(-)-Aspartic acid

别名: D-天门冬氨酸;D-天冬氨酸;D(-)-天冬氨酸;天门冬氨酸; (R)-氨基琥珀酸; (R)-(-)-氨基琥珀酸;(R)-2-氨基琥珀酸
目录号: V32257 纯度: ≥98%
(-)-Aspartic Acid 是一种内源性 NMDA 受体激动剂(激活剂)。
(-)-Aspartic acid CAS号: 1783-96-6
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
(-)-Aspartic Acid 是一种内源性 NMDA 受体激动剂(激活剂)。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
使用CCK-8进行的细胞活力实验表明,用浓度≤30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)处理人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 24、48和72小时,没有细胞毒性作用。60 mM和120 mM的浓度显著抑制了HGF的增殖。[1]
用1、10或30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理HGFs 24小时,能显著降低由HMGB1 (10 µg/mL) 诱导的细胞膜通透性增加。证据包括:碘化丙啶 (PI) 染色减少,流式细胞术中Annexin V-FITC+/PI+双阳性细胞比例降低,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH) 的释放量减少。这种保护作用呈剂量依赖性,30 mM剂量效果最强。[1]
如qRT-PCR所测,用1、10或30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著抑制HMGB1诱导的焦亡相关mRNA表达上调,包括NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18。抑制作用呈剂量依赖性。[1]
ELISA分析表明,用10 mM和30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著减少HMGB1诱导的IL-1β和IL-18蛋白向细胞培养上清液的释放。1 mM剂量减少了IL-18的释放,但对IL-1β的释放没有显著影响。[1]
蛋白质印迹分析表明,用30 mM的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)预处理,能显著下调HMGB1诱导的caspase-1、NLRP3和GSDMD的蛋白表达水平。[1]
细胞实验
细胞活力实验: 将人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 以每孔5×10³个细胞的密度接种到96孔板中,孵育过夜。然后用不同浓度(1、10、30、60或120 mM)的(-)-天冬氨酸 (D-Asp)处理细胞24、48和72小时。处理后,向每孔加入CCK-8试剂,孵育后,使用酶标仪在450 nm波长下测量吸光度以确定细胞活力。[1]
膜通透性/焦亡评估(PI/Hoechst染色): 药物和HMGB1处理后,用碘化丙啶 (PI, 2 µg/mL) 和Hoechst 33342 (5 µg/mL) 在37°C下对HGFs染色5分钟。立即使用荧光倒置显微镜观察并成像染色细胞。对指示膜通透性的PI阳性(红色)细胞进行定量。[1]
流式细胞术检测细胞死亡: 将HGFs以每孔1×10⁶个细胞的密度接种于6孔板中。干预处理后,收集细胞,洗涤并重悬于缓冲液中。根据试剂盒说明书,使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒进行细胞染色。使用流式细胞仪获取每个样本至少1×10⁴个事件,分析Annexin V-FITC+/PI+双阳性细胞(指示晚期凋亡/焦亡)的百分比。[1]
乳酸脱氢酶 (LDH) 释放实验: 药物和HMGB1处理后,收集细胞培养上清液。使用LDH检测试剂盒测量从受损细胞释放到上清液中的LDH水平。使用酶标仪在450 nm波长下测量反应混合物的吸光度。吸光度越高表明膜损伤和LDH释放越严重。[1]
定量实时PCR (qRT-PCR): 使用TRIzol试剂从HGFs中提取总RNA。使用逆转录试剂盒从RNA合成cDNA。使用基于SYBR Green的实时PCR预混液,在实时PCR检测系统上定量NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18的基因表达水平。PCR循环条件包括:95°C初始变性5分钟,随后进行40个循环的95°C 10秒和60°C 30秒。以GAPDH作为内参基因,使用2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量。[1]
酶联免疫吸附实验 (ELISA): 处理后,收集细胞培养上清液并离心。根据制造商说明书,使用特异性的人IL-1β和IL-18 ELISA试剂盒测量上清液中分泌的IL-1β和IL-18蛋白水平。在450 nm波长下读取吸光度。[1]
蛋白质印迹分析: 使用RIPA裂解液从HGFs中提取总细胞蛋白。使用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。等量蛋白通过SDS-PAGE电泳分离,并转移到PVDF膜上。膜封闭后,在4°C下与针对caspase-1、NLRP3、GSDMD和β-actin(上样对照)的一抗孵育过夜。洗涤后,膜与相应的辣根过氧化物酶标记的二抗孵育。使用增强化学发光 (ECL) 试剂显色蛋白条带,并用图像分析软件进行分析。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外对人牙龈成纤维细胞 (HGF) 的细胞毒性评估表明,浓度为 60 mM 和 120 mM 的 (-)-天冬氨酸 (D-Asp) 在处理 24、48 和 72 小时后均显著抑制细胞增殖/活力,表明这些高浓度具有细胞毒性作用。在测试条件下,浓度 ≤ 30 mM 被认为无细胞毒性。[1]
参考文献

[1]. D-aspartic acid protects against gingival fbroblasts infammation by suppressing pyroptosis. Mol Biol Rep. 2022 Jul;49(7):5821-5829.

[2]. D-Aspartic acid stimulates steroidogenesis through the delay of LH receptor internalization in a mammalian Leydig cell line. J Endocrinol Invest. 2016 Feb;39(2):207-213.

[3]. Involvement of D-aspartic acid in the synthesis of testosterone in rat testes. Life Sci. 1996;59(2):97-104.

[4]. Occurrence of D-aspartic acid and N-methyl-D-aspartic acid in rat neuroendocrine tissues and their role in the modulation of luteinizing hormone and growth hormone release. FASEB J. 2000 Apr;14(5):699-714.

[5]. D'Aniello A. D-Aspartic acid: an endogenous amino acid with an important neuroendocrine role. Brain Res Rev. 2007 Feb;53(2):215-34.

其他信息
D-天冬氨酸是天冬氨酸的D-对映异构体,是小鼠的代谢产物。它是一种天冬氨酸,也是一种D-α-氨基酸,是D-天冬氨酸(1-)的共轭酸,是L-天冬氨酸的对映异构体。
据报道,D-天冬氨酸存在于赤松(Pinus densiflora)、香附子(Cyperus aromaticus)和其他一些有相关数据的生物体中。
天冬氨酸的D-异构体。
(-)-天冬氨酸 (D-Asp)是一种D-氨基酸。本研究探讨了其对高迁移率族蛋白1 (HMGB1) 诱导的人牙龈成纤维细胞 (HGFs) 焦亡的保护作用,该模型与种植体周围炎的炎症相关。 [1]
所提出的作用机制是(-)-天冬氨酸 (D-Asp)竞争性拮抗HMGB1与成纤维细胞上Toll样受体 (TLR) 的结合。这种干扰抑制了下游经典细胞焦亡通路(TLR-NLRP3-caspase-1-GSDMD)的激活,从而导致炎症小体组分(NLRP3、caspase-1)、成孔蛋白(GSDMD)和促炎细胞因子(IL-1β、IL-18)的表达降低。[1]
该研究表明,(-)-天冬氨酸 (D-Asp)具有作为治疗药物的潜力,可用于预防种植体周围炎等疾病中由细胞焦亡引起的炎症,为治疗提供了一种新的策略视角。然而,该研究仅限于体外模型。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C4H7NO4
分子量
133.1027
精确质量
133.037
CAS号
1783-96-6
相关CAS号
27881-01-2
PubChem CID
83887
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
264.1±30.0 °C at 760 mmHg
熔点
300ºC
闪点
113.5±24.6 °C
蒸汽压
0.0±1.1 mmHg at 25°C
折射率
1.531
LogP
-0.67
tPSA
100.62
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
9
分子复杂度/Complexity
133
定义原子立体中心数目
1
SMILES
C([C@H](C(=O)O)N)C(=O)O
InChi Key
CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N
InChi Code
InChI=1S/C4H7NO4/c5-2(4(8)9)1-3(6)7/h2H,1,5H2,(H,6,7)(H,8,9)/t2-/m1/s1
化学名
(2R)-2-aminobutanedioic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : ~7.69 mg/mL (~57.78 mM)
DMSO : ~1 mg/mL (~7.51 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2 mg/mL (15.03 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 7.5131 mL 37.5657 mL 75.1315 mL
5 mM 1.5026 mL 7.5131 mL 15.0263 mL
10 mM 0.7513 mL 3.7566 mL 7.5131 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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