| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mcl-1 (IC50 = 0.7 nM); Mcl-1 (Kd = 0.17 nM)
AZD5991 is a potent and direct inhibitor of Mcl-1 with high selectivity versus other Bcl-2 family proteins. Apoptosis is triggered quickly in cancer cells by AZD5991 by binding directly to Mcl-1 and activating the Bak-dependent mitochondrial apoptotic pathway, most notably in myeloma and acute myeloid leukemia (GI50 100nM) cells. Hematological cells are preferentially killed by AZD5991 in a panel of cancer-derived cell lines with hematological or solid tumor origins[1][3]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AZD5991 是一种有效的直接 Mcl-1 抑制剂，与其他 Bcl-2 家族蛋白相比具有高选择性。 AZD5991 通过直接与 Mcl-1 结合并激活 Bak 依赖性线粒体凋亡途径，在癌细胞中快速触发细胞凋亡，尤其是在骨髓瘤和急性髓性白血病 (GI50 100nM) 细胞中。在一组具有血液学或实体瘤起源的癌症衍生细胞系中，AZD5991 优先杀死血液细胞[1][3]。
AZD5991 可在 Mcl-1 依赖性癌细胞系中快速诱导细胞凋亡。在敏感的多发性骨髓瘤细胞系 MOLP-8 中，10 nM 的 AZD5991 处理可在 15 分钟内使 Mcl-1 从促凋亡蛋白 Bak 上解离（通过免疫共沉淀证实）。随后发生线粒体外膜通透性增加、caspase-3/7 激活、磷脂酰丝氨酸外翻、细胞 ATP 耗竭，并最终在 20 小时内导致细胞膜通透性丧失。 [1] 在 MV4-11 细胞中进行的细胞热转移实验（CETSA）表明，AZD5991 能在细胞内结合并稳定 Mcl-1 蛋白，EC50 为 13 nM（95% CI 0.004328–0.03125 nM）。 [1] AZD5991 的细胞毒性作用依赖于 Bak。在 NCI-H23 细胞中敲低 Bak 会使其对 AZD5991 诱导的 caspase-3/7 激活和细胞死亡产生抵抗。在 Eµ-Myc 淋巴瘤细胞中过表达其他抗凋亡蛋白（Bcl-2, Bcl-xL, Bfl-1/A1, Bcl-w）会阻断其活性，证实了其靶向 Mcl-1 的特异性机制。 [1] 在广泛的癌细胞系筛选中，血液系统恶性肿瘤（如多发性骨髓瘤、急性髓系白血病）对 AZD5991 尤为敏感。其抑制细胞生长的能力与其激活 caspase-3/7 的能力密切相关。 [1] 在来自 48 例多发性骨髓瘤患者骨髓的原代单个核细胞的离体实验中，用 AZD5991 处理 24 小时后，71% 的样本其诱导凋亡的 EC50 低于 100 nM。 [1] 体外联合研究表明，AZD5991 与蛋白酶体抑制剂硼替佐米（可上调促凋亡蛋白 Bim）以及 Bcl-2 抑制剂维奈克拉在诱导 caspase 激活方面具有协同作用，特别是在对单药耐药的细胞系中。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
单次耐受性良好的剂量后，AZD5991 单独使用或与硼替佐米或维奈托克联合使用时，在多种多发性骨髓瘤和急性髓性白血病模型中表现出强大的体内抗肿瘤活性，肿瘤完全消退。这些体内研究中 caspase-3 和 PARP 的裂解表明，AZD5991 的细胞毒活性与线粒体凋亡途径的激活密切相关[1]。
在皮下 MOLP-8（多发性骨髓瘤）小鼠异种移植模型中，单次静脉注射 AZD5991 可诱导剂量依赖性的抗肿瘤活性。10 mg/kg 和 30 mg/kg 剂量在第10天分别导致 52% 和 93% 的肿瘤生长抑制。单次 60 mg/kg 剂量导致 99% 的肿瘤消退，7只小鼠中有6只检测不到肿瘤；100 mg/kg 剂量在所有小鼠中引起完全肿瘤消退。肿瘤消退与肿瘤内 cleaved caspase-3 的诱导相关。 [1] 在 NCI-H929 多发性骨髓瘤异种移植模型中，单次静脉注射 100 mg/kg 的 AZD5991 同样导致完全肿瘤消退。 [1] 在 MV4-11（急性髓系白血病）异种移植模型中，单次静脉注射 AZD5991（10、30、100 mg/kg）引起剂量依赖性的抗肿瘤活性，100 mg/kg 剂量在7天内使所有小鼠的肿瘤完全消退。疗效与肿瘤中 cleaved caspase-3 和 PARP 的增加相关。 [1] 在弥散性 MOLM-13 AML 小鼠模型中，每周静脉注射 AZD5991（60 mg/kg）治疗10天后，显著减少了外周血和骨髓中的白血病细胞百分比。 [1] 体内联合治疗显示了增强的疗效。在 NCI-H929 模型中，次有效剂量的 AZD5991（30 mg/kg，静脉注射）联合硼替佐米（1 mg/kg，静脉注射）诱导了 88% 的肿瘤消退，而单药仅显示微弱活性。 [1] 在 OCI-AML3 异种移植模型中（该模型对单药固有耐药），AZD5991（60 mg/kg，静脉注射，每周一次）与维奈克拉（100 mg/kg，口服，每日一次）联合治疗导致所有小鼠肿瘤消退，而单药治疗仅显示微弱的生长抑制。 [1] |
| 酶活实验 |
AZD5991 对 Mcl-1 及其他 Bcl-2 家族蛋白的结合亲和力和选择性通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）竞争性结合实验测定。将重组 GST 或 His 标签蛋白（Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Bfl-1）与铕标记的抗体和荧光标记的肽段（Bim 或 Bak 肽）一起孵育。将测试化合物进行系列稀释并加入反应体系。孵育后，测量 665 nm（受体）与 612 nm（供体）的发射光比值。相对于 DMSO 和仅含肽段的对照计算抑制百分比，并得出 IC50 值。使用已知的肽段 Kd 值，通过 Cheng-Prusoff 方程计算抑制常数（Ki）。 [1]
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| 细胞实验 |
MOLP-8 细胞用 AZD5991 或 DMSO 对照处理 30 分钟。然后将样品离心，将沉淀重悬于冰冷的裂解缓冲液中，并在冰上孵育 20 分钟，每 5 分钟涡旋一次。离心样品后，测量蛋白质浓度。在 4°C 下旋转孵育抗 Mcl-1 抗体过夜之前，使用旋转和 50% Protein A/G 磁珠浆液在 4°C 下将样品预净化 30 分钟。之后，加入Protein A/G磁珠并在4℃下旋转1小时。每个 IP 沉淀物均添加 10% 的样品还原剂，然后用裂解缓冲液/PBS (1:1) 洗涤四次，然后进行蛋白质印迹分析。
对于 caspase 激活和细胞活力测定，将细胞接种于 384 孔板中。对于 caspase-3/7 激活，细胞用 AZD5991 处理 2 或 6 小时，随后加入 Caspase-Glo 3/7 试剂，测量化学发光。对于细胞活力，细胞处理 24 小时后，加入 CellTiter-Glo 试剂，测量化学发光。绘制剂量反应曲线以确定 EC50（caspase）或 GL50（活力）值。 [1] 对于 MOLP-8 细胞的凋亡动力学分析，在 AZD5991 处理后的不同时间点评估标志物：通过 TMRE 染色和流式细胞术测量线粒体外膜通透性；通过 Annexin V 染色测量磷脂酰丝氨酸外翻；通过 7-AAD 染色测量细胞膜通透性。 [1] 对于细胞靶点结合，进行了细胞热转移实验（CETSA）。用 AZD5991 或 DMSO 处理 MV4-11 细胞，进行热激，裂解细胞，并通过 Western blot 分析可溶组分中的 Mcl-1 蛋白水平。使用 48°C 的等温剂量反应曲线确定稳定 Mcl-1 的 EC50。 [1] 对于评估 Mcl-1:Bak 复合物破坏的免疫共沉淀实验，用 AZD5991 处理 MOLP-8 细胞，裂解后免疫沉淀 Mcl-1。通过 Western blot 检测共沉淀的 Bak 以及裂解物中 Mcl-1、Bim 和 cleaved PARP 的水平。 [1] |
| 动物实验 |
小鼠和大鼠[1] 在小鼠中，药物（例如AZD5991；10-100 mg/kg）以5 mL/kg的体积进行静脉注射，但Venetoclax除外，其以10 mL/kg的体积进行口服给药。将100万个MV4-11细胞、500万个MOLP-8细胞、1000万个NCI-H929细胞或500万个OCI-AML3细胞以0.1 mL的体积皮下注射到小鼠右侧腹部。在大鼠中，AZD5991（10-100 mg/kg）以10 mL/kg的体积进行静脉注射。将1000万个MV4-11细胞以0.1 mL的体积皮下注射到大鼠右侧腹部。在研究期间，每周两次记录肿瘤体积（用游标卡尺测量）、动物体重和肿瘤状况。肿瘤体积的计算方法见参考文献[1]。
在皮下异种移植疗效研究中，将肿瘤细胞（例如，1×10⁶ MV4-11，5×10⁶ MOLP-8）植入雌性 CB-17 SCID 小鼠体内。当肿瘤平均体积达到约 230 mm³ 时，将小鼠随机分组。AZD5991 配制于 10% DMSO / 40% PEG400 / 50% 柠檬酸盐缓冲液（pH 4）中，以 5 mL/kg 的体积单次静脉推注给药，剂量范围为 10 至 100 mg/kg。定期监测肿瘤体积和体重。 [1] 在NCI-H929模型中，AZD5991与硼替佐米联合用药研究中，AZD5991（30 mg/kg，静脉注射）和硼替佐米（1 mg/kg，静脉注射）均以单次给药方式给药。[1] 在OCI-AML3模型中，AZD5991与维奈托克联合用药研究中，AZD5991以60 mg/kg的剂量每周静脉注射一次，维奈托克以100 mg/kg的剂量每日口服一次。维奈托克的制剂成分为10%乙醇、30% PEG 400和60%磷酸50丙二醇。[1] 在播散性MOLM-13 AML模型中，CIEA-NOG小鼠经静脉注射白血病细胞。3天后开始治疗。每周一次静脉注射AZD5991（60 mg/kg）。第10天，采用流式细胞术分析骨髓和外周血中人CD45+ HLA-ABC+白血病细胞。[1] 药代动力学分析中，在单次静脉注射AZD5991（10-100 mg/kg）后的不同时间点，从荷瘤小鼠中采集血浆样本。样本用含内标的乙腈进行处理，并使用LC-MS/MS分析校准曲线。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AZD5991具有很高的血浆蛋白结合率，在胎牛血清中仅检测到0.1%的游离部分。这显著影响其细胞活性，表现为在MOLP-8细胞中，随着血清浓度的增加，其诱导caspase的EC50值也随之升高（在0%、2%和10%血清浓度下，EC50值分别为0.001、0.008和0.033 μM）。[1]
在携带MOLP-8肿瘤的小鼠中，单次静脉注射AZD5991后，血浆暴露量呈剂量依赖性。我们提供了10、30、60和100 mg/kg剂量下24小时内的血浆浓度-时间曲线。[1] AZD5991的结合亲和力因物种而异。它对小鼠 Mcl-1 的解离常数 Kd 比对人 Mcl-1 的解离常数 Kd 低约 25 倍，对大鼠 Mcl-1 的解离常数 Kd 低约 4 倍。它与人、狗和食蟹猴的 Mcl-1 均具有同等的高亲和力。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠异种移植研究中，单次静脉注射剂量高达 100 mg/kg 的 AZD5991 耐受性良好，未观察到明显的体重下降。然而，在解读这些模型中的耐受性时，必须考虑其与小鼠 Mcl-1 结合力较弱这一因素。[1] 在大鼠 MV4-11 异种移植模型中，静脉注射 30 mg/kg 的 AZD5991 可诱导肿瘤消退，且未观察到明显的体重下降。[1] 在 Eµ-Myc 淋巴瘤同源小鼠模型（宿主和肿瘤的 Mcl-1 具有相似的敏感性）中，移植后第 3 天和第 10 天静脉注射 100 mg/kg 的 AZD5991 可清除外周血中的白血病细胞，并延长生存期，且未观察到严重的毒性，表明在药理学相关环境中，AZD5991 在耐受剂量下具有活性。 [1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AZD-5991 正在进行临床试验 NCT03218683（AZD5991 治疗复发或难治性血液系统恶性肿瘤的研究）。
Mcl-1 抑制剂 AZD5991 是一种诱导型髓系白血病细胞分化蛋白（髓系细胞白血病-1；Mcl-1；Bcl2-L-3）抑制剂，具有潜在的促凋亡和抗肿瘤活性。给药后，AZD5991 与 Mcl-1 结合，从而阻止 Mcl-1 与某些促凋亡蛋白结合并使其失活，并促进 Mcl-1 过表达细胞的凋亡。 Mcl-1 是一种属于 Bcl-2 蛋白家族的抗凋亡蛋白，在癌细胞中表达上调，并促进肿瘤细胞存活。 AZD5991 是一种首创的、合理设计的环状分子，可直接且选择性地抑制抗凋亡蛋白 Mcl-1。目前，AZD5991 正在进行针对血液系统恶性肿瘤患者的 I 期临床试验 (NCT03218683)。[1] 该药物的作用机制涉及与 Mcl-1 的高亲和力结合，从而取代 Bak 和 Bim 等促凋亡蛋白，进而以 Bak 依赖的方式激活内源性（线粒体）凋亡途径。 [1] AZD5991在多发性骨髓瘤和急性髓系白血病的临床前模型中显示出强大的单药活性，并且与硼替佐米或维奈托克联合用药有望克服耐药性。[1] |
| 分子式 |
C35H34CLN5O3S2
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|---|---|
| 分子量 |
672.2592
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| 精确质量 |
671.18
|
| 元素分析 |
C, 62.53; H, 5.10; Cl, 5.27; N, 10.42; O, 7.14; S, 9.54
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| CAS号 |
2143061-81-6
|
| 相关CAS号 |
AZD-5991 Racemate;2143010-83-5;AZD-5991 (S-enantiomer);2143061-82-7
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| PubChem CID |
131634760
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
6.8
|
| tPSA |
138
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
46
|
| 分子复杂度/Complexity |
1060
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
KBQCEQAXHPIRTF-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C35H34ClN5O3S2/c1-20-31-29(38-40(20)3)19-45-17-22-15-23(41(4)37-22)18-46-24-14-21-8-5-6-9-25(21)30(16-24)44-13-7-10-26-27-11-12-28(36)32(31)33(27)39(2)34(26)35(42)43/h5-6,8-9,11-12,14-16H,7,10,13,17-19H2,1-4H3,(H,42,43)
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| 化学名 |
17-chloro-5,13,14,22-tetramethyl-28-oxa-2,9-dithia-5,6,12,13,22-pentazaheptacyclo[27.7.1.14,7.011,15.016,21.020,24.030,35]octatriaconta-1(36),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29(37),30,32,34-tridecaene-23-carboxylic acid
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| 别名 |
AZD 5991; AZD-5991; AZD5991
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100~250 mg/mL (148.8~371.9 mM）
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.09 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 配方 4 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.09 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 配方 6 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4875 mL | 7.4376 mL | 14.8752 mL | |
| 5 mM | 0.2975 mL | 1.4875 mL | 2.9750 mL | |
| 10 mM | 0.1488 mL | 0.7438 mL | 1.4875 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03218683 | Terminated | Drug: AZD5991 + Venetoclax Drug: AZD5991 |
Relapsed or Refractory Acute Myeloid Leukemia (AML) |
AstraZeneca | August 2, 2017 | Phase 1 |
Hematological cell lines are preferentially sensitive to AZD5991. |
|---|
AZD5991 causes tumor regression in AML models.Nat Commun.2018 Dec 17;9(1):5341. |
AZD5991 exhibits potent anti-tumor efficacy in MM models.Nat Commun.2018 Dec 17;9(1):5341. |
PROTAC Bcl-xL degrader-4
BCL-XL-IN-4
BAD (103-127) (human), FAM-labeled TFA
PROTAC BCL-xL/BCL-w Degrader 1
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