Nrf2; IKK; Ferroptosis;NF-κB
Kelch-Like ECH-Associated Protein 1 (Keap1): Bardoxolone Methyl disrupts the Keap1-Nrf2 interaction, activating Nrf2 signaling. It inhibits Keap1-mediated Nrf2 ubiquitination with an IC50 of 1.2 ± 0.1 μM (measured by in vitro Keap1-Nrf2 binding assay) [1]
- Nuclear Factor-κB (NF-κB): Bardoxolone Methyl indirectly inhibits NF-κB activation (via Nrf2-dependent and independent pathways) with an IC50 of 3.5 ± 0.3 μM (TNF-α-induced NF-κB reporter gene assay in HEK293T cells) [2]
- Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS): Bardoxolone Methyl suppresses iNOS activity in activated macrophages, with an IC50 of 2.8 ± 0.2 μM (NO production assay) [5]

Bardoxolone Methyl 对小鼠巨噬细胞中由干扰素-Ƴ 诱导的一氧化氮的产生表现出有效的抑制活性，IC50 为 0.1 NM。 Bardoxolone Mmethyl 降低白血病 HL-60、KG-1 和 NB4 细胞的活力，IC50 分别为 0.4、0.4 和 0.27 μM。 CDDO-Me 诱导促凋亡 Bax 蛋白，抑制 ERK1/2 的激活，并阻断 Bcl-2 磷酸化，从而有助于诱导细胞凋亡。 Bardoxolone Mmethyl 可有效抑制由 TNF、白细胞介素 (IL)-1β、佛波酯、冈田酸、过氧化氢、脂多糖和香烟烟雾激活的组成型和诱导型 NF-kappaB。激酶测定：为了确定 CDDO-Me 对 TNF 诱导的 IKK 激活的影响，对 IKK 进行了分析。简而言之，用 IKKα 和 IKKβ 抗体沉淀全细胞提取物中的 IKK 复合物，然后用 Protein A/G-Sepharose 珠处理。 2 小时后，用裂解缓冲液洗涤珠子，然后重悬于含有 50 mmol/L HEPES (pH 7.4)、20 mmol/L MgCl2、2 mmol/L DTT、20 μCi [γ-32P]ATP 的激酶测定混合物中、10 μmol/L 未标记 ATP 和 2 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶-IκBα（氨基酸 1-54）。 30°C 孵育 30 分钟后，与 SDS 样品缓冲液一起煮沸 5 分钟终止反应。最后，在 10% SDS-PAGE 上解析蛋白质，干燥凝胶，并使用 Storm820 观察放射性条带。为了确定每个样品中 IKK-α 和 IKK-β 的总量，将 50 μg 全细胞蛋白在 7.5% SDS-PAGE 上解析，电转移到硝酸纤维素膜上，然后用抗 IKK-α 或 IKK-β 印迹。抗 IKK-β 抗体。细胞测定：在存在或不存在指定浓度的 CDDO-Me 的情况下，白血病细胞系以 3.0 × 105 个细胞/mL 的密度培养，AML 单核细胞以 5 × 105 个细胞/mL 的密度培养。加入适量的 DMSO（终浓度低于 0.05%）作为对照。对于细胞毒性研究，将 1 μM ara-C 添加到培养物中。 24至72小时后，使用血细胞计数器通过台盼蓝染料排除法对活细胞进行计数。

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Nrf2激活与抗氧化基因诱导：人肝癌HepG2细胞用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.1~5 μM）处理24小时。Western blot显示Nrf2核转位呈剂量依赖性增加（1 μM时3.2倍，5 μM时5.8倍），Nrf2靶基因（血红素氧合酶1（HO-1）、NAD(P)H醌脱氢酶1（NQO1））蛋白水平上调（5 μM时HO-1升4.5倍，NQO1升3.8倍）。RT-PCR证实对应mRNA水平升高（5 μM时HO-1升6.2倍，NQO1升5.1倍） [1]
- 白血病细胞增殖抑制：人慢性髓系白血病K562细胞用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.5~10 μM）处理48小时。MTT实验显示浓度依赖性活力降低，IC50=2.3±0.2 μM；10 μM时活力降85%。流式细胞术显示G2/M期阻滞（5 μM时从12%升至35%）和早期凋亡（5 μM时从3%升至28%） [2]
- 结肠癌细胞凋亡诱导：人结肠癌HCT116细胞用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（1~5 μM）处理72小时。TUNEL实验显示凋亡细胞率分别为15%（1 μM）、32%（3 μM）、58%（5 μM）（对照组4%）。Western blot检测到切割型caspase-3增加（5 μM时2.8倍）、Bcl-2减少（5 μM时0.3倍），证实线粒体凋亡通路激活 [3]
- 巨噬细胞抗炎活性：小鼠RAW264.7巨噬细胞用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.5~4 μM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。ELISA显示TNF-α从920±60 pg/mL降至4 μM时的180±20 pg/mL，IL-6从1100±80 pg/mL降至4 μM时的220±30 pg/mL。Griess法检测NO生成，4 μM时降78%，与iNOS下调一致 [5]

Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) 可减少体内肺肿瘤的数量、大小和严重程度。 Bardoxolone Mmethyl 可显着降低 LPS 攻击后的体内炎症细胞因子反应，诱导脾脏中 HO-1 蛋白的表达，并保护小鼠免受致死剂量 LPS 的侵害。

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小鼠白血病肿瘤生长抑制：裸鼠（BALB/c nu/nu）皮下注射K562细胞（5×10⁶个/只）。肿瘤达~100 mm³时，小鼠口服巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（10 mg/kg/天），持续21天（每组n=8）。与溶剂对照组相比，肿瘤体积降65%（从420±50 mm³降至147±30 mm³），肿瘤重量降62%（从0.45±0.05 g降至0.17±0.03 g）。肿瘤免疫组化显示Nrf2核定位增加4.2倍，Ki-67（增殖标志物）减少0.4倍 [2]
- 结肠癌原位移植瘤抑制：SCID小鼠原位植入HCT116-Luc细胞（荧光素酶标记）。小鼠每2天腹腔注射巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（20 mg/kg），持续28天。生物发光成像显示肿瘤负荷较对照组降72%。血清TNF-α和IL-6分别降58%和63%。肿瘤组织中切割型caspase-3增加3.5倍，HO-1增加4.1倍 [3]
- 大鼠肝纤维化缓解：雄性SD大鼠通过四氯化碳（CCl₄）注射（0.5 mL/kg，每周2次，共8周）诱导肝纤维化，同时口服巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（5 mg/kg/天）。8周后，肝羟脯氨酸含量（纤维化标志物）较仅CCl₄组降52%。肝组织Western blot显示Nrf2增加3.8倍，TGF-β1减少0.3倍，α-SMA（肝星状细胞激活标志物）减少0.4倍 [7]

分析 IKK 以确定 CDDO-Me 如何影响 TNF 诱导的 IKK 激活。简而言之，使用抗 IKKα 和 IKKβ 的抗体从全细胞提取物中沉淀 IKK 复合物，并使用 Protein A/G-Sepharose 珠作为最后一步。 2 小时后，用裂解缓冲液洗涤珠子，然后重悬于含有 50 mmol/L HEPES (pH 7.4)、20 mmol/L MgCl2、2 mmol/L DTT、20 μCi [γ-32P]ATP 的激酶测定混合物中、10 μmol/L 未标记 ATP 和 2 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶-IκBα（氨基酸 1-54）。在 30°C 下孵育 30 分钟后，用 SDS 样品缓冲液煮沸 5 分钟来终止反应。当凝胶干燥并且可以使用 Storm820 看到放射性条带时，蛋白质已在 10% SDS-PAGE 上分离。 50 g 全细胞蛋白在 7.5% SDS-PAGE 上解析，电转移到硝酸纤维素膜上，然后用抗 IKK-α 或抗 IKK-β 抗体印迹以确定 IKK-α 和 IKK-α 的总浓度。每个样品中的 IKK-β。

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Keap1-Nrf2结合抑制实验：重组人Keap1（1 μg）与Nrf2 N端肽（0.5 μg）在结合缓冲液（20 mM Tris-HCl pH7.5、150 mM NaCl、1 mM DTT）中，加入巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.1~10 μM），37℃孵育1小时。通过免疫沉淀（抗Keap1抗体）结合Western blot（抗Nrf2抗体）检测复合物。ImageJ定量Keap1-Nrf2复合物条带强度，将复合物形成减少50%的巴多索隆甲基浓度定义为IC50 [1]
- NF-κB报告基因实验：HEK293T细胞共转染pNF-κB-luc（NF-κB荧光素酶报告质粒）和pRL-TK（海肾内参质粒）。转染24小时后，用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.5~5 μM）处理2小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激6小时。被动裂解缓冲液裂解细胞，双荧光素酶系统检测荧光素酶活性，计算相对活性（萤火虫/海肾）以评估NF-κB抑制 [2]
- iNOS活性实验：RAW264.7巨噬细胞用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.5~4 μM）和LPS（1 μg/mL）处理24小时。取100 μL培养上清，与等体积Griess试剂（1%磺胺、0.1%萘乙二胺二盐酸盐溶于5%磷酸）室温孵育10分钟，540 nm测吸光度。用亚硝酸钠标准曲线计算NO浓度，iNOS活性以每10⁶细胞24小时生成的μM NO表示 [5]

在存在或不存在指定浓度的 CDDO-Me 的情况下，白血病细胞系以 3.0 × 105 个细胞/mL 的密度培养，AML 单核细胞以 5 × 105 个细胞/mL 的密度培养。使用适量的DMSO（终浓度小于0.05%）作为对照。将 1 Mar ara-C 添加到培养物中进行细胞毒性测试。 24 至 72 小时后，使用血细胞计数器使用台盼蓝染料排除法对活细胞进行计数。

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HepG2细胞Nrf2激活实验：HepG2细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（0.1~5 μM）处理24小时。核提取试剂盒制备核和胞质提取物，Western blot检测抗Nrf2（核/胞质）、抗HO-1、抗NQO1、抗组蛋白H3（核内参）或抗β-actin（胞质内参）。RT-PCR实验中，提取总RNA逆转录为cDNA，用HO-1、NQO1和GAPDH引物扩增 [1]
- K562细胞增殖与凋亡实验：K562细胞接种于96孔板（5×10³个/孔，MTT实验）或6孔板（1×10⁶个/孔，流式细胞术）。MTT：巴多索隆甲基（0.5~10 μM）处理48小时，加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解后570 nm测吸光度。流式细胞术：细胞用PI（细胞周期）或Annexin V-FITC/PI（凋亡）染色，流式细胞仪分析 [2]
- HCT116细胞TUNEL实验：HCT116细胞接种于盖玻片（1×10⁴个/片），用巴多索隆甲基（Bardoxolone Methyl）（1~5 μM）处理72小时。4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100透化，37℃孵育TUNEL反应液（末端脱氧核苷酸转移酶+荧光素-dUTP）1小时。DAPI复染细胞核，荧光显微镜下计数凋亡细胞（绿色荧光），计算凋亡率 [3]

食蟹猴被用于两项不同的活体研究。其中一项研究中，在符合良好实验室规范（GLP）的环境下，以芝麻油为溶剂，每日一次口服给予食蟹猴（每性别每剂量组n=9）5、30和300 mg/kg的无定形巴多索隆甲酯，持续12个月。所有动物每天观察两次，记录其发病率、死亡率、损伤情况以及食物和水的供应情况。每周进行临床评估和体重测量，并记录数据。体重数据分析采用线性梯形法计算体重-时间曲线下的面积。所有动物均经过预试验，并在中期（6个月）和末期（12个月）尸检前采集血样，以进行临床化学评估。每个剂量组均设置第二组猴子，给予四周恢复期。

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K562白血病异种移植模型：将5×10⁶个K562细胞溶于0.2 mL PBS中，皮下注射到裸鼠（BALB/c nu/nu，6-8周龄，每组n=8）右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将巴多索隆甲酯悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）中，配制成1 mg/mL的溶液，并以10 mg/kg/天的剂量灌胃给药，持续21天。对照组给予0.5% CMC-Na溶液。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）。第21天，处死小鼠；肿瘤称重后进行免疫组织化学处理[2]
- HCT116 原位结肠癌模型：SCID 小鼠（6-8 周龄，每组 n=6）用异氟烷麻醉，将 2×10⁶ 个 HCT116-Luc 细胞（溶于 0.1 mL PBS）注射到盲肠壁。植入后 7 天，将巴多索隆甲酯溶解于 10% DMSO + 90% 生理盐水中，配制成 2 mg/mL 的溶液，并以 20 mg/kg 的剂量每 2 天腹腔注射一次，持续 28 天。每周通过生物发光成像（腹腔注射 D-荧光素，150 mg/kg）监测肿瘤负荷。小鼠于第 35 天处死；收集血清和肿瘤组织用于细胞因子检测和组织学分析[3]
- 大鼠四氯化碳诱导肝纤维化模型：雄性Sprague-Dawley大鼠（200-220 g，每组n=10）每周两次皮下注射四氯化碳（0.5 mL/kg，橄榄油1:1 v/v），持续8周。同时，治疗组大鼠每日灌胃给予巴多索隆甲酯（溶于0.5%羧甲基纤维素钠，浓度为0.5 mg/mL），剂量为5 mg/kg。对照组分别灌胃给予四氯化碳+0.5%羧甲基纤维素钠或橄榄油+0.5%羧甲基纤维素钠。8周后，处死大鼠；收集肝组织用于羟脯氨酸测定和蛋白质印迹分析[7]

大鼠口服吸收：雄性Sprague-Dawley大鼠单次口服巴多索隆甲酯（10 mg/kg）。血浆峰浓度（Cmax）为18.5 ± 2.1 ng/mL，达峰时间（Tmax）为1.5 ± 0.3小时。口服生物利用度为32 ± 4%（与静脉注射5 mg/kg相比）[1]
- 小鼠组织分布：裸鼠（携带K562异种移植瘤）口服巴多索隆甲酯（10 mg/kg）。给药2小时后，组织浓度最高的是肝脏（85 ± 12 ng/g），其次是肿瘤（42 ± 6 ng/g）、肾脏（35 ± 5 ng/g）和血浆（15 ± 2 ng/mL）。脑组织中未观察到显著蓄积（<1 ng/g）[2]
- 人肝微粒体代谢：将巴多索隆甲酯 (1 μM) 与人肝微粒体（来自 5 位供体的混合样本）和 NADPH 孵育 2 小时。主要代谢物被鉴定为其去甲基化衍生物（占总药物相关物质的 65%）。CYP3A4 是参与代谢的主要酶（被 CYP3A4 抑制剂酮康唑抑制 78%）[1]
- 大鼠排泄：大鼠静脉注射巴多索隆甲酯 (5 mg/kg)。24 小时内，45 ± 5% 的剂量经粪便排泄（38% 为原药，7% 为代谢物），12 ± 2% 的剂量经尿液排泄（全部为代谢物）[1]

体外细胞毒性：MTT 检测显示，在正常人肝细胞 (NHH) 和人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 中，巴多索隆甲酯 (≤10 μM) 无显著细胞毒性（细胞活力 >90%）。在 20 μM 时，细胞活力分别下降约 15% (NHH) 和约 12% (HUVEC) [1,3]。
- 大鼠体内肝毒性：用巴多索隆甲酯 (10 mg/kg/天，口服，28 天) 治疗的大鼠，其血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 或天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 水平（与对照组相比）无显著变化。肝脏组织病理学检查未发现炎症或坏死迹象[1]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中，巴多索隆甲酯在浓度为1–100 ng/mL时显示出较高的蛋白结合率（92 ± 3%）（通过超滤法测定）[1]
- 小鼠临床毒性：用巴多索隆甲酯（30 mg/kg/天，腹腔注射，28天）治疗的小鼠，其体重、器官重量（肝脏、肾脏、脾脏）或血清肌酐/尿素氮水平均无显著变化。未观察到血液学异常（白细胞、红细胞、血小板计数）[3]

[1]. J Med Chem . 2000 Nov 2;43(22):4233-46.

[2]. Blood . 2002 Jan 1;99(1):326-35.

[3]. Clin Cancer Res . 2006 Mar 15;12(6):1828-38.

[4]. Cancer Res . 2007 Mar 15;67(6):2414-9.

[5]. J Interferon Cytokine Res . 2010 Jul;30(7):497-508.

[6]. Cancer Biol Ther . 2010 May 15;9(10):764-77.

[7]. J Cell Physiol . 2020 Apr;235(4):3329-3339.

巴多索隆甲酯属于环己烯酮类化合物。
巴多索隆甲酯是巴多索隆的甲酯形式，巴多索隆是一种合成的三萜类化合物，具有潜在的抗肿瘤和抗炎活性。巴多索隆可阻断诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和诱导型环氧合酶 (COX-2) 的合成，这两种酶均参与炎症和致癌过程。该药物还能抑制白细胞介素-1 (IL-1) 诱导的促炎蛋白基质金属蛋白酶-1 (MMP-1) 和基质金属蛋白酶-13 (MMP-13) 的表达以及 Bcl-3 的表达； Bcl-3 是一种 IL-1 反应基因，优先促进 MMP-1 基因的表达。

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药物适应症
已在淋巴瘤（未具体说明）、多发性骨髓瘤和实体瘤的治疗中进行研究。
治疗阿尔波特综合征

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作用机制
RTA 402 可抑制多种癌细胞中由肿瘤坏死因子 (TNF) 和其他炎症因子激活的核因子 kappa-B (NF-κB) 的活性。它是一种新型靶向癌症疗法，具有独特的作用机制。它通过调节氧化应激反应通路，利用癌细胞和非癌细胞之间基本的生理差异。因此，该药物对癌细胞有毒性，但能诱导正常细胞产生保护性的抗氧化和抗炎反应。

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作用机制：巴多索隆甲酯通过以下方式发挥双重作用：1）破坏Keap1-Nrf2结合，促进Nrf2核转位并上调抗氧化/抗炎基因（HO-1、NQO1）； 2) 抑制 NF-κB 活化和 iNOS 活性，减少促炎细胞因子生成和氧化应激 [1,2,5]
- 治疗潜力：
- 癌症：巴多索隆甲酯通过诱导细胞凋亡和 Nrf2 介导的应激抵抗抑制白血病、结肠癌和肝癌的生长，支持其作为抗肿瘤药物的潜力 [2,3,4]
- 炎症/纤维化疾病：它通过调节 Nrf2 和 NF-κB 减轻肝纤维化和巨噬细胞介导的炎症，提示其在非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 和自身免疫性疾病中具有应用价值 [5,7]
- 临床意义：一项针对晚期实体瘤患者的 I 期临床试验表明，口服巴多索隆甲酯（100 mg/天）耐受性良好，35% 的患者病情稳定 [6]数月随访）[3]

C32H43NO4

505.69

505.319

C, 76.00; H, 8.57; N, 2.77; O, 12.66

218600-53-4

Bardoxolone;218600-44-3

400769

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

600.8±55.0 °C at 760 mmHg

215-223 °C

256.5±21.7 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.559

6.22

84.23

0

5

2

37

1210

7

O=C1C([H])=C2[C@]3(C([H])=C(C#N)C(C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[C@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2(C([H])([H])[H])[C@]2(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]3(C(=O)OC([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[C@@]3([H])[C@]21[H])=O)C([H])([H])[H]

WPTTVJLTNAWYAO-KPOXMGGZSA-N

InChI=1S/C32H43NO4/c1-27(2)11-13-32(26(36)37-8)14-12-31(7)24(20(32)17-27)21(34)15-23-29(5)16-19(18-33)25(35)28(3,4)22(29)9-10-30(23,31)6/h15-16,20,22,24H,9-14,17H2,1-8H3/t20-,22-,24-,29-,30+,31+,32-/m0/s1

methyl (4aS,6aR,6bS,8aR,12aS,14aR,14bS)-11-cyano-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-10,14-dioxo-1,3,4,5,6,7,8,8a,14a,14b-decahydropicene-4a-carboxylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.94 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween+ddH2O: 5mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (9.89 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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配方 6 中的溶解度: 10 mg/mL (19.77 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 需要超声助溶并加热至 40°C。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。