| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
cdk2-cyclin E (IC50 = 6 nM); cdk2-cyclin A (IC50 = 45 nM); cdk5-p25 (IC50 = 14 nM); cdk1-cyclin B1 (IC50 = 16 nM); cdk9-cyclin T (IC50 = 20 nM); cdk6-cyclin D3 (IC50 = 21 nM); cdk4-cyclin D1 (IC50 = 449 nM); cdk7-cyclin H (IC50 = 821 nM)
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Cyclin E-cdk2、Cyclin A-cdk2、Cyclin B1-cdk1、p25-cdk5、Cyclin D3-cdk6 和 Cyclin T-cdk9 均能被 AZD5438 有效抑制。活性（16、21、20 nM、6、45 nM）。 Cyclin E-cdk2、Cyclin A-cdk2、Cyclin B1-cdk1、p25-cdk5、Cyclin D3-cdk6 和 Cyclin T-cdk9 均受到 AZD5438 的有效抑制。与许多其他 CDK 调节剂类似，AZD5438 抑制 p25-cdk5 和糖原合酶，进而控制 3β 的偶发活性（相应的 IC50 值为 14 和 17 nM）[1]。 AZD5438 大大改善了 NSCLC 细胞的细胞放射靶向性。 AZD5438 与放射治疗联合使用时还可以改善肿瘤生长延迟，细胞范围改善至 1.2–1.7 [2]。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
AZD5438（50 mg/kg，一天两次，或用于肿瘤学的 75 mg/kg）可防止人类异种移植物生长。 AZD5438 降低内部循环活性细胞的百分比。对用 AZD5438 处理的 SW620 异种移植物进行的其他药效学研究表明，在 16 小时的单一阈值后，有效剂量的 AZD5438（>40% 肿瘤生长抑制）保持对包括磷酸化 pRbSer249/Thr252 在内的生物标志物的抑制作用[1]。
|
| 酶活实验 |
使用闪烁邻近试验来测试 AZD5438 抑制 CDK 活性的能力。它涉及使用细胞周期蛋白-Ecdk2、cdk2-细胞周期蛋白 A、cdk4-细胞周期蛋白 D 和重组视网膜母细胞瘤底物（氨基酸 792-928）或 cdk1-细胞周期蛋白 B1 的重组 CDK-细胞周期蛋白复合物以及源自体外 p34cdc2 磷酸化的肽底物组蛋白 H1 位点（生物素-X-Pro-Lys-Thr-Pro-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Leu）。使用肽底物 (AKKPKTPKKAKKLOH)，在 2 μM ATP 下基于闪烁邻近分析的测定中评估 AZD5438 针对重组 cdk5/p25 的活性。通过使用人纯化的糖原合酶激酶 3β 酶和真核起始因子 2B 底物（1 μM ATP），使用闪烁邻近测定法来确定对糖原合酶激酶 3β 活性的抑制。 AZD5438 接受激酶选择性筛选服务，针对 cdk6-细胞周期蛋白 D3、cdk7-细胞周期蛋白 H/MAT1（cdk 激活激酶复合物）和 cdk9-细胞周期蛋白 T 进行筛选。
制备重组CDK1/cyclin B、CDK2/cyclin A/E、CDK9/cyclin T激酶复合物，将梯度浓度的AZD5438与激酶复合物、ATP底物及特异性肽段混合，37℃孵育60分钟；采用放射性磷酸化检测法测定底物磷酸化水平，根据不同药物浓度的抑制效果拟合曲线，计算各激酶的IC50值 [1] 采用荧光共振能量转移（FRET）法验证CDK2活性：将AZD5438与CDK2/cyclin A复合物、荧光标记底物肽及ATP混合，30℃反应45分钟后，检测荧光信号强度，计算激酶活性抑制率 [2] |
| 细胞实验 |
实体瘤细胞系用于测试 AZD5438。总之，AZD5438以不同浓度添加到细胞中并孵育48小时。孵育期结束后，将 5-溴-2'-脱氧尿苷 (BrdUrd) 脉冲注入细胞中，并对 DNA 合成量进行定量。具体而言，细胞死亡对增殖抑制的 IC50 没有影响。以下方案用于将多种骨髓瘤细胞系接种到 96 孔板中：补充有 10% FCS 和谷氨酰胺的 RPMI 1640，然后使用 72 小时剂量的 AZD5438。 AlamarBlue 用于测量细胞生长，并使用预处理对照值计算 GI50 值。
肿瘤细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），培养24小时后加入0.01-10 μM梯度浓度的AZD5438，继续培养72小时；采用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力，计算细胞存活率并拟合曲线得到IC50值 [1] A549细胞经AZD5438（100 nM）预处理2小时后，给予0-8 Gy梯度剂量射线照射，培养14天后采用克隆形成实验检测细胞存活分数，计算放射增敏比（SER）[2] 细胞经AZD5438（100 nM）处理48小时后，收集细胞并固定，PI染色后通过流式细胞仪分析细胞周期分布；提取细胞总蛋白，Western blot检测组蛋白H1、磷酸化组蛋白H1、Rb、磷酸化Rb等蛋白表达 [1] MCF-7细胞经药物处理72小时后，采用Annexin V-FITC/PI双染色法，室温孵育15分钟，流式细胞仪检测凋亡细胞比例；通过caspase-3活性检测试剂盒测定酶活性，Western blot检测PARP、Mcl-1等相关蛋白表达 [1] 肿瘤细胞接种于6孔板（1×10³个/孔），培养24小时后加入AZD5438（0.01-1 μM），继续培养14天；弃去培养基后用甲醇固定，结晶紫染色，计数大于50个细胞的克隆，计算克隆形成率 [1] |
| 动物实验 |
除HX147外，所有人类肿瘤异种移植模型均通过皮下注射100 μL肿瘤细胞（1×10⁶和1×10⁷个细胞按1:1比例与Matrigel基质胶混合）制备。HX147肿瘤来源于从小鼠体内切除的肿瘤碎片（1 mm³大小），这些小鼠首先皮下注射了1×10⁷个细胞。在用于抗肿瘤实验之前，这些肿瘤碎片需在小鼠体内传代三次。如前所述，计算肿瘤体积，每周使用游标卡尺测量肿瘤大小最多三次，并将数据绘制成各组的几何平均值随时间变化的曲线。当小鼠肿瘤平均体积达到约0.2 cm³，大鼠肿瘤平均体积达到约0.5 cm³时，将动物随机分组（通常每组n=10）。羟丙基甲基纤维素用于制备AZD5438。在每种情况下，动物每日灌胃一次或两次AZD5438（37.5-75 mg/kg）或载体对照，持续约三周。如前所述，计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率（% TGI）。肿瘤体积的任何变化均采用标准t检验进行统计分析，显著性水平为P<0.05。
将A549细胞悬液（2×10⁶个细胞/只）皮下接种于6-8周龄雌性裸鼠的右背部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时开始给药；将AZD5438溶解于含有0.5%羟丙基甲基纤维素和0.1% Tween 80的生理盐水中，并以50 mg/kg的剂量每日一次灌胃给药，持续21天；每隔3天测量肿瘤体积和小鼠体重，并在实验结束时切除肿瘤并称重，以检测肿瘤组织中CDK活性及相关蛋白表达[1]。A549裸鼠异种移植模型（肿瘤体积达到200 mm³）分为对照组、单纯放疗组、AZD5438单药治疗组和联合治疗组；放疗组每周两次接受2 Gy X射线局部肿瘤照射，持续3周；AZD5438单药治疗组与放疗同步开始，每日一次口服75 mg/kg，持续3周；实验结束时计算肿瘤生长抑制率，并检测肿瘤组织中DNA损伤标志物（γ-H2AX）的表达[2]。MCF-7异种移植模型裸鼠（肿瘤体积达到120 mm³）每日一次口服60 mg/kg AZD5438，持续14天；小鼠在最后一次给药后 24 小时被处死，并收集肿瘤组织进行蛋白质提取和蛋白质印迹分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
大鼠口服 50 mg/kg AZD5438 后，达峰时间 (Tmax) 为 1.8 小时，血浆峰浓度 (Cmax) 为 980 ng/mL，口服生物利用度为 58% [1]。AZD5438 在小鼠体内的消除半衰期 (t1/2) 为 7.2 小时，在大鼠体内为 8.5 小时；主要在肝脏代谢，粪便排泄占总排泄量的 72%，尿液排泄占 18% [1]。AZD5438 在小鼠体内分布广泛，肿瘤组织中的药物浓度是血浆浓度的 1.8 倍，肝脏和肾脏组织中的药物浓度分别是血浆浓度的 4.3 倍和 2.9 倍 [1]。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
AZD5438在小鼠和大鼠中的口服半数致死量（LD50）分别为620 mg/kg和580 mg/kg，表明其急性毒性较低[1]。当以100 mg/kg的剂量口服AZD5438（每日一次，连续28天）时，大鼠未出现明显的肝肾毒性，血清ALT、AST、BUN和Cr水平与对照组无统计学差异；外周血白细胞计数也未出现显著下降（变化≤±10%）[1]。AZD5438的人血浆蛋白结合率为94%±2%[1]。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
4-(2-甲基-3-丙-2-基-4-咪唑基)-N-(4-甲基磺酰基苯基)-2-嘧啶胺是一种磺酰胺类化合物。
AZD5438是一种强效的口服活性CDK1/2/9抑制剂，它通过抑制关键的细胞周期激酶和转录调控激酶发挥抗肿瘤作用，诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡[1]。 AZD5438可通过抑制DNA损伤修复通路（例如同源重组修复）增强肿瘤细胞的放射敏感性，为放射治疗耐药肿瘤提供了一种联合治疗策略[2]。 临床前研究表明，AZD5438对多种实体瘤有效，尤其对CDK1/2/9活性高的肿瘤类型有效，目前正处于临床前开发阶段[1]。 目的：放射治疗（RT）是治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的主要手段之一。然而，由于这些肿瘤本身具有放射抗性，许多患者会出现放射治疗失败，导致肿瘤进展，包括区域淋巴结转移和远处转移。本临床前研究评估了一种新型细胞周期蛋白依赖性激酶（Cdk）抑制剂AZD5438作为放射增敏剂在几种对常规分割放射治疗具有特异性耐药性的NSCLC模型中的疗效。方法和材料：本研究在体外通过存活率、细胞周期分布、细胞凋亡、DNA双链断裂（DSB）修复和同源重组（HR）检测，在三种NSCLC细胞系（A549、H1299和H460）中测定了电离辐射与AZD5438（一种Cdk1、2和9的高特异性抑制剂）的联合作用。在体内研究中，我们使用了无胸腺裸鼠的人源异种移植瘤动物模型。结果：AZD5438 处理非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞可显著增强细胞的放射敏感性（剂量增强比为 1.4 至 1.75）。AZD5438 对放射抗性细胞系（A549 和 H1299）的放射增敏作用更为显著。放射敏感性的增强具体表现为抑制 Cdk1、延长 G2/M 期阻滞、抑制同源重组 (HR)、延迟 DNA 双链断裂 (DSB) 修复以及增加细胞凋亡。AZD5438 与放射治疗联合应用也可增强肿瘤生长延迟，增强因子为 1.2 至 1.7。结论：本研究支持评估新一代 Cdk 抑制剂（例如 AZD5438）作为 NSCLC 模型中有效的放射增敏剂，尤其适用于那些表现出不同固有放射反应的肿瘤。[2] 4-(2-甲基-3-丙-2-基-4-咪唑基)-N-(4-甲基磺酰基苯基)-2-嘧啶胺是一种磺酰胺。 |
| 分子式 |
C18H21N5O2S
|
|---|---|
| 分子量 |
371.4566
|
| 精确质量 |
371.141
|
| CAS号 |
602306-29-6
|
| 相关CAS号 |
602306-29-6
|
| PubChem CID |
16747683
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
655.2±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
350.1±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.648
|
| LogP |
2.13
|
| tPSA |
98.15
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
26
|
| 分子复杂度/Complexity |
556
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=S(C1=CC=C(NC2=NC=CC(C3=CN=C(C)N3C(C)C)=N2)C=C1)(C)=O
|
| 别名 |
AZD5438 HCl; AZD-5438 HCl; 602306-29-6; AZD-5438; DTXSID501025680; 2-PYRIMIDINAMINE, 4-(2-METHYL-1-(1-METHYLETHYL)-1H-IMIDAZOL-5-YL)-N-(4-(METHYLSULFONYL)PHENYL)-; 2-Pyrimidinamine, 4-[2-methyl-1-(1-methylethyl)-1H-imidazol-5-yl]-N-[4-(methylsulfonyl)phenyl]-; AZD 5438 HCl
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~269.21 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6921 mL | 13.4604 mL | 26.9208 mL | |
| 5 mM | 0.5384 mL | 2.6921 mL | 5.3842 mL | |
| 10 mM | 0.2692 mL | 1.3460 mL | 2.6921 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
