Daunorubicins/Doxorubicins; Topoisomerase II
Aldoxorubicin (INNO-206) (0.27 to 2.16 μM) inhibits the formation of blood vessels and decreases the growth of multiple myeloma cells in a pH-dependent fashion[1].

Aldoxorubicin (INNO-206)（0.27 至 2.16 μM）以 pH 依赖性方式抑制血管形成并减少多发性骨髓瘤细胞的生长[1]。

---

评估了INNO-206与弹性蛋白样多肽载体结合后的细胞毒性。SynB1-ELP-INNO-206共轭物能抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖，在42°C下的IC50为32.961 ± 4.092 µM，而单独的载体(SynB1-ELP)毒性很小。INNO-206中的酸敏感腙连接子对活性至关重要，因为其不可切割的对应物(EMC-DOXO)与SynB1-ELP结合后没有显示出毒性。 [4]
在MCF-7细胞中的共聚焦荧光显微镜显示，用CPP-ELP-INNO-206共轭物（Bac, Tat, SynB1）处理1小时，再孵育4小时后，阿霉素定位于细胞核内，与游离阿霉素相似，表明活性药物从酸不稳定的共轭物中成功在细胞内释放。 [4]

Aldoxorubicin (INNO-206) (10.8 mg/kg, iv) 耐受性良好； 90% 患有 LAGκ-1A 肿瘤的小鼠能够存活到研究结论[1]。在第 28 天，它还表现出明显较小的肿瘤体积和 IgG 水平。 I 期研究表明，醛多柔比星 (INNO-206) 可以导致肉瘤、小细胞肺癌和乳腺癌的肿瘤消退，同时在剂量增加时保持良好的安全性至 260 mg/mL 阿霉素当量[2]。在乳腺癌异种移植物和鼠肾细胞癌模型中，醛柔比星（INNO-206）比阿霉素表现出更好的疗效[3]。

---

在同基因E0771小鼠乳腺癌模型（C57BL/6小鼠）中，与相同剂量下进行热疗的游离阿霉素相比，SynB1-ELP-INNO-206共轭物（按7 mg/kg阿霉素等效剂量，在第0、2、4、6天静脉给药）联合局部肿瘤热疗（41°C）能显著抑制肿瘤生长。第14天时，SynB1-ELP-INNO-206 + 热疗组的肿瘤体积和重量显著更低。 [4]
与接受游离阿霉素和热疗的动物相比，接受SynB1-ELP-INNO-206和热疗的动物在治疗过程中体重减轻较少，表明治疗指数可能有所改善。 [4]

细胞活力测定[1]
在含有FBS的RPMI-1640培养基中，以1×105个细胞/100μL/孔的密度将细胞接种在96孔板上24小时，然后进行处理。细胞在培养基、INNO-206或阿霉素存在下培养48小时。接下来，使用CellTiter 96 AQueous非放射性细胞增殖试验（Promega）定量细胞存活率。每个孔用MTS处理1至4小时，之后使用96孔板读数器记录490nm处的吸光度。甲赞产物的测量量与活细胞的数量成正比。绘制的数据为平均值±SEM，每个数据点使用3个重复。

---

通过MTS法测定不同pH水平的INNO-206对多发性骨髓瘤细胞系增殖的抗多发性髓瘤作用，并通过绒毛尿囊膜/羽毛芽法测定其抗血管生成活性。使用我们的多发性骨髓瘤异种移植物模型，还将INNO-206的抗多发性髓瘤作用和毒性与常规阿霉素和聚乙二醇化脂质体阿霉素（PLD）单独使用以及与硼替佐米联合使用进行了比较[1]。

---

细胞增殖实验 (MTS): 将MCF-7人乳腺癌细胞接种于96孔板中，培养24小时。用不同浓度的CPP-ELP-INNO-206共轭物（以阿霉素等效浓度表示）或游离阿霉素在37°C或42°C下处理细胞1小时。处理后，洗涤细胞，更换新鲜培养基并放回培养箱。72小时后，使用MTS法测量细胞增殖。测定吸光度，数据归一化至未处理的对照组细胞。拟合剂量反应曲线以确定IC50值。 [4]
流式细胞术检测细胞摄取: 用10 µM阿霉素等效浓度的CPP-ELP-INNO-206共轭物在37°C或42°C下处理MCF-7细胞1小时。然后洗涤细胞，使用非酶细胞解离缓冲液收获细胞，并重悬于PBS中。使用流式细胞仪测量与细胞相关的总荧光（来自阿霉素部分），以量化细胞摄取。 [4]
荧光显微镜检测细胞内定位: 将MCF-7细胞接种于盖玻片上，生长至50%汇合度。用20 µM阿霉素等效浓度的CPP-ELP-INNO-206共轭物或游离阿霉素在37°C或42°C下处理细胞1小时。处理后，洗涤细胞并添加新鲜培养基。处理后4小时，冲洗细胞，用多聚甲醛固定，并用Hoechst染料染色以显示细胞核。使用落射荧光显微镜观察阿霉素荧光的细胞内定位。 [4]

INNO-206 stock solutions (5.4 mg/mL) were prepared using 50% ethanol and 50% water and further diluted in sterile water. [1]
For the LAGκ-1A experiment, INNO-206 was administered to SCID mice at 10.8 mg/kg (doxorubicin equivalent dose of 8.0 mg/kg) once weekly. Mice were treated with conventional doxorubicin at 4.0 and 8.0 mg/kg once weekly. For the LAGκ-2 experiment, INNO-206 was administered once weekly (W) at doses of 2.7 and 5.4 mg/kg, or on 3 consecutive days (W-F) weekly at doses of 0.9 and 1.8 mg/kg. Bortezomib was administered twice weekly (W, F) at a dose of 0.5 mg/kg. Doxorubicin was administered to SCID mice at 2, 4, and 8 mg/kg, and PLD was administered to SCID mice at 2 mg/kg once weekly. Each drug was administered i.v. in a volume of 100 μL.[1]

---

The (6-maleimidocaproyl)hydrazone derivative of doxorubicin (INNO-206) is an albumin-binding prodrug of doxorubicin with acid-sensitive properties that is being assessed clinically. The prodrug binds rapidly to circulating serum albumin and releases doxorubicin selectively at the tumor site. This novel mechanism may provide enhanced antitumor activity of doxorubicin while improving the overall toxicity profile. Preclinically, INNO-206 has shown superior activity over doxorubicin in a murine renal cell carcinoma model and in breast carcinoma xenograft models. In this work, we compared the antitumor activity of INNO-206 and doxorubicin at their respective maximum tolerated doses in three additional xenograft models (breast carcinoma 3366, ovarian carcinoma A2780, and small cell lung cancer H209) as well as in an orthotopic pancreas carcinoma model (AsPC-1). INNO-206 showed more potent antitumor efficacy than free doxorubicin in all tumor models and is thus a promising clinical candidate for treating a broad range of solid tumors[3].

---

E0771 Murine Breast Cancer Model: Female C57BL/6 mice were implanted with 1×10^6 E0771 murine breast cancer cells into the mammary fat pad. When tumors reached approximately 150 mm³ in volume, treatment began (Day 0). Mice were injected intravenously via the femoral vein with either saline, free doxorubicin (7 mg/kg), or SynB1-ELP-INNO-206 (7 mg/kg doxorubicin equivalent) on Days 0, 2, 4, and 6 under isoflurane anesthesia. This dose was based on the maximum tolerated dose of the ELP carrier. [4]
Hyperthermia Application: For hyperthermia groups, immediately after drug injection, the tumor region was subjected to localized heating. An infrared laser probe was placed 2-3 mm above the skin over the tumor, while surrounding areas were shielded. A thermal cycling protocol was used: 20 minutes of heating (raising tumor temperature to ~41°C) followed by 10 minutes of cooling, repeated for a total of 2 hours. The animals were anesthetized during this procedure. [4]
Monitoring: Tumor dimensions were measured daily using calipers, and animal body weight was recorded. On Day 14, animals were euthanized, tumors were excised and weighed, and statistical analysis was performed. [4]

INNO-206是一种酸敏感型阿霉素前药，设计用于在静脉给药后快速且选择性地与循环白蛋白的半胱氨酸-34位结合，从而延长其血浆半衰期，并通过增强渗透性和滞留性（EPR）效应促进肿瘤蓄积。[4]
INNO-206中的羧酸腙连接基在生理pH条件下稳定，但在内体（pH 5.0–6.5）和溶酶体（pH 4–5）的酸性环境中会发生断裂，导致活性阿霉素释放到细胞内。[4]

从INNO-206释放的活性药物阿霉素具有严重的副作用，包括中性粒细胞减少症、黏膜炎、脱发、恶心、骨髓抑制和心脏毒性。利用白蛋白结合和ELP等大分子载体的药物前体策略旨在通过降低全身暴露和对正常组织的毒性来提高治疗指数。[4]
在动物研究中，与接受游离阿霉素治疗的小鼠相比，接受SynB1-ELP-INNO-206治疗的小鼠体重减轻较少，表明结合形式的全身毒性可能降低。[4]
SynB1-ELP载体单独使用时，小鼠的最大耐受剂量（MTD）为800 mg/kg。更高剂量与股动脉附近局部高温联合使用会导致载体蓄积、血管阻塞和肢体坏死。 SynB1-ELP-INNO-206 载体的最大耐受剂量下，等效多柔比星剂量约为 7 mg/kg。[4]

[1]. Anti-Myeloma Effects of the Novel Anthracycline Derivative INNO-206. Clin Cancer Res.2012 18; 3856.

[2]. INNO-206 (DOXO-EMCH), an Albumin-Binding Prodrug of Doxorubicin Under Development for Phase II Studies. Current Bioactive Compounds, 2011, 7(1): 33-38(6).

[3]. INNO-206, the (6-maleimidocaproyl hydrazone derivative of doxorubicin), shows superior antitumor efficacy compared to doxorubicin in different tumor xenograft models and in an orthotopic pancreas carcinoma model. Invest New Drugs. 2010 Feb;28(1):14-9.

[4]. Cell penetrating peptides fused to a thermally targeted biopolymer drug carrier improve the delivery and antitumor efficacy of an acid-sensitive doxorubicin derivative. Int J Pharm. 2012 Oct 15;436(1-2):825-32.

醛柔比星是一种抗肿瘤药物，是阿霉素的白蛋白结合前药。
醛柔比星是蒽环类抗生素阿霉素（DOXO-EMCH）的6-马来酰亚胺己酰腙衍生物前药，具有抗肿瘤活性。静脉注射后，醛柔比星通过其马来酰亚胺部分选择性地与白蛋白的半胱氨酸-34位结合。在肿瘤的酸性环境中，酸敏感的腙连接基团断裂后，阿霉素从白蛋白载体上释放出来，进入细胞内后，嵌入DNA，抑制DNA合成，并诱导细胞凋亡。由于实体瘤代谢周转率高、血管生成迅速、血管丰富以及淋巴引流受损，白蛋白容易在实体瘤中积聚。由于其在肿瘤内的被动蓄积，该药物可能增强阿霉素的治疗效果，同时最大限度地降低全身毒性。

---

药物适应症
已在实体瘤的治疗中进行研究。

---

作用机制
INNO-206 是阿霉素的 (6-马来酰亚胺己酰基)腙衍生物。INNO-206 是阿霉素的前药，给药后可与内源性白蛋白结合。结合的阿霉素在肿瘤细胞的酸性环境中通过酸敏感连接子的裂解而释放。在临床前模型中，INNO-206 在抗肿瘤疗效和毒性方面均优于阿霉素。

---

INNO-206（原名 DOXO-EMCH）是阿霉素的 (6-马来酰亚胺己酰基)腙衍生物。它代表了一种经临床验证的技术，可将马来酰亚胺类前药原位结合到内源性白蛋白上。[4]
本研究探索了将其与热响应性弹性蛋白样多肽 (ELP) 载体偶联，该载体融合了细胞穿透肽 (CPP)。被动靶向（EPR 效应）、主动热靶向（局部热疗诱导肿瘤内 ELP 聚集）和增强细胞摄取（通过 CPP）的结合旨在优化阿霉素的递送。[4]
INNO-206 在本文发表时正在进行软组织肉瘤的 II 期临床试验。[4]

C37H42N4O13

750.748

750.274

C, 59.19; H, 5.64; N, 7.46; O, 27.70

1361644-26-9

MC-DOXHZN hydrochloride;480998-12-7;MC-DOXHZN;151038-96-9;Aldoxorubicin hydrochloride;1361563-03-2

9810709

Purple to purplish red solid powder

1.6±0.1 g/cm3

1.708

3.08

271.33

7

15

12

54

1510

6

[H][C@@]1(O[C@H]2C[C@@](/C(CO)=N/NC(CCCCCN3C(C=CC3=O)=O)=O)(O)CC(C2=C4O)=C(O)C5=C4C(C6=C(OC)C=CC=C6C5=O)=O)O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](N)C1

OBMJQRLIQQTJLR-USGQOSEYSA-N

InChI=1S/C37H42N4O13/c1-17-32(46)20(38)13-27(53-17)54-22-15-37(51,23(16-42)39-40-24(43)9-4-3-5-12-41-25(44)10-11-26(41)45)14-19-29(22)36(50)31-30(34(19)48)33(47)18-7-6-8-21(52-2)28(18)35(31)49/h6-8,10-11,17,20,22,27,32,42,46,48,50-51H,3-5,9,12-16,38H2,1-2H3,(H,40,43)/b39-23+/t17-,20-,22-,27-,32+,37-/m0/s1

N-[(E)-[1-[(2S,4S)-4-[(2R,4S,5S,6S)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-2,5,12-trihydroxy-7-methoxy-6,11-dioxo-3,4-dihydro-1H-tetracen-2-yl]-2-hydroxyethylidene]amino]-6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanamide

EMCH-doxorubicin; MC-DOXHZN hydrochloride; INNO 206; INNO-206 HCl; DOXO-EMCH; EMCH-Doxo; INNO206; INNO-206; Doxorubicin-EMCH; 151038-96-9; MC-Doxhzn; N-[(E)-[1-[(2S,4S)-4-[(2R,4S,5S,6S)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-2,5,12-trihydroxy-7-methoxy-6,11-dioxo-3,4-dihydro-1H-tetracen-2-yl]-2-hydroxyethylidene]amino]-6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanamide; Aldoxorubicin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Ship with dry ice

DMSO: ≥ 50 mg/mL (~66.6 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。