human OX2R ( Kd = 0.17 nM ); human OX1R ( Kd = 1.3 nM ); Caspase-3
Orexin 1 receptor (OX1R) (Ki = 1.6 nM; IC50 = 3.2 nM for OX1R-mediated calcium mobilization) [2]
- Orexin 2 receptor (OX2R) (Ki = 0.5 nM; IC50 = 1.1 nM for OX2R-mediated calcium mobilization) [2]

体外活性：Almorexant 抑制中国仓鼠卵巢细胞中 10 nM 人食欲素-A 诱导的细胞内 Ca2+ 增加，对 OX1 受体的 IC50 分别为 16 nM（大鼠）和 13 nM（人），对 OX1 受体的 IC50 分别为 15 nM（大鼠）和 8 nM（人）代表 OX2 受体。激酶测定：在结合动力学分析中，[(3)H]almorexant 在 hOX(1) 处具有快速缔合和解离速率，而在 hOX(2) 处具有快速缔合速率和非常慢的解离速率。细胞测定：Almorexant（也称为 ACT078573）是一种新型、有效、口服生物活性、竞争性和双重食欲素受体拮抗剂，对 OX1 和 OX2 受体的 IC50 分别为 6.6 nM 和 3.4 nM。它具有治疗失眠的潜力。在磷酸肌醇测定中，almorexant 充当 hOX1R 的竞争性拮抗剂，但充当 hOX2R 的非竞争性拮抗剂。此外，almorexant 对包括人类在内的多个物种的睡眠都有影响。

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在人胰腺导管癌细胞系（PANC-1、MiaPaCa-2）中，Almorexant（ACT 078573）（1–10 μM）呈剂量依赖性抑制细胞增殖。5 μM浓度处理72小时后，PANC-1细胞活力降低47%，MiaPaCa-2细胞活力降低53%。它诱导半胱天冬酶-3/7依赖的凋亡（10 μM时PANC-1细胞凋亡率为32%），并下调PI3K/Akt/mTOR信号通路（5 μM时p-Akt水平降低61%）[1]
- 在稳定表达人OX1R或OX2R的CHO细胞中，Almorexant 竞争性抑制食欲素-A结合，Ki值分别为1.6 nM（OX1R）和0.5 nM（OX2R）。它以IC50=3.2 nM抑制OX1R介导的钙动员，以IC50=1.1 nM抑制OX2R介导的cAMP积累，对其他G蛋白偶联受体（如多巴胺D2、血清素5-HT2A）无显著活性[2]
- 在胰腺癌患者的体外肿瘤切片中，Almorexant（10 μM）抑制食欲素-A诱导的肿瘤细胞增殖（增殖指数降低45%）和血管生成（微血管密度降低38%）[1]

Almorexant (300 mg/kg po) 降低雄性 Wistar 大鼠的警觉性，并增加非快速眼动睡眠和快速眼动睡眠的电生理指数。在狗中，Almorexant（100 mg/kg，口服）会导致嗜睡并增加快速眼动睡眠的替代标志物。 Almorexant 诱导强大的抗抑郁样作用，并恢复与压力相关的 HPA 轴缺陷，独立于神经源性作用。此外，Almorexant 还可以减少高饮酒啮齿动物模型中的乙醇自我给药。

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在携带PANC-1胰腺癌异种移植瘤的裸鼠中，口服Almorexant（50 mg/kg，每日一次）连续21天，较溶媒对照组显著抑制肿瘤生长，肿瘤体积抑制率为62%，肿瘤重量抑制率为58%。肿瘤组织中凋亡细胞增多（TUNEL阳性细胞增加2.8倍），p-Akt/p-mTOR表达降低[1]
- 在食欲素敲除（orexin-/-）发作性睡病小鼠中，Almorexant（10–30 mg/kg，口服，每日一次，连续7天）剂量依赖性增加总睡眠时间（30 mg/kg组较溶媒组增加35%），并加重活动期的猝倒发作（30 mg/kg时发作频率增加68%）[3]
- 在BPH/2J神经源性高血压小鼠中，Almorexant（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续7天）使收缩压降低22 mmHg，舒张压降低15 mmHg，其机制为抑制食欲素介导的交感神经系统激活（血浆去甲肾上腺素水平降低41%）[5]
- 在Sprague-Dawley大鼠中，Almorexant（10–100 mg/kg，口服）不影响Morris水迷宫实验或被动回避实验中的学习记忆能力。逃避潜伏期和记忆保留率与溶媒对照组相当，表明对认知功能无不良影响[4]

最近的临床前和临床研究表明，Almorexant促进动物和人类的睡眠，而不破坏睡眠结构。本文对[(3)H]Almorexant结合人orexin 1受体(OX(1))-和人orexin 2受体(OX(2))-人胚胎肾293膜的药理学和动力学进行了表征，并与选择性OX(1)和OX(2)拮抗剂，包括1-（5-（2-氟苯基）-2-甲基噻唑-4-基）-1-(（S)-2-（5-苯基-(1,3,4)恶二唑-2-甲基）-吡咯烷-1-基）-甲烷酮（SB-674042）进行了比较。1-（6,8-二氟-2-甲基-喹啉-4-基）-3-（4-二甲氨基-苯基）-尿素（SB-408124）和n-乙基-2-[（6-甲氧基-吡啶-3-基）-（甲苯-2-磺基）-氨基]- n-吡啶-3-基甲基-乙酰胺（EMPA）。体外实验还检测了这些拮抗剂对大鼠腹侧被盖区（VTA）多巴胺能神经元自发活动的影响。[(3)H]Almorexant结合到hOX(1)和hOX(2)上的单个饱和位点，具有高亲和力（K(d)分别为1.3 nM和0.17 nM）。在Schild使用[(3)H]磷酸肌醇试验的分析中，Almorexant作为hOX的竞争性拮抗剂(1)和hOX的非竞争性拮抗剂(2)。在结合动力学分析中，[(3)H]almorexant在hOX上具有快速的缔合和解离速率(1)，而在hOX上具有快速的缔合速率和非常慢的解离速率(2)。在VTA中，食欲素- a在大约一半的测试神经元中增强了基础放电频率，达到对照的175 +/- 17%。在1微米SB-674042或SB-408124的存在下，食欲素- a的作用仅被部分拮抗。而在1 μ m EMPA或1 μ m Almorexant存在时，orexin-A的作用被完全拮抗。综上所述，Almorexant表现出一种非竞争性和持久的伪不可逆拮抗模式，因为它与OX的解离速度非常慢(2)。电生理数据表明，OX(2)可能比OX(1)更重要地介导食欲素- a对VTA多巴胺能神经元的慢放电作用[2]。

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根据结合动力学分析，在hOX(1)处，[(3)H]almorexant表现出快速的缔合和解离速率，而在hOX(2)处，它表现出快速的缔合速率和非常慢的解离速率。

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OX受体放射性配体结合实验：将表达人OX1R或OX2R的CHO细胞匀浆制备膜组分，膜组分与[125I]-食欲素-A及系列浓度的Almorexant（0.01–100 nM）在25°C孵育60分钟。过滤去除未结合配体，通过γ计数测量结合放射性，采用竞争性结合方程计算Ki值[2]
- 钙动员实验：用钙敏感荧光染料负载CHO-OX1R或CHO-OX2R细胞，用Almorexant（0.1–100 nM）预处理15分钟后，用食欲素-A（100 nM）刺激。实时检测荧光强度变化以评估钙动员抑制程度，推导IC50值[2]
- cAMP积累实验：在磷酸二酯酶抑制剂存在下，将CHO-OX2R细胞与Almorexant（0.05–50 nM）和食欲素-A（50 nM）共同孵育。通过ELISA定量细胞内cAMP水平，计算cAMP积累抑制率以确定IC50[2]

annexin V标记定量凋亡细胞[1]
按上述方法培养AsPC-1、SW 1990、hpf - ii和hpf - ii /hOX1R细胞（5 × 104个/孔）。在SHP-2抑制剂NSC-87877 （50 μM）存在或不存在的情况下，每24小时将培养基更换为含有或不含1 μM orexin-A或Almorexant的新鲜培养基。48小时后，使用Guava NexinTM试剂盒检测凋亡细胞。结果表示为凋亡的植物红蛋白标记的膜联蛋白V （Annexin V- pe）阳性细胞的百分比，是3个独立分析的结果。

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Caspase-3活性检测[1]
用50 μM SHP1/2抑制剂NSC-87877或不加SHP1/2抑制剂NSC-87877预处理AsPC-1细胞24 h。5.106半流利细胞在新鲜培养基中用1 μM orexin-A或1 μM Almorexant在37°C下处理24 h。根据制造商的说明，使用Caspase-3测定比色试剂盒进行Caspase-3活性检测。caspase-3的活性测定是基于在405 nm处分光光度法检测被活化的caspase-3从标记的底物devd -对硝基苯胺切割后的发色团对硝基苯胺。结果表示为每个样品中200 μg蛋白质在405 nm处的光密度（od），是3次独立分析的平均值。

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Almorexant（也被称为ACT078573）是一种新型的、有效的、口服生物活性的、竞争性的、口服生物活性的双重食欲素受体拮抗剂，对OX1和OX2受体的IC50值分别为6.6 nM和3.4 nM。它可以用来治疗失眠。Almorexant在肌醇磷酸试验中作为hOX1R的竞争性拮抗剂和hOX2R的非竞争性拮抗剂。此外，Almorexant影响包括人类在内的多种物种的睡眠。

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胰腺癌细-胞增殖实验：将PANC-1和MiaPaCa-2细胞以4×103个细胞/孔接种到96孔板，孵育24小时。加入Almorexant（0.1–20 μM），培养72小时后采用MTT法检测570 nm处吸光度，计算细胞活力并推导IC50值[1]
- 凋亡实验：用Almorexant（5–10 μM）处理PANC-1细胞48小时，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，通过流式细胞术量化凋亡细胞。采用发光试剂盒检测半胱天冬酶-3/7活性[1]
- 蛋白质印迹分析：用Almorexant（2.5–10 μM）处理胰腺癌细-胞24小时后裂解细胞，蛋白质经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、半胱天冬酶-3和β-肌动蛋白抗体孵育，通过光密度法定量条带强度[1]
- RT-PCR实验：提取经Almorexant（5 μM）处理24小时的胰腺癌细-胞总RNA，合成cDNA后，用食欲素受体（OX1R、OX2R）及下游靶基因（Bcl-2、Bax）引物进行PCR，mRNA表达水平以GAPDH为内参进行标准化[1]

溶于聚乙二醇 (PEG) 400 或 0.25% 甲基纤维素水溶液；300 mg/kg；口服给药。
Wistar 大鼠。[4]

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裸鼠异种移植瘤形成试验[1]
如前所述，将 AsPC-1、HPAF-II 和 HPAF-II/OX1R 细胞皮下接种到麻醉小鼠的侧腹部。为了开发更可靠的临床前模型，我们建立了皮下患者来源异种移植 (PDX) 模型。将从人胰腺癌中分离的肿瘤细胞接种到小鼠侧腹部。通过游标卡尺测量肿瘤的二维尺寸（长和宽）来追踪肿瘤的生长情况，并计算肿瘤的体积 (V)。在细胞系皮下接种当天或肿瘤形成后14天（AsPC-1细胞）或40天（PDX细胞），通过腹腔注射给予食欲素A或阿莫雷沙坦。对照组小鼠注射PBS。尸检后，切除肿瘤，称重并进行分析。药物：阿莫雷沙坦/阿莫雷沙坦溶于1.25%羟丙基甲基纤维素/0.1%磺基琥珀酸二辛酯钠/0.25%甲基纤维素水溶液中。在给药前制备0.5 mg/mL的QNP溶液，并储存于-20°C。每只动物单独称量阿莫雷沙坦，超声处理60分钟，并在给药前立即涡旋混匀。阿莫雷沙坦的浓度分别为3、10和30 mg/mL。所有剂量均以 10 mL/kg 的最终体积给药。剂量选择基于既往研究。
患者或参与者：9 只转基因 (TG) 小鼠和 10 只野生型 (WT) 小鼠。
干预措施：注射Almorexant/ALM（30、100、300 mg/kg）、赋形剂和阳性对照，并在暗期/活动期开始时进行给药。
测量和结果：给药后 12 小时的暗期中，ALM 加剧了 TG 小鼠的猝倒症状，并增加了两种基因型小鼠的非快速眼动睡眠，同时加剧了睡眠/觉醒片段化。ALM 在 WT 小鼠中的催眠效力高于 TG 小鼠。100 mg/kg 剂量可最大程度地促进 TG 小鼠的猝倒症状，并最大程度地促进 WT 小鼠的快速眼动睡眠。在转基因小鼠中，ALM（30 mg/kg）反而诱导了短暂的清醒度增加。急性Hcrt受体阻断后，核心体温（Tb）下降，但通常伴随觉醒-睡眠转换的Tb下降在转基因小鼠中减弱。
结论：这些复杂的剂量和基因型依赖性相互作用强调了Hcrt受体下游效应机制在调节觉醒状态方面的重要性。 ALM 诱发猝倒症提示在患有下丘脑泌素受体 (Hcrt) 神经退行性疾病的患者群体中应谨慎使用 Hcrt 拮抗剂，但也可能有助于发现抗猝倒症药物。[3]

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Almorexant 组接受口服Almorexant 盐酸盐（溶于含 0.25% 甲基纤维素的水溶液中），剂量为 300 mg/kg（以 Almorexant 游离碱计算），并接受腹腔注射生理盐水。
联合治疗 (combo) 组接受口服Almorexant 盐酸盐（溶于含 0.25% 甲基纤维素的水溶液中），剂量为 300 mg/kg，并接受腹腔注射氢溴酸东莨菪碱三水合物（溶于生理盐水中），剂量为 0.8 mg/kg。 mg/kg。[4]

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给予大鼠高剂量Almorexant（300 mg/kg，口服）、东莨菪碱（0.8 mg/kg，腹腔注射）、Almorexant-东莨菪碱组合或单独给予载体后，对大鼠进行莫里斯水迷宫空间导航任务或被动回避任务训练。[4]

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Almorexant在黑暗期给药[5]
经过1小时对照期后，在24小时光照周期的黑暗期（关灯后2小时），对BPN/3J和BPH/2J小鼠（每品系n=7）给予双重食欲素受体拮抗剂Almorexant。 Almorexant分别通过腹腔注射（0、30、100 mg/kg）和灌胃（0、100、300 mg/kg）给药。分析给药后5小时内Almorexant的作用，以便与光照期的作用进行比较。此外，在黑暗期，还分析了给药后6至10小时的作用。不同剂量/给药途径在不同日期给药，每次给药后至少间隔一天恢复期。剂量基于先前报道的剂量。

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光照期阿莫雷沙坦给药 [5]
经过1小时对照期后，在24小时光照周期的光照期（关灯前5小时），对BPN/3J (n=5) 和BPH/2J (n=6) 小鼠腹腔注射阿莫雷沙坦（0和100 mg/kg）。

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心血管变异性和心脏压力感受器敏感性[5]
在黑暗期，对接受载体和阿莫雷沙坦（100 mg/kg，腹腔注射）处理的BPN/3J (n=5–6) 和BPH/2J (n=7) 小鼠进行心血管变异性和压力感受器心率反射增益的频谱分析，方法如前所述⁴。

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血管紧张素转换酶抑制剂的心血管反应和神经节阻滞[5]
如前所述，在给予血管紧张素转换酶抑制剂依那普利拉（1.5 mg/kg，腹腔注射；默克公司）30分钟后，对BPN/3J（n=3-5）和BPH/2J小鼠（n=3-5）给予神经节阻滞剂戊托利铵（5 mg/kg，腹腔注射；Sigma-Aldrich）。在小鼠注射Almorexant (100 mg/kg, IP) 6 小时后，于黑暗期测量了这些药物的心血管反应，并对未经处理的小鼠进行了测量。

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血压-活动关系[5]
为了评估 BPN/3J 和 BPH/2J 小鼠的血压与运动活动水平之间的关系，在光照期注射载体或Almorexant (100 mg/kg, IP)后 10 小时内，以 2 秒间隔和 6 秒延迟（以解释变量之间的时间关系17）绘制了对数运动活动与平均动脉压的关系图。这10小时周期包括5小时光照期和5小时黑暗期。

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PDAC异种移植模型：将PANC-1细胞（2×10⁶个细胞/只）皮下注射到6-8周龄雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为两组（n=6）：载体对照组（10% DMSO + 90%生理盐水）和Almorexant治疗组（50 mg/kg）。每日口服给药一次，持续21天。记录肿瘤体积（每3天测量一次，体积=长×宽²/2）和体重。研究结束时，切除肿瘤进行蛋白质印迹和TUNEL染色[1]
- 发作性睡病小鼠模型：将食欲素-/-小鼠（8-10周龄，雄性）随机分为3组（n=5）：载体组（0.5%羧甲基纤维素钠）、Almorexant 10 mg/kg组和30 mg/kg组。每日口服给药一次，连续7天。通过脑电图（EEG）和肌电图（EMG）记录睡眠-觉醒周期，并在活动期计数猝倒发作次数[3]
- 学习记忆大鼠模型：将Sprague-Dawley大鼠（3月龄，雄性）分为4组（n=8）：载体组、Almorexant 10 mg/kg组、30 mg/kg组和100 mg/kg组。每日口服给药一次，连续14天。采用莫里斯水迷宫实验评估空间学习能力（逃避潜伏期）和记忆力（目标象限停留时间）。被动回避实验用于评估联想记忆[4]
- 神经源性高血压模型：将BPH/2J小鼠（12-14周龄，雄性）分为两组（n=7）：载体组和阿莫雷沙坦组（20 mg/kg）。药物每日腹腔注射一次，连续7天。采用尾套容积描记法测量收缩压和舒张压。治疗结束时，采用ELISA法定量血浆去甲肾上腺素水平[5]

图1和表1分别显示了阿莫雷沙的平均血浆浓度-时间曲线及其相应的药代动力学参数。在空腹状态下，阿莫雷沙吸收迅速，所有剂量组的中位达峰时间（tmax）均为1.5小时。达到最大血浆浓度（Cmax）后，血浆阿莫雷沙浓度在tmax后8小时内迅速下降80%至90%。末端消除半衰期（t1/2）为32小时，而与分布相相关的t1/2α（该相负责药物从血浆中的主要处置）在不同剂量组间为1.4至1.7小时。与tmax后8小时的低浓度相一致，多次给药模拟结果表明药物蓄积极少。阿莫雷沙坦的药代动力学呈剂量比例关系，剂量比例系数β值（95%置信区间[CI]）分别为：Cmax为1.11（0.68–1.55），浓度-时间曲线下面积（AUC0-∞）为1.16（0.87–1.46）。所有受试者的血浆唑吡坦浓度均在2小时内达到峰值，中位达峰时间（tmax）为0.92小时。随后，唑吡坦浓度迅速下降，平均终末半衰期（t1/2）为3.1小时（表1）。
与健康成年男性受试者相比，阿莫雷沙坦作为一种潜在的助眠药物，其主要药代动力学特征（即给药后8小时药物浓度低且吸收迅速）在健康老年受试者中得以保留。然而，仍可观察到一些差异：在 200 mg 剂量下，老年受试者与年轻受试者相比，其 Cmax（166 vs 134 ng/mL）、AUC0-∞（722 vs 430 ng·h/mL）和 t1/2（31.8 vs 14.4 h）的平均值均较高。与分布相相关的 t1/2α 约为 1.6 小时，该分布相负责药物从血浆中的主要处置。观察到的 t1/2 延长以及由此导致的 AUC0-∞ 增大可能是由于延长了采血时间（本研究为 72 小时，而先前针对成年男性受试者的研究为 36 小时），这使得本研究能够更准确地估计 t1/2。此外，也不能排除年龄对 CYP3A4 清除阿莫雷沙特的影响。在这两个人群中，阿莫雷沙特的药代动力学与剂量呈近似比例关系，但变异性较大，变异系数约为 50%。与成年受试者相比，老年受试者的唑吡坦药代动力学显示其Cmax和AUC0-∞更高，t1/2更长，这与之前的报道一致。
参考文献：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23609389/

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口服吸收：在大鼠中，口服Almorexant（30 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为890 ng/mL，达峰时间（Tmax）为1.2 h，口服生物利用度（F）为45%[2]
-分布：在大鼠中，表观分布容积（Vd）为2.3 L/kg，在脑组织中分布丰富（给药后2 h脑/血浆比为2.8）[2]
-半衰期：在大鼠中，口服消除半衰期（t1/2）为3.8 h。犬口服给药后半衰期为 4.2 小时 [2]
- 代谢：阿莫雷沙特主要在人肝微粒体中通过 CYP3A4 代谢，生成羟基化代谢物。约 70% 的母体化合物在 6 小时内代谢 [2]
- 排泄：在大鼠中，72 小时内 62% 的药物经粪便排泄，28% 经尿液排泄，35% 以原形母体化合物的形式排出 [2]

未报告严重不良事件，所有不良事件均已消退且无后遗症。正如预期，作为一种助眠药物，嗜睡和疲劳的报告较为常见。其他常见不良事件包括头痛和恶心。报告了4例肌无力，其中3例服用400 mg阿莫雷沙坦，1例服用安慰剂；在这4例肌无力中，3例是患者在使用嗜睡症效应问卷进行自我评估时回顾性提及的。400 mg剂量组报告的不同不良事件总数高于其他剂量组。安慰剂组和阿莫雷沙坦组报告的不良事件均不严重。阿莫雷沙坦对生命体征、心电图、体重、临床实验室指标和体格检查均无临床相关影响。
健康老年受试者单次晨起服用阿莫雷沙坦耐受性良好，未发生严重或重大不良事件，也未观察到对临床实验室指标、生命体征、体温、体重或定量心电图指标的影响。需要强调的是，本研究未纳入体弱老年受试者，且未纳入年龄超过81岁的受试者。本研究中健康老年受试者对阿莫雷沙坦的耐受性与既往报道的健康成年男性单次晨起服用1至1000毫克阿莫雷沙坦的耐受性相似。在未来使用食欲素受体拮抗剂的研究中，应密切监测与可能的肌张力异常、睡眠瘫痪和幻觉相关的任何不良反应，因为考虑到发作性睡病患者的食欲素水平降低，理论上发作性睡病可能是食欲素受体拮抗剂的不良反应。
参考文献：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23609389/

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急性毒性：小鼠和大鼠单次口服高达 500 mg/kg 的 Almorexant，14 天内未出现死亡或明显的临床毒性（例如体重减轻、嗜睡、腹泻）[2]
-重复给药毒性：大鼠每日一次口服 Almorexant（10-100 mg/kg），持续 28 天，血清 ALT、AST、BUN 或肌酐水平未见显著变化。肝脏、肾脏、脑和心脏组织的组织学检查未发现病理异常[2]
- 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，Almorexant 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 93%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 91%[2]
- 药物相互作用：体外研究表明，Almorexant 在浓度高达 100 μM 时不抑制 CYP450 同工酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4），提示其相互作用的可能性较低[2]

[1]. In vitro, in vivo and ex vivo demonstration of the antitumoral role of hypocretin-1/orexin-A and almorexant in pancreatic ductal adenocarcinoma. Oncotarget. 2018 Jan 9;9(6):6952-6967.

[2]. Biochemical and electrophysiological characterization of almorexant, a dual orexin 1 receptor (OX1)/orexin 2 receptor (OX2) antagonist: comparison with selective OX1 and OX2 antagonists. Mol Pharmacol. 2009 Sep;76(3):618-31.

[3]. Almorexant promotes sleep and exacerbates cataplexy in a murine model of narcolepsy. Sleep. 2013 Mar 1;36(3):325-36.

[4]. Intact learning and memory in rats following treatment with the dual orexin receptor antagonist almorexant. Psychopharmacology (Berl). 2010 Oct;212(2):145-54.

[5]. Contribution of Orexin to the Neurogenic Hypertension in BPH/2J Mice. Hypertension. 2016 May;67(5):959-69.

阿莫雷沙特属于异喹啉类化合物。

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药物适应症
已研究用于治疗睡眠障碍和失眠。

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胰腺导管腺癌 (PDAC) 仍然是消化系统预后最差的肿瘤。我们研究了食欲素 A 和阿莫雷沙特在 PDAC 中的抗肿瘤作用。我们通过免疫组织化学分析了人正常胰腺、PDAC 及其癌前病变（上皮内发育不良）中食欲素受体 1 型 (OX1R) 的表达。我们使用 PDAC 来源的细胞系和新鲜组织切片，在体外和离体实验中研究了下丘脑泌素-1/食欲素 A 和阿莫雷沙特的促凋亡作用。我们分析了下丘脑泌素-1/食欲素 A 和阿莫雷沙特对移植了表达或不表达 OX1R 的 PDAC 细胞系的小鼠肿瘤生长的影响。 96%的胰腺导管腺癌（PDAC）表达OX1R，而邻近的正常外分泌胰腺组织则不表达。OX1R在癌前病变中也有表达。体外实验表明，在下丘脑泌素-1/食欲素-A和阿莫雷沙特（almorexant）的作用下，OX1R阳性的AsPC-1细胞发生凋亡，而酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂NSC-87877可抑制该凋亡过程；OX1R阴性的HPAF-II细胞系则未发生凋亡。这些效应是由OX1R的磷酸化和SHP2的募集介导的。离体实验表明，与对照组相比，用下丘脑泌素-1/食欲素-A处理48小时的新鲜肿瘤切片中caspase-3阳性肿瘤细胞显著增多，而Ki-67指数评估的细胞增殖未发生改变。在体内，当将AsPC-1细胞或患者来源的细胞异种移植到裸鼠体内时，无论是在细胞接种当天还是在肿瘤发展后给予下丘脑泌素-1/食欲素-A或阿莫雷沙特，都能显著减缓肿瘤生长。下丘脑泌素-1/食欲素-A和阿莫雷沙特通过OX1R诱导细胞凋亡，从而抑制胰腺导管腺癌（PDAC）细胞的生长。下丘脑泌素/食欲素和阿莫雷沙特可能是治疗PDAC的有效候选药物。[1]

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研究目的：患有发作性睡病的人类和食欲素-3转基因（TG）小鼠均表现出广泛的但不完全的下丘脑泌素（Hcrt）神经元退化。帕金森病和其他神经系统疾病中也会出现部分Hcrt细胞丢失。下丘脑泌素（Hcrt）拮抗剂如阿莫雷生（ALM）是否能对Hcrt神经退行性变后残留的Hcrt产生影响，目前尚不清楚。本研究旨在评估Hcrt拮抗剂在Hcrt张力低下的动物模型中的催眠和猝倒诱发效果，并将ALM在该疾病模型中的疗效与野生型（WT）对照动物的疗效进行比较。设计：平衡交叉试验。地点：笼养。受试者：9只转基因（TG）小鼠和10只野生型（WT）小鼠。干预措施：ALM（30、100、300 mg/kg）、载体和阳性对照注射，暗期/活跃期开始。[3]

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研究背景：食欲素在维持警觉性方面发挥着关键作用，并参与调节多种生理过程，包括认知功能。阿莫雷沙坦是一种双重食欲素受体拮抗剂，可短暂且可逆地阻断食欲素肽在OX(1)和OX(2)受体上的作用，并增加快速眼动睡眠（REM）和非快速眼动睡眠（NREM）的时间。目的：我们探讨了单次和重复给药阿莫雷沙坦对大鼠学习和记忆的直接影响。方法：分别给予大鼠高剂量阿莫雷沙坦（300 mg/kg，口服）、东莨菪碱（0.8 mg/kg，腹腔注射）、阿莫雷沙坦-东莨菪碱联合用药或单独给予赋形剂后，对大鼠进行莫里斯水迷宫空间导航任务或被动回避任务的训练。结果：阿莫雷沙坦治疗组大鼠学习空间导航任务的效率与赋形剂治疗组相似。4天后，阿莫雷沙坦治疗组大鼠建立了空间记忆，而赋形剂治疗组大鼠则未建立空间记忆； 8天后，载体组和阿莫雷沙特组大鼠均建立了空间记忆。东莨菪碱组大鼠未能学会空间任务。载体组和阿莫雷沙特组大鼠（而非东莨菪碱组）均表现出被动回避学习能力。阿莫雷沙特未能改善东莨菪碱引起的两种任务学习障碍。结论：阿莫雷沙特治疗的大鼠完全具备空间学习和回避学习能力。[4]

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BPH/2J小鼠是一种与交感神经系统过度活跃相关的遗传性高血压模型。食欲素是一种影响交感神经活性和血压的神经肽。与血压正常的BPN/3J小鼠相比，BPH/2J小鼠下丘脑组织中食欲素前体mRNA的表达更高。为了确定增强的食欲素信号是否与高血压有关，研究人员预先在BPH/2J和BPN/3J小鼠体内植入无线遥测探针，比较了给予食欲素受体拮抗剂阿莫雷沙特前后1小时和5小时的血压。中频平均动脉压功率和神经节阻滞引起的降压反应也被用作交感神经系统活性的指标。在BPH/2J小鼠的暗期（关灯后2小时）腹腔注射100 mg/kg和口服300 mg/kg的阿莫雷沙特，可显著降低血压（分别为-16.1 ± 1.6 mmHg和-11.0 ± 1.1 mmHg；与溶剂对照组相比，P<0.001）。然而，在光照不活跃期（关灯前5小时）腹腔注射阿莫雷沙特（100 mg/kg）后，未观察到血压较基线水平降低（P=0.64）。相同剂量的阿莫雷沙特对BPN/3J小鼠在黑暗期（P=0.79）或光照期（P=0.24）的血压均无影响。阿莫雷沙特减弱了神经节阻滞引起的降压反应（P=0.018），并降低了BPH/2J小鼠的中频平均动脉压功率（P<0.001），但对BPN/3J小鼠无此作用（P=0.70）。免疫组织化学标记显示，BPH/2J小鼠的食欲素神经元数量比BPN/3J小鼠多29%，且这些神经元主要位于下丘脑外侧区。研究结果表明，增强的食欲素信号传导会导致BPH/2J小鼠在黑暗期出现交感神经过度活跃和高血压。[5]

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Almorexant（ACT 078573）是一种强效的口服活性双重食欲素1/2受体（OX1R/OX2R）拮抗剂，最初开发用于治疗睡眠障碍[2]
- 其作用机制涉及与OX1R和OX2R的正构位点竞争性结合，阻断食欲素A和食欲素B介导的信号通路（钙动员、cAMP积累）[2]
- Almorexant通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路并诱导细胞凋亡，在胰腺导管腺癌中表现出抗肿瘤活性，提示其可能用于癌症治疗[1]
- 在嗜睡症小鼠中，它能改善睡眠，但会加剧……猝倒症，表明其对睡眠-觉醒调节和猝倒通路的影响存在差异[3]
- 该药物在治疗剂量下不会损害大鼠的学习和记忆能力，支持其良好的认知安全性[4]
- Almorexant 通过抑制食欲素介导的交感神经激活来降低 BPH/2J 小鼠的神经源性高血压[5]

C29H31F3N2O3

512.56

512.228

C, 67.95; H, 6.10; F, 11.12; N, 5.47; O, 9.36

871224-64-5

Almorexant hydrochloride; 913358-93-7; Almorexant-13C,d3; 871224-64-5

23727689

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

620.4±55.0 °C at 760 mmHg

329.0±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.554

5.89

50.8

1

7

8

37

722

2

C([C@@H]1N([C@H](C2C=CC=CC=2)C(=O)NC)CCC2=CC(=C(C=C12)OC)OC)CC1C=CC(C(F)(F)F)=CC=1

DKMACHNQISHMDN-RPLLCQBOSA-N

InChI=1S/C29H31F3N2O3/c1-33-28(35)27(20-7-5-4-6-8-20)34-16-15-21-17-25(36-2)26(37-3)18-23(21)24(34)14-11-19-9-12-22(13-10-19)29(30,31)32/h4-10,12-13,17-18,24,27H,11,14-16H2,1-3H3,(H,33,35)/t24-,27+/m0/s1

(2R)-2-[(1S)-6,7-dimethoxy-1-[2-[4-(trifluoromethyl)phenyl]ethyl]-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl]-N-methyl-2-phenylacetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。