拮抗剂。因此，尽管AGN193109仅与RAR形式相互作用，但它也能拮抗一种与RAR和RXR均具有较高亲和力的药物（9-cRA）的作用。由于AGN193109不与RXR相互作用，因此它不太可能直接阻止9-cRA与RXR受体的相互作用。此外，RXR特异性配体在ECE16-1细胞中活性相对较低(37)。由于9-cRA能有效结合RAR，因此AGN193109很可能通过抑制RAR介导的9-cRA效应发挥作用。[2]
受体拮抗剂是极其有用的配体，既可用于理解作用机制，也可用于设计新的治疗方法。在本研究中，我们利用人宫颈外上皮细胞系ECE16-1细胞证明，AGN193109是一种活性极高、亲和力极强的类视黄醇拮抗剂，且似乎不具有内在的类视黄醇激动剂活性。[2]

C28H24O2

392.498

392.178

C, 85.68; H, 6.16; O, 8.15

171746-21-7

AGN 193109;171746-21-7;AGN 193109-d7;1216429-25-2

177238

Off-white to light yellow solid powder

1.21 g/cm3

564.5ºC at 760 mmHg

257.1ºC

6.206

37.3

1

2

4

30

716

0

NCEQLLNVRRTCKJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H24O2/c1-19-4-11-22(12-5-19)24-16-17-28(2,3)26-15-10-21(18-25(24)26)7-6-20-8-13-23(14-9-20)27(29)30/h4-5,8-16,18H,17H2,1-3H3,(H,29,30)

4-[2-[5,5-dimethyl-8-(4-methylphenyl)-6H-naphthalen-2-yl]ethynyl]benzoic acid

AGN-193109; AGN 193109; 171746-21-7; AGN193109; AGN-193109; 4-[2-[5,5-dimethyl-8-(4-methylphenyl)-6H-naphthalen-2-yl]ethynyl]benzoic acid; CHEMBL358145; ZC6062V1O9; AGN 193109 (GMP); AGN193109

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~2 mg/mL (~5.10 mM)

配方 1 中的溶解度: 12.5 mg/mL (31.85 mM) in 15% Cremophor EL 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (12.74 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。