Baohuoside I   中文名称: 宝藿苷Ⅰ

CXCR4; Inflammation/Immunology
The targets of Baohuoside I are CXC chemokine receptor 4 (CXCR4) and nuclear factor κB (NF-κB)[1]
The targets of Baohuoside I are c-Jun N-terminal kinase (JNK) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK)[2]

CXCR4 抑制剂 baohuoside I 在 12–25 μM 时可抑制 CXCR4 的表达。 baohuoside I (0-25 μM) 以剂量依赖性方式抑制 NF-κB 激活和 CXCL12 引起的宫颈癌细胞的侵袭。保活苷 I 还可以防止乳腺癌细胞侵袭性生长[1]。分别在24小时、11.5小时、48小时和72小时时，baohuoside I降低A549细胞的活力，IC50分别为25.1 μM、11.5 μM和9.6 μM。在 A549 细胞中，baohuoside I (25 μM) 刺激 p38MAPK 和 JNK 信号级联，增加 ROS 水平，并抑制 caspase 级联 [2]。保霍苷 I（3.125、6.25、12.5、25.0 和 50.0 µg/mL）对食管鳞癌 Eca109 细胞的增殖有显着的剂量依赖性抑制，48 小时的 IC50 为 4.8 µg/mL[3]。

---

1. 在人宫颈癌 HeLa 细胞中，Baohuoside I 以剂量和时间依赖方式下调 CXCR4 表达，孵育 12 小时即可观察到抑制效果，最低有效浓度为 12.5 μM，25 μM 作用 24 小时可显著抑制 CXCR4 表达[1]
2. 在乳腺癌 MDA-MB-231 细胞、肝癌 HepG2 细胞、胰腺癌 HPAC 细胞中，25 μM Baohuoside I 作用 24 小时可下调 CXCR4 表达，其中对 MDA-MB-231 细胞的抑制效果最显著，且在该细胞中呈剂量依赖抑制 CXCR4 表达[1]
3. Baohuoside I 对 CXCR4 的下调并非通过蛋白酶体或溶酶体降解途径实现，而是发生在转录水平，以剂量依赖方式降低 CXCR4 mRNA 水平[1]
4. 在 HeLa 细胞中，Baohuoside I 以剂量依赖方式抑制 NF-κB 的组成型激活[1]
5. 25 μM Baohuoside I 预处理可有效抑制 CXCL12 诱导的 HeLa 细胞和 MDA-MB-231 细胞侵袭[1]
1. 对人非小细胞肺癌 A549 细胞具有细胞毒性，以时间和浓度依赖方式抑制细胞活力，24 h、48 h、72 h 的半数抑制浓度（IC50）分别约为 25.1 μM、11.5 μM、9.6 μM[2]
2. 诱导 A549 细胞凋亡，25 μM 处理 24 h 后，凋亡细胞比例从对照组的 8.9±1.1% 升高至 58.5±2.5%，亚 G1 期细胞比例从 0.13±0.02% 升高至 18.31±0.9%，TUNEL 染色显示阳性细胞显著增加[2]
3. 导致 A549 细胞线粒体膜电位（DWM）下降，绿色/红色荧光强度比增至对照组的 4 倍，且能促进线粒体中细胞色素 c（Cytc）释放到细胞质中[2]
4. 上调 A549 细胞中 BAX/Bcl-2 比率，激活 caspase 3 和 caspase 9，导致聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）降解[2]
5. 诱导 A549 细胞过量产生活性氧（ROS），25 μM 处理 12 h 后，DCF 阳性细胞比例从 4.1±0.9% 增至 64.3±2.9%，ROS 生成在 6 h 开始升高并持续至 24 h[2]
6. 以浓度和时间依赖方式激活 A549 细胞中 JNK 和 p38MAPK 通路，9 h 时可检测到 JNK 和 p38MAPK 的磷酸化激活，且持续至 24 h，ERK 磷酸化水平无明显变化[2]
7. ROS 清除剂 NAC（1 mM）预处理可显著逆转 Baohuoside I 诱导的 ROS 积累（降至 23.4±2.7%）、线粒体膜电位下降、细胞凋亡（降至 25.9±3.1%）和细胞死亡（从 59.6±2.6% 降至 27.2±3.3%），并抑制 JNK 和 p38MAPK 通路激活[2]
8. 泛 caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK（50 μM）预处理只能部分抑制 Baohuoside I 诱导的 A549 细胞凋亡[2]
9. p38MAPK 抑制剂 SB203580（25 μM）和 JNK 抑制剂 SP600125（25 μM）与 25 μM Baohuoside I 共孵育 24 h，可有效减弱 A549 细胞凋亡[2]
1. 对人食管鳞状细胞癌 Eca109 细胞具有增殖抑制作用，呈剂量和时间依赖关系，48 h 半数抑制浓度（IC50）为 24.8 μg/ml，50 μg/ml 浓度下细胞生长几乎停滞[3]
2. 诱导 Eca109 细胞凋亡，呈剂量依赖关系，50 μg/ml 处理 48 h 后，亚 G1 期凋亡细胞比例从对照组的 3.26% 升高至 49.21%[3]
3. 下调 Eca109 细胞中 β-catenin、survivin 和 cyclin D1 的 mRNA 表达水平，呈剂量依赖关系[3]
4. 下调 Eca109 细胞中 β-catenin、survivin 和 cyclin D1 的蛋白表达水平，呈剂量依赖关系[3]

在裸鼠中，baohuoside I (25 mg/kg) 降低生存素、细胞周期蛋白 D1 和 β-catenin 蛋白水平的表达[3]。

---

baohuoside I抑制人食管癌细胞异种移植瘤模型的体内肿瘤生长。采用人食管鳞状细胞癌异种移植模型研究保活苷1的体内抗癌活性。简单地说，将指数生长的萤火虫荧光素酶标记的Eca109细胞注射到Babl/c裸鼠的侧翼。癌细胞注射1周后，局部给药baohuoside I (25 mg/kg体重，每天1次)。小鼠在另外三周内每周接受一次Xenogen生物发光成像。如图5所示，baohuoside I治疗组与对照组相比，Xenogen成像信号明显降低。事实上，定量分析显示，在治疗后3周，即使肿瘤没有完全消除，baohuoside I介导的对异种移植肿瘤生长的抑制也具有统计学意义(p<0.01)(图5A和B)。组织学分析(H&E染色)表明，baohuoside I治疗组肿瘤肿块的细胞数量减少[3]。

---

1. 在人食管癌 Eca109-luc 裸鼠异种移植模型中，25 mg/kg 剂量 Baohuoside I 瘤内注射，每日一次，持续三周，可显著抑制肿瘤生长，生物发光成像信号强度显著降低（p<0.01）[3]
2. 组织学分析显示，用药组肿瘤组织细胞密度降低[3]
3. 肿瘤组织中 β-catenin、survivin 和 cyclin D1 蛋白表达水平分别下降 40%、41% 和 45%（均 p<0.01）[3]

在这项工作中，研究人员研究了韩国淫羊藿(Epimedium koreanum)的一种成分保火苷I (baohuoside I)在宫颈癌和乳腺癌细胞中作为CXCR4表达和功能的调节因子。我们观察到保火苷I在HeLa细胞中以剂量和时间依赖的方式下调CXCR4的表达。用蛋白酶体和溶酶体抑制剂治疗对保火苷I抑制CXCR4表达的能力没有实质性影响。当我们研究其作用的分子机制时，我们发现CXCR4的表达抑制发生在mRNA水平。保火苷I引起的CXCR4表达水平下降与抑制cxcl12诱导的宫颈癌和乳腺癌细胞的侵袭有关。综上所述，我们的研究结果表明保火苷I是通过下调CXCR4的表达来发挥其抗转移作用的，因此具有抑制肿瘤转移的潜力[1]。

Western Blotting[1]< br >
为了检测CXCR4，用RIPA缓冲液[150 mM NaCl, 10 mM Tris (pH 7.2)， 0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)， 1% Triton X-100, 1%脱氧胆酸盐，和5 mM乙二胺四乙酸(EDTA)]，用完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒片富集，然后在冰上常规涡旋孵育30 min，然后在14000 rpm和4°C下离心15 min。使用比辛醌酸(BCA)蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。蛋白质样品在SDS样品缓冲液中煮沸5分钟，在10% SDS -聚丙烯酰胺凝胶上溶解。电泳后，将蛋白转移到聚二氟乙烯(PVDF)膜上，用5%脱脂干牛奶在含0.1% Tween 20 (TBST)的tris缓冲盐水中阻断，与一抗孵育至适当的终浓度，然后与辣根过氧化物酶偶联的抗兔或抗小鼠二抗杂交。每一步，用TBST洗涤膜3次，持续10分钟，根据制造商的说明，将转移的蛋白质与超信号微化学发光底物或硬膜发光底物孵育2分钟，并用成像仪LAS 4000进行可视化。

---

Invasion Assay[1]< br >
根据制造商的说明，使用Bio-Coat Matrigel入侵试验系统进行体外入侵试验。将癌细胞(5 × 104 /毫升)悬浮在培养基中，并将其植入孔径为8 μm的聚碳酸酯膜预涂覆的transwell腔室中。加保活苷I (25 μM)或不加保活苷I (25 μM)预孵育后，将传孔室置于24孔板中，分别加入基础培养基或含有100 ng/mL CXCL12的基础培养基。孵育后(HeLa和MDA-MB-231孵育24 h)，用棉签擦拭transwell腔室上表面，固定入侵细胞并用Diff-Quick染色。在随机选择的5个显微镜视野(100倍)中计数入侵细胞的数量。

---

1. 细胞培养：人宫颈癌 HeLa 细胞采用添加 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 抗生素的 RPMI1640 培养基培养；乳腺癌 MDA-MB-231 细胞、胰腺癌 HPAC 细胞、肝癌 HepG2 细胞采用添加 10% FBS 和 1% 抗生素的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM）培养。所有细胞均置于 37℃、5% CO₂ 和 95% 空气的环境中，当细胞汇合度达到 80% 时，用 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化 3-5 分钟进行传代[1]
2. Western Blot 实验：收集经 Baohuoside I 处理后的细胞，用含完整蛋白酶抑制剂混合物的 RIPA 缓冲液（150 mM NaCl、10 mM Tris（pH 7.2）、0.1% 十二烷基硫酸钠（SDS）、1% Triton X-100、1% 脱氧胆酸盐、5 mM 乙二胺四乙酸（EDTA））裂解细胞，冰上孵育 30 分钟并定期涡旋，随后在 4℃、14000 rpm 条件下离心 15 分钟。采用 BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度，蛋白样品在 SDS 样品缓冲液中煮沸 5 分钟后，通过 10% SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，随后转移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜。膜用含 5% 脱脂奶粉的 Tris 缓冲盐溶液（含 0.1% Tween 20，TBST）封闭，加入适当终浓度的一抗孵育后，再与辣根过氧化物酶偶联的二抗杂交。每步反应后用 TBST 洗涤膜 3 次，每次 10 分钟，最后用化学发光底物孵育 2 分钟，通过图像分析系统可视化蛋白条带[1]
3. RT - PCR 实验：采用 Trizol 试剂提取细胞总 RNA，按照试剂盒说明使用逆转录预混液合成 cDNA。以甘油醛 - 3 - 磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，通过定量 RT - PCR 分析 CXCR4 的相对表达。CXCR4 的引物序列为正义链（5′-CCG TGG CAA ACT GGT ACT TT-3′）和反义链（5′-TTT CAG CCA ACA GCT TCC TT-3′）；GAPDH 的引物序列为正义链（5′-CAG CCT CAA GAT CAT CAG CA-3′）和反义链（5′-GTC TTC TGG GTG GCA GTG AT-3′）。PCR 反应体系包含 2.5 μL 10×Taq 反应缓冲液、0.5 μL 10 mM dNTP、1 μL 上下游引物和 2 μL 模板 DNA，总体积为 25 μL。扩增产物经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳（含安全染料）分离后，通过图像分析系统拍照记录[1]
4. 实时定量 PCR 实验：以合成的 cDNA 为模板，使用 CXCR4 和 GAPDH 特异性引物，采用 SYBR Green 试剂盒在实时荧光定量 PCR 仪上进行反应。PCR 程序为 95℃ 预变性 10 分钟，随后进行 40 个循环（95℃ 10 秒、55℃ 30 秒），最后 40℃ 冷却 30 秒。以 GAPDH 的交叉点（Cp）值为对照，对 CXCR4 的 Cp 值进行归一化处理，用于相对定量分析[1]
5. 侵袭实验：采用基质胶包被的穿膜小室（聚碳酸酯膜孔径 8 μm）进行体外侵袭实验。将癌细胞（5×10⁴ 个/毫升）悬浮于培养基中并接种到上室，经 25 μM Baohuoside I 预处理或未预处理后，将穿膜小室置于 24 孔板中，下室加入基础培养基或含 100 ng/mL CXCL12 的基础培养基。HeLa 细胞和 MDA-MB-231 细胞孵育 24 小时后，用棉签擦拭上室表面，固定并染色侵袭到下室的细胞，在 100 倍显微镜下随机选取 5 个视野计数侵袭细胞数[1]
6. 电泳迁移率变动分析（EMSA）：使用含 NF-κB 结合基序的寡核苷酸探针，用 DIG-ddUTP 进行末端标记。取 10 μg 样品蛋白与 DIG 标记的探针在室温下孵育 30 分钟进行结合反应，随后在 6% 非变性聚丙烯酰胺凝胶中（以 0.5×TBE 为电泳缓冲液）分离 DNA - 蛋白复合物。电泳后将凝胶转移至尼龙膜，通过化学发光法检测，并用图像分析仪定量信号强度[1]
1. 细胞培养：人非小细胞肺癌 A549 细胞采用添加 10% 热灭活胎牛血清（FBS）、100 单位/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素的 RPMI-1640 培养基，在 37℃、5% CO₂ 湿润空气环境中培养，定期检测支原体感染呈阴性[2]
2. 细胞活力检测（MTT 法）：将 1×10⁴ 个/孔细胞接种到 96 孔板，分别用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 或 1 mM NAC 处理 24、48、72 h。去除含 MTT 的培养基后，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）溶解形成的结晶，混合后用酶标仪在 540 nm 处检测吸光度[2]
3. 细胞周期分析：1×10⁶ 个/ml 细胞用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理 24 h，用 PBS 洗涤后，胰蛋白酶-EDTA 收集细胞并计数，用 75% 乙醇固定后于 4℃ 保存。样品重悬于低渗碘化丙啶（PI）溶液（50 μg/ml PI、0.1% 柠檬酸钠、0.1% Triton X-100、0.1 mg/ml 核糖核酸酶 A），避光孵育 1 h 后，用流式细胞仪分析[2]
4. 凋亡分析（Annexin V/PI 双染法）：1×10⁶ 个/ml A549 细胞先用 50 μM Z-VAD-FMK 或 1 mM NAC 预处理 1 h，再用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理 24 h；或用 25 μM Baohuoside I 与 25 μM SB203580 或 25 μM SP600125 共孵育 24 h。洗涤后的细胞重悬于 Annexin-V 结合缓冲液，加入 FITC 标记的 Annexin-V 和 PI，室温避光孵育 15 min 后，添加结合缓冲液，用流式细胞仪检测凋亡细胞[2]
5. TUNEL 分析：2×10⁵ 个/ml A549 细胞用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理后，用多聚甲醛固定，4℃ 下用 Triton-X100 通透 5 min。洗涤后，加入 TUNEL 反应混合物 37℃ 孵育 60 min，DNA 片段标记为绿色斑点；再用 DAPI（PBS 稀释至 1:20000）标记所有细胞核，洗涤后用荧光显微镜拍照[2]
6. 线粒体膜电位（DWM）检测：A549 细胞接种至汇合度 70-80%，用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理 24 h，或用 1 mM NAC 或 5 μM FCCP 预处理 1 h。用 PBS 洗涤两次后，加入 JC-1 孵育 30 min，去除 JC-1 后，胰蛋白酶消化收集细胞，重悬于 PBS。用流式细胞仪检测每个样品 10000 个细胞在 530 nm（绿色荧光，FL-1）和 590 nm（红色荧光，FL-2）的荧光强度，通过绿色/红色荧光比率评估 DWM 变化[2]
7. 细胞内 ROS 生成检测：1×10⁶ 个/ml 细胞用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理 12 h，或用 1 mM NAC 预处理 1 h，然后加入 10 μM DCF-DA 37℃ 孵育 15 min。细胞内 ROS 可将 DCF-DA 氧化为荧光化合物 2',7'-二氯荧光素（DCF），用流式细胞仪在激发波长 480 nm、发射波长 525 nm 处检测[2]
8. 细胞质和线粒体组分制备：2×10⁶ 个/ml 细胞用 PBS 洗涤后，重悬于等渗匀浆缓冲液，匀浆 80 次后，30g 离心 5 min 去除未破碎细胞。分别以 800g 离心 10 min 和 14000g 离心 30 min 分离线粒体组分[2]
9. Western blot 分析：2×10⁶ 个/ml A549 细胞用 6.25、12.5、25 μM Baohuoside I 处理 24 h 后，用冰预冷的 PBS 洗涤两次，用含 50 mM Tris–HCl、150 mM NaCl、0.02% 叠氮钠和 1% NP-40 的裂解液提取蛋白。取 50 μg 上清蛋白用 SDS 样品缓冲液煮沸变性，通过 10% SDS–PAGE 分离，半干转印至聚偏氟乙烯膜。膜用含 Tween 20 的 5% 脱脂牛奶封闭，加入针对 PARP、剪切型 PARP、Bcl-2、BAX、caspase 3、剪切型 caspase 3、caspase 9、剪切型 caspase 9 和 β-肌动蛋白的一抗孵育，用 TBS 洗涤三次后，加入辣根过氧化物酶结合的二抗室温孵育 1 h，化学发光试剂显影，用图像分析软件进行蛋白表达定量[2]
1. 细胞培养：人食管鳞状细胞癌 Eca109 细胞采用添加 10% 胎牛血清、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 制霉菌素的 RPMI-1640 培养基，在 37℃、5% CO₂ 湿润环境中培养，汇合度达 80% 时用 0.25% 胰蛋白酶消化传代[3]
2. 细胞活力检测（MTT 法）：将 1×10⁴ 个细胞/孔接种到 96 孔板，加入 3.125、6.25、12.5、25.0、50.0 μg/ml 浓度的 Baohuoside I，每个浓度设 10 个复孔，分别孵育 24、48、72 h。每孔加入 MTT 溶液（5 mg/ml 溶于 PBS）孵育 4 h，1500×g 离心 5 min 后去除培养基，加入 0.1 ml 二甲基亚砜（DMSO）溶解结晶，振荡后用酶标仪在 570 nm 波长处检测吸光度，以空白对照组细胞活力为 100% 计算药物对细胞活力的抑制率[3]
3. 凋亡分析（PI 染色法）：Eca109 细胞用 0-50 μg/ml 浓度的 Baohuoside I 处理 48 h 后收集，重悬于含 50 μg/ml PI、0.1% Triton X-100、0.1 mmol/L EDTA(Na)₂ 和 50 μg/ml RNase 的 PBS 溶液中，避光孵育 30 min，用流式细胞仪（Ex=488 nm，Em=530 nm）分析，亚 G0 峰细胞视为凋亡细胞[3]
4. Western blot 分析：用细胞裂解缓冲液提取 Eca109 细胞总蛋白，超声破碎 20 sec 后 1500×g 离心 10 min 收集上清。取 20-100 μg 蛋白样品经 10% SDS-PAGE 凝胶（120 V 电泳 2 h）分离后，转移至硝酸纤维素膜（135 mA 转移 2 h）。膜用含 5% 牛奶的 TBST 缓冲液封闭过夜，洗涤三次后加入抗 β-catenin、抗 survivin、抗 cyclin D1 一抗室温孵育 2 h，再用 TBST 洗涤三次，加入荧光标记的二抗孵育 1 h，洗涤四次后用红外成像仪成像[3]
5. RT-PCR 分析：用 TRI 试剂提取细胞总 RNA，取 3-5 μg RNA 加入 oligo(dT)18、dNTP 和逆转录酶合成 cDNA。以 cDNA 为模板，采用特异性引物（cyclin D1 退火温度 55℃、35 个循环；survivin 退火温度 55℃、38 个循环；β-actin 退火温度 55℃、35 个循环）进行 PCR 扩增，扩增产物经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳分离后，用图像分析系统分析[3]
6. 稳定标记 Eca109-luc 细胞系建立：通过脂质体转染法将含萤火虫荧光素酶基因的重组质粒转入 Eca109 细胞，用 1.0 μg/ml 嘌呤霉素筛选 7 天获得稳定细胞系，加入 150 μg/ml D-荧光素后用活体成像系统检测荧光素酶活性[3]

Xenograft tumor model of human esophageal squamous cell carcinoma. [3]
The use and care of animals were carried out by following the guidelines approved by the Institutional Animal Care and Use Committee. Female Balb/c nude mice (4- to 6-weeks-old) were used. Subconfluent Eca109-Luc cells were harvested and resuspended in PBS to a final density of 2x107 cells/ml. Prior to injection, cells were resuspended in PBS and analyzed by 0.4% trypan blue exclusion assay (viable cells >90%). For subcutaneous injection, ~1x106 Eca109-Luc cells in 200 µl PBS were injected into the left flank of each mouse using 27G needles. At 1 week after tumor cell injection, Baohuoside-I (25 mg/kg per mouse) was injected intralesionally once a day, whereas the 10 mice intended for vehicle treatment were administered an equal volume of PBS.

---

Xenogen bioluminescence imaging.[3]
Small animal whole body optical imaging was carried out as described. Briefly, mice were anesthetized with isoflurane attached to a nosecone mask equipped with the Xenogen IVIS imaging system and subjected to imaging weekly after subcutaneous injection. For imaging, mice were injected (i.p.) with D-Luciferin sodium salt at 100 mg/kg body weight in 0.1 ml sterile PBS. Acquired pseudo-images were obtained by superimposing the emitted light over the grayscale photographs of the animal. Quantitative analysis was carried out with Xenogen's Living Image V2.50.1 software as described. Animals were sacrificed after 3 weeks, and tumor samples were retrieved for histological evaluation and Western blot analysis.

---

1. Establishment of Human Esophageal Cancer Nude Mouse Xenograft Model: Female Balb/c nude mice aged 4-6 weeks are selected. Eca109-luc cells are resuspended in PBS to a density of 2×10⁷ cells/ml (trypan blue staining shows viable cell rate>90%), and 200 μl of cell suspension (containing 1×10⁶ cells) is subcutaneously injected into the left flank of each nude mouse[3]
2. Administration Protocol: One week after tumor cell injection, nude mice in the treatment group receive intralesional injection of 25 mg/kg Baohuoside I once daily, while the control group receives an equal volume of PBS, with continuous administration for three weeks[3]
3. In Vivo Imaging Detection: Nude mice are anesthetized with isoflurane weekly, and D-luciferin sodium salt aqueous solution at 100 mg/kg body weight is intraperitoneally injected. Images are collected by an in vivo optical imaging system, and the fluorescence signal intensity is quantified with imaging analysis software[3]
4. Tissue Processing: After three weeks of administration, nude mice are sacrificed, and tumor tissues are dissected. Part of the tissues are fixed with 10% formalin, embedded in paraffin for hematoxylin-eosin (H&E) staining, and part are used for Western blot analysis[3]

1. Baohuoside I has poor bioavailability due to extensive efflux by apically located efflux transporters[2]
2. Baohuoside I-phospholipid complex can improve its absorption in the Caco-2 cell monolayer model[2]
3. Vitamin E tocopherol polyethylene glycol succinate 1000 can enhance the intestinal absorption of Baohuoside I in the four-site rat intestinal perfusion model[2]

[1]. Baohuoside I suppresses invasion of cervical and breast cancer cells through the downregulation of CXCR4 chemokine receptor expression. Biochemistry. 2014 Dec 9;53(48):7562-9.

[2]. Reactive oxygen species-mediated mitochondrial pathway is involved in Baohuoside I-induced apoptosis in human non-small cell lung cancer. Chem Biol Interact. 2012 Jul 30;199(1):9-17.

[3]. The flavonoid Baohuoside-I inhibits cell growth and downregulates survivin and cyclin D1 expression in esophageal carcinoma via β-catenin-dependent signaling. Oncol Rep. 2011 Nov;26(5):1149-56.

Icariside II is a glycosyloxyflavone that is 3,5,7-trihydroxy-4'-methoxy-8-prenylflavone in which the hydroxy group at position 3 has been converted into its alpha-L-rhamnopyranoside. It has a role as a plant metabolite, an anti-inflammatory agent, an antineoplastic agent and an apoptosis inducer. It is functionally related to an alpha-L-rhamnopyranose.
Baohuoside I has been reported in Epimedium pubescens, Epimedium acuminatum, and other organisms with data available.

---

1. Baohuoside I, also known as icariside II, is derived from the stems and leaves of Epimedium koreanum and has been traditionally used in Chinese traditional medicine for the treatment of osteoporosis, irregular menstruation, and joint pain[1]
2. Previous studies have shown that Baohuoside I exhibits anticancer activity against various cancer cells, including prostate cancer, myeloma, osteosarcoma, and skin cancer. Its mechanisms include reducing hypoxia-inducible factor (HIF) 1α protein level in human osteosarcoma cells, suppressing the cyclooxygenase (COX) 2/prostaglandin E2 pathway in prostate cancer PC3 cells, blocking the signal transducer and activator of transcription (STAT) 3 signaling pathway in U266 multiple myeloma cells, and inducing apoptosis in breast cancer MCF7 cells through both intrinsic and extrinsic signaling pathways[1]
3. Baohuoside I exerts its antimetastatic effect by downregulating CXCR4 expression, and the CXCR4/CXCL12 axis is a key mediator of tumor metastasis. Tumor cells with high CXCR4 expression tend to metastasize to organs with high CXCL12 secretion[1]
1. Baohuoside I, also known as Icariside II, is a flavonoid isolated from Epimedium koreanum Nakai, with anti-inflammatory and anticancer activities[2]
2. Baohuoside I is the predominant bioactive metabolite of icariin in vivo, and icariin can be rapidly hydrolyzed to Baohuoside I in the perfused rat intestinal model[2]
3. The mechanism by which Baohuoside I induces apoptosis in A549 cells involves the ROS-mediated mitochondrial pathway and MAPK pathway. ROS acts as an upstream signal that can activate the JNK and p38MAPK pathways, thereby triggering mitochondrial dysfunction and activation of apoptosis-related molecules[2]
4. Baohuoside I-induced apoptosis in A549 cells involves both caspase-dependent and caspase-independent mechanisms[2]
1. Baohuoside I is a flavonoid extracted from Cortex periplocae, with a molecular formula of C27H30O10, a molecular weight of 514, and a purity of >96%[3]
2. Baohuoside I exerts its effects of inhibiting the proliferation and inducing apoptosis of esophageal cancer cells by inhibiting the β-catenin-dependent signaling pathway and downregulating the expression of downstream target genes survivin and cyclin D1[3]
3. Baohuoside I has potential therapeutic value for esophageal squamous cell carcinoma, providing experimental evidence for a new treatment regimen for esophageal cancer[3]

C27H30O10

514.5211

514.183

113558-15-9

5488822

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

759.4±60.0 °C at 760 mmHg

253.9±26.4 °C

0.0±2.7 mmHg at 25°C

1.666

4.65

159.05

5

10

6

37

874

5

O1[C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]1([H])C([H])([H])[H])O[H])O[H])O[H])OC1C(C2=C(C([H])=C(C(C([H])([H])/C(/[H])=C(\C([H])([H])[H])/C([H])([H])[H])=C2OC=1C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])[H])O[H])O[H])=O

NGMYNFJANBHLKA-LVKFHIPRSA-N

InChI=1S/C27H30O10/c1-12(2)5-10-16-17(28)11-18(29)19-21(31)26(37-27-23(33)22(32)20(30)13(3)35-27)24(36-25(16)19)14-6-8-15(34-4)9-7-14/h5-9,11,13,20,22-23,27-30,32-33H,10H2,1-4H3/t13-,20-,22+,23+,27-/m0/s1

5,7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-enyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxychromen-4-one

Baohuoside I; 113558-15-9; Icariside II; BAOHUOSIDEI; CHEBI:82619; 5,7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-enyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxychromen-4-one; CHEMBL560116; 4H-1-Benzopyran-4-one, 3-[(6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)oxy]-5,7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methyl-2-buten-1-yl)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 32 mg/mL (~62.19 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 20 mg/mL (38.87 mM) in 0.5% CMC/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。