| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 500mg |
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| 5g |
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| 50g |
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| Other Sizes |
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| 体外研究 (In Vitro) |
使用CCK-8进行的细胞活力实验表明,用浓度≤30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)处理人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 24、48和72小时,没有细胞毒性作用。60 mM和120 mM的浓度显著抑制了HGF的增殖。[1]
用1、10或30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理HGFs 24小时,能显著降低由HMGB1 (10 µg/mL) 诱导的细胞膜通透性增加。证据包括:碘化丙啶 (PI) 染色减少,流式细胞术中Annexin V-FITC+/PI+双阳性细胞比例降低,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH) 的释放量减少。这种保护作用呈剂量依赖性,30 mM剂量效果最强。[1] 如qRT-PCR所测,用1、10或30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著抑制HMGB1诱导的焦亡相关mRNA表达上调,包括NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18。抑制作用呈剂量依赖性。[1] ELISA分析表明,用10 mM和30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著减少HMGB1诱导的IL-1β和IL-18蛋白向细胞培养上清液的释放。1 mM剂量减少了IL-18的释放,但对IL-1β的释放没有显著影响。[1] 蛋白质印迹分析表明,用30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著下调HMGB1诱导的caspase-1、NLRP3和GSDMD的蛋白表达水平。[1] |
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| 细胞实验 |
细胞活力实验: 将人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 以每孔5×10³个细胞的密度接种到96孔板中,孵育过夜。然后用不同浓度(1、10、30、60或120 mM)的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)处理细胞24、48和72小时。处理后,向每孔加入CCK-8试剂,孵育后,使用酶标仪在450 nm波长下测量吸光度以确定细胞活力。[1]
膜通透性/焦亡评估(PI/Hoechst染色): 药物和HMGB1处理后,用碘化丙啶 (PI, 2 µg/mL) 和Hoechst 33342 (5 µg/mL) 在37°C下对HGFs染色5分钟。立即使用荧光倒置显微镜观察并成像染色细胞。对指示膜通透性的PI阳性(红色)细胞进行定量。[1] 流式细胞术检测细胞死亡: 将HGFs以每孔1×10⁶个细胞的密度接种于6孔板中。干预处理后,收集细胞,洗涤并重悬于缓冲液中。根据试剂盒说明书,使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒进行细胞染色。使用流式细胞仪获取每个样本至少1×10⁴个事件,分析Annexin V-FITC+/PI+双阳性细胞(指示晚期凋亡/焦亡)的百分比。[1] 乳酸脱氢酶 (LDH) 释放实验: 药物和HMGB1处理后,收集细胞培养上清液。使用LDH检测试剂盒测量从受损细胞释放到上清液中的LDH水平。使用酶标仪在450 nm波长下测量反应混合物的吸光度。吸光度越高表明膜损伤和LDH释放越严重。[1] 定量实时PCR (qRT-PCR): 使用TRIzol试剂从HGFs中提取总RNA。使用逆转录试剂盒从RNA合成cDNA。使用基于SYBR Green的实时PCR预混液,在实时PCR检测系统上定量NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18的基因表达水平。PCR循环条件包括:95°C初始变性5分钟,随后进行40个循环的95°C 10秒和60°C 30秒。以GAPDH作为内参基因,使用2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量。[1] 酶联免疫吸附实验 (ELISA): 处理后,收集细胞培养上清液并离心。根据制造商说明书,使用特异性的人IL-1β和IL-18 ELISA试剂盒测量上清液中分泌的IL-1β和IL-18蛋白水平。在450 nm波长下读取吸光度。[1] 蛋白质印迹分析: 使用RIPA裂解液从HGFs中提取总细胞蛋白。使用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。等量蛋白通过SDS-PAGE电泳分离,并转移到PVDF膜上。膜封闭后,在4°C下与针对caspase-1、NLRP3、GSDMD和β-actin(上样对照)的一抗孵育过夜。洗涤后,膜与相应的辣根过氧化物酶标记的二抗孵育。使用增强化学发光 (ECL) 试剂显色蛋白条带,并用图像分析软件进行分析。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外对人牙龈成纤维细胞 (HGF) 的细胞毒性评估表明,浓度为 60 mM 和 120 mM 的 (-)-天冬氨酸 (D-Asp) 在处理 24、48 和 72 小时后均显著抑制细胞增殖/活力,表明这些高浓度具有细胞毒性作用。在测试条件下,浓度 ≤ 30 mM 被认为无细胞毒性。[1]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
D-天冬氨酸是天冬氨酸的D-对映异构体,是小鼠的代谢产物。它是一种天冬氨酸,也是一种D-α-氨基酸,是D-天冬氨酸(1-)的共轭酸,是L-天冬氨酸的对映异构体。
据报道,D-天冬氨酸存在于赤松(Pinus densiflora)、香附子(Cyperus aromaticus)和其他一些有相关数据的生物体中。 天冬氨酸的D-异构体。 (-)-天冬氨酸 (D-Asp)是一种D-氨基酸。本研究探讨了其对高迁移率族蛋白1 (HMGB1) 诱导的人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 焦亡的保护作用,该模型与种植体周围炎的炎症相关。 [1] 所提出的作用机制是(-)-天冬氨酸 (D-Asp)竞争性拮抗HMGB1与成纤维细胞上Toll样受体 (TLR) 的结合。这种干扰抑制了下游经典细胞焦亡通路(TLR-NLRP3-caspase-1-GSDMD)的激活,从而导致炎症小体组分(NLRP3、caspase-1)、成孔蛋白(GSDMD)和促炎细胞因子(IL-1β、IL-18)的表达降低。[1] 该研究表明,(-)-天冬氨酸 (D-Asp)具有作为治疗药物的潜力,可用于预防种植体周围炎等疾病中由细胞焦亡引起的炎症,为治疗提供了一种新的策略视角。然而,该研究仅限于体外模型。[1] |
| 分子式 |
C4H7NO4
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|---|---|
| 分子量 |
133.1027
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| 精确质量 |
133.037
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| CAS号 |
1783-96-6
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| 相关CAS号 |
27881-01-2
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| PubChem CID |
83887
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
264.1±30.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
300ºC
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| 闪点 |
113.5±24.6 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.531
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| LogP |
-0.67
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| tPSA |
100.62
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
9
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| 分子复杂度/Complexity |
133
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C([C@H](C(=O)O)N)C(=O)O
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| InChi Key |
CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C4H7NO4/c5-2(4(8)9)1-3(6)7/h2H,1,5H2,(H,6,7)(H,8,9)/t2-/m1/s1
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| 化学名 |
(2R)-2-aminobutanedioic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~7.69 mg/mL (~57.78 mM)
DMSO : ~1 mg/mL (~7.51 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2 mg/mL (15.03 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 7.5131 mL | 37.5657 mL | 75.1315 mL | |
| 5 mM | 1.5026 mL | 7.5131 mL | 15.0263 mL | |
| 10 mM | 0.7513 mL | 3.7566 mL | 7.5131 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。