Topoisomerase II; Daunorubicins/Doxorubicins
Aldoxorubicin (INNO-206) (0.27 to 2.16 μM) inhibits the formation of blood vessels and decreases the growth of multiple myeloma cells in a pH-dependent fashion[1].

Aldoxorubicin (INNO-206)（0.27 至 2.16 μM）以 pH 依赖性方式抑制血管形成并减少多发性骨髓瘤细胞的生长[1]。

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Aldoxorubicin HCl (INNO-206)以浓度和pH依赖性的方式抑制多发性骨髓瘤细胞系（RPMI8226、U266、MM1S）的活力。在pH 5条件下，与pH 7相比，细胞活力显著降低。例如，在pH 5条件下，当INNO-206浓度≥0.54 µmol/L（相当于≥0.4 µmol/L多柔比星）时，RPMI8226细胞的活力基本被消除。相比之下，在相同的酸性条件下，游离多柔比星的抗骨髓瘤作用减弱。[1]
Aldoxorubicin HCl (INNO-206)在绒毛尿囊膜/羽毛芽（CAM/FB）实验中表现出抗血管生成活性。它以浓度和pH依赖性的方式抑制羽毛芽发育并降低内皮细胞标志物Flk-1基因的表达，在pH 5时抑制作用更为显著。[1]

Aldoxorubicin (INNO-206) (10.8 mg/kg, iv) 耐受性良好； 90% 患有 LAGκ-1A 肿瘤的小鼠能够存活到研究结论[1]。在第 28 天，它还表现出明显较小的肿瘤体积和 IgG 水平。 I 期研究表明，醛多柔比星 (INNO-206) 可以导致肉瘤、小细胞肺癌和乳腺癌的肿瘤消退，同时在剂量增加时保持良好的安全性至 260 mg/mL 阿霉素当量[2]。在乳腺癌异种移植物和鼠肾细胞癌模型中，醛柔比星（INNO-206）比阿霉素表现出更好的疗效[3]。

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在携带LAGκ-1A人多发性骨髓瘤异种移植瘤的SCID小鼠中，每周一次静脉注射Aldoxorubicin HCl (INNO-206)（10.8 mg/kg，多柔比星等效剂量8.0 mg/kg），与溶剂对照组相比，在第28、35和42天显著降低了肿瘤体积和血清人IgG水平。90%的小鼠存活至第42天。[1]
在携带LAGκ-2人多发性骨髓瘤异种移植瘤的SCID小鼠中，每周一次给予5.4 mg/kg或每周三次给予1.8 mg/kg的Aldoxorubicin HCl (INNO-206)，与对照组相比显著抑制了肿瘤生长。[1]
在LAGκ-2模型中，Aldoxorubicin HCl (INNO-206)（2.7 mg/kg，每周一次）与硼替佐米（0.5 mg/kg，每周两次）联合用药，与任一单药相比，能更显著且持续地减小肿瘤体积，部分小鼠肿瘤变得不可触及，且肿瘤再生长的速度延迟。[1]
向荷瘤小鼠静脉注射伊文思蓝染料（可与白蛋白结合）证明，多发性骨髓瘤异种移植瘤在4小时内摄取了白蛋白（从而也摄取了白蛋白结合的INNO-206）。[1]

细胞活力测定[1]
在含有FBS的RPMI-1640培养基中，以1×105个细胞/100μL/孔的密度将细胞接种在96孔板上24小时，然后进行处理。细胞在培养基、INNO-206或阿霉素存在下培养48小时。接下来，使用CellTiter 96 AQueous非放射性细胞增殖试验（Promega）定量细胞存活率。每个孔用MTS处理1至4小时，之后使用96孔板读数器记录490nm处的吸光度。甲赞产物的测量量与活细胞的数量成正比。绘制的数据为平均值±SEM，每个数据点使用3个重复。

通过MTS法测定不同pH水平的INNO-206对多发性骨髓瘤细胞系增殖的抗多发性髓瘤作用，并通过绒毛尿囊膜/羽毛芽法测定其抗血管生成活性。使用我们的多发性骨髓瘤异种移植物模型，还将INNO-206的抗多发性髓瘤作用和毒性与常规阿霉素和聚乙二醇化脂质体阿霉素（PLD）单独使用以及与硼替佐米联合使用进行了比较[1]。

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使用MTS法评估细胞活力。将人多发性骨髓瘤细胞系（RPMI8226、U266、MM1S）接种于96孔板中。24小时后，细胞与含有不同浓度Aldoxorubicin HCl (INNO-206)或多柔比星（INNO-206：0.27至2.16 µmol/L；多柔比星等效浓度：0.2至1.6 µmol/L）的培养基共培养48小时。药物在添加前于pH 5或pH 7条件下预孵育45分钟。加入MTS试剂，孵育1-4小时后，测量490 nm处的吸光度。甲臜产物的数量与活细胞数成正比。[1]
使用绒毛尿囊膜/羽毛芽（CAM/FB）共培养模型评估抗血管生成效果。将受精鸡卵孵育8天。切取背部皮肤羽毛芽（FBs），置于培养插片上，并在不同pH值（5、6、7）下暴露于Aldoxorubicin HCl (INNO-206)或多柔比星中48小时。然后将FBs转移到另一个8日龄胚胎的绒毛尿囊膜（CAM）上，再孵育4天。通过显微镜评估羽毛发育情况。[1]
对FB组织进行基因表达分析。提取总RNA，逆转录为cDNA，并使用内皮标志物Flk-1和GAPDH（作为内参）的引物进行PCR。通过凝胶电泳和光密度法分析PCR产物。[1]

INNO-206 stock solutions (5.4 mg/mL) were prepared using 50% ethanol and 50% water and further diluted in sterile water [1]. For the LAGκ-1A experiment, INNO-206 was administered to SCID mice at 10.8 mg/kg (doxorubicin equivalent dose of 8.0 mg/kg) once weekly. Mice were treated with conventional doxorubicin at 4.0 and 8.0 mg/kg once weekly. For the LAGκ-2 experiment, INNO-206 was administered once weekly (W) at doses of 2.7 and 5.4 mg/kg, or on 3 consecutive days (W-F) weekly at doses of 0.9 and 1.8 mg/kg. Bortezomib was administered twice weekly (W, F) at a dose of 0.5 mg/kg. Doxorubicin was administered to SCID mice at 2, 4, and 8 mg/kg, and PLD was administered to SCID mice at 2 mg/kg once weekly. Each drug was administered i.v. in a volume of 100 μL.[1]

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The (6-maleimidocaproyl)hydrazone derivative of doxorubicin (INNO-206) is an albumin-binding prodrug of doxorubicin with acid-sensitive properties that is being assessed clinically. The prodrug binds rapidly to circulating serum albumin and releases doxorubicin selectively at the tumor site. This novel mechanism may provide enhanced antitumor activity of doxorubicin while improving the overall toxicity profile. Preclinically, INNO-206 has shown superior activity over doxorubicin in a murine renal cell carcinoma model and in breast carcinoma xenograft models. In this work, we compared the antitumor activity of INNO-206 and doxorubicin at their respective maximum tolerated doses in three additional xenograft models (breast carcinoma 3366, ovarian carcinoma A2780, and small cell lung cancer H209) as well as in an orthotopic pancreas carcinoma model (AsPC-1). INNO-206 showed more potent antitumor efficacy than free doxorubicin in all tumor models and is thus a promising clinical candidate for treating a broad range of solid tumors[3].

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For efficacy studies, human multiple myeloma xenografts (LAGκ-1A or LAGκ-2) were established in the gluteal muscle of 6-8 week old male CB17 SCID mice. Treatment began 7 days after tumor implantation.[1]
In the LAGκ-1A model, Aldoxorubicin HCl (INNO-206) was administered intravenously once weekly at a dose of 10.8 mg/kg (in 100 µL volume). Doxorubicin was administered intravenously once weekly at 4.0 and 8.0 mg/kg for comparison.[1]
In the LAGκ-2 model, Aldoxorubicin HCl (INNO-206) was administered intravenously either once weekly (5.4 mg/kg or 2.7 mg/kg) or three times per week on consecutive days (1.8 mg/kg or 0.9 mg/kg). Bortezomib was administered intravenously twice weekly at 0.5 mg/kg. Doxorubicin and PEGylated liposomal doxorubicin (PLD) were administered intravenously once weekly at 2 mg/kg in combination studies.[1]
Stock solutions: INNO-206 (5.4 mg/mL in 50% ethanol/50% water, diluted in sterile water); bortezomib (1 mg/mL stock diluted in 0.9% sodium chloride); doxorubicin (2 mg/mL in PBS); PLD (2 mg/mL diluted in sterile water).[1]
Tumor volume was measured weekly using calipers. Serum human IgG levels were determined by weekly retro-orbital bleeding and ELISA.[1]
To assess albumin uptake, a 2% Evans blue dye solution in sterile water was injected intravenously into tumor-bearing mice. Mice were sacrificed 4 hours post-injection, tumors were extracted, and dye accumulation was visually assessed and quantified using image analysis.[1]

本研究未提供盐酸阿多西林（INNO-206）的具体药代动力学参数（例如，清除率、半衰期、口服生物利用度）。该手稿引用了其他研究，表明静脉注射后，INNO-206 可迅速与血清白蛋白的半胱氨酸-34 位点结合，并在酸性条件下释放。[1]
该研究提到，异种移植研究中使用的剂量（0.9–10.8 mg/kg/周）在临床上是可实现的，远低于 I 期临床试验中确定的耐受性良好的剂量 200 mg/m²（相当于阿多西林 148.6 mg/m²）。[1]

在SCID小鼠异种移植模型中，盐酸醛柔比星（INNO-206）耐受性良好，其剂量与游离阿霉素的毒性剂量相当。在LAGκ-1A模型中，每周一次INNO-206（10.8 mg/kg）治疗可使小鼠在第42天存活率达到90%，而所有每周一次接受阿霉素（4.0或8.0 mg/kg）治疗的小鼠均在第42天死亡。[1]在LAGκ-2联合用药研究中，每周一次INNO-206（2.7 mg/kg）联合硼替佐米治疗未引起明显的体重下降，且小鼠存活率达到70%。与此形成鲜明对比的是，所有接受等剂量或更低剂量游离阿霉素（2 mg/kg）或PLD（2 mg/kg）联合硼替佐米治疗的小鼠均在第28天死亡。[1]
该手稿引用了其他研究，指出INNO-206在动物体内的最大耐受剂量（MTD）是游离阿霉素的2至5倍，并且其心脏毒性和在心脏、肝脏和肾脏等非靶器官中的蓄积均有所降低。[1]

[1]. Anti-Myeloma Effects of the Novel Anthracycline Derivative INNO-206. Clin Cancer Res.2012 18; 3856.

[2]. INNO-206 (DOXO-EMCH), an Albumin-Binding Prodrug of Doxorubicin Under Development for Phase II Studies. Current Bioactive Compounds, 2011, 7(1): 33-38(6).

[3]. INNO-206, the (6-maleimidocaproyl hydrazone derivative of doxorubicin), shows superior antitumor efficacy compared to doxorubicin in different tumor xenograft models and in an orthotopic pancreas carcinoma model. Invest New Drugs. 2010 Feb;28(1):14-9.

[4]. Cell penetrating peptides fused to a thermally targeted biopolymer drug carrier improve the delivery and antitumor efficacy of an acid-sensitive doxorubicin derivative. Int J Pharm. 2012 Oct 15;436(1-2):825-32.

[5]. Hydrazone, Amide, Carbamate, Macromolecular and Other Prodrugs of Doxorubicin. The Open Drug Delivery Journal, 2008, 2, 77-85.

醛柔比星是一种抗肿瘤药物，是阿霉素的白蛋白结合前药。
醛柔比星是蒽环类抗生素阿霉素（DOXO-EMCH）的6-马来酰亚胺己酰腙衍生物前药，具有抗肿瘤活性。静脉注射后，醛柔比星通过其马来酰亚胺部分选择性地与白蛋白的半胱氨酸-34位结合。在肿瘤的酸性环境中，酸敏感的腙连接基团断裂后，阿霉素从白蛋白载体上释放出来，进入细胞内后，嵌入DNA，抑制DNA合成，并诱导细胞凋亡。由于实体瘤代谢周转率高、血管生成迅速、血管丰富以及淋巴引流受损，白蛋白容易在实体瘤中积聚。由于其在肿瘤内的被动蓄积，该药物可能增强阿霉素的治疗效果，同时最大限度地降低全身毒性。

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作用机制：INNO-206 是阿霉素的 (6-马来酰亚胺己酰)腙衍生物。INNO-206 是一种阿霉素前药，给药后可与内源性白蛋白结合。结合的阿霉素在肿瘤细胞的酸性环境中，通过酸敏感连接子的裂解而释放。在临床前模型中，INNO-206 在抗肿瘤疗效和毒性方面均优于阿霉素。

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阿霉素已显示出疗效，尤其是在联合治疗多发性骨髓瘤方面；然而，其副作用限制了其应用。INNO-206 是一种白蛋白结合型阿霉素前药，在酸性条件下可从白蛋白中释放出来。由于 INNO-206 此前未在任何血液系统恶性肿瘤中进行过评估，我们对其抗多发性骨髓瘤的作用进行了研究。实验设计：我们采用 MTS 法检测了 INNO-206 在不同 pH 值下对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响，并采用绒毛尿囊膜/羽毛芽法检测了其抗血管生成活性。此外，我们还利用多发性骨髓瘤异种移植模型，将 INNO-206 的抗多发性骨髓瘤作用和毒性与传统阿霉素、聚乙二醇化脂质体阿霉素 (PLD) 以及与硼替佐米联合用药进行了比较。结果：INNO-206 以 pH 依赖的方式抑制血管生成并减少多发性骨髓瘤细胞的生长。 INNO-206 单独使用即可在体内产生显著的抗多发性骨髓瘤作用，其剂量与阿霉素的毒性剂量相当；INNO-206 与硼替佐米联合使用，其抗多发性骨髓瘤作用较单独使用任一药物均有所增强。相反，所有接受硼替佐米联合阿霉素或 PLD 治疗的小鼠均死亡。结论：这些结果表明，INNO-206 在体外和体内均具有抗多发性骨髓瘤作用，并且能够增强硼替佐米的抗肿瘤作用。这些结果提示，INNO-206 可能为多发性骨髓瘤患者提供一种蒽环类药物，与游离阿霉素相比，INNO-206 可以安全地以更高的剂量给药，从而获得优于目前用于治疗这种 B 细胞恶性肿瘤的蒽环类药物的疗效。[1] Clin Cancer Res; 18(14); 3856–67. ©2012 AACR。

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阿霉素的(6-马来酰亚胺己酰)腙衍生物（INNO-206，原名DOXO-EMCH）是抗癌药物阿霉素的前药，计划于2011年静脉给药后，可在数分钟内选择性地与内源性白蛋白的半胱氨酸-34位结合。临床前和临床研究表明，与阿霉素相比，INNO-206的白蛋白结合形式具有较大的AUC、较小的分布容积和较低的清除率。其在实体瘤中的摄取受肿瘤组织的病理生理机制介导，其特征是血管生成、血管增生、血管结构缺陷和淋巴引流受损。该前药含有酸敏感的腙连接子，使得阿霉素能够在肿瘤组织中常见的弱酸性环境中胞外释放，或在肿瘤细胞摄取白蛋白偶联物后，在酸性内体或溶酶体隔室中胞内释放。在多种临床前肿瘤模型中，INNO-206 的抗肿瘤疗效显著优于游离阿霉素。在一项 I 期研究中，INNO-206 在剂量高达 260 mg/m² 阿霉素当量时显示出良好的安全性。尽管并非该 I 期研究的主要终点，但 INNO-206 能够诱导乳腺癌、小细胞肺癌和肉瘤的肿瘤消退。针对胃癌、胰腺癌和肉瘤的II期临床试验计划于2010年底启动。[2]弹性蛋白样多肽（ELP）是一种具有热响应特性的大分子载体，能够被动地在实体瘤中积累，并在暴露于高温时进一步聚集在肿瘤组织中。本研究将ELP与抗癌药物阿霉素（DOXO）和三种不同的细胞穿透肽（CPP）偶联，以期与游离阿霉素相比，抑制小鼠体内的肿瘤生长。MCF-7乳腺癌细胞的荧光显微镜研究表明，三种不同的CPP-ELP-DOXO偶联物均能将阿霉素递送至细胞核。所有CPP-ELP-DOXO偶联物在42 °C下均表现出细胞毒性，IC50值在12-30 μM范围内，但以SynB1为细胞穿透肽的ELP载体具有最低的固有细胞毒性。因此，在热疗条件下，比较了SynB1-ELP-DOXO与阿霉素的抗肿瘤疗效。将携带同源E0771小鼠乳腺肿瘤的C57BL/6雌性小鼠分别接受游离阿霉素或SynB1-ELP-DOXO偶联物的治疗，并辅以或不辅以针对肿瘤的局部热疗。在高温条件下，SynB1-ELP-DOXO 的肿瘤抑制率是同等剂量游离阿霉素治疗的两倍，因此是优化热响应性药物聚合物偶联物的理想候选药物。[4]

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盐酸阿霉素 (INNO-206) 是一种前药，旨在通过 pH 敏感连接子与循环白蛋白共价结合。它能在酸性微环境中特异性地释放活性药物阿霉素，例如肿瘤（由于瓦博格效应）和多发性骨髓瘤中破骨细胞附近的骨髓。[1]
本研究首次评估了 INNO-206 在血液系统恶性肿瘤（多发性骨髓瘤）中的疗效。酸依赖性释放机制可能为骨髓瘤患者酸性骨髓微环境提供治疗优势。[1]
在临床前模型中，盐酸阿霉素 (INNO-206)与蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合用药显示出增强的抗骨髓瘤疗效，且未增加毒性，提示其可能是一种潜在的临床联合治疗策略。[1]
该研究由CytRx公司资助。[1]

C37H43CLN4O13

787.209329843521

786.251

C, 56.45; H, 5.51; Cl, 4.50; N, 7.12; O, 26.42

480998-12-7

Aldoxorubicin;1361644-26-9;MC-DOXHZN;151038-96-9

10056071

Red solid powder

268Ų

8

15

12

55

1510

6

Cl.O(C1CC(C(C(C)O1)O)N)C1C2C(=C3C(C4C(=CC=CC=4C(C3=C(C=2C[C@@](C(CO)=NNC(CCCCCN2C(C=CC2=O)=O)=O)(C1)O)O)=O)OC)=O)O

NGKHWQPYPXRQTM-UKFSEGPMSA-N

InChI=1S/C37H42N4O13.ClH/c1-17-32(46)20(38)13-27(53-17)54-22-15-37(51,23(16-42)39-40-24(43)9-4-3-5-12-41-25(44)10-11-26(41)45)14-19-29(22)36(50)31-30(34(19)48)33(47)18-7-6-8-21(52-2)28(18)35(31)49;/h6-8,10-11,17,20,22,27,32,42,46,48,50-51H,3-5,9,12-16,38H2,1-2H3,(H,40,43);1H/b39-23+;/t17-,20-,22-,27-,32+,37-;/m0./s1

N-[(E)-[1-[(2S,4S)-4-[(2R,4S,5S,6S)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-2,5,12-trihydroxy-7-methoxy-6,11-dioxo-3,4-dihydro-1H-tetracen-2-yl]-2-hydroxyethylidene]amino]-6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanamide;hydrochloride

INNO-206 HCl; MC-DOXHZN hydrochloride; INNO206; DOXO-EMCH; EMCH-Doxo; EMCH-doxorubicin; INNO-206; INNO 206; MC-DOXHZN HCl; INNO-206 hydrochloride; Aldoxorubicin?HCl; 1361563-03-2; Aldoxorubicin (hydrochloride); Aldoxorubicin Hydrochloride [USAN];Aldoxorubicin.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~25 mg/mL (~31.8 mM)
H2O: ~12.5 mg/mL (~15.9 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。