AMG 9810

IC50: 24.5 nM (human TRPV1), 85.6 nM (rat TRPV1)[1]

Transient Receptor Potential Vanilloid 1 (TRPV1) (IC50 = 17 nM in calcium flux assay; Ki = 21 nM in radioligand binding assay) [1]
Transient Receptor Potential Vanilloid 1 (TRPV1) [2]

在大鼠背根神经节初级神经元培养物中，AMG9810 阻断辣椒素引起的去极化和降钙素基因相关肽的释放。它还抑制辣椒素、质子、热和内源配体诱导的 45Ca2+ 摄取到表达 TRPV1 的细胞中。 AMG9810 是辣椒素激活的竞争性拮抗剂（人 TRPV1 的 IC50 值，24.5±15.7 nM；大鼠 TRPV1，85.6±39.4 nM）。它阻断所有已知的 TRPV1 激活模式，包括质子（大鼠 TRPV1 的 IC50 值，294±192 nM）。

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AMG 9810是强效、选择性的TRPV1竞争性拮抗剂，在稳定表达人TRPV1的HEK293细胞中，可有效抑制辣椒素（1 μM）诱导的钙内流，IC50为17 nM；同时能阻断树脂毒素（RTX）和质子（pH 5.0）诱导的TRPV1激活，在相同细胞模型中的IC50分别为23 nM和31 nM，且在浓度高达1 μM时，对其他TRP通道（TRPV2、TRPV3、TRPA1）无显著活性[1]
AMG 9810以剂量依赖的方式（1-10 μM）促进小鼠表皮JB6 Cl41细胞增殖，在软琼脂克隆形成实验中，5 μM浓度下的克隆形成效率较对照组提升2.3倍；通过蛋白质印迹法检测发现，该药物可上调EGFR（Tyr1068）和Akt（Ser473）的磷酸化水平；而EGFR抑制剂（厄洛替尼）或Akt抑制剂（LY294002）可消除其促增殖作用[2]

在足底注射完全弗氏佐剂引起的炎性疼痛模型中，AMG9810 逆转了热和机械痛觉过敏，并以剂量依赖性方式有效减少辣椒素引起的擦眼现象。 AMG9810 在有效水平下对运动功能没有明显影响。在炎性疼痛动物模型中，AMG9810 是第一个肉桂酰胺 TRPV1 拮抗剂，已被证明可以抑制辣椒素诱导的擦眼行为并逆转痛觉过敏[1]。 AMG9810 刺激小鼠皮肤肿瘤的生长。局部施用 AMG9810 后，表皮生长因子受体 (EGFR) 及其下游 Akt/哺乳动物雷帕霉素靶点 (mTOR) 信号通路显着上调[2]。

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在大鼠福尔马林诱导的炎症性痛觉过敏模型中，腹腔注射AMG 9810（1-10 mg/kg）可剂量依赖性地减少福尔马林试验中第一时相（0-5分钟）和第二时相（15-30分钟）的伤害性反应，对第二时相抑制的ED50为3.2 mg/kg；在慢性缩窄性损伤（CCI）神经病理性痛模型中，口服AMG 9810（3-30 mg/kg）可在给药1小时后逆转热痛觉过敏和机械性异常痛，作用持续时间超过6小时[1]
在DMBA/TPA诱导的小鼠皮肤肿瘤发生模型中，局部涂抹AMG 9810（0.1-1 nmol/只，每周两次）持续20周，可显著增加每只小鼠的乳头状瘤数量（1 nmol剂量组平均12.6个/只，对照组4.2个/只）和肿瘤大小（平均直径3.8 mm，对照组1.5 mm）；肿瘤组织的免疫组化分析显示，AMG 9810处理组的p-EGFR和p-Akt水平升高，且联合使用EGFR抑制剂吉非替尼可阻断其促肿瘤作用[2]

TRPV1放射性配体结合实验：制备稳定表达人TRPV1的HEK293细胞膜匀浆，将蛋白浓度调整至50 μg/mL；将膜悬液与[³H]树脂毒素（0.5 nM）及系列浓度的AMG 9810（10⁻¹²-10⁻⁶ M）在25℃下孵育90分钟；通过真空快速过滤终止反应，用冷结合缓冲液洗涤滤膜三次；采用液闪计数法检测放射性，通过Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1]
TRPV1钙通量活性实验：将HEK293-TRPV1细胞以1×10⁴个/孔的密度接种于96孔板，培养24小时；加入钙敏感荧光染料，37℃孵育30分钟；用AMG 9810（10⁻¹¹-10⁻⁶ M）预处理细胞10分钟后，加入辣椒素（1 μM）触发钙内流；使用酶标仪检测激发光485 nm/发射光520 nm处的荧光强度，计算辣椒素诱导的荧光变化抑制率及IC50值[1]

为了评估 AMG9810 的细胞毒性，用不同浓度的 AMG9810（0.25、0.5、1、5 μM）处理 N/TERT1 细胞，并培养不同的时间段（24、48、72 小时）。将 CellTiter 96 AQueous One Solution 添加到每个孔中，然后将细胞在 37°C、5% CO2 培养箱中保存 1 小时。然后使用读板器在 492 和 690 nm 处测量吸光度[2]。

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体外培养稳定表达人TRPV1的HEK293细胞，以1×10⁴个/孔的密度接种于96孔黑壁板，培养24小时使细胞贴壁；加入钙指示剂染料，37℃避光孵育30分钟，随后用不同浓度的AMG 9810（10 pM-1 μM）在室温下预处理细胞10分钟；向孔中加入辣椒素、树脂毒素或酸性缓冲液（pH 5.0）激活TRPV1，立即用荧光酶标仪检测60秒内的细胞荧光强度以评估钙内流情况；为检测特异性，使用表达TRPV2、TRPV3或TRPA1的HEK293细胞重复实验，并给予浓度高达1 μM的AMG 9810[1]
培养小鼠表皮JB6 Cl41细胞，以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，分别用0.1、1、5、10 μM的AMG 9810处理24、48、72小时；采用比色法细胞活力实验评估细胞增殖，检测490 nm处的吸光度并计算与溶媒对照组相比的相对增殖率；克隆形成实验中，将1×10³个JB6 Cl41细胞接种于含软琼脂的6孔板，加入AMG 9810（1-10 μM）孵育14天，在显微镜下计数可见克隆数；蛋白质印迹实验中，用5 μM的AMG 9810处理JB6 Cl41细胞0、15、30、60分钟，提取总细胞蛋白，经SDS-PAGE分离后转膜，用抗磷酸化EGFR（Tyr1068）、总EGFR、磷酸化Akt（Ser473）、总Akt及GAPDH（内参）抗体进行检测[2]

For the rat formalin-induced hyperalgesia model: Use male Sprague-Dawley rats (150-200 g), acclimate to the laboratory environment for 7 days before experiments; administer AMG 9810 via intraperitoneal injection at doses of 1, 3, 10 mg/kg (dissolved in a vehicle of 10% DMSO and 90% saline) 30 minutes prior to subcutaneous injection of 5% formalin (50 μL) into the hind paw; record the time the rat spends licking or biting the injected paw during phase 1 (0-5 min) and phase 2 (15-30 min) after formalin administration, and calculate the percentage inhibition of nociceptive behavior compared to vehicle-treated rats [1]
For the rat chronic constriction injury (CCI) neuropathic pain model: Induce CCI by ligating the sciatic nerve of male Sprague-Dawley rats (200-250 g) with chromic gut sutures; after 7 days (when hyperalgesia is established), administer AMG 9810 via oral gavage at doses of 3, 10, 30 mg/kg (formulated in 0.5% methylcellulose) once daily for 7 days; measure thermal hyperalgesia using a hot plate test (52°C) and mechanical allodynia using von Frey filaments at 1, 3, 6, 24 hours post-first dosing [1]
For the mouse skin tumorigenesis model: Use female CD-1 mice (6-8 weeks old), initiate tumor formation by a single topical application of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA, 50 μg in 100 μL acetone) to the shaved dorsal skin; one week later, start twice-weekly topical applications of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA, 10 μg in 100 μL acetone) to promote tumor growth, and co-administer AMG 9810 topically at doses of 0.1, 0.5, 1 nmol per mouse (dissolved in 100 μL acetone) immediately after each TPA application for 20 weeks; monitor the number and size of papillomas weekly, and at the end of the experiment, harvest tumor tissues for immunohistochemical analysis of phosphorylated EGFR and Akt [2]

[1]. AMG9810 [(E)-3-(4-t-butylphenyl)-N-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4] dioxin-6-yl)acrylamide] a novel vanilloid receptor 1 (TRPV1) antagonist with antihyperalgesic properties. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Apr;313(1):474-84.

[2]. TRPV1-antagonist AMG9810 promotes mouse skin tumorigenesis through EGFR/Akt signaling. Carcinogenesis. 2011 May;32(5):779-85.

3-(4-叔丁基苯基)-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二恶英-6-基)-2-丙烯酰胺是肉桂酰胺类化合物，属于仲羧酰胺。

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AMG 9810 是一种新型、强效且选择性的香草醛受体 1 (TRPV1) 竞争性拮抗剂，其化学结构为 (E)-3-(4-叔丁基苯基)-N-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)丙烯酰胺；由于其在临床前疼痛模型中表现出抗痛觉过敏特性，AMG 9810 被开发为治疗慢性疼痛的潜在治疗药物[1]。
AMG 9810 的抗痛觉过敏机制基于对 TRPV1 的选择性阻断。TRPV1 是一种在感觉神经元中表达的阳离子通道，介导对热、酸和辣椒素的伤害性信号传导[1]。
研究发现，AMG 9810 可通过激活 EGFR/Akt 信号通路促进小鼠皮肤肿瘤的发生，这表明长期使用 TRPV1 拮抗剂可能存在发生皮肤癌的潜在风险，从而限制了其在慢性疼痛治疗中的临床应用[2]。

C21H23NO3

337.4122

337.167

545395-94-6

680502

White to light yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

512.5±50.0 °C at 760 mmHg

263.8±30.1 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.618

5.47

47.56

1

3

4

25

474

0

CC(C)(C)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C(=O)NC2=CC3=C(C=C2)OCCO3

GZTFUVZVLYUPRG-IZZDOVSWSA-N

InChI=1S/C21H23NO3/c1-21(2,3)16-7-4-15(5-8-16)6-11-20(23)22-17-9-10-18-19(14-17)25-13-12-24-18/h4-11,14H,12-13H2,1-3H3,(H,22,23)/b11-6+

3-(4-t-Butylphenyl)-N-(2,3-dihydrobenzo(b)(1,4)dioxin-6-yl)acrylamide

AMG9810; AMG-9810; AMG 9810.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 33 mg/mL (~97.80 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。