hypoxia-inducible factor-α1 (HIF-α1); p53

Amifostine (0.78125-100 μM, 24 h) 在 100 μM 浓度下可显着降低 H9c2 细胞凋亡，并以剂量方式减少叔四氢过氧化物 (TBHP) 诱导的细胞损伤 [5]。

Amifostine（静脉注射，400 mg/kg，4小时）对雄性C57BL/6小鼠的心肌I/R损伤具有保护作用[5]。

我们使用TBHP，一种比H2O2更稳定的化学物质，来诱导氧化应激。为了测量H9c2细胞的ROS，将细胞与10 μmol/L活性氧敏感染料2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）在37°C下20 分钟。通过流式细胞仪分选机（BD Biosciences，San Jose，CA，USA）检测ROS，并通过BD FACS软件定量。将上述实验重复三次。ΔΨm用JC-1染色法测定；将细胞接种到培养皿中。处理后，将培养皿在JC-1染色溶液（5 mg/ml）在37°C下持续20 分钟。随后用JC-1染色缓冲液洗涤染色细胞两次；通过共聚焦激光扫描显微镜拍摄图像。[5]

将H9c2细胞以每孔5000个细胞的浓度接种到96孔板中。用阿米福汀（0.78125、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50和100 μM）30 在暴露于叔丁基氢过氧化物（TBHP）12分钟之前 h.通过MTT法评估活细胞的数量。简言之，将MTT染料溶液添加到每个孔中并孵育4 h.通过评估490的吸光度来测量活细胞的数量 nm。MTT测定重复三次以保持一致性。

动物/疾病模型：雄性C57BL/6小鼠心肌缺血/再灌注损伤[5]：400 mg/kg
给药途径：静脉注射；4小时
实验结果：减轻心肌细胞凋亡，减少缺血/再灌注诱导的活性氧（ROS）生成。显著降低裂解型caspase 3和Bax的表达，同时增强SOD1、SOD2和Bcl2的表达。SOD活性显著升高，丙二醛（MDA）水平降低。

吸收、分布和排泄
静脉注射150 mg/m²乙醇后，10秒内母体药物及其两种代谢物的肾脏排泄量较低，给药后一小时内，母体药物、硫醇和二硫化物的肾脏排泄量平均分别为给药剂量的0.69%、2.64%和2.22%。
静脉注射后5至8分钟，在骨髓细胞中检测到了活性游离硫醇代谢物的可测量浓度。
目前尚不清楚氨磷汀或其代谢物是否会分布到乳汁中。
药物主要通过快速代谢和组织吸收消除。
……大鼠单次皮下注射氨磷汀的研究表明，在正常组织或肿瘤组织中均未发现药物蓄积，肿瘤中WR-1065的浓度峰值略高于……治疗期间的定量限……
本研究在两项关于卡铂或顺铂联合氨磷汀的I期临床试验中，对参与试验的患者进行了细胞保护剂氨磷汀（Ethyol®；WR 2721）及其主要代谢物（WR 1065和二硫化物）的药代动力学研究。患者接受单次或三次氨磷汀治疗（740或910 mg/m²）。单次或首次给药在化疗药物给药前以15分钟静脉输注的方式进行。其余两次输注分别在2小时和4小时后进行。氨磷汀从血浆中迅速清除，这至少部分是由于其快速转化为WR 1065所致。观察到双相下降，最终半衰期为0.8小时。活性代谢物 WR 1065 从血浆中清除的最终半衰期为 7.3 ± 3.6 小时。WR 1065 的初始半衰期较短可归因于其在组织中的快速吸收以及二硫化物的形成。二硫化物的最终半衰期为 8.4-13.4 小时，且在治疗后至少 24 小时内均可检测到。它们可能作为 WR 1065 的可交换池。在多次给药方案中，每次 15 分钟输注结束时氨磷汀的峰值浓度并未累积。对于 WR 1065，观察到峰值水平有增加的趋势 [C1,max: 47.5 +/- 11.9 uM, C2,max: 79.0 +/- 13.2 uM, C3,max: 84.8 +/- 15.1 uM, (n = 6)]，而二硫化物峰值水平则观察到略微下降的趋势 [C1,max: 184.2 +/- 12.6 uM, C2,max: 175.0 +/- 23.7 uM, C3,max: 166.0 +/- 17.2 uM, (n = 6)]。后一项发现可能提示二硫键形成达到饱和，或WR 1065的吸收或消除发生改变，从而导致多次服用氨磷汀后血浆和组织中WR 1065水平升高。

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代谢/代谢物
氨磷汀在组织中主要被碱性磷酸酶快速脱磷酸化为活性游离硫醇代谢物，随后进一步转化为活性较低的二硫键代谢物。
氨磷汀在组织中主要被碱性磷酸酶脱磷酸化为活性游离硫醇代谢物，随后进一步转化为活性较低的二硫键代谢物。
在15分钟内以每平方米体表面积740至910毫克的剂量进行静脉输注，或在10秒内以每平方米体表面积150毫克的剂量进行快速静脉注射后1小时内，尿液中未检测到原形氨磷汀。氨磷汀、二硫化物代谢物和硫醇代谢物分别仅占剂量的0.69%、2.22%和2.64%。
本研究探讨了放射和化学防护化合物WR-2721（氨磷汀；S-2-(3-氨基丙基氨基)乙基硫代磷酸酯）在Balb/c小鼠体内的代谢情况。……已知辐射防护需要将母体药物在培养细胞中转化为其游离硫醇代谢物WR-1065。由于WR-1065的代谢物可能参与防护作用，且硫醇是代谢活性很高的分子，我们采用电化学检测-高效液相色谱法（EC-HPLC）研究了WR-2721的代谢。本研究的主要发现如下：1）WR-2721药物从血液中迅速清除。给药后 30 分钟，母体药物的血药浓度较 5 分钟时的最大观察值下降了 10 倍。2) WR-1065 迅速出现在正常实体组织的过氯酸 (PCA) 可溶性组分中。给药后 10 分钟，肝脏和肾脏中 WR-1065 的最高浓度分别为 965 和 2195 μmol/kg；而心脏和小肠的最高浓度在 30 分钟时分别为 739 和 410 μmol/kg。3) WR-1065 在两种实验性肿瘤的 PCA 可溶性组分中的积累速率低于其他组织。

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生物半衰期
8 分钟
约 8 分钟；给药后6分钟，血浆中氨磷汀的残留量不足10%。
本研究在两项关于卡铂或顺铂联合氨磷汀的I期临床试验中，对参与试验的患者进行了细胞保护剂氨磷汀（Ethyol®；WR 2721）及其主要代谢物（WR 1065和二硫化物）的药代动力学研究。患者接受单次或三次氨磷汀治疗（740或910 mg/m²）。单次或首次给药在化疗药物给药前以15分钟静脉输注的方式进行。其余两次输注分别在2小时和4小时后进行。氨磷汀从血浆中迅速清除，这至少部分归因于其快速转化为WR 1065。观察到双相下降，最终半衰期为0.8小时。活性代谢物 WR 1065 从血浆中清除的最终半衰期为 7.3 ± 3.6 小时。WR 1065 的初始半衰期较短可归因于其在组织中的快速吸收以及二硫化物的形成。二硫化物的最终半衰期为 8.4-13.4 小时，并且在治疗后至少 24 小时内均可检测到。它们可能作为 WR 1065 的可交换池。

大鼠（腹腔注射）：LD50：418 mg/kg
大鼠（肌肉注射）：LD50：396 mg/kg
小鼠（口服）：LD50：842 mg/kg
小鼠（腹腔注射）：LD50：321 mg/kg
小鼠（静脉注射）：LD50：557 mg/kg
小鼠（肌肉注射）：LD50：514 mg/kg
犬（静脉注射）：LDLo：279 mg/kg

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相互作用
在给予γ-磷酸酯酶（γ-fos）治疗前30分钟，重复口服给予褪黑素和抗坏血酸（剂量为200 mg/kg）可降低其累积毒性作用。在此条件下，琥珀酸（剂量为100 mg/kg）无效。接受单独使用γ-磷酸酯或γ-磷酸酯联合褪黑素、抗坏血酸和琥珀酸治疗的50%动物的累积死亡时间分别为3.08天、4.29天、4.06天和2.97天。PMID：15455115
氨磷汀可能暂时引起低血压；应在服用氨磷汀前24小时停用抗高血压药物或其他可能导致低血压的药物；正在接受无法停用的抗高血压治疗的患者不应服用氨磷汀。

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解毒剂和紧急处理
立即采取急救措施：确保已进行充分的去污处理。如果患者停止呼吸，应立即开始人工呼吸，最好使用按需呼吸机、球囊面罩或简易呼吸面罩，并按照培训内容进行操作。必要时进行心肺复苏。立即用流动清水冲洗受污染的眼睛。切勿催吐。如果发生呕吐，应将患者身体前倾或置于左侧卧位（如有可能，头部向下），以保持呼吸道通畅并防止误吸。保持患者安静并维持正常体温。立即就医。/A类和B类中毒/
基本治疗：建立通畅的呼吸道（必要时使用口咽或鼻咽通气道）。必要时进行吸痰。观察呼吸功能不全的迹象，必要时辅助通气。使用无创呼吸面罩以10至15升/分钟的流量给予氧气。监测肺水肿，必要时进行治疗……。监测休克，必要时进行治疗……。预判癫痫发作，必要时进行治疗……。如果眼睛受到污染，立即用水冲洗眼睛。在转运过程中，持续用0.9%生理盐水冲洗每只眼睛……。不要使用催吐剂。误服时，漱口并给予5 mL/kg至200 mL的水稀释，前提是患者能够吞咽、有强烈的咽反射且不流涎……。皮肤烧伤经去污后，用干燥的无菌敷料覆盖……。/A类和B类毒物/
高级治疗：对于意识不清、严重肺水肿或严重呼吸窘迫的患者，考虑进行口咽或鼻咽气管插管以控制气道。使用球囊面罩进行正压通气可能有效。考虑药物治疗肺水肿……。考虑使用β受体激动剂（如沙丁胺醇）治疗严重支气管痉挛……。监测心律，必要时治疗心律失常……。开始静脉输注5%葡萄糖溶液（SRP：“保持通畅”，最小流速）。如果出现低血容量的迹象，请使用0.9%生理盐水或乳酸林格氏液。对于伴有低血容量迹象的低血压，应谨慎输液。注意观察液体过量的迹象……。使用地西泮或劳拉西泮治疗癫痫发作……。使用盐酸丙美卡因辅助眼部冲洗……。 /毒物A和B/

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毒性数据
大鼠（腹腔注射）：LD50：418 mg/kg
大鼠（肌肉注射）：LD50：396 mg/kg
小鼠（口服）：LD50：842 mg/kg
小鼠（腹腔注射）：LD50：321 mg/kg
小鼠（静脉注射）：LD50：557 mg/kg
小鼠（肌肉注射）：LD50：514 mg/kg
犬（静脉注射）：LDLo：279 mg/kg

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相互作用
在给予γ-磷酸酯酶（γ-fos）治疗前30分钟，重复口服给予褪黑素和抗坏血酸（剂量为200 mg/kg）可降低其累积毒性作用。在此条件下，琥珀酸（剂量为100 mg/kg）无效。接受γ-磷酸酯单药治疗或γ-磷酸酯联合褪黑素、抗坏血酸和琥珀酸治疗的50%动物的累积死亡时间分别为3.08天、4.29天、4.06天和2.97天。
氨磷汀可能暂时引起低血压；抗高血压药物或其他可能导致低血压的药物应在氨磷汀给药前24小时停用；正在接受无法停用的抗高血压治疗的患者不应接受氨磷汀治疗。

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非人类毒性值
小鼠腹腔注射LD50 700 mg/kg /氨磷汀一水合物/

[1]. Kouvaris, J.R., V.E. Kouloulias, and L.J. Vlahos, Amifostine: the first selective-target and broad-spectrum radioprotector. Oncologist, 2007. 12(6): p. 738-47.

[2]. Amifostine (WR2721) restores transcriptional activity of specific p53 mutant proteins in a yeast functional assay. Oncogene. 2001 Jun 14;20(27):3533-40.

[3]. Amifostine inhibits angiogenesis in vivo. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Feb;304(2):729-37.

[4]. Amifostine induces anaerobic metabolism and hypoxia-inducible factor 1 alpha. Cancer Chemother Pharmacol. 2004 Jan;53(1):8-14.

[5]. Amifostine Pretreatment Attenuates Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury by Inhibiting Apoptosis and Oxidative Stress. Oxid Med Cell Longev. 2017;2017:4130824.

治疗用途
放射防护剂
氨磷汀适用于降低晚期卵巢癌患者因反复使用顺铂而引起的累积性肾毒性。/已包含在美国产品标签中/
氨磷汀适用于降低晚期非生殖细胞来源实体瘤患者因反复使用顺铂而引起的累积性肾毒性。/未包含在美国产品标签中/
氨磷汀适用于降低接受头颈部肿瘤术后放射治疗且放射野包含大部分腮腺的患者发生中度至重度口干症的风险。 /包含于美国产品标签/
有关氨磷汀（共8种）的更多治疗用途（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药物警告
尽管在氨磷汀细胞保护治疗期间低钙血症的发生率很低，但对于有低钙血症风险的患者，例如肾病综合征患者或接受多次氨磷汀治疗的患者，应监测血清钙浓度，并根据需要补充钙剂。
由于在氨磷汀治疗期间恶心和/或呕吐的发生率较高，且可能较为严重，因此应在氨磷汀治疗前和治疗期间给予有效的止吐治疗（例如，静脉注射皮质类固醇，如地塞米松和5-羟色胺5-HT3受体拮抗剂）。根据同时进行的化疗或放疗的致吐性，可能需要使用其他止吐药。此外，对于接受高致吐性化疗的患者，应密切监测其体液平衡。
在静脉注射氨磷汀期间和之后，应密切监测患者，以防出现过敏反应，包括罕见的、与心脏骤停相关的过敏性休克。如果发生急性超敏反应，应立即永久停止输注。生产商指出，应备有肾上腺素和其他适当的急救措施，以便立即处理此类事件。
对于持续时间少于5分钟的输注，至少应在输注开始前和输注结束后立即监测血压，并在必要时继续监测。如果出现低血压需要中断氨磷汀输注，应将患者置于头低脚高位，并通过另一条静脉输注0.9%氯化钠溶液。
有关氨磷汀（共9条）的更多药物警告（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药效学
氨磷汀是一种有机硫代磷酸酯类细胞保护剂，适用于降低晚期卵巢癌或非小细胞肺癌患者反复使用顺铂引起的累积性肾毒性，以及降低接受头颈部肿瘤术后放疗患者中度至重度口干症的发生率。氨磷汀是一种前药，在组织中经碱性磷酸酶脱磷酸化后转化为具有药理活性的游离硫醇代谢物，该代谢物被认为能够降低顺铂的累积肾毒性以及减轻辐射对正常口腔组织的毒性作用。由于氨磷汀及其代谢物在健康细胞中的浓度比肿瘤细胞高100倍，因此健康细胞能够优先受到保护。

C5H21N2O6PS

268.27

214.054

C, 28.03; H, 7.06; N, 13.08; O, 22.41; P, 14.46; S, 14.97

20537-88-6

112901-68-5 (trihydrate); 20537-88-6 (free); 59178-37-9 (sodium); 63717-27-1 (monohydrate)

2141

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

441.7±51.0 °C at 760 mmHg

160-161ºC

220.9±30.4 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.555

-1.68

130.69

4

6

7

12

152

0

OP(SCCNCCCN)(O)=O

JKOQGQFVAUAYPM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C5H15N2O3PS/c6-2-1-3-7-4-5-12-11(8,9)10/h7H,1-6H2,(H2,8,9,10)

2-((3-Aminopropyl)amino)-ethanethiol, dihydrogen phosphate ester (9CI)

Apaetp; AU-95722; YM-08310;NSC 296961; S 8744; Ethyol; Sapep; Aminopropylaminoethyl thiophosphate; NSC-296961; WR 2721; YM 08310; Ethiofos; Gammaphos;

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~100 mg/mL (~466.81 mM)
DMF : 1 mg/mL (~4.67 mM)
DMSO :< 1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (466.81 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。