| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Aurora A (approx 3 nM, based on 52% inhibition at 3.0 nM) [1]
Aurora B (approx 3 nM, based on 58% inhibition at 3.0 nM) [1] JAK2 (IC50 = 1.2 nM) [1] JAK3 (IC50 = 1.1 nM) [1] Abl (T315I) (IC50 = 4 nM) [1] Other kinases with IC50 values: GSK3-β, FGFR2, VEGFR3 (Flt4), Mer, Ret, Rsk2, Rsk3, Tyk2, Yes (1-10 nM); Abl(Q252H), DRAK1, FGFR1, FGFR1(V561M), FGFR2(N549H), FGFR3, VEGFR1(Flt1), Flt-3, PDGFR-α(D842V), PDK1, PKCμ, Rsk4, SRC(T341M), VEGFR2 (10-30 nM); 21 kinases (30-100 nM); 37 kinases (100-300 nM); 14 kinases (>300 nM). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AT9283 通过抑制 HCT116 细胞中 Aurora B 激酶的活性，导致明显的多倍体表型，IC50 为 30 nM。此外，AT9283 还对 HCT116 克隆形成具有显著的抑制作用。
激酶活性测定：Aurora A 和 B 的活性测定采用 DELFIA 法进行。将 Aurora A 酶与 AT9283 和 3 μM 交叉底物（生物素-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG）在含有 10 mM MOPS（pH 7）、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油、0.2 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇、15 μM ATP 和 2.5% DMSO 的缓冲液中孵育。将 Aurora B 酶与 AT9283 和 3 μM 上述底物在含有 25 mM Tris（pH 8.5）、5 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、0.025% Tween-20、1 mM DTT、15 μM ATP 和 2.5% DMSO 的缓冲液中孵育。 Aurora A 和 Aurora B 的反应分别进行 60 分钟和 45-90 分钟后，用 EDTA 淬灭。然后将反应混合物转移到中性链霉亲和素包被的板上，并使用磷酸化特异性抗体和铕标记的二抗，通过时间分辨荧光（激发波长 337 nm；发射波长 620 nm）对磷酸化肽进行定量。对照化合物的IC50值分别为92 nM（Aurora A检测）和17 nM（Aurora B检测）。 细胞检测：HCT 116细胞培养于DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I培养基中。将200 μL细胞接种于黑色96孔平底（透明）组织培养处理板中，并在37°C、5% CO2的湿润空气中培养约16小时。将细胞用九种不同浓度的测试化合物（浓度范围为 1 nM 至 10 μM，另加 DMSO 溶剂对照）处理，然后孵育 72 小时。随后记录细胞的多倍体形态。报告产生明显多倍体表型所需的 AT9283 浓度。将细胞以 75-100 个细胞/mL 的浓度接种于 6 孔或 24 孔组织培养板中，并在相应的培养基中培养 16 小时使其恢复。向重复孔中加入测试化合物（11 种浓度，浓度范围为 0.1 nM 至 10 μM）或溶剂对照（DMSO），使最终 DMSO 浓度为 0.1%。加入化合物后，培养 10 至 14 天，以便进行最佳的离散菌落计数。将菌落固定于 2 mL Carnoy 固定液（25% 乙酸，75% 甲醇）中，并用 2 mL 0.4% (w/v) 结晶紫染色。计数每个孔中的菌落数。使用 Prism Graphpad 软件，通过 S 形剂量反应（可变斜率）IC50 曲线计算 IC50 值。 AT-9283 HCl 抑制 HCT116 细胞的生长和存活，产生通常与 Aurora B 激酶抑制相关的多倍体细胞表型。[1] 在 HCT116 细胞中，0.03 μM 的 AT-9283 HCl 产生了明显的多倍体表型。 [1] AT-9283 HCl 在二级细胞试验中能有效抑制 HCT116 集落形成，IC50 为 12 nM。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带 HCT116 人类结肠癌异种移植瘤的小鼠中，AT9283 治疗（15 mg/kg 和 20 mg/kg）16 天可分别显著抑制肿瘤生长 67% 和 76%。此外，AT9283 在肿瘤中的半衰期（2.5 小时）显著长于血浆中的半衰期（0.5 小时），且在小鼠体内具有中等的口服生物利用度（Fp.o. = 24%）。
在携带早期 HCT116 人结肠癌异种移植瘤的免疫缺陷 BALB/c 裸鼠中，腹腔注射 15 mg/kg 和 20 mg/kg 的 AT-9283 HCl（每日两次，每 4 天一次，共 5 个疗程）在治疗第 16 天分别产生了 67% (%T/C = 33%) 和 76% (%T/C = 24%) 的显著肿瘤生长抑制率。两种剂量均耐受良好，平均体重维持在初始体重的 90% 以上。[1] |
| 酶活实验 |
Aurora A 和 Aurora B 激酶活性测定采用 DELFIA 法进行。对于 Aurora A：将酶与测试化合物和 3 μM 生物素标记的交叉底物（生物素-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG）在 10 mM MOPS pH 7、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油、0.2 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇、15 μM ATP 和 2.5% DMSO 中孵育。对于 Aurora B：将酶与测试化合物和 3 μM 底物在 25 mM Tris pH 8.5、5 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、0.025% Tween-20、1 mM DTT、15 μM ATP 和 2.5% DMSO 中孵育。反应进行 60 分钟（Aurora A）或 45-90 分钟（Aurora B）后，用 EDTA 终止反应。将反应混合物转移至中性链霉亲和素包被的微孔板中，并使用磷酸化特异性抗体和铕标记的二抗，通过时间分辨荧光法（激发波长 337 nm，发射波长 620 nm）定量磷酸化肽。[1]
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| 细胞实验 |
原代HCT116细胞实验：将HCT116细胞培养于DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I培养基中。将5×10^3个细胞/孔接种于黑色96孔平底组织培养板中，每孔加入200 μL培养基，并在37℃、5% CO2条件下培养约16小时。用九种不同浓度的测试化合物（浓度范围为1 nM至10 μM，另设DMSO溶剂对照）处理细胞，并继续培养72小时。观察多倍体形态，并记录产生明显多倍体表型所需的最低浓度。[1]
HCT116集落形成实验（二级实验）：将细胞以75-100个细胞/mL的密度接种于6孔或24孔板中，并使其恢复16小时。将测试化合物（11 个浓度，范围从 0.1 nM 到 10 μM）或溶剂对照（DMSO）加入到重复孔中（最终 DMSO 浓度为 0.1%）。菌落培养 10-14 天后，用卡诺氏固定液（25% 乙酸，75% 甲醇）固定，并用 0.4% 结晶紫染色。计数菌落，并使用 Prism Graphpad 软件通过 S 形剂量反应（可变斜率）曲线计算 IC50 值。[1] |
| 动物实验 |
将AT-9283 HCl配制成盐酸盐，溶于10% DMSO、20%水和70%羟丙基-β-环糊精（25% w/v 水溶液）中；剂量为15和20 mg/kg；腹腔注射给药。将HCT116细胞皮下注射到雄性BALB/c小鼠的后侧腹部。
体内疗效研究：将HCT116细胞悬液皮下接种到雄性BALB/c无胸腺裸鼠（Hsd：无胸腺裸鼠-Foxn1nu）的后侧腹部，使其生长至约100 mm^3。AT-9283 HCl配制成盐酸盐，溶于10% DMSO、20%水和70%羟丙基-β-环糊精（25% w/v 水溶液）中。小鼠腹腔注射给药，每日两次，连续给药2天，停药2天（bid × 2 q4d），此循环重复5次。剂量为15和20 mg/kg。每隔2或3天使用外部测量方法记录肿瘤大小，并使用椭球体公式（长×宽²/2）计算肿瘤体积。对照组仅按相同方案注射赋形剂。[1] 药代动力学和肿瘤分布研究：AT-9283 HCl单次给药于BALB/c小鼠。静脉注射剂量为 5 或 10 mg/kg（100% 生理盐水），腹腔注射剂量为 20 mg/kg（10% DMSO、20% 水、70% 羟丙基-β-环糊精，25% w/v 水溶液），口服剂量为 10 mg/kg（10% 生理盐水、90% 水）。在设定的时间间隔采集肿瘤和/或血浆样本。将肿瘤样本在 5 倍体积（w/v）的乙腈/水（50/50）混合液中匀浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC/MS/MS）进行定量分析。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠中：血浆蛋白结合率为 81.5%（平衡透析）。静脉注射 5 mg/kg 后：清除率为 114 mL/min/kg，稳态分布容积 (Vss) 为 3.9 L/kg，血浆半衰期 (t1/2) 为 0.5 h，血药峰浓度 (Cmax) 为 4.9 μM，AUC0-t 为 1.9 μM·h。口服 10 mg/kg 后：血药峰浓度 (Cmax) 为 0.45 μM，AUC0-t 为 0.91 μM·h，口服生物利用度为 24%。腹腔注射 20 mg/kg 后：血药峰浓度 (Cmax) 为 8.4 μM，AUC0-t 为 7.7 μM·h，腹腔生物利用度为 100%（吸收基本完全）。肿瘤半衰期 (t1/2) 为 2.5 h（静脉注射 10 mg/kg 后）。 [1]
在体外小鼠肝细胞中，清除率为 8.8 (μM/min)/百万细胞。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在疗效研究中，15 和 20 mg/kg 的剂量（腹腔注射，每日两次，每 4 天一次，共两次）耐受性良好，平均体重维持在初始体重的 90% 以上。[1]
AT-9283 HCl 显示出良好的 CYP450 酶活性谱，对 CYP3A4、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9 和 CYP2C19 的 IC50 >10 μM。[1] |
| 参考文献 |
J Med Chem.2009 Jan 22;52(2):379-88.
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| 其他信息 |
AT-9283 HCl是通过基于片段的药物发现方法，从吡唑-苯并咪唑片段5（Aurora A IC50 = 0.91 μM，配体效率 = 0.59）出发筛选得到的。在整个优化过程中，该片段与Aurora A之间的关键氢键相互作用得以保留。X射线晶体衍射和核磁共振证实，该化合物具有折叠构象，其稳定性由环丙基环与苯并咪唑之间的疏水相互作用所维持。[1]
除了Aurora激酶外，AT-9283 HCl还能抑制JAK2、JAK3和Abl (T315I)，这归因于这些激酶铰链区存在额外的甘氨酸残基（Aurora A中的Gly216，JAK2中的Gly935）。该结合对门控残基的性质相对不敏感，因此对 Abl 的 T315I 突变体也具有活性。[1] AT-9283 HCl 已进入治疗癌症（难治性血液系统恶性肿瘤）的 I 期临床试验。[1] |
| 分子式 |
C19H24CLN7O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
417.89
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| 精确质量 |
417.167
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| CAS号 |
896466-61-8
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| 相关CAS号 |
896466-61-8 (HCl);896466-04-9;896466-76-5 (lactate);
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| PubChem CID |
135461257
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| tPSA |
111
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
554
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(NC1CC1)NC2=CNN=C2C=3NC4=C(N3)C=C(C=C4)CN5CCOCC5.Cl
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| InChi Key |
NHFNYIVVGIXBPD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H23N7O2.ClH/c27-19(21-13-2-3-13)24-16-10-20-25-17(16)18-22-14-4-1-12(9-15(14)23-18)11-26-5-7-28-8-6-26;/h1,4,9-10,13H,2-3,5-8,11H2,(H,20,25)(H,22,23)(H2,21,24,27);1H
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| 化学名 |
1-cyclopropyl-3-[5-[6-(morpholin-4-ylmethyl)-1H-benzimidazol-2-yl]-1H-pyrazol-4-yl]urea;hydrochloride
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3930 mL | 11.9649 mL | 23.9297 mL | |
| 5 mM | 0.4786 mL | 2.3930 mL | 4.7859 mL | |
| 10 mM | 0.2393 mL | 1.1965 mL | 2.3930 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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AT9283 potently inhibits Aurora B activity in B-NHL cell lines.Int J Cancer.2012 Jun 15;130(12):2997-3005. |
AT9283 plus docetaxel suppresses tumor growth and prolong survival of Granta-519-SCID xenografted mice.Int J Cancer.2012 Jun 15;130(12):2997-3005. |
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COA
Figure 5
粤公网安备 44011102003439号
463611831
