Hypoxia-inducible factor-α1 (HIF-α1); p53

Amifostine（0.78125-100 μM，24 h）三水合物在 100 μM 浓度下可显着降低 H9c2 细胞凋亡，并以剂量依赖性方式减少叔丁基过氧化氢 (TBHP) 诱导的细胞损伤 [5]。

氨磷汀（静脉注射，400 mg/kg，4 小时）三水合物可以保护患有心肌 I/R 损伤的雄性 C57BL/6 小鼠免受心肌 I/R 损伤 [5]。

使用TBHP，一种比H2O2更稳定的化学物质，来诱导氧化应激。为了测量H9c2细胞的ROS，将细胞与10 μmol/L活性氧敏感染料2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）在37°C下20 分钟。通过流式细胞仪分选机（BD Biosciences，San Jose，CA，USA）检测ROS，并通过BD FACS软件定量。将上述实验重复三次。ΔΨm用JC-1染色法测定；将细胞接种到培养皿中。处理后，将培养皿在JC-1染色溶液（5 mg/ml）在37°C下持续20 分钟。随后用JC-1染色缓冲液洗涤染色细胞两次；通过共聚焦激光扫描显微镜拍摄图像。[5]

将H9c2细胞以每孔5000个细胞的浓度接种到96孔板中。用阿米福汀（0.78125、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50和100 μM）30 在暴露于叔丁基氢过氧化物（TBHP）12分钟之前 h.通过MTT法评估活细胞的数量。简言之，将MTT染料溶液添加到每个孔中并孵育4 h.通过评估490的吸光度来测量活细胞的数量 nm。MTT测定重复三次以保持一致性。[5]

动物/疾病模型： 雄性 C57BL/6 小鼠，心肌缺血/再灌注损伤 [5]
剂量： 400 mg/kg
给药途径： 静脉注射；4 小时
实验结果： 减轻心肌细胞凋亡，减少缺血/再灌注诱导的活性氧（ROS）生成。显著降低裂解型 caspase 3 和 Bax 的表达，同时增强 SOD1、SOD2 和 Bcl2 的表达。SOD 活性显著升高，丙二醛（MDA）水平降低。

消除途径
静脉注射150 mg/m²乙醇后，10秒内母体药物及其两种代谢物的肾脏排泄量较低，给药后一小时内，母体药物、硫醇和二硫化物的肾脏排泄量平均分别为给药剂量的0.69%、2.64%和2.22%。
静脉给药后5至8分钟，在骨髓细胞中检测到了活性游离硫醇代谢物的可测量浓度。
目前尚不清楚氨磷汀或其代谢物是否会分泌到乳汁中。
消除主要通过快速代谢和组织吸收。
在大鼠中进行的单剂量氨磷汀皮下注射研究表明，在正常组织或肿瘤组织中均未发现药物蓄积，肿瘤中WR-1065的浓度峰值略高于定量限。治疗。……PMID：12577236
本研究在参与两项关于卡铂或顺铂联合氨磷汀治疗的I期临床试验的患者中，研究了细胞保护剂氨磷汀（Ethyol®；WR 2721）及其主要代谢物（WR 1065和二硫化物）的药代动力学。患者接受单次或三次氨磷汀治疗（740或910 mg/m²）。单次或首次给药在化疗药物给药前以15分钟静脉输注的方式进行。其余两次输注分别在2小时和4小时后进行。氨磷汀从血浆中迅速清除，这至少部分是由于其快速转化为WR 1065所致。观察到双相下降，最终半衰期为0.8小时。活性代谢物 WR 1065 从血浆中清除的最终半衰期为 7.3 ± 3.6 小时。WR 1065 的初始半衰期较短可归因于其在组织中的快速吸收以及二硫化物的形成。二硫化物的最终半衰期为 8.4-13.4 小时，且在治疗后至少 24 小时内均可检测到。它们可能作为 WR 1065 的可交换池。在多次给药方案中，每次 15 分钟输注结束时氨磷汀的峰值浓度并未累积。对于 WR 1065，观察到峰值水平有增加的趋势 [C1,max: 47.5 +/- 11.9 uM, C2,max: 79.0 +/- 13.2 uM, C3,max: 84.8 +/- 15.1 uM, (n = 6)]，而二硫化物峰值水平则观察到略微下降的趋势 [C1,max: 184.2 +/- 12.6 uM, C2,max: 175.0 +/- 23.7 uM, C3,max: 166.0 +/- 17.2 uM, (n = 6)]。后一项发现可能提示二硫键形成达到饱和，或WR 1065的吸收或消除发生改变，从而导致多次服用氨磷汀后血浆和组织中WR 1065水平升高。PMID:9337685

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代谢/代谢物
氨磷汀在组织中主要被碱性磷酸酶快速脱磷酸化为活性游离硫醇代谢物，随后进一步转化为活性较低的二硫键代谢物。
氨磷汀在组织中主要被碱性磷酸酶脱磷酸化为活性游离硫醇代谢物，随后进一步转化为活性较低的二硫键代谢物。Thomson/Micromedex. Drug Information for the Health Care Professional. Volume 1, Greenwood Village, CO. 2007., p. 90.危险物质数据库 (HSDB) 在15分钟内以每平方米体表面积740至910毫克的剂量输注，或在10秒内以每平方米体表面积150毫克的剂量快速静脉注射后1小时内，尿液中未代谢的氨磷汀、二硫化物代谢物和硫醇代谢物的回收率分别仅占剂量的0.69%、2.22%和2.64%。
本研究探讨了放射和化学防护化合物WR-2721 [氨磷汀；s-2-(3-氨基丙基氨基)乙基硫代磷酸酯]在Balb/c小鼠体内的代谢情况。……已知辐射防护需要将母体药物在培养细胞中转化为其游离硫醇代谢物WR-1065。由于WR-1065的代谢产物可能参与保护作用，且硫醇是代谢活性很高的分子，我们采用电化学检测-高效液相色谱法（EC-HPLC）研究了WR-2721的代谢。本研究的主要发现如下：1）WR-2721药物从血液中迅速清除。给药后30分钟，其血药浓度较5分钟时的最高值下降了10倍。2）WR-1065迅速出现在正常实体组织的过氯酸（PCA）可溶性部分。给药后10分钟，肝脏和肾脏中WR-1065的最高浓度分别为965和2195 μmol/kg；而心脏和小肠中的最高浓度在30分钟时分别为739和410 μmol/kg。 3) 在两种实验性肿瘤的PCA可溶性组分中，WR-1065的积累速率低于其他组织。PMID:7895607

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生物半衰期
8分钟
约8分钟；给药6分钟后，血浆中残留的氨磷汀不足10%。
本研究在参与两项I期临床试验的患者中，对细胞保护剂氨磷汀（Ethyol®；WR 2721）及其主要代谢物（WR 1065和二硫化物）的药代动力学进行了研究，这两项临床试验分别涉及卡铂或顺铂联合氨磷汀的治疗。患者接受单次或三次氨磷汀治疗（740或910 mg/m²）。单次或首次给药是在化疗药物给药前，以15分钟静脉输注的方式进行。随后分别在2小时和4小时后进行了两次额外的输注。氨磷汀从血浆中迅速清除，这至少部分归因于其快速转化为WR 1065。观察到其浓度呈双相下降，最终半衰期为0.8小时。活性代谢物WR 1065从血浆中清除的最终半衰期为7.3 ± 3.6小时。WR 1065初始半衰期短可归因于其在组织中的快速吸收以及二硫化物的形成。二硫化物的最终半衰期为8.4-13.4小时，并且在治疗后至少24小时内均可检测到。它们可能作为WR 1065的可交换池。

大鼠（腹腔注射）：LD50：418 mg/kg
大鼠（肌肉注射）：LD50：396 mg/kg
小鼠（口服）：LD50：842 mg/kg
小鼠（腹腔注射）：LD50：321 mg/kg
小鼠（静脉注射）：LD50：557 mg/kg
小鼠（肌肉注射）：LD50：514 mg/kg
犬（静脉注射）：LD50：279 mg/kg

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相互作用
在给予γ-磷酸酯酶（γ-fos）治疗前30分钟，重复口服给予褪黑素和抗坏血酸（剂量为200 mg/kg）可降低其累积毒性作用。在此条件下，琥珀酸（剂量为100 mg/kg）无效。接受γ-磷酸酯单药治疗或联合褪黑素、抗坏血酸和琥珀酸治疗的50%动物的累积死亡时间分别为3.08天、4.29天、4.06天和2.97天。PMID：15455115
氨磷汀可能暂时引起低血压；应在服用氨磷汀前24小时停用抗高血压药物或其他可能导致低血压的药物；正在接受无法停用的抗高血压治疗的患者不应服用氨磷汀。

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解毒剂和紧急处理
立即采取急救措施：确保已进行充分的去污处理。如果患者停止呼吸，应立即开始人工呼吸，最好使用按需呼吸机、球囊面罩或简易呼吸面罩，并按照培训内容进行操作。必要时进行心肺复苏。立即用流动清水冲洗受污染的眼睛。切勿催吐。如果发生呕吐，应将患者身体前倾或置于左侧卧位（如有可能，头部向下），以保持呼吸道通畅并防止误吸。保持患者安静并维持正常体温。立即就医。/A类和B类中毒/
基本治疗：建立通畅的呼吸道（必要时使用口咽或鼻咽通气道）。必要时进行吸痰。观察呼吸功能不全的迹象，必要时辅助通气。使用无创呼吸面罩以10至15升/分钟的流量给予氧气。监测肺水肿，必要时进行治疗……。监测休克，必要时进行治疗……。预判癫痫发作，必要时进行治疗……。如果眼睛受到污染，立即用水冲洗眼睛。在转运过程中，持续用0.9%生理盐水冲洗每只眼睛……。不要使用催吐剂。误服时，漱口并给予5 mL/kg至200 mL的水稀释，前提是患者能够吞咽、有强烈的咽反射且不流涎……。皮肤烧伤经去污后，用干燥的无菌敷料覆盖……。/A类和B类毒物/
高级治疗：对于意识不清、严重肺水肿或严重呼吸窘迫的患者，考虑进行口咽或鼻咽气管插管以控制气道。使用球囊面罩进行正压通气可能有效。考虑药物治疗肺水肿……。考虑使用β受体激动剂（如沙丁胺醇）治疗严重支气管痉挛……。监测心律，必要时治疗心律失常……。开始静脉输注5%葡萄糖溶液（SRP：“保持通畅”，最小流速）。如果出现低血容量的迹象，请使用 0.9% 生理盐水 (NS) 或乳酸林格氏液。对于伴有低血容量迹象的低血压，应谨慎输液。注意液体过量的迹象……。使用地西泮或劳拉西泮治疗癫痫发作……。使用盐酸丙美卡因辅助眼部冲洗……。/A 类和 B 类毒物/

[1]. D Maurici, et al. Amifostine (WR2721) restores transcriptional activity of specific p53 mutant proteins in a yeast functional assay. Oncogene. 2001 Jun 14;20(27):3533-40.
[2]. Efstathia Giannopoulou, et al. Amifostine inhibits angiogenesis in vivo. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Feb;304(2):729-37.
[3]. Michael I Koukourakis, et al. Amifostine induces anaerobic metabolism and hypoxia-inducible factor 1 alpha. Cancer Chemother Pharmacol. 2004 Jan;53(1):8-14.
[4]. John R Kouvaris, et al. Amifostine: the first selective-target and broad-spectrum radioprotector. Oncologist. 2007 Jun;12(6):738-47.
[5]. Shao-Ze Wu, et al. Amifostine Pretreatment Attenuates Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury by Inhibiting Apoptosis and Oxidative Stress. Oxid Med Cell Longev. 2017;2017:4130824.

一种被提议用作辐射防护剂的硫代磷酸酯。它能引起脾脏血管扩张，并可能阻断自主神经节。
另见：氨磷汀（注释已移至）。

C5H15N2O3PS.H2O

232.24

232.065

C, 25.86; H, 7.38; N, 12.06; O, 27.56; P, 13.34; S, 13.80

63717-27-1

20537-88-6 (free);112901-68-5 (trihydrate);59178-37-9 (sodium);63717-27-1 (monohydrate);

83996

Typically exists as solid at room temperature

441.7ºC at 760 mmHg

220.9ºC

0.777

139.92

5

7

7

13

152

0

O.NCCCNCCSP(=O)(O)O

CWHOHHKTRJUFTR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C5H15N2O3PS.H2O/c6-2-1-3-7-4-5-12-11(8,9)10;/h7H,1-6H2,(H2,8,9,10);1H2

2-(3-aminopropylamino)ethylsulfanylphosphonic acid;hydrate

Amifostine hydrate; 63717-27-1; Amifostine monohydrate; Amifostinum; Amifostina; 2-(3-aminopropylamino)ethylsulfanylphosphonic acid hydrate; 63717-27-1 (monohydrate); L693H6MM64;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。